وقد برزت تشوه الميكانيكية السريع للخلايا باعتبارها، طريقة خالية من ناقلات واعدة للتسليم داخل الخلايا والجزيئات النانوية. يوفر هذا البروتوكول خطوات تفصيلية حول كيفية استخدام النظام لمجموعة واسعة من التطبيقات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الضغط خلية باعتبارها قوية، ميكروفلويديك بين الخلايا توصيل منصة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد برزت تشوه الميكانيكية السريع للخلايا باعتبارها، طريقة خالية من ناقلات واعدة للتسليم داخل الخلايا والجزيئات النانوية. وقد أظهرت هذه التقنية في معالجة التطبيقات المحتملة صعبة سابقا؛ بما في ذلك، والتسليم إلى الخلايا الأولية المناعي، وإعادة برمجة الخلية، وأنابيب الكربون، والكم نقطة التسليم. تعتمد هذه المنصة خالية من ناقلات ميكروفلويديك على اضطراب الميكانيكية للغشاء الخلية لتسهيل تسليم عصاري خلوي من المواد المستهدفة. هنا، نحن تصف طريقة مفصلة لاستخدام لهذه الأجهزة ميكروفلويديك بما في ذلك، والتجمع الجهاز، وإعداد الخلايا، وتشغيل النظام. هذا النهج يتطلب التسليم الأمثل موجزة عن نوع الجهاز وظروف التشغيل للتطبيقات يبلغ عنها سابقا. الإرشادات المتوفرة هي تعميم لمعظم أنواع الخلايا والمواد التسليم وهذا النظام لا يتطلب مخازن المتخصصة أو خطوات التعديل الكيميائي / الاقتران. هذا العمل كما توفرق توصيات بشأن كيفية تحسين أداء الجهاز والمتاعب اطلاق النار على المشاكل المحتملة المتعلقة انسداد، الكفاءة تسليم منخفضة، وبقاء الخلية.
المقدمة
تسليم الجزيئات إلى السيتوبلازم الخلية هو خطوة حاسمة في التطبيقات العلاجية والبحوث. جسيمات متناهية الصغر بوساطة التسليم، على سبيل المثال، أظهرت المحتملة في العلاج الجيني 1،2، بينما التسليم البروتين هو وسيلة واعدة لتؤثر على وظيفة الخلوية في كل من السريرية والمختبرية 3 4 الإعدادات. غيرها من المواد، مثل المخدرات جزيء صغير، نقاط الكم، أو جزيئات الذهب، هي ذات فائدة في تطبيقات تتراوح بين علاجات السرطان 5،6 إلى 7،8 وضع العلامات داخل الخلايا، وجزيء واحد تتبع 9.
غشاء الخلية غير منفذ إلى حد كبير الجزيئات. العديد من ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. تخزين
- تخزين خزانات، وأصحاب والحلقات والأجهزة ميكروفلويديك في الايثانول 70٪. استخدام الحاويات (مثل جرة أو كوب) التي لديها غطاء لمنع التبخر وتلوث الغبار أو الجزيئات خارج. وضع الأجهزة في حاوية واحدة (1) والخزانات وO-حلقات في حاوية الثانية (2)، وأصحاب في الثالثة (3).
ملاحظة: استخدام الايثانول 70٪ للتخزين هو الحفاظ على العقم. إذا كانت مكونات فقط من الحل هي الايثانول والماء (أي لا وكلاء تغيير طبيعة)، وينبغي أن تكون جميع مكونات النظام متوافق تماما ولن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يحتوي الشكل 1 تخطيطي وصفية للنظام التسليم ميكروفلويديك. أرقام 2A-B توضيح نتائج نموذجية من علاج خلايا هيلا مع تصاميم مختلفة في الجهاز وجود fluorescently مترافق 3 كيلو دالتون ديكستران 20. إذا تم اتباع الإجراء بشكل صحيح، سوف أداء النظام تكون حساسة لنوع الجهاز وسرعة التشغيل. لذلك، ينبغي للمرء أن تحسين هذه الظروف لتطبيق معين قبل الشروع في المزيد من التجارب المعقدة. في مجموعة من ظروف التشغيل موضح في الشكل، يبقى بقاء الخلية أعلى من 80٪، ومع ذل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
قد تحتاج بعض جوانب الإجراءات التجريبية وصفها (أي عوامل أخرى من تصميم رقاقة وسرعة التشغيل) ليكون الأمثل اعتمادا على نوع من الخلايا والمواد التسليم يتم تطبيق نظام ل. المناقشة التي يلي عناوين بعض العوامل الأكثر شيوعا التي يجب مراعاتها عند تصميم التجارب.
لتحسين إشارة لتسليم مركبات fluorescently المسمى، ويحتاج المرء لمعالجة مصادر مضان الخلفية. السطح ملزمة والإلتقام، على سبيل المثال، يمكن معالجتها عن طريق غسل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفين أرمون Sharei، روبرت لانغر، وكلاوس ينسن F. هي مساهمي الشركة SQZ التكنولوجيات الحيوية التي تنتج الأجهزة ميكروفلويديك المستخدمة في هذه المقالة.
شكر وتقدير
نشكر T. Shatova للمناقشة مفيدة على التصميم التجريبي وتحليل البيانات. المساعدة والخبرة من G. باراديس، واعترف أفراد التدفق الخلوي الأساسية في معهد كوخ، وموظفي مختبر التكنولوجيا مايكروسيستمز في معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا بامتنان. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح EB011187 RC1-02، DE013023، DE016516، EB000351، وجزئيا من قبل المركز الوطني للسرطان معهد السرطان دعم (كور) المنح P30-CA14051 وMPP-09Call-انجر-60.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حامل الجهاز & خزان بلاستيك | SQZ Biotechnologies | Holder | |
| LSRFortessa Analyzer | Becton Dickinson | N / A | آلة قياس التدفق الخلوي المستخدمة في معهد كوخ المرافق الأساسية |
| جهاز الموائع الدقيقة | SQZ Biotechnologies | Cell Squeeze | |
| O-Rings | McMaster | 9452K311 | |
| نظام الضغط لتشغيل الجهاز | SQZ Biotechnologies | نظام | |
| ملاقط | |||
| حمام |
المراجع
- Schaffert, D., Wagner, E. Gene therapy progress and prospects: synthetic polymer-based systems. Gene. Ther. 15, 1131-1138 (2008).
- Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. Knocking down barriers: advances in siRNA delivery. Nat. Rev. Drug Discov. 8, 129-....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
