مقالة منهجية

مراقبة وقياس حجم فيبرين جل ضغط الخلايا الليفية بوساطة

5.6K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/50918

⸱

يناير 16, 2014

 , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Iowa

في هذه المقالة

ملخص

واستخدمت تقنيات الفحص المجهري ومعالجة الصور الفاصلة زمنيا لمراقبة وتحليل ضغط هلامي بوساطة الخلايا الليفية وإعادة تنظيم ألياف الفيبرين في مفاعل حيوي خاضع للرقابة البيئية على مدى فترة 48 ساعة.

الملخص

الخلايا المضمنة في الكولاجين والمواد الهلامية الفيبرين نعلق وممارسة قوى الجر على ألياف الجل. ويمكن أن تؤدي هذه القوى إلى إعادة تنظيم وإعادة تنظيم الهيكل المجهري الهلامي على الصعيدين المحلي والعالمي. هذه العملية تسير بطريقة معقدة تعتمد جزئيا على التفاعل بين موقع الخلايا، وهندسة الجل، والقيود الميكانيكية على الجل. لفهم أفضل لكيفية إنتاج هذه المتغيرات لأنماط محاذاة الألياف العالمية، نستخدم المجهر التبايني للتداخل الفاصل الزمني (DIC) إلى جانب مفاعل حيوي يتم التحكم فيه بيئيا لمراقبة عملية الضغط بين النباتات المجهرية المتباعدة هندسيا (مجموعات من الخلايا الليفية). ثم يتم تحليل الصور مع خوارزمية معالجة الصور المخصصة للحصول على خرائط للإجهاد. ويمكن استخدام المعلومات التي تم الحصول عليها من هذه التقنية للتحقيق في علم الأحياء الميكانيكية لمختلف التفاعلات مصفوفة الخلية، والتي لها آثار هامة لفهم العمليات في التئام الجروح، وتطوير الأمراض، وتطبيقات هندسة الأنسجة.

المقدمة

أداة هامة لدراسة التفاعلات مصفوفة الخلية هو هلام الكولاجين المأهولة بالخلايا1،2. الجل يوفر بيئة 3D التي هي أقرب إلى الطابع في الجسم الحي من الأنسجة وأكثر ملاءمة لفهم سلوك الخلية مما تقدمه الثقافات التقليدية 2D3. الدراسات المبكرة التي تم توزيعها بشكل متجانس الخلايا الليفية داخل هلام الكولاجين وجدت أن الخلايا توطيد بسرعة ألياف الكولاجين وضغط هلام4,5. الخلايا الليفية انقباش في المواد الهلامية العائمة الحرة ثم الانتقال إلى حالة هادئة بعد فترة وجيزة من هلام وصلت تماما ضغط1,6,7. الخلايا الليفية في المواد الهلامية التي هي مقيدة عند الحدود لا تزال في حالة نشطة، الاصطناعية8 وأنها تولد محاذاة الألياف بطريقة تعتمد على هندسة هلام والقيود الخارجية5،9. الاختلافات في نشاط الخلية ويبدو أن نتيجة للتوتر الداخلي (أو عدمه) التي تتطور كما الخلايا ممارسة قوى الجر عن طريق integrins على ألياف الكولاجين في هلام.

وهناك متغير من هذه التقنية ينطوي على وضع explants الخلايا الليفية(أي كتل من الخلايا) على مسافة بعيدا داخل هلام الكولاجين ومراقبة التفاعلات الخلية مصفوفة والتطور التدريجي للمحاذاة الألياف بين explants (تسمى أحيانا الأشرطة مثل الرباط)10-12. الميزة الأساسية للنظام explant هو أنه يسمح للمرء لترتيب الخلايا في أنماط هندسية بسيطة، مما يجعل من الأسهل تصور والتحقيق في الآليات الكامنة وراء إعادة تنظيم الألياف التي تحركها الخلية. هذه الأنماط المحاذاة — التي تعتمد أساسا على التفاعل بين قوى الجر الخلية, توزيع الخلية المكانية, هندسة هلام, والقيود الميكانيكية على هلام — من المهم أن نفهم لأنها تلعب دورا مركزيا في تنظيم الأنسجة العالمية, وظيفة ميكانيكية, والبيئة الميكانيكية المحلية13.

في مجال هندسة الأنسجة ، تتضمن إحدى استراتيجيات إنتاج الأنسجة الوظيفية ميكانيكيا والمهندسة التحكم في نمط محاذاة الألياف الذي يتطور من ضغط الخلايا بحيث تمتلك الأنسجة المهندسة محاذاة الألياف التي تحاكي محاذاة الأنسجة الأصلية14،15. ويعتقد أن مثل هذا المحاذاة ضروري للأنسجة المهندسة لتكرار السلوك الميكانيكي المعقد للأنسجة الأصلية. تعديل هذه الاستراتيجية هو استبدال هلام الكولاجين مع هلام الفيبرين16. هلام الفيبرين يطور نمط محاذاة مماثل لهلام الكولاجين أثناء الضغط. مع مرور الوقت هو المتدهورة الفيبرين واستبدالها مع ECM توليفها الخلية التي تتبع نمط محاذاة الألياف الفيبرين الأولية. وقد أدى البناء المهندس الناتج إلى تحسين الخصائص الميكانيكية بشكل كبير مقارنة ببنيات هلام الكولاجين المشتقة17.

عملية المحاذاة والأحداث إعادة عرض لاحقة في المواد الهلامية الفيبرين المضي قدما بطريقة معقدة وغير مفهومة بشكل جيد. لتوصيف هذه التفاعلات بشكل أفضل وتأثيرها على سلوك الخلية وإعادة عرض ECM ، قمنا بتطوير إجراء يستند إلى طريقة الزرع. في هذه الطريقة، يتم وضع explants الخلايا الليفية على هلام الفيبرين في أنماط هندسية مختلفة. يتم الحفاظ على المواد الهلامية في مفاعل حيوي18يتم التحكم فيه بيئيا ، ويتم مراقبة عملية الضغط وإعادة تنظيم الألياف باستخدام المجهر التفاضلي للتداخل الفاصل الزمني (DIC). يتم قياس حقول الإزاحة كميا باستخدام خوارزميات مخصصة. البيانات التي تم الحصول عليها من هذه التجارب لها آثار واسعة النطاق على عدد من العمليات، بما في ذلك تحسين استراتيجيات هندسة الأنسجة، وتحسين التئام الجروح، وعلاج إعادة عرض الأنسجة المرضية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد الاستنسل

إعداد الاستنسل على بارا فيلم لتخطيط موقع كل explant، بعد الهندسة المطلوبة (الشكلين 1A و 1B). الفضاء كل explant ما يقرب من 1-2 ملم عن بعضها البعض. هذه المسافة تتوافق مع تباعد مثالي لتوليد محاذاة الألياف بين النباتات السابقة. إرفاق الاستنسل تحت منطقة coverglass حيث سيتم إعداد العينة مع الشريط.

2. التعقيم

تنظيف جميع مكونات المفاعل الحيوي بدقة باستخدام الإيثانول بنسبة 70٪ وتعقيمها لمدة 2-3 ساعات تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية قبل التجريب. إذا كان يتم استخدام وعاء بديل بدلا من مفاعل حيوي ثم ينبغي استخدام تقنيات التعقيم المناسبة. انظر الخطوة 4.12 للحصول على تعليقات حول استخدام طبق بيتري أسفل الزجاج.

3. فيبرين جل إعداد

بعد أن تم تعقيم مكونات المفاعل الحيوي ، يلقي طبقة رقيقة من هلام الفيبرين على سطح الغطاء الزجاجي. تفاصيل لإعداد الفيبرينوجين وحلول الأسهم thrombin لصنع 6.6 ملغ / مل الفيبرين المواد الهلامية موصوفة في ساندر وآخرون. 13 بروتوكول مماثل من قبل يي وآخرون. 19 لصنع 3.3 ملغ / مل الفيبرين المواد الهلامية يمكن أيضا أن ينظر إليها على موقع JoVE.

  1. إعداد حل من الميكروبات الفلورية في DMEM بتركيز 10 مليون حبة / مل. سيتم استخدام الخرز للمساعدة في تتبع إزاحة الجل. لتحقيق هذا التركيز، والجمع بين 0.017 مل من محلول المخزون الميكروب و 0.149 مل من DMEM في أنبوب الطرد المركزي الدقيق.
  2. Sonicate هذا التعليق لمدة 10 دقيقة لتفريق الخرز وتجانس الحل.
  3. حل الفيبرين — في أنبوب c سعة 15 مل، امزج 0.22 مل من محلول مخزون الفيبرينوجين مع 0.44 مل من 20 مللي متر من العازلة HEPES. إضافة 0.1667 مل من DMEM مع الميكروبات التي تم إنشاؤها في الخطوة 3.1.
  4. Thrombin Solution — في أنبوب c 15 مل منفصل، امزج معا 0.0328 مل من محلول مخزون الثرومبين، و0.131 مل من 20 مللي متر HEPES العازلة، و0.00246 مل من 2 M CaCl2.
  5. اخلط بعناية محلول الثرومبين (الخطوة 3.4) مع محلول الفيبرينوجين (الخطوة 3.3) عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا 5-10x حتى يتم توزيع الحل بالتساوي. تجنب إدخال الفقاعات قدر الإمكان. لتقليل كمية الفقاعات المنتجة، يجب الحرص على عدم التفريغ الكامل للمصصة أثناء الاختلاط.
  6. إضافة thrombin سوف يسبب الحل لهلام بسرعة (~ 30 ثانية). Pipette الحل المختلط على coverglass في أقرب وقت ممكن. السماح للجل لبوليمرات في RT.
  7. ختم المفاعل الحيوي، إدراج كتل التدفئة، وربط الحرارية إلى وحدة تحكم درجة الحرارة. احتضان الجل في 37 درجة مئوية لمدة 15-30 دقيقة.

4. إعداد خلية اكسبلانت

  1. إزالة المتوسطة من قارورة T-75 التي تحتوي على خلايا الورم الليفي الجلد البشري.
  2. شطف السطح بعناية مع ما يقرب من 5 مل من الفوسفات المالحة المخزنة (PBS) لإزالة بروتينات المصل. إضافة 1 مل من تريبسين-EDTA واحتضان لمدة 3 دقائق، أو حتى الخلايا قد رفعت.
  3. بعد رفع الخلايا، قم بتدفير التعليق في جهاز طرد مركزي عند 200 × ز لمدة 5 دقائق. إزالة supernatant وإعادة إنفاق بيليه في حجم DMEM التي من شأنها أن تسمح بتركيز نهائي من 20 مليون خلية / مل.
  4. بينما الخلايا تدور أسفل في الطرد المركزي فصل المفاعل الحيوي من كتل التدفئة والكوابل الحرارية. نقل المفاعل الحيوي إلى خزانة السلامة الحيوية وإزالة الغطاء بعناية باتباع تقنيات asceptic.
  5. إنشاء explants عن طريق الأنابيب 0.3 ميكرولتر من تعليق الخلية على هلام الفيبرين البوليمر، باتباع النمط على الاستنسل. يجب أن يحتوي كل explant على حوالي 6000 خلية. تأكد من استخدام نصائح micropipette منخفضة الحجم (0.1-10 ميكرولتر).
  6. السماح للخلايا لتسوية ونرفق مصفوفة الفيبرين لمدة 1 ساعة في 37 درجة مئوية.
  7. مع المفاعل الحيوي لا تزال مفتوحة, إضافة ما يقرب من 5 مل من DMEM تستكمل مع 10٪ مصل البقر الجنين (FBS), 1٪ البنسلين-streptomycin, 0.1٪ أمفوتريسين B, و 10 ملغ / مل aprotinin مباشرة إلى غرفة المفاعل الحيوي. DMEM هو بيكربونات المخزنة مؤقتا ويتطلب 5٪ CO2 للحفاظ على درجة الحموضة محايدة. وبما أن المفاعل الحيوي لا يتم تزويده ب CO2، قم بشرط أن يكون الوسط في حاضنة مع 5٪ CO2 لمدة 2-3 ساعات قبل الاستخدام. Aprotinin هو مثبط بروتياز سيرين الذي يستخدم على نطاق واسع للحد من معدل تدهور الفيبرين20.
  8. إعادة ختم المفاعل الحيوي. استخدم حقنة لتوصيل 5 مل إضافية منثاني أكسيد الكربون المتوسطة المكيفة عبر تركيب الشائكة على مدخل الميناء. الاستغناء عن المتوسطة ببطء وتأكد من ملء كامل حجم غرفة المفاعل الحيوي. إزالة بعناية الفقاعات التي تشكل في المفاعل الحيوي.
  9. توريد الطازجة، 5٪ CO2 المتوسطة مشروطة إلى المفاعل الحيوي طوال التجربة من أجل الحفاظ على درجة الحموضة، وتوفير المواد الغذائية، وإزالة النفايات. إعداد مضخة حقنة مع حقنة 10 مل أو 30 مل مليئة 5٪ CO2 المتوسطة مكيفة. قم بتوصيل المحاقن مباشرة بمنفذ المدخل على غطاء المفاعل الحيوي مع أنابيب معقمة مزودة بقفل Luer. إزالة تركيب الذكور وإرفاق الأنابيب إلى تركيب الشائكة على المفاعل الحيوي (انظر الشكل 1C).
  10. تعيين معدل التغلغل إلى 0.01 مل / دقيقة. ربط قطع معدلة من الأنابيب إلى كل من منافذ منفذ ووضع نهايات في كوب 100 مل لجمع النفايات.
  11. استخدم مقبس المختبر لتعيين ارتفاعات مدخل ومنفذ يغذي بحيث لا يتطور الفرق في الضغط في المفاعل الحيوي (راجع الشكل 1D للرجوع إليها).
  12. إذا لم يكن المفاعل الحيوي متوفرا، فاعد عينات في أطباق بيتري ذات القاع الزجاجي مقاس 35 مم مع قمم زجاجية. استخدم واحدة بحجم غطاء تم تحسينه لمجموعة محددة من الأهداف التي سيتم استخدامها. يجب الحفاظ على العينات التي يتم إعدادها في أطباق بيتري في حاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO2.
    ملاحظة: يقوم البوليسترين بإزالة الاستقطاب عن الضوء وسيتداخل مع تصوير DIC ، لذلك يجب استخدام قمم الزجاج إذا تم إجراء تصوير DIC. تباين المرحلة هو طريقة تصوير بديلة مناسبة. إن نقل الأطباق بين الحاضنة والمجهر سيجعل تسجيل الصور صعبا. إذا لم يتم تسجيل الصور بشكل صحيح ، فلن تكون السلالة المحسوبة في القسم 6 دقيقة.

5. التصوير الفاصل الزمني

  1. وبمجرد إعداد العينة، أعد ختم المفاعل الحيوي، وأعد توصيل كتل التدفئة والكوابل الحرارية، وحدد درجة حرارة المفاعل الحيوي إلى 37 درجة مئوية.
  2. تعيين المفاعل الحيوي على المجهر شنت مرحلة الآلية. ضع هدف 20X DIC تحت منفذ العرض. ويعتبر هدف التكبير الأدنى مقبولا، خاصة إذا لم تكن هناك مرحلة دقيقة مزودة بمحركات. تأكد من أن المستقطب، محلل، والمنشور كلها في مكانها. بدلا من ذلك، يمكن أيضا تصوير العينات باستخدام تباين المرحلة.
  3. افتح برنامج التصوير.
  4. ركز الهدف على المنطقة بين المخططات الثلاثة.
  5. حفظ الإحداثيات (س، ص، و ض) من هذا الموقع في برنامج التصوير.
  6. من أجل تصوير المنطقة بأكملها بين وحول explants حدد الخيار للحصول على صورة كبيرة وتحديد حجم المنطقة. سيسمح هذا بالحصول على صور متعددة حول المنطقة المحددة وإنشاء صورة متجانبة تمثل منطقة أكبر من العينة.
  7. تعيين وقت التعرض وشدة الضوء إلى أدنى القيم الممكنة لتجنب موت الخلايا الناجم عن السمية الضوئية، في حين لا تزال توفر حلا كافيا للتمييز بين الخلايا والميكروبات وألياف الفيبرين.

6. تتبع سلالة

للحصول على تفاصيل وتعليمات حول برنامج تتبع سلالة (الشكل 2) المستخدمة انظر Raghupathy وآخرون. 21 الخوارزمية هي رمز MATLAB مخصصة التي يمكن تحميلها من http://www.license.umn.edu/default.aspx. لاحظ أن صور DIC غالبا ما يكون لها نسيج كاف لتتبع الإجهاد. يتم تضمين الميكروبات لتكون بمثابة الاختيار على حقول سلالة محسوبة. إذا كان سيتم تتبع سلالة من الأهمية بمكان أن يتم التقاط الصور التي تم الحصول عليها في نفس الموقع بالضبط بحيث يتم تسجيل الصور. الصور غير المسجلة سوف تنتج سلالات زائفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إعادة عرض الأنسجة هي عملية معقدة مدفوعة جزئيا بالتفاعلات الفيزيائية المتبادلة بين الخلايا والمصفوفة المحيطة بها. الخلايا إعادة تنظيم الألياف المحيطة بها وتوليد التوتر في شبكة الألياف. محاذاة الألياف والبيئة الميكانيكية بدورها يتحكم سلوك الخلية، بحيث كل من الخلايا والمصفوفة على الصعيد العالمي إعادة تنظيم لإنتاج الأنسجة المعاد تشكيلها. في هذه التجربة ، بدأت خلايا النباتات ، في البداية جولة في مورفولوجيا ، في التوسع في الجل والالتزام ألياف الفيبرين(الشكل 3). مارست الخلايا قوى الجر التي انتشرت من خلال هلام و...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد وضع هذا البروتوكول لغرض مراقبة وقياس الميكانيكا التي تنطوي عليها عملية إعادة تشكيل نظام الرصد الأوروبي بوساطة الخلية. هذه العمليات تكمن وراء عدد من الظواهر البيولوجية ولها آثار هامة على الأنسجة الهندسية2,22, الحد منندبة 1,23, وفهم إعادة عرض الأنسجة المرضية12,24. استخدام المجهر DIC الفاصل الزمني يسمح للمرء بحل وتحديد إزاحة ومحاذاة ألياف الفيبرين التي تحدث نتيجة لقوى الجر الخلية. إعادة التنظيم التي لوحظت هنا هي المرحلة الأولى من عملية إعادة التشكيل ، وتتبع الأنماط التنظيمية الملاحظة في ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نشكر جورج جوديس وستيفن إلياسون على التبرع بالخلايا الليفية الجلدية البشرية وراميش راغوباثي للمساعدة في خوارزمية تتبع الإجهاد. تم تقديم الدعم لهذا العمل من قبل وزارة التعليم الأميركية مساعدة الدراسات العليا في مجالات الحاجة الوطنية زمالة (GAANN P200A120071).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
سيجما ألدريتشF8630
سيجما ألدريتشT4648
جيبكو11965-092
جيبكو15140-122
سيجما ألدريتشA2942
سيجما ألدريتشH0887
سيجما ألدريتش223506
جيبكو25200-056
Invitrogen3000
LonzaDE14-701F
المجسات الجزيئيةF8858
GIBCOA10483-01
GIBCO11430-030
فيشر ScientificSS264-1
سيجما ألدريتشA3428-25MG
Biotense BioreactorADMET
Ti-Eclipe MicroscopeNikon
# 0 35 مم طبق بتري ذو قاعزجاجي MatTekP35G-0-20-C
# 0 35 مم زجاج علوي بتريطبق MatTekP35GTOP-0-20-C
تركيبات بلاستيك لور ، أنابيب PVC مع نهايات لورCole-Parmer30600-65

المراجع

  1. Grinnell, F., Petroll WM, Cell motility and mechanics in three-dimensional collagen matrices. Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 26, 335-361 (2001).
  2. Sander, E. A., Barocas, V. H. Biomimetic collagen tissues: collagenous tissue engineering and other applications. In: Collagen: Structure and Mechanics. , Springer. New York. (2008).
  3. Pedersen JA,, Swartz MA, Mechanobiology in the third dimension. Ann. Biomed. Eng. 33 (11), 1469-1490 (2005).
  4. Bell, E., Ivarsson, B., Merrill, C. Production of a tissue-like structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 76 (3), 1274 (1979).
  5. Guidry, C., Grinnell, F. Studies on the mechanism of hydrated collagen gel reorganization by human skin fibroblasts. J. Cell. Sci. 79 (1), 67-81 (1985).
  6. Fluck, J., Querfeld, C., Cremer, A., Niland, S., Krieg, T., Sollberg, S. Normal human primary fibroblasts undergo apoptosis in three-dimensional contractile collagen gels. J. Invest. Dermatol. 110 (2), 153-157 (1998).
  7. Rosenfeldt, H., Grinnell, F. Fibroblast quiescence and the disruption of ERK signaling in mechanically unloaded collagen matrices. J. Biol. Chem. 275 (5), 3088-3092 (2000).
  8. Nakagawa, S., Pawelek, P., Grinnell, F. Long-term culture of fibroblasts in contracted collagen gels: Effects on cell growth and biosynthetic activity. J. Invest. Dermatol. 93 (6), 792-798 (1989).
  9. Harris, A. K., Stopak, D., Wild, P. Fibroblast traction as a mechanism for collagen morphogenesis. Nature. 290, 249-251 (1981).
  10. Stopak, D., Harris AK, Connective tissue morphogenesis by fibroblast traction: I. tissue culture observations. Dev. Biol. 90 (2), 383-398 (1982).
  11. Sawhney, R. K., Howard, J. Slow local movements of collagen fibers by fibroblasts drive the rapid global self-organization of collagen gels. J. Cell. Biol. 157 (6), 1083-1092 (2002).
  12. Provenzano, P. P., Inman, D. R., Eliceiri, K. W., Trier, S. M., Keely, P. J. Contact guidance mediated three-dimensional cell migration is regulated by rho/ROCK-dependent matrix reorganization. Biophys. J. 95 (11), 5374 (2008).
  13. Sander, E., Barocas, V., Tranquillo, R. Initial fiber alignment pattern alters extracellular matrix synthesis in fibroblast-populated fibrin gel cruciforms and correlates with predicted tension. Ann. Biomed. Eng. 39 (2), 714-729 (2011).
  14. Barocas, V. H., Tranquillo, R. T. An anisotropic biphasic theory of tissue-equivalent mechanics: the interplay among cell traction, fibrillar network deformation, fibril alignment, and cell contact guidance. J. Biomech. Eng. 119, 137-146 (1997).
  15. Neidert, M. R., Tranquillo, R. T. Tissue-engineered valves with commissural alignment. Tissue Eng. 12 (4), 891-903 (2006).
  16. Robinson PS,, Robinson PS, Planar biaxial behavior of fibrin-based tissue-engineered heart valve leaflets. Tissue Eng. Part A. 15 (10), 2763-2772 (2009).
  17. Grassl, E., Oegema, T., Tranquillo, R. Fibrin as an alternative biopolymer to type I collagen for the fabrication of a media equivalent. J. Biomed. Mater. Res. 60 (4), 607-612 (2002).
  18. Paten, J. A., Zareian, R., Saeidi, N., Melotti, S. A., Ruberti, J. W. Design and performance of an optically accessible, low-volume, mechanobioreactor for long-term study of living constructs. Tissue Eng. Part C Methods. 17 (7), 775-788 (2001).
  19. Ye KY,, Sulli van KE,, Black LD, Encapsulation of cardiomyocytes in a fibrin hydrogel for cardiac tissue engineering. J. Vis. Exp. (55), (2011).
  20. Ahmann, K. A., Weinbaum, J. S., Johnson, S. L., Tranquillo, R. T. Fibrin degradation enhances vascular smooth muscle cell proliferation and matrix deposition in fibrin-based tissue constructs fabricated in vitro. Tissue Eng. Part A. 16 (10), 3261-3270 (2010).
  21. Raghupathy, R., Witzenburg, C., Lake, S. P., Sander, E. A., Barocas, V. H. Identification of regional mechanical anisotropy in soft tissue analogs. J. Biomech. Eng. 133, (2011).
  22. Robinson, P. S., Johnson, S. L., Evans, M. C., Barocas, V. H., Tranquillo, R. T. Functional tissue-engineered valves from cell-remodeled fibrin with commissural alignment of cell-produced collagen. Tissue Eng. Part A. 14 (1), 83-95 (2008).
  23. Gabbiani, G. The myofibroblast in wound healing and fibrocontractive diseases. J. Pathol. 200 (4), 500-503 (2003).
  24. PaszeK, M. J., et al. Tensional homeostasis and the malignant phenotype. Cancer Cell. 8 (3), 241-254 (2005).
  25. Grinnell, F., Rocha L, B., Iucu, C., Rhee, S., Jiang, H. Nested collagen matrices: A new model to study migration of human fibroblast populations in three dimensions. Exp. Cell. Res. 312 (1), 86-94 (2006).
  26. Miron-Mendoza, M., Seemann, J., Grinnell, F. The differential regulation of cell motile activity through matrix stiffness and porosity in three dimensional collagen matrices. Biomaterials. 31 (25), 6425-6435 (2010).
  27. Wakatsuki, T., Kolodney MS,, Zahalak GI,, Elson EL, Cell mechanics studied by a reconstituted model tissue. Biophys. J. 79 (5), 2353-2368 (2000).
  28. De Jesus, A., Aghvami, M., Sander, E. Fibroblast-mediated fiber realignment in fibrin gels. ASME Summer Bioengineering Conference, 2013 Jun 26-29, Sunriver, OR, , (2013).
  29. Aghvami, M., Barocas, V. H., Sander, E. A. Multiscale mechanical simulations of cell compacted collagen gels. J. Biomech. Eng. 135, (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة