مقالة منهجية

تصاعدي الأورطي انقباض في الفئران لخلق الضغط الزائد تضخم القلب النموذجي

DOI:

10.3791/50983

⸱

يونيو 29, 2014

 ,  ,  ,  , 
1Cardio Vascular Disease Biology, Rajiv Gandhi Centre for Biotechnology, 2Animal Research Facility, Rajiv Gandhi Centre for Biotechnology, 3Cardiology Department, Sree Chitra Tirunal Institute for Medical Sciences & Technology

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن تصف الإجراء التدريجي لخلق الضغط الزائد وتضخم البطين الأيسر في فئران ويستار بواسطة انقباض الشريان الأبهر الصاعد باستخدام مقطع معدنية صغيرة. ويستخدم هذا النموذج على نطاق واسع لدراسة التغييرات إعادة عرض خلال تضخم القلب وتحديد وتقييم استراتيجيات الانحدار من هذه التغييرات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصاعدي انقباض الشريان الأبهر هو النموذج الأكثر شيوعا والجراحية الناجحة لخلق ضغط الزائد الناجم عن تضخم القلب وقصور في القلب. هنا، نحن تصف إجراء العمليات الجراحية مفصلة لخلق الضغط الزائد وتضخم القلب في الفئران عن طريق انقباض الشريان الأبهر الصاعد باستخدام مقطع معدنية صغيرة. بعد التخدير، ومدخل أنبوب القصبة الهوائية عن طريق إدخال قنية من خلال شق منتصف الطريق الذي تم بين حلقتين غضروف القصبة الهوائية. ثم يتم إجراء شق الجلد على مستوى الفضاء الوربية الثانية على جدار الصدر الأيسر ويتم مسح طبقات العضلات لتحديد موقع جزء من الشريان الأورطي تصاعدي. وقلص الأبهر الصاعد إلى 50-60٪ من قطرها الأصلية عن طريق تطبيق مقطع التيتانيوم صغيرة الحجم. بعد انقباض الشريان الأبهر، ويقترب من أضلاعه الثاني والثالث مع خيوط البرولين. أعيد إنشاء تتم إزالة قنية القصبة الهوائية التنفس مرة واحدة عفوية. ولا يسمح للحيوان لاسترداد سن لوحة التدفئة عن طريق خفض تدريجيا التخدير. يتم تحديد شدة الضغط الزائد التي أنشأتها انقباض الشريان الأبهر الصاعد عن طريق تسجيل التدرج الضغط باستخدام العابرة للالصدري ثنائية الأبعاد دوبلر-ضربات القلب. عموما هذا البروتوكول هو مفيد لدراسة الأحداث وإعادة عرض خصائص مقلص للقلب خلال ظهور تدريجي وتطور من تضخم القلب الى القلب معاوض مرحلة الفشل.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نماذج حيوانية صغيرة هي الأدوات الأكثر تفضيلا لدراسة التغيرات المزمنة في تطوير تضخم القلب وانتقاله إلى فشل القلب. نماذج فشل القلب عن طريق الأساليب الجراحية وقد وضعت أصلا في الفئران حيث أن هذه الحيوانات هي الأكثر مناسبة لعمليات جراحية في الصدر مفتوحة، ضربات القلب وتقييم المعلمات الدورة الدموية. كما أنها توفر العينات بعد الوفاة كافية للأنسجة، والدراسات الخلوية المستوى الجزيئي 1. انقباض في الشريان الأبهر الصاعد هو واحد من النماذج الجراحية الأكثر شيوعا ونجاحا لخلق فشل القلب الضغط الزائد 2، 3. يناسب هذا النموذج جيدا لدراسة الأحداث إعادة عرض الخلوية الخلوية ودون وخصائص مقلص للقلب خلال الانتقال من تضخم إلى فشل القلب 4.

والميزة الرئيسية لهذا النموذج هو ظهور تدريجي للضغط الزائد على القلب 5، </ سوب> 6. هذا النموذج هو ذات الصلة سريريا بسبب التقدم بطيء ولكنه ثابت في الفترة من تعويض تضخم القلب إلى مرحلة امعاوض وأخيرا إلى مرحلة فشل القلب. تتأثر مدة لتطور تضخم القلب إلى فشل القلب والتغيرات الفسيولوجية المرتبطة أساسا من درجة تضيق أنتجت 7. تصاعدي انقباض الشريان الأبهر يمكن القيام بها بطريقتين، إما باستخدام الخيوط الجراحية أو عن طريق تطبيق مقاطع معدنية 8، 9. والميزة الرئيسية لاستخدام مقطع معدني لانقباض الشريان الأبهر هو أن العمليات الجراحية هي أقل تعقيدا. في هذا الأسلوب واحد لديه لتحديد موقع فوق صمامي الأبهر الصاعد وإدراج القصاصة حول الشريان الأورطي للحصول على المستوى المطلوب من انقباض. A ضام الصدر ليس من الضروري في هذا الإجراء. النطاقات الأبهر عن طريق خياطة يتطلب المزيد من التلاعب الجراحية لوضع إبرة قياس بجانب الأبهر الصاعد وخياطة حوله لتنتج المستوى المطلوب من انقباض الشريان الأبهر. والأسلوب الأخير هو أكثر تستغرق وقتا طويلا بالمقارنة مع استخدام مقاطع معدنية لانقباض الشريان الأبهر. الأسلوب هو موضح في هذا الفيديو يوضح الإجراء الجراحي لانقباض الشريان الأبهر الصاعد في الفئران التي يسمح بإنشاء الضغط زائد تضخم البطين الأيسر نموذج.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأجريت التجارب على الحيوانات بعد الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات المؤسسية الحيوان. وتم إيواء فئران ويستار تحت الظلام 12 ساعة لدورة ضوء، درجة حرارة الغرفة ثابتة (24 ± 2 درجة مئوية) مع الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية (وفقا للمبادئ التوجيهية CPCSEA).

1) العناية والتخدير قبل العملية

  1. الحفاظ على الفئران (حوالي 200 غرام من وزن الجسم) تحت مظلة المضادات الحيوية 24 ساعة قبل الجراحة بالإدارة أموكسيسيلين شفويا (الجرعة: 500 ملغ / لتر من الماء).
  2. تعقيم جميع الأدوات الجراحية (مثل مقص، ملقط، مقطع قضيب، والإبر خياطة الجروح، وحامل إبرة) بواسطة التعقيم في درجة حرارة 121 مئوية لمدة 15 دقيقة.
  3. استخدام وسادة التدفئة للحفاظ على درجة حرارة جسم الحيوان نحو 37 درجة مئوية لتجنب الانخفاض السريع في معدل ضربات القلب.
  4. الحرص على تجنب الجفاف الحيوان قبل وأثناء الجراحة.
  5. تخدير الفئران في غرفة الاستقراء مع 3٪ isoflurane ومختلطة مع0.5-1.0 لتر / دقيقة 100٪ من الأكسجين؛ الحفاظ على التخدير مع 1.5٪ isoflurane و.
  6. تحقق منعكس دواسة لتأكيد التخدير ناجحة.

2) إعداد الموقع الجراحية

  1. الحفاظ على الفئران على رأس درجة الحرارة التي تسيطر عليها سادة التدفئة في موقف ضعيف.
  2. ضع الشريط المطاطي على الأسنان الأمامية والفئران للحفاظ على الحيوانات في الموقف مع الحفاظ على التخدير مع مخروط الأنف.
  3. إزالة الفراء من العنق والصدر غادر المنطقة من الفئران (ويفضل استخدام ماكينة حلاقة كهربائية).
  4. تطهير موقع الجراحية مع محلول البوفيدون اليود ثم مع 70٪ الكحول الإيثيلي.
  5. استخدام ثنى العقيمة لفضح فقط موقع الجراحية أثناء إجراء الجراحة.
    ملاحظة: كما خيارا إضافيا لرعاية الحيوان، 0.25٪ Bupivicaine معرف (2.5 ملغ / كلغ) يمكن إدراجها قبل شقها في كل موقع شق لتخدير موضعي / التسكين.

3) تنبيب الرغامي في الجرذ

  1. إجراء شق صغير في الجلد موازية إلى القصبة الهوائية باستخدام شفرة جراحية معقمة وفصل بعناية الأنسجة الكامنة من أجل فضح القصبة الهوائية.
  2. تطبيق التعادل 4-0 من الحرير خيوط الجروح تحت القصبة الهوائية ورفع بلطف التعادل التصاعدي.
  3. جعل شق منتصف الطريق بين حلقتين الغضروف وإدراج قنية القصبة الهوائية إلى القصبة الهوائية من الفئران.
  4. توصيل قنية القصبة الهوائية لجهاز التنفس الصناعي القوارض للحفاظ على معدل التنفس من 50 الأنفاس / دقيقة، حجم المد والجزر من 1.70 مل والوقت الالهام من 0.60 ثانية (للفأر مع 200 غرام من وزن الجسم).

4) انقباض تصاعديا الأبهر

  1. بعد استشعار موقف الأضلاع مع الأصابع، وجعل شق الجلد من حوالي 2 سم على جدار الصدر غادر بين الأضلاع الثانية والثالثة.
  2. فصل طبقة العضلات الوربية بعد طبقة، وجعل شق حوالي 1.5 سم طويلة بين الأضلاع الثانية والثالثة. (العناية ينبغي أن يكون اتخاذن لتجنب أي إصابة الرئتين في حين جعل شق بين الضلوع)
  3. سحب الأضلاع وتحديد موقع جزء تصاعدي من الشريان الأورطي.
  4. وضع مقطع التيتانيوم صغيرة الحجم حول الأبهر الصاعد مع مساعدة من قضيب حيث تشنجا الشريان الأورطي إلى 50-60٪ من القطر الأصلي.
  5. بعد انقباض الشريان الأبهر، تقريب الأضلاع الثانية والثالثة مع 3.0 البرولين في نمط خياطة توقف. في وقت واحد، وقفة التنفس الصناعي لمدة 2-4 ثانية من أجل إعادة تضخيم الرئتين.
  6. Appose طبقات العضلات مع 3.0 الغرز البرولين والجلد مع 4.0 الغرز الحرير في نمط خياطة توقف. الغرز للامتصاص غير الاصطناعية يمكن استخدامها بدلا من الحرير لخياطة الجلد.
  7. إزالة القصبة الهوائية قنية من الفئران وإعادة تأسيس التنفس مرة واحدة عفوية.
  8. إغلاق الفتحة القصبة الهوائية مع 3.0 الغرز البرولين وطبقة الجلد مع 4.0 الغرز الحرير.
  9. السماح للحيوان لاسترداد على رانه التدفئة وسادة من خلال خفض تدريجيا التخدير والتنفس الصناعي بمساعدة التنفس.
  10. في الحيوانات صورية السيطرة العمر المتطابقة، نفذ القصبة الهوائية وبضع الصدر دون انقباض الشريان الأبهر الصاعد.

5) العناية اللاحقة للعمليات الجراحية

  1. تطهير المنطقة الجراحية مع محلول البوفيدون اليود.
  2. كما تسكين بعد العملية، وضخ ترامادول داخل peritoneally (10 ملغ / كغ من وزن الجسم / يوم) لمدة 1 أسبوع.
  3. حقن معقمة العادي المالحة داخل peritoneally إذا ظهرت علامات الجفاف بعد الجراحة (حوالي 1 مل).
  4. إدارة الأموكسيسيلين شفويا، مختلطة مع مياه الشرب، لمدة سبعة أيام (الجرعة: 500 ملغ / لتر من الماء).
  5. إزالة أي خيوط الحرير المتبقية من الجلد آخر 10 أيام من الجراحة تحت التخدير عن طريق الاستنشاق.

6) إقرار انقباض الناجح تصاعديا الأبهر

  1. إجراء عبر الصدر ثنائية الأبعاد دوبلر-ضربات القلب لتحديد intenSITY من الضغط الزائد تنتجها انقباض الشريان الأبهر الصاعد.
  2. تخدير الفئران أسبوع واحد بعد الجراحة كما هو موضح سابقا (الخطوة 1.5)
  3. وضع محول بالموجات فوق الصوتية في الموضع القصية فوق لتسجيل التدرج الضغط عبر جزء ضيق من الشريان الأبهر الصاعد.
    ملاحظة: سوف الفئران مع التدرج الضغط من حوالي 60 ملم من الزئبق في موقع ضيق الأبهر تطوير تضخم القلب الحاد بحوالي 8-10 أسابيع بعد الجراحة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في تجاربنا ونحن قادرون على تحقيق أكثر من 80٪ معدلات البقاء على قيد الحياة. تم تأكيد فعالية انقباض الشريان الأبهر عن طريق إجراء تخطيط صدى القلب دوبلر. الفئران (ن = 6) مع التدرج الضغط من حوالي 60 ملم من الزئبق في موقع ضيق الشريان الأبهر لوحظت لمدة 8 أسابيع وضحى لتحليل لتطوير تضخم القلب (الشكل 1). بعد 8 أسابيع بعد الجراحة كشف تقييم تخطيط صدى القلب زيادة كبيرة في البطين الأيسر المعلمات مثل سمك بين البطين الحاجز، البطين الأيسر الخلفي سمك الجدار وانخفاض في الجهة اليسرى ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك العديد من النماذج الجراحية للتحريض الضغط الزائد وكذلك تضخم القلب وقصور في القلب. في الحيوانات الصغيرة، وضعت Lorell وزملاؤه نموذج وصفناها هنا وأنها ذكرت حدوث تضخم القلب معاوض 8 أسابيع بعد ربط الشريان الأبهر 5. التغيرات القلبية التقدم تدريجيا إلى حالة امعاوض ومن ثم يؤدي إلى فشل القلب. الميزة الرئيسية لهذا النموذج هو ظهور تدريجي للزيادة في ضغط البطين الأيسر وبالتالي مماثلة للحالات السريرية في ارتفاع ضغط الدم المزمن. وإنما هو أيضا نموذج حيواني مناسبة لدراسة فشل القلب ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفين الاعتراف قسم التكنولوجيا الحيوية، وحكومة الهند للحصول على الدعم المالي لهذا المشروع. وأيد أجيت كومار GS مع كبار زمالة بحثية من مجلس البحوث الصناعية، حكومة الهند وBinil راج مع كبار زمالة بحثية من المجلس الهندي للأبحاث الطبية، وحكومة الهند العلمية و.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
فئرانالتي يتم الاحتفاظ بها في ARF ، أنظمة
التخدير الاستنشاقي RGCB VetEquipAB19276
جهاز التنفس الصناعي للقوارضCWE IncSAR- 830 / AP 
قنية القصبة الهوائية للفئرانCWE Inc13-21032
نظام الموجات فوق الصوتيةPhilipsHD7
محول طاقة بالموجات فوق الصوتيةPhilipsS 12
مشبك تيتانيوم (صغير)Horizon1204
قضيب كليبWeck137081
ماكينة حلاقة كهربائيةVinverthVBT0817
شفرة BP (الحجم: 11)الجراحREF10111إعداد موقع الجراحة
ترامادولأوركيد الرعاية الصحيةOCH043
أموكسي سيلين هيدروكلوريدرانباكسي
إيزوفلورانبيرامال الرعايةالصحية A23M10A
محاقنBD2015-09
4-0 حرير مضفرالماس
3-0 برولينجونسون وأمبير جونسونNW018
الشريط الجراحيرومسونزSH 6301
بوفيدون اليودوين ميديكير
درجة الحرارة. وسادة التدفئة التي يتم التحكمفلامنغوHC1003
الويستار فيها

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present. Circ Heart Fail. 2, 138-144 (2009).
  2. Weinberg, E. O., et al. Angiotensin-converting enzyme inhibition prolongs survival and modifies the transition to heart failure in rats with pressure overload hypertrophy due to ascending aortic stenosis. Circulation. 90, 1410-1422 (1994).
  3. Schunkert, H., et al. Increased rat cardiac angiotensin converting enzyme activity and mRNA expression in pressure overload left ventricular hypertrophy. Effects on coronary resistance, contractility, and relaxation. J Clin Invest. 86, 1913-1920 (1990).
  4. Hasenfuss, G. Animal models of human cardiovascular disease, heart failure and hypertrophy. Cardiovasc Res. 39, 60-76 (1998).
  5. Litwin, S. E., et al. Serial echocardiographic-Doppler assessment of left ventricular geometry and function in rats with pressure-overload hypertrophy. Chronic angiotensin-converting enzyme inhibition attenuates the transition to heart failure. Circulation. 91, 2642-2654 (1995).
  6. Miyamoto, M. I., et al. Adenoviral gene transfer of SERCA2a improves left-ventricular function in aortic-banded rats in transition to heart failure. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 793-798 (2000).
  7. Kagaya, Y., Hajjar, R. J., Gwathmey, J. K., Barry, W. H., Lorell, B. H. Long-term angiotensin-converting enzyme inhibition with fosinopril improves depressed responsiveness to Ca2+ in myocytes from aortic-banded rats. Circulation. 94, 2915-2922 (1996).
  8. Del Monte, F., Butler, K., Boecker, W., Gwathmey, J. K., Hajjar, R. J. Novel technique of aortic banding followed by gene transfer during hypertrophy and heart failure. Physiol Genomics. 9, 49-56 (2002).
  9. Turcani, M., Rupp, H. Heart failure development in rats with ascending aortic constriction and angiotensin-converting enzyme inhibition. Br J Pharmacol. 130, 1671-1677 (2000).
  10. Kerem, A., et al. Lung endothelial dysfunction in congestive heart failure: role of impaired Ca2+ signaling and cytoskeletal reorganization. Circ Res. 106, 1103-1116 (2010).
  11. Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. Transverse aortic constriction in mice. J Vis Exp. (38), (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة