مقالة منهجية

الإنتاجية العالية التدفق الخلوي القائم على الفحص لكشف خلية أضداد N-ميثيل مد اسبارتاتي مستقبلات الدوبامين-2 أو مستقبلات في مصل الإنسان

DOI:

10.3791/50935

⸱

نوفمبر 23, 2013

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute for Neuroscience and Muscle Research, The Kids Research Institute at the Children's Hospital at Westmead, The University of Sydney, 2Flow Cytometry Centre, Westmead Millennium Institute for Medical Research

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلال السنوات الأخيرة، وقد استخدمت المقايسات القائم على الخلية الحية بنجاح للكشف عن الأجسام المضادة ضد المستضدات السطحية ومتعلق بتكوين جزئي. هنا، نحن تصف طريقة استخدام تدفق عالية الإنتاجية الخلوي تمكن من تحليل الأفواج الكبيرة من المرضى. وكشف عن الأجسام المضادة رواية تحسين تشخيص وعلاج اضطرابات مناعية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على مدى السنوات الأخيرة، تم الكشف عن الأجسام المضادة ضد سطح والبروتينات بتكوين تشارك في النقل العصبي في الجهاز العصبي المركزي أمراض المناعة الذاتية لدى الأطفال والبالغين. وقد استخدمت هذه الأجسام المضادة لتوجيه التشخيص والعلاج. المقايسات خلية مقرها تحسنت كشف عن الأجسام المضادة في مصل المريض. لأنها تستند إلى التعبير مستضدات سطح الدماغ على خلايا حقيقية النواة، والتي يتم بعد ذلك حضنت مع المريض الأمصال المخفف تليها الأجسام المضادة الثانوية تألقي مترافق. بعد الغسيل، الأجسام المضادة الثانوية ملزمة ثم يتم تحليلها من قبل التدفق الخلوي. وقد وضعت مجموعتنا تدفق عالية الإنتاجية الخلوي الحية فحص خلية مقرها لكشف موثوق أجسام مضادة ضد مستقبلات الناقل العصبي محددة. هذا الأسلوب التدفق الخلوي هو مستقيم إلى الأمام، الكمي وفعالة، واستخدام نظام العينات عالية الإنتاجية يسمح للأفواج كبيرة المريض أن يعاير بسهولة في فترة قصيرة من الزمن. بالإضافة إلى ذلك، استنادا الخلية هذا النحويقول يمكن تكييفها بسهولة للكشف عن الأجسام المضادة لكثير من الأهداف المستضدية مختلفة، سواء من الجهاز العصبي المركزي والمحيط. واكتشاف المؤشرات الحيوية إضافية رواية الضد تمكين تشخيص سريعة ودقيقة وتحسين علاج اضطرابات مناعية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلال السنوات الأخيرة، تم تحديد أشكال المناعة الذاتية من الجهاز العصبي المركزي (CNS) الأمراض. وقد تبين أن هذه الأمراض ترتبط ويعرف عن وجود الأجسام المضادة. هذه الأجسام المضادة لمستقبلات الخلايا العصبية ربط أو البروتينات متشابك المشاركة في العصبي 1،2. تم الكشف عن مستضدات مختلفة، مثل مستقبلات N-ميثيل مد اسبارتاتي (NMDAR) 3-5، γ-B حمض الغاما مستقبلات (GABA B) مستقبلات 6، α-أمينو 3 هيدروكسي-5-الميثيل-4- حمض isoxazolepropionic (أمبا) مستقبلات 7، الجهد بوابات قنوات البوتاسيوم (VGKC) المرتبطة البروتينات: يسين الغنية تنشيط دبقي 1 البروتين (LGL-1) ويرتبط البروتين contactin 2 (capsr2) 8،9، 5،10 مستقبلات الغلوتامات ، والدوبامين-2 مستقبلات (D2R) 11. في الماضي، كانت هذه الاضطرابات الجهاز العصبي المركزي المناعة الذاتية (التهاب الدماغ تسمى أساسا) في كثير من الأحيان دون تشخيص وعلاج. هذه المؤشرات الحيوية الضد الرواية، على سبيل المثالالأجسام المضادة NMDAR أو D2R الأجسام المضادة، قد تحسنت بشكل كبير التشخيص والوعي، وفتحت خيارات العلاج للمرضى. في الواقع، ويرتبط العلاج المبكر مع المناعية مع تحسن نتائج 11،12.

وقد استخدمت الأساليب التقليدية للكشف عن الأجسام المضادة، مثل انزيم مرتبط المناعي فحص (ELISA) وصمة عار الغربية للكشف عن الأجسام المضادة في الأمصال. ومع ذلك، فإنها لا تمكن بسهولة الاعتراف الحواتم خارج الخلية أو السطحية، وبدلا من ذلك، قد تكشف عن مناعية نحو حاتمة داخل الخلايا. وعلاوة على ذلك، والأجسام المضادة التي تربط إلى المجال خارج الخلية من البروتينات الهامة التي ينطوي عليها العصبي من المرجح أن تكون 2،3،7،13،14 المسببة للأمراض. وبالتالي، فإن تطوير فحوصات دقيقة وحساسة لاكتشاف سطح الخلية ذات الصلة أو أهداف الضد خارج الخلية في المرضى هو الهدف الأسمى. ويستند أسلوب المعيار الذهبي في هذا المجال على استخدام الخلايا الحية، في ما يسمى ب "خلية باالمقايسات ااا ". ينطوي هذا الأسلوب في التعبير عن مستضد على سطح خلايا الثدييات (في معظم الأحيان الكلى 293 (HEK293) الخلايا الجنينية البشرية) في شكلها الأصلي قبل ترنسفكأيشن ناقلات تحتوي على تسلسل [كدنا] كامل للمستضد من الفائدة. ثم يتم تحضين الخلايا الحية nonpermeabilized مع مصل المريض المخفف وتليها تألقي مترافق المضادة للالمناعي البشري (IG) الضد الثانوية. ثم يتم الكشف عن كثافة أو مستوى مضان ويرتبط إلى مستوى الأجسام المضادة ملزمة. هذا الأسلوب غير محددة، كما هى overexpressed مستضد واحد فقط في الخلايا. وكان الأكثر استخداما على نطاق واسع "تلا" التحليل المجهري متحد البؤر بعد مناعية 4،5،8-10. ومع ذلك، التدفق الخلوي المقايسات خلية مقرها استخدمت بنجاح للكشف عن الأجسام المضادة في المرضى الذين يعانون من أمراض المزيل 15-17. على وجه الخصوص، ووترز 15 آخرون. مقارنة الكشف عن الأجسام المضادة باستخدام مقلاةش من الأجسام المضادة تقنيات الاستكشاف بما في ذلك المقايسات خلية مقرها تليها المجهري أو تدفق يحلل الخلوي، وأظهرت فحص التدفق الخلوي خلية القاعدة أن يكون الأسلوب الأكثر حساسية، ودقيقة، ويمكن الاعتماد عليها. لذلك، فحص التدفق الخلوي خلية القاعدة هو مفيد كما هو كمي، لا تعتمد على المحقق، وليس فيها أي استخدام للمواد المشعة. كما أنها مريحة لأنها تسمح الأفواج الكبيرة المريض أن يعاير في فترة قصيرة من الزمن.

في الآونة الأخيرة، قمنا الأمثل تدفق عالية الإنتاجية الخلوي فحص خلية مقرها للكشف عن الأجسام المضادة NMDAR وD2R الأجسام المضادة في المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية الجهاز العصبي المركزي 11. الكشف عن مجموعتنا مؤخرا NMDAR الأجسام المضادة في مصل المريض باستخدام التدفق الخلوي فحص خلية مقرها. هذه NMDAR الضد إيجابية الأمصال تم تحليلها سابقا باستخدام متحد البؤر المجهري وعثر أيضا أن تكون إيجابية 11. يحدد هذا البروتوكول لفحص التدفق الخلوي خلية القاعدة للكشف عن جonformation الحساسة الأجسام المضادة في مصل المريض CNS استفاد من العينات الآلي عالية الإنتاجية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Subcloning استراتيجية لبناء pIRES2-EGFP ناقلات ترميز D2R أو NMDAR

  1. الحصول على كامل طول استنساخ [كدنا] من D2R الإنسان أو NMDAR الوحيدات 1 (NR1).
  2. اختيار ناقلات التعبير، مثل pIRES2-EGFP، الذي هو مناسبة للتعبير عن البروتينات عبر الغشاء مع تعزيز البروتين الفلوري الأخضر (GFP) تحت سيطرة مراسل موقع الريبوسوم دخول الداخلي (IRES)، مما يمكن كلا المستضدات وGFP أن coexpressed في الخلايا بشكل منفصل.
  3. Subclone كدنا] الإنسان داخل pIRES2-EGFP ناقلات.
    1. لsubclone [كدنا]، واستخدام إنزيمات التقييد المناسب (على سبيل المثال NheI وXhoI عن الإنسان D2R [كدنا]).
    2. Ligate قطع كدنا] إدراج ضمن محدود pIRES2-EGFP ناقلات.
    3. تسلسل ligated pIRES2-EGFP D2R أو NMDAR ناقلات للتحقق ما إذا كان متجه يحتوي على التسلسل الصحيح.
    4. تنقية وتضخيم pIRES2-EGFP D2R أو NMDAR ناقلات لاستخدامها لاحقا في ترنسفكأيشن.
itle "> 2. HEK293 ترنسفكأيشن الخلية العصبية عن التعبير عن مستضد

  1. خلايا الثقافة HEK293 في قوارير زراعة الأنسجة مع الطازجة Dulbecco لتعديل النسر متوسطة (1X) (DMEM) كاملة مع 4.5 غرام / لتر D-الجلوكوز، L-الجلوتامين و 110 ملغم / لتر البيروفات الصوديوم تستكمل مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، 2 مم GlutaMAX، و 50 ميكروغرام / مل جنتاميسين.
  2. فصل الخلايا باستخدام التربسين HEK293 ونقل إلى أنبوب مخروطي.
    1. غسل الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 6 دقائق و resuspend بيليه خلية في DMEM كاملة جديدة.
  3. عد الخلايا والبذور 6 لوحات جيدا في حوالي 8 × 5 10 خلايا / جيد والثقافة بين عشية وضحاها في DMEM 2ML عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 في حاضنة.
  4. بمجرد أن وصلت إلى حوالي 70٪ confluency، بالنقل الخلايا HEK293 مع pIRES2-EGFP NR1 (HEK293 NMDAR + الخلايا)، pIRES2-EGFP D2R (HEK293 D2R + الخلايا)، و (خلايا HEK293 CTL؛ مكافحة ناقلات) pIRES2-EGFP على النحو التالي. الحفاظ على بعض الخلايا HEK293 untransfected للتعويض في وقت لاحق.
    1. إعداد حجم المطلوب من مزيج ترنسفكأيشن تضم 2.5 ميكروغرام الحمض النووي، 200 ميكرولتر 0.9٪ كلوريد الصوديوم و 4 ميكروغرام / مل polyethylenimine / جيد (كل منها يحتوي على 2 مل DMEM كاملة الطازجة).
    2. دوامة فورا المزيج لمدة 10 ثانية ويحضن في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 10 دقيقة، قبل أن يضيف حجم مزيج ترنسفكأيشن إلى الآبار المناسبة.
    3. تغطية لوحة، والتفاف الجانبين مع parafilm، وأجهزة الطرد المركزي في 280 x ج لمدة 5 دقائق لمساعدة ترنسفكأيشن الخلية.
    4. إزالة Parafilm ثم وضع في الحاضنة للثقافة في 37 درجة مئوية.
    5. استبدال سائل الإعلام والثقافة بعد 18 ساعة مع DMEM كاملة جديدة، والحفاظ في الثقافة لمدة 72 ساعة أخرى.
    6. اختياري: 72 ساعة بعد ترنسفكأيشن، يمكن تحديد الخلايا المصابة بالعدوى بالنقل الثقافة في DMEM كاملة تستكمل مع 250 ميكروغرام / مل Geneticin، من أجل الحصول على بولكلونل transfectant مستقرة.

الطبقة = "jove_title"> 3. التدفق الخلوي قائم على خلية الفحص للكشف عن الأجسام المضادة لمستضدات سطح الخلايا العصبية

  1. فصل HEK293 NMDAR +، + HEK293 D2R، والخلايا HEK293 CTL قبل الحضانة مع 500 ميكرولتر / جيد Versene لحوالي 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.
    1. resuspend في 2ml/well من برنامج تلفزيوني (كا 2 + /-2 ملغ +) تستكمل مع FBS 2٪ (PBS / FBS) ونقل إلى 15 مل أو 50 مل أنبوب مخروطي.
    2. غسل الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 6 دقائق و resuspend بيليه خلية في 15-50 مل PBS / FBS. تكرار غسل 2X.
    3. عد الخلايا ثم resuspend في برنامج تلفزيوني / FBS في 1 × 10 6 خلية / مل.
  2. تصميم القالب 96 جيدا لاكتساب التدفق الخلوي، معتبرا أن HEK293 D2R + أو HEK293 NMDAR + الخلايا، وكذلك الخلايا HEK293 CTL سيتعين حضنت مع كل عينة مريض أو الأجسام المضادة الأولية.
  3. خلايا البذور في لوحة 96-V-جيدا أسفل في 50،000 خلية / نحنليرة لبنانية وفقا لالتدفق الخلوي قالب الاستحواذ.
  4. بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي لوحة 96 جيدا في 450 x ج لمدة 5 دقائق وإزالة طاف بلطف باستخدام ماصة الأقنية الإلكترونية أو دليل، إمالة لوحة على زاوية ومع الحرص على عدم نضح بيليه الخلية.
  5. احتضان HEK293 D2R +، + HEK293 NMDAR، والخلايا HEK293 CTL لمدة 1 ساعة على RT في الظلام مع:
    1. التخفيفات المسلسل من الأجسام المضادة الأولية من أجل تقييم التعبير مستضد السطح.
    2. عينات من المرضى من أجل الكشف عن الأجسام المضادة.
  6. استخدام التدفق الخلوي الضوابط المناسبة التعويض، على سبيل المثال. خلايا HEK293 untransfected غير ملوثين، GFP + HEK293 الخلايا (AF647 -)، وuntransfected AF647 + HEK293 الخلايا (GFP).
  7. غسل الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 5 دقائق و resuspend الخلية بيليه في 170 ميكرولتر PBS / FBS. تكرار غسل الخطوة مرتين أخريين.
  8. احتضان الخلايا لمدة 1 ساعةص في ​​RT في الظلام مع 1:100 التخفيف من الأجسام المضادة الثانوية AF647 مترافق (مفتش مكافحة الإنسان لمصل المريض ومكافحة فأر مفتش لمكافحة NR1 أو المضادة للD2R الأجسام المضادة الأولية).
  9. غسل الخلايا ثلاث مرات، كما في الخطوة 3.7، و resuspend في 35 ميكرولتر PBS / FBS لاكتساب التدفق الخلوي الخلية.
  10. إعداد عينات عالية الإنتاجية (HTS) على تدفق عداد الكريات (BDLSRII).
  11. اكتساب 10،000 الأحداث / جيد وفقا للالتدفق الخلوي قالب الاستحواذ.
  12. التصدير ومن ثم تحليل البيانات لتحليل التدفق الخلوي باستخدام حزمة البرامج، مثل FlowJo V7.5:
    1. الأولى، البوابة الخلايا الحية HEK293 استنادا إلى الأمام (حجم) والجانب (تحبب) ينثر.
    2. مزيد من البوابة الخلايا الحية HEK293 استنادا عالية GFP-الإيجابية لتحليل فقط الخلايا المصابة بالعدوى بالنقل.
    3. تحديد كثافة يعني مضان (MFI) من قناة AF647 داخل خلايا GFP إيجابية الحية.
    4. تصدير البيانات إلى Excel أو بريزم للتحليل:
      1. مؤامرة جoncentrations من الأجسام المضادة الأولية (المضادة للNMDAR أو المضادة للD2R الضد) مقابل الحصول عليها من مؤسسات التمويل الأصغر الخلايا المحتضنة مع هذه الأجسام المضادة.
      2. لكل عينة المريض والسيطرة، وتحديد ΔMFI بطرح مؤسسات التمويل الأصغر من الخلايا HEK293 CTL من مؤسسات التمويل الأصغر من HEK293 D2R + أو HEK293 NMDAR + الخلايا، على التوالي.
      3. حساب عتبة الأجسام المضادة الإيجابية عن طريق إضافة ثلاثة انحرافات معيارية فوق ΔMFI متوسط ​​الفوج السيطرة.
      4. عينات فردية مؤامرة مجمعة وفقا لنوع المصل على الرسم البياني وتمثل عتبة كخط.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم الحصول على الخلايا الحية HEK293 D2R + وHEK293 CTL في تدفق عداد الكريات باستخدام عينات عالية الإنتاجية. خلال التحليل، وبوابات الخلايا استنادا مبعثر إلى الأمام (حجم) ومبعثر الجانب (تحبب) المعلمات (أرقام 1A و1D). أعرب خلايا HEK293 Transfected جزيء مراسل GFP، في السيتوبلازم، واستبعدت من التحليل خلايا untransfected (أرقام 1B و1E). داخل GFP + البوابة، تم قياس مؤسسات التمويل الأصغر المرتبطة AF647 مترافق المضادة للمفتش ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتصف هذه الورقة تطبيق الرواية من التدفق الخلوي الحية فحص خلية مقرها لكشف الأجسام المضادة التي تستهدف بروتينات معينة سطح الخلية العصبية باستخدام عينات عالية الإنتاجية. باستخدام هذه التقنية، ونحن التقرير أن مجموعة فرعية من المرضى المصابين يعانون من أمراض المناعة الذاتية الجهاز العصبي المركزي لديهم الأجسام المضادة في الدم إلى السطح NMDAR أو تطفو على السطح D2R.

خطوات أساسية للكشف عن الأجسام المضادة الأمثل باستخدام هذ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تضارب المصالح: قد قدم براءة الاختراع عن طريق الفيس بوك والتجمع الدستوري الديمقراطي (جامعة سيدني) مدعيا D2R كهدف للالأجسام المضادة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل المجلس الأسترالي الوطني للصحة والبحوث الطبية، ومؤسسة ستار العلمية (أستراليا)، جمعية متلازمة توريت (الولايات المتحدة الأمريكية)، والتصلب المتعدد تريش مؤسسة البحوث والتصلب المتعدد البحوث أستراليا، ومؤسسة بيتري (أستراليا)، وريبيكا L. مؤسسة كوبر البحوث الطبية (استراليا). نشكر جميع المرضى وأفراد الأسرة الذين قدموا عينات لدراستنا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ناقلات pIRES2-EGFPClontech6029-1
مستقبلات HA-Dopamine-2 البشرية (D2R) (cDNAميسوري S & مركز موارد T cDNADRD020TN00
الوحدة الفرعية البشرية 1 من NMDAR (NR1) هدية cDNAمن البروفيسور A. Vincent   ؛ (أكسفورد ، المملكة المتحدة)
الفأر المنقى أحادي النسيلة المضاد للإنسان NR1 (استنساخ: 54.1)BD Pharmingen556308
الماوس أحادي النسيلة المنقى المضاد ل DRD2 IgG (الاستنساخ: 1B11)Sigma-AldrichWH0001813M1-50UG
Alexa Fluor 647 الحمار المضاد للفأر IgG (H + L)InvitrogenA31571
Alexa Fluor 647 الماعز المضاد للإنسان IgG (H + L)InvitrogenA21445
دولبيكو s النسر المعدل المتوسط (1x) 4.5 جم / لتر D-glucose و L-Glutamine و 110 مجم / لتر بيروفات الصوديومInvitrogen11995-065
مصل الأبقار الجنينيInvitrogen10099-141
GentamicinInvitrogen15710-072
GlutaMAXInvitrogen35050-061
Penicillin-StreptomycinInvitrogen15140-122
GeneticinInvitrogen10131-035
ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (1x) (-Ca2 + < / sup> / - Mg2 + < / sup>)Invitrogen14190-144
TrypLE Express (1x) مع الفينول الأحمرInvitrogen12605-028
0.9٪ كلوريد الصوديومباكسترAHF7975
PolyethyleniminePolysciences Inc9002-98-6
VerseneInvitrogen15040-066
XhoIRoche10899194001
NheIRoche10885843001
PureLink PCR Purification KitInvitrogenK3100-01
JetQuick Gel Extraction Spin KitGenomed420050
T4 DNA LigaseRoche10481220001
Plasmid  زائد  Maxi KitQiagen12963
اسم المعدات / البرمجياترقم الكتالوج الشركةالموديل / الإصدار
مقياس التدفق الخلوي مع نظام أخذ العينات عالي الإنتاجيةBD BiosciencesBDLSRII مع
مجهر HTS المقلوبأوليمبوسCKX41 (مع مصباح زئبق ومصدر طاقة U-RFLT50)
ماصة إلكترونية متعددة القنوات (15-300 مو ؛ ل)Eppendorf613-2240P12-channel Xplorer Plus
Excel Microsoft2010
Prism GraphPad Software، Inc.v4
FlowJoTreestarv7.5
50 مل أنابيب مخروطية من مادة البولي بروبلين BDBiosciences352070
6 آبار صفيحةBD Biosciences353046
قارورة زراعة الأنسجة (T75)BD Biosciences353136
ParafilmPechiney Plastic PackagingPM-992
V-bottom 96-well لوحةكورنينج651180
) محلول < td colspan = "4" >< ص >< / ص >

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lancaster, E., Martinez-Hernandez, E., Dalmau, J. Encephalitis and antibodies to synaptic and neuronal cell surface proteins. Neurol. 77, 179-189 (2011).
  2. Vincent, A., Bien, C. G., Irani, S. R., Waters, P. Autoantibodies associated with diseases of the CNS: new developments and future challenges. Lancet Neurol. 10, 759-772 (2011).
  3. Dalmau, J., et al. Anti-NMDA-receptor encephalitis: case series and analysis of the effects of antibodies. Lancet Neurol. 7, 1091-1098 (2008).
  4. Dalmau, J., et al. Paraneoplastic anti-N-methyl-D-aspartate receptor encephalitis associated with ovarian teratoma. Ann Neurol. 61, 25-36 (2007).
  5. Dale, R. C., et al. N-methyl-D-aspartate receptor antibodies in pediatric dyskinetic encephalitis lethargica. Ann Neurol. 66, 704-709 (2009).
  6. Lancaster, E., et al. Antibodies to the GABA(B) receptor in limbic encephalitis with seizures: Case series and characterisation of the antigen. Lancet Neurol. 9, 67-76 (2010).
  7. Lai, M., et al. AMPA receptor antibodies in limbic encephalitis alter synaptic receptor location. Ann Neurol. 65, 424-434 (2009).
  8. Irani, S. R., et al. Antibodies to Kv1 potassium channel-complex proteins leucine-rich, glioma inactivated 1 protein and contactin-associated protein-2 in limbic encephalitis, Morvan’s syndrome and acquired neuromyotonia. Brain. 133, 2734-2748 (2010).
  9. Lai, M., et al. Investigation of LGI1 as the antigen in limbic encephalitis previously attributed to potassium channels: a case series. Lancet Neurol. 9, 776-785 (2010).
  10. Lancaster, E., et al. Antibodies to metabotropic glutamate receptor 5 in the Ophelia syndrome. Neurol. 77, 1698-1701 (2011).
  11. Dale, R. C., et al. Antibodies to surface dopamine-2 receptor in autoimmune movement and psychiatric disorders. Brain. , (2012).
  12. Titulaer, M. J., et al. Treatment and prognostic factors for long-term outcome in patients with anti-NMDA receptor encephalitis: an observational cohort study. Lancet Neurol. 12, 157-165 (2013).
  13. Hughes, E. G., et al. Cellular and synaptic mechanisms of anti-NMDA receptor encephalitis. J Neurosci. 30, 5866-5875 (2010).
  14. Bien, C. G., et al. Immunopathology of autoantibody-associated encephalitides: clues for pathogenesis. Brain. 135, 1622-1638 (2012).
  15. Waters, P. J., et al. Serologic diagnosis of NMO: a multicenter comparison of aquaporin-4-IgG assays. Neurol. 78, 665-671 (2012).
  16. McLaughlin, K. A., et al. Age-Dependent B Cell Autoimmunity to a Myelin Surface Antigen in Pediatric Multiple Sclerosis. J Immunol. 183, 4067-4076 (2009).
  17. Probstel, A. K., et al. Antibodies to MOG are transient in childhood acute disseminated encephalomyelitis. Neurol. 77, 580-588 (2011).
  18. Cho, D., et al. N-terminal Region of Dopamine D2 Receptor, a Rhodopsin Family GPCR, Regulates Proper Integration into Plasma Membrane and Endocytic Routes. British journal of pharmacology. , (2011).
  19. Zhou, D., et al. Identification of a pathogenic antibody response to native myelin oligodendrocyte glycoprotein in multiple sclerosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 19057-19062 (2006).
  20. Brilot, F., et al. Antibodies to native myelin oligodendrocyte glycoprotein in children with inflammatory demyelinating central nervous system disease. Ann Neurol. 66, 833-842 (2009).
  21. Boronat, A., et al. Encephalitis and Antibodies to Dipeptidyl-Peptidase-Like Protein-6, a Subunit of Kv4.2. Potassium Channels. Ann Neurol. 73, 120-128 (2013).
  22. Hinson, S. R., et al. Aquaporin-4-binding autoantibodies in patients with neuromyelitis optica impair glutamate transport by down-regulating EAAT2. J. Exp. Med. 205, 2473-2481 (2008).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HEK 293 GFP

مقالات ذات صلة