Method Article

في المختبر الهجرة الخليوي والغزو فحوصات

DOI:

10.3791/51046

⸱

June 1st, 2014

 ,  ,  , 
1Division of Hematology/Oncology, Department of Oncology, East Carolina University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تستخدم عادة، يتم وصف طرق للوصول للغاية لدراسة الهجرة الخلية والغزو في المختبر. الأسلوب الأول هو الجرح خلية إغلاق الفحص الذي يقيس حركية الخلية. الأسلوب الثاني هو transwell الهجرة والغزو الفحص أن يقيم الكيميائي والقدرة الغازية من الخلايا.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهجرة هي خاصية رئيسية للخلايا الحية وضرورية للتطور الطبيعي والاستجابة المناعية وعمليات المرض مثل ورم خبيث السرطان والالتهابات. تعد طرق فحص هجرة الخلايا مفيدة ومهمة للغاية لمجموعة واسعة من الأبحاث الطبية الحيوية مثل بيولوجيا السرطان والمناعة وبيولوجيا الأوعية الدموية وبيولوجيا الخلية والبيولوجيا التنموية. نستخدم هنا هجرة الخلايا السرطانية وغزوها كمثال ونصف فحصين مرتبطين لتوضيح الطرق شائعة الاستخدام والتي يسهل الوصول إليها لقياس هذه العمليات. الطريقة الأولى هي مقايسة إغلاق جرح مزرعة الخلية التي يتم فيها إنشاء خدش على طبقة أحادية الخلية المتقاربة. يمكن قياس سرعة إغلاق الجرح وهجرة الخلايا عن طريق التقاط صور لقطة باستخدام مجهر مقلوب منتظم على عدة فترات زمنية. يمكن توثيق سلوك هجرة الخلايا الأكثر تفصيلا باستخدام نظام الفحص المجهري بفاصل زمني. الطريقة الثانية الموضحة في هذه الورقة هي مقايسة هجرة الخلايا عبر الويل وغزوها التي تقيس قدرة حركة الخلية وغزوها نحو تدرج جاذب كيميائي. هدفنا هو وصف هذه الأساليب بطريقة يسهل الوصول إليها بحيث يمكن تنفيذ الإجراءات بنجاح في مختبرات الأبحاث حتى مع إعداد بيولوجيا الخلية الأساسية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حركية هو سمة أساسية من سمات الخلايا الحية. وتشارك الهجرة خلية في مفهوم الحياة، والتطور الجنيني، الاستجابة المناعية، والعديد من العمليات المرضية مثل السرطان والتهاب ثانوي لورم خبيث 1-9. وبالتالي، وأساليب لدراسة الخلية السلوك المهاجرة هي أدوات البحث مفيد جدا لمجموعة واسعة من التخصصات في العلوم الطبية الحيوية، وعلم الأحياء، والهندسة الحيوية، والمجالات ذات الصلة.

دراسة الهجرة الخلية في أبحاث السرطان هو من مصلحة خاصة فيما يرتبط السبب الرئيسي للوفاة في مرضى السرطان لتطور النقيلي. من أجل السرطانية تنتشر وتنشر في جميع أنحاء الجسم، يجب أن تهاجر الخلايا السرط....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إغلاق الفحص مدينة الثقافة الجرح

  1. فصل الخلايا من نسيج لوحة الثقافة باستخدام 0.25٪ التربسين-EDTA حل. بيليه الخلايا في أنبوب 15 مل المخروطية بواسطة الطرد المركزي، ونضح طاف، واعادة تعليق الخلايا في وسائل الإعلام والثقافة. لوحة العدد المناسب من الخلايا في لوحة 6 جيدا للالتقاء 100٪ في غضون 24 ساعة.
    ملاحظة: قد تكون هناك حاجة إلى اختبارات لتحديد الوقت وعدد من الخلايا لتحقيق 100٪ التقاء بسبب نوع من الخلايا وحجم البئر وتستخدم (على سبيل المثال، هي المصنفة 1 × 10 6 خلايا سرطان الجلد B16F10 في بئر ل لوحة 6 جيدا قبل 24 ساعة من الجيل....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت إغلاق فحص الجرح وفحص الهجرة الخلية transwell المقدمة هنا باستخدام خلايا فأر B16F10 سرطان الجلد كنظام نموذج. في مقايسة إغلاق الجرح، وكانت المصنفة B16F10 الخلايا في 6 جيدا نسيج لوحة الثقافة ونمت إلى 100٪ التقاء في غضون 24 ساعة. ولدت وجرح ما يقرب من 700 ميكرون واسع باستخدام طرف ماصة وإغلاق الجرح (الهجرة الخلية) تم تسجيلها باستخدام المجهر مرور الزمن. بدلا من ذلك، يمكن أيضا إغلاق الجرح دراستها من قبل التقاط الصور لقطة في نقاط زمنية مختلفة إذا كان الوقت الفاصل بين المجهري غير متوف.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهجرة الخلية هو أحد الجوانب الهامة للدراسة في أبحاث السرطان، ويمكن أيضا أن تطبق على النمو، والجرح الدراسات المناعية الشفاء. ثقافة الخلية الجرح إغلاق الفحص والكشف عن الهجرة الخلية transwell والغزو المقايسات معلومات مفصلة من السلوكيات الخلايا المهاجرة، ويمكن استخدامها للتحقيق في الآليات الجزيئية للهجرة الخلية 1،2،10،14. استخدمت دراستنا هذه المقايسات حركية الخلية لتحديد سرعة الهجرة والغزو قدرات خط خلية سرطان الجلد B16F10.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون مايك مايلز وسام سوندرز وسي دبليو إلتون في خدمات الوسائط المتعددة والتكنولوجيا في وحدة التحكم الإلكترونية لتقديم المساعدة في إنتاج الفيديو. نحن نقدر دعم المنحة من مركز نورث كارولينا للتكنولوجيا الحيوية ، ولاعبي الجولف ضد السرطان ، وصندوق Brody Brothers Endowment Fund ، وجمعية القلب الأمريكية ، وصندوق ECU / Vidant لأبحاث وتعليم السرطان (L.V.Y. و M.J.R.).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
دولبيكو s معدل النسر المتوسط (DMEM)جيبكو11995-073
مصل الأبقار الجنيني (FBS)الجوزاء100106
مصل الأبقار الألبومين (BSA)سيجما ألدريتشA4503-50G
التربسين EDTA 0.25٪جيبكو25200-056
دولبيكو s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS)Gibco14190-250
كريستال بنفسجيSigmaC0775-100Gمذاب في الماء عند 0.2٪
عازلة تفكك الخليةGibco13151-014
حاضنة ثقافة الخليةThermo Fisher النموذج العلمي# 3145
SterilGARD غطاء السلامة الحيويةThe Baker Company، Inc. نموذج # VBM-600
EVOS Fl مجهر مقلوبThermo Fisher النموذج العلمي# AMF-4302-US
لوحة زراعة الأنسجةBecton Dickinson353046يختلف رقم الكتالوج اعتمادا على نوع لوحة الثقافة
Corning Transwell insertFisher07-200-150يختلف رقم الكتالوج حسب حجم مسام الغشاء

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
  2. Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
  3. Lau....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell MigrationWound Closure AssayTranswell AssayTime lapse MicroscopyChemoattractant GradientCell InvasionMicroscopy AnalysisCell CultureMembrane StainingImage J

Related Articles