يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التالية في الوقت الحقيقي تأثير العوامل الالتهاب الرئوي الحاد الفوعة في نموذج الفأر الالتهاب الرئوي عن طريق البكتيريا للإضاءة الحيوية

14.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51174

⸱

فبراير 23, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department Genetics of Microorganisms, Interfaculty Institute for Genetics and Functional Genomics, University of Greifswald

في هذه المقالة

ملخص

العقدية الرئوية هي الرائدة الممرض تسبب الالتهاب الرئوي الحاد المكتسبة من المجتمع ومسؤولة عن أكثر من 2 مليون حالة وفاة في جميع أنحاء العالم. تأثير العوامل البكتيرية المتورطين في اللياقة البدنية أو الفوعة يمكن رصدها في الوقت الحقيقي في الماوس الالتهاب الرئوي الحاد أو تجرثم نموذج باستخدام البكتيريا للإضاءة الحيوية.

الملخص

الالتهاب الرئوي هو واحد من مشاكل الرعاية الصحية الرئيسية في البلدان النامية والبلدان الصناعية ويترافق مع معدلات الاعتلال والوفيات كبيرة. على الرغم من التقدم في المعرفة من هذا المرض، وتوافر وحدات العناية المركزة (ICU)، واستخدام العوامل المضادة للجراثيم قوية واللقاحات فعالة، لا تزال معدلات وفيات عالية 1. العقدية الرئوية هو الممرض الرئيسي للالتهاب الرئوي المكتسبة من المجتمع (CAP) واحد من الأسباب الأكثر شيوعا لتجرثم الدم لدى البشر. وقد تم تجهيز هذا الممرض مع عتاد من adhesins المعرضة للسطح وعوامل الفوعة تساهم في الالتهاب الرئوي والأمراض الرئوية الغازية (IPD). تقييم دور في الجسم الحي من اللياقة البدنية أو الفوعة العوامل البكتيرية أمر في غاية الأهمية لكشف S. الآليات الإمراضية الرئوية. وتستخدم نماذج الفئران من الالتهاب الرئوي، وتجرثم الدم، والتهاب السحايا لتحديد تأثير العوامل المتنوعة في المكورات الرئويةخمتلفة مراحل العدوى. نحن هنا وصف بروتوكول لرصد في الوقت الحقيقي نشر المكورات الرئوية في الفئران بعد الأنف أو التهابات داخل الصفاق مع البكتيريا للإضاءة الحيوية. أظهرت النتائج تكاثر ونشر المكورات الرئوية في الجهاز التنفسي السفلي والدم، الأمر الذي يمكن تصور وتقييمها باستخدام نظام التصوير وبرامج التحليل المرفقة.

المقدمة

التهابات الجهاز التنفسي التي تسببها الفيروسات أو البكتيريا لا تزال واحدة من المشاكل المكتسبة من المجتمع أو السريرية الأكثر شيوعا في جميع أنحاء العالم مما تسبب في ما يقرب من ثلث جميع وفاة في العالم. الأنواع البكتيرية الرئيسية هي المستدمية النزلية والعقدية الرئوية 2. ومع ذلك، هذه الأنواع البكتيرية عادة ما تكون المكونات المشتركة من النباتات الطبيعية الجهاز التنفسي. وبالتالي نقل البكتيرية هي أيضا من بعض المخاطر لمرض الغازية واعتمادا على الحالة المناعية أو الاستعداد للأفراد. يتم تشغيل الاستعمار أعراض للعدوى الغازية. العقدية الرئوية هو الممرض الرئيسي للالتهاب الرئوي المكتسبة من المجتمع (CAP) واحدة من أكثر الأسباب شيوعا للتجرثم الدم لدى البشر. في الأفراد الأصحاء S. الرئوية (المكورات الرئوية) وغالبا ما تكون أعراض المستعمرين وغير ضارة من الجهاز التنفسي العلوي، حيث تصدى لهم مع بكتيريا غير إمراضيةمن الفلورا ولكن أيضا مع مسببات الأمراض مثل المستدمية النيابة. أو المكورات العنقودية الذهبية والسطر الأول من نظام الدفاع المناعي للإنسان. معدلات نقل أعلى في الأطفال الصغار (37٪) وأعلى حتى داخل مراكز الرعاية النهارية مزدحمة (58٪) 3-5. أصغر السكان وكبار السن، وحصل على المكورة الرئوية عن طريق نقل الهباء الجوي من الناقلين وإفرازات البلعوم 6، تنتمي إلى الفئات المعرضة لمخاطر عالية والتطعيم باستخدام أحد قاحات المكورات الرئوية (PCV10 أو قاح PCV13 في الأطفال و 23 التكافؤ السكاريد PPSV23 في البالغين) ويوصى في الولايات المتحدة (الولايات المتحدة) والعديد من البلدان الأوروبية 4. يغطي PPSV23 الأنماط المصلية المسؤولة عن ~ 90٪ من أمراض المكورات الرئوية bacteremic في الولايات المتحدة وأوروبا، والوقاية من الأمراض الرئوية الغازية بالتالي بكفاءة (IPD) في البالغين، في حين تغطي PCVs الأنماط المصلية الأكثر انتشارا في الأطفال. بالتالي، IPD بسبب أنواع اللقاح (VT) هي reduظهرت الأنماط المصلية دائرة الهندسة المدنية ولكن nonvaccine عرض إمكانات الفوعة العالية والمقاومة للمضادات الحيوية 4،7-12. البلعوم الأنفي كما الخزان هو نقطة الانطلاق لالمكورات الرئوية ينتشر في الجيوب الأنفية أو التهابات الأذن الوسطى الشروع المحلية الضارة. الأهم من ذلك، تنتشر مباشرة عبر مجرى الهواء إلى شعب هوائية والرئة مما يؤدي إلى مهددة للحياة CAP 4،13 المكورات الرئوية. وغالبا ما يصحب التهابات الرئة مع الأنسجة وتدمير الحاجز، وبالتالي تمكين الممرض أن تنتشر في الدم وتسبب IPD. حوادث CAP وIPD هي أعلى في الأشخاص المناعة أو في النقيضين من العمر 4،13. الظروف المسؤولة عن التحويل من المتعايشة على الممرض مع الفوعة العالية لا تزال قيد النقاش. ولكن، إلى جانب التغيرات في قابلية المضيف والتكيف التطوري ترافق مع ارتفاع الفوعة وزيادة في المقاومة للمضادات الحيوية وقد اقترحت أن يكون لها تأثير حاسم على PNEالتهابات umococcal 14-16.

وهبت الممرض مع تعدد adhesins التوسط اتصال حميم إلى الخلايا الظهارية المخاطية. بعد التغلب على مخاط مجرى الهواء، مما يسهل الالتزام المكورات الرئوية إلى الخلايا المضيفة عبر التفاعل المباشر من adhesins المعرضة للسطح مع المستقبلات الخلوية وذلك من خلال استغلال مكونات المصفوفة خارج الخلية أو البروتينات في الدم كما سد جزيئات 4،17،18. كما تم تجهيز مسببات الأمراض الرئوية تنوعا أيضا مع العوامل التي تدخل في التهرب من المضيف المناعي آليات الدفاع. وعلاوة على ذلك، لديهم القدرة على التكيف مع مختلف الأوساط المضيفة مثل الرئة، والدم، والسائل النخاعي (CSF)، على التوالي 5،17،19،20.

يتم التحقيق في تأثير العوامل البكتيرية والمرضية على المضيف التهابات الردود في النماذج الحيوانية التجريبية من الالتهاب الرئوي، وتجرثم الدم، أو التهاب السحايا 21-25. على الرغم من كونه الممرض الإنسان، وهذه النماذج نحنليرة لبنانية تأسيس فك tropism المكورات الرئوية الأنسجة، آليات الفوعة، أو protectivity المرشحين لقاح المكورات الرئوية. الخلفية الوراثية للسلالات الفطرية الماوس يحدد القابلية للالمكورات الرئوية. تم العثور على BALB / ج الفئران المصابة الأنف مع المكورات الرئوية لتكون مقاومة، في حين كانت CBA / الكالسيوم وSJL الفئران أكثر عرضة ضد الالتهابات الرئوية 22. هذا يعني أنه، على غرار البشر، والخلفية الوراثية وآليات الدفاع المضيف تحديد نتيجة العدوى. وبالتالي، من الضروري لكشف مواضع المقاومة في جينوم الفئران أقل عرضة للعدوى المكورات الرئوية بذل المزيد من الجهود. وقد أدت النتائج إلى تغييرات في الجسم الحي في بروتوكولات الفوعة. بدلا من الفئران الفطرية BALB / ج غالبا ما تستخدم في الماضي، وغالبا ما تستخدم في الوقت الحاضر CD-1/MF1 سلالات الفئران الأباعد عرضة لدراسة تأثير الخسارة من وظيفة الفوعة المكورات الرئوية أو الملاءمة عوامل 26-28. علاوة على ذلك، توفرمن المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية وتقنيات التصوير الضوئي يسمح في الوقت الحقيقي تلألؤ بيولوجي bioimaging من الالتهابات. في المكورات الرئوية تم إدراج الأمثل luxABCDE كاسيت الجين (البلازميد بول-A تينيسي 4001 كم luxABCDE ص) في موقع التكامل واحد من كروموسوم من قبل ينقول الطفرات. وقد استخدمت المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية لتقييم التوهين من المسوخ المكورات الرئوية نقص في الفوعة أو الملاءمة العوامل وإزفاء بهم من موقع واحد التشريحية ل26،28-31 آخر.

ونحن هنا نقدم بروتوكول للالتهابات الرئوية bioimaging في الفئران التهاب رئوي أو نموذج الإنتان. يمكن بسهولة رصد والتضخيم، ونشر المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية في الفئران المصابة الأنف أو الغشاء البريتونى مع مرور الوقت باستخدام نظام التصوير الضوئي ونفس الحيوان عند نقاط زمنية مختلفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

التجارب العدوى الحيوانية وصفها هنا يجب أن يؤديها بما يتفق بدقة مع (مثل قانون الصحة الأوروبية لاتحاد الجمعيات مختبر الحيوان العلوم (FELASA)) المحلية والدولية والمبادئ التوجيهية واللوائح لاستخدام الحيوانات الفقارية. التجارب يجب أن يكون وافق عليها المجلس المحلي الأخلاقية والمؤسسية جنة رعاية الحيوان. جميع التجارب مع S. وتجرى الرئوية في المختبر أو الإصابات الحيوانية في الدرجة الثانية للسلامة الأحيائية مجلس الوزراء.

1. إعداد المخزون المعدية من إضاءة الحيوية Pneumocococi

  1. إعداد الثقافات الأسهم المكورات الرئوية في تود هيويت مرق تستكمل مع 1٪ (ث / ت) خلاصة الخميرة وتركيز النهائي من 20٪ الجلسرين للصيانة في 80 درجة مئوية.
  2. لوحة كمية صغيرة من ثقافة الأسهم المكورات الرئوية مجمدة على لوحة أجار الدم واحتضان البكتيريا لمدة 10 ساعة عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2. Tانه وحة آغار الدم يحتوي على المضادات الحيوية المناسبة مثل الكانامايسين (150 ميكروغرام / مل) لينقول الإدراج من الكاسيت الجينات في جينوم luxABCDE.
  3. دون زراعة، مستعمرة جديدة على لوحة آغار الدم الجديد لمدة أقصاها 10 ساعة.
  4. تطعيم THY المتوسطة تستكمل مع 10٪ (V / V) الحرارة المعطل (30 دقيقة عند 56 درجة مئوية) مصل بقري جنيني (FBS) مع المكورات الرئوية وبدء الثقافة في لOD 600 من 0.05-0.07.
  5. احتضان المكورات الرئوية دون الانفعالات عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2 حتى يصل إلى ثقافة OD 600 من 0،35-0،40. سوف يستغرق ما بين 3-4 النمو ساعة.
  6. الحصاد المكورات الرئوية بواسطة الطرد المركزي في 3،750 x ج لمدة 10 دقيقة و resuspend المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية في الفوسفات مخزنة المالحة 7.4 درجة الحموضة (PBS) تستكمل مع FBS 0.5٪.
  7. ضبط اللقاح إلى التركيز المطلوب في PBS/10٪ FBS. جرعة العدوى يعتمد على سلالة الرئوية المستخدمة والخلفية الوراثية من هيئة التصنيع العسكريه. لتصيب الأباعد CD-1 الفئران الأنف مع S. وكس الرئوية D39 ينبغي تعديل جرعة العدوى إلى 1 × 10 7 كفو في تعليق 20 ميكرولتر تستكمل مع 90 وحدات هيالورونيداز. لا تهزه أو دوامة المكورات الرئوية، لأن هذا من شأنه أن يؤدي انحلال ذاتي.
  8. تحقق من تركيز اللقاح عن طريق طلي 10 أضعاف التخفيفات المسلسل على أجار الدم وتعداد المستعمرات بعد نمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2.
  9. التحقق من تلألؤ بيولوجي من اللقاح المكورات الرئوية عن طريق قياس تلألؤ بيولوجي باستخدام نظام التصوير الضوئي.

2. الأنف والعدوى داخل الصفاق من الفئران مع إضاءة الحيوية الرئوية

  1. استخدام الفئران الإناث الأباعد في سن 7-10 أسابيع لالتهاب رئوي حاد ونموذج الإنتان. وينبغي أن يكون وزن هذه الفئران بين 20-30 غرام.
  2. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق الكيتامين وزيلازين. إعداد خليط 1.0 ملغالكيتامين و 0.1 ملغ زيلازين في 100 ميكرولتر العقيمة 0.9٪ (ث / ت) كلوريد الصوديوم للفئران مع وزن الجسم من 20 غراما. وهذا يتفق مع جرعة من 50 ملغ / كغ من وزن الجسم للالكيتامين و 5 ملغ / كغ من وزن الجسم لزيلازين. أن تكون دقيقة، وزن الفئران قبل حقن التخدير.
  3. حقن الخليط في تجويف داخل الصفاق ووضع الحيوانات مرة أخرى إلى القفص حتى يتصرف التخدير والحيوانات مخدر. والتنفس من الفئران تصبح بطيئة جدا ومنتظمة. الفئران يجب أن تكون مخدر تماما، بحيث التلقيح داخل الأنف واستنشاق تعليق البكتيرية لا يؤدي إلى العطس وبالتالي فقدان اللقاح. هذا يمكن تقييمها من قبل معسر الماوس في نهاية الذيل، وسوف ماوس مخدر بالكامل تفتقر الاستجابة.
  4. اختيار بلطف صعودا ماوس مخدر مع الاستمرار على الماوس بين الأصابع والإبهام مع الأنف تستقيم (الشكل 1).
  5. استخدام ماصة مع نصائح ضيقة طويلة (جل لودرنصائح) وإسقاط المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية في قطرات صغيرة متعددة على فتحتي الأنف (10 ميكرولتر / الأنف) من الفأرة 26-29. سوف الماوس يستنشق كرها البكتيريا. عقد الماوس 1-2 دقيقة تستقيم ومراقبة ما إذا كان الماوس العطس أو تحافظ على اللقاح.
  6. تصيب 7-10 أسبوع من العمر CD-1 الفئران الأنف مع جرعة العدوى من 1 × 10 7 أو 7.5 × 10 7 المكورات الرئوية من سلالة D39 وTIGR4، على التوالي، لرصد العدوى في الوقت الحقيقي. حد الكشف عن النظام دون أي امتصاص الأنسجة المضيف هو ما يقرب من 1 × 10 6 البكتيريا للإضاءة الحيوية.
  7. تصيب الغشاء البريتونى الفئران (IP) لتقييم وbioimage الفوعة من المكورات الرئوية في نموذج عدوى تعفن الدم الماوس. استخدام 5 × 10 3 كفو في 100 ميكرولتر من سلالة D39 و 1 × 10 4 من سلالة TIGR4. لا يتم تخدير الفئران عند استخدام الطريق IP.
  8. تطعيم السيطرة على الفئران مع برنامج تلفزيوني.
    figure-protocol-1
    الشكل 1. عدوى الأنف من CD-1 الفئران مع S. الرئوية. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .

3. تصور المكورات الرئوية نشر في الرئة والدم باستخدام نظام التصوير

نشر صورة المكورات الرئوية بعد العدوى داخل الأنف من الفئران الإناث CD1 الأباعد في الوقت الحقيقي باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي.

  1. التبديل على نظام التصوير والبدء في برنامج تحليل الصور الموجودة على الكمبيوتر preconfigurated.
  2. نظام التصوير تهيئة تلقائيا ويتم تبريد كاميرا CCD الحرارية لل90 درجة مئوية قبل ممارسة النشاط.
  3. تعتمد الإعدادات وbinning على عدد من الفئران قياسفي وقت واحد وعلى قوة إشارة للإضاءة الحيوية. مجال الرؤية (فوف) لرصد تلألؤ بيولوجي من الحيوانات هو متغير ويتراوح بين التكبير فوف من 22.5 سم إلى قياس خمسة فئران، ومجال الرؤية من 3.9 سم لقياس ماوس واحدة أو أجزاء من الحيوانات مثل الصدر أو الرأس.
  4. تستخدم بشكل روتيني ومدة التعرض من 1 دقيقة، وعلى درجة متوسطة من binning، ومجال الرؤية من 22.5 سم (مجموعة D). أولا، اختيار وضع التصوير الانارة ومن ثم تعيين المعلمات التصوير.
  5. انبعاث إشارة قد تعتمد على السلالة البكتيرية وسلالة الماوس المستخدمة، والصباغ من الفأرة. حلق الصدر من الفئران عند استخدام مثل C57BL / 6 الفئران، والتي يمكن أن تكون مفيدة عند التصوير تطوير الالتهاب الرئوي في هذه الفئران.
  6. صورة المصابة الفئران على فترات زمنية prechosen. قياس تلألؤ بيولوجي من الفئران في نموذج الالتهاب الرئوي الحاد في فترات زمنية من 8-12 ساعة كحد أقصى. رصد أيضا رفاهية الفئران المصابة بواسطة observiنانوغرام مظهرها، والسلوك، وتقرير لفقدان الوزن.
  7. تخدير الفئران في غرفة المخدرة من نظام التخدير لمعدات التصوير قبل القياسات في الغرفة. بدء استنشاق خليط من الأكسجين وisoflurane ووانتظر حتى تنفس الفئران ببطء وبشكل منتظم.
  8. وضع الحيوانات تخدير في غرفة التصوير من النظام والحفاظ على الفئران في موقف ضعيف. الكاميرا CCD على الجزء العلوي من الغرفة سوف ثم صورة الجهاز التنفسي الفئران.
  9. وضع الحيوانات مع أنوفهم في لأنابيب للسماح استنشاق مواد التخدير.
  10. يسمح دخول isoflurane والى غرفة التصوير عن طريق أنابيب الغاز للحفاظ على التخدير.
  11. لتفعيل اتفاقية مكافحة التصحر الكاميرا على رأس الغرفة والبدء في التصوير الضوئي للإضاءة الحيوية، اضغط على "اكتساب" في برامج التصوير. على الفور صورة من الفئران في غرفة مغلقة يظهر على الشاشة. بعد دقيقة واحدة من القياس تراكب البيانات تلألؤ بيولوجي ويظهر في الصورة.
  12. وقف التخدير بعد ظهور تراكب الصور في نافذة البرنامج ووضع الفئران مرة أخرى إلى أقفاصها.
  13. ويتم رصد الفئران لتحقيق الانتعاش.
    figure-protocol-2
    الشكل 2. التخدير ورصد الفئران المصابة مع المكورات الرئوية للإضاءة الحيوية باستخدام التخدير IVIS ونظام IVIS الطيف، على التوالي. A) نظام IVIS الطيف التصوير. B) نظام التخدير IVIS مع غرفة الحضانة. C) الفئران تخدير في غرفة الحضانة دال) الفئران تقع داخل غرفة التصوير IVIS الطيف مع أنوفهم استنشاق مخدر._blank "> اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر.

4. الكمي وتقييم ضوء بارد من الفئران المصابة مع إضاءة الحيوية S. الرئوية

  1. تحديد شدة تلألؤ بيولوجي من الفئران أو من المنطقة المحددة من الفئران عن طريق قياس انبعاث الفوتون الإجمالي (الفوتونات / ثانية) باستخدام برنامج تحليل الصور.
  2. استخدام القيم من انبعاث الفوتون التي يتم توفيرها في ورقة بيانات Excel إلى إعداد الرسم البياني. منذ تباين البيانات غالبا ما تكون مرتفعة في الفئران مجمعة، إنشاء رسم بياني مربع الخط الطولي لعرض الاختلافات في الفئران المصابة مع سلالات المكورات الرئوية المختلفة.
  3. توفير الفوتونات في الفئران أو بدلا من ذلك نتائج على أنه متوسط ​​الاشعاع (الفوتونات / ثانية / سم 2 / ريال سعودي) من المساحة المحددة.
  4. بيانات قياس العائد على الاستثمار (منطقة المصالح) في وضع الفوتون يمكن كميا مقارنة عبر مختلف في نظم التصوير الجسم الحي مع مختلف وجاءإعدادات را، منذ القياسات في وحدات من وهج تلقائيا تأخذ في الاعتبار إعدادات الكاميرا (مثل الوقت والتكامل، binning، و / إيقاف، ومجال الرؤية).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

اقتناء وامتصاص الميثيونين هو من الأهمية المركزية لالمكورات الرئوية للحفاظ على اللياقة البدنية في مكانه المضيفة 32،33. يتم ترميز ميثيونين ABC البروتين الدهني نقل في D39 من قبل الحزب الديمقراطي الاشتراكي _ 0151 الجين (TIGR4: sp_0149) واسمه MetQ 32. المكورات الرئوية مزيد من انتاج الانزيمات ميثيونين الحيوي (D39: Spd_0510 - Spd_0511؛ TIGR4 Sp_0585 - Sp_0586، ميتي وMetF). عدم وجود ميثيونين في وسط محددة كيميائيا يؤثر نمو المكورات الرئوية و...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

كل التجارب التي أجريت على الحيوانات أن تتم الموافقة عليها من قبل السلطات المحلية واللجان الأخلاق. في التجارب المجراة في العدوى البكتيرية الحمل في مختلف المنافذ مجموعة من الحيوانات المصابة لابد من تحديد نقاط مختلفة في الوقت بعد الإصابة. في ظل هذه الظروف التجريبية على الحيوانات لديها لا بد من التضحية قبل عزل البكتيريا من الدم، والبلعوم الأنفي، غسيل bronchoalvelar، أو أجهزة مثل الرئتين والطحال، والدماغ. لحساب عدد من البكتيريا في مكانة المضيف وتقييم تأثير العوامل البكتي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

وأيد البحوث في المختبر عن طريق المنح من جمعية الألمانية للبحوث (DFG HA 3125/3-2، DFG HA 3125/4-2) والوزارة الاتحادية للتعليم والبحوث (BMBF) علم الجينوم العدوى الطبية (FKZ 0315828A) إلى SH.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مرق تود هيويتكارل روث ، كارلسروه ، ألمانياX936.1  ؛
مستخلص الخميرةكارل روث ، كارلسروه ، ألمانيا2363.2  ؛
لوحات أجار الدمOxoid ، Wesel ، ألمانياPB5039A 
KanamycinCarl Roth, Karlsruhe, GermanyT832.2 
ErythromycinSigma-Aldrich,Taufkirchen, GermanyE6376 
مصل الأبقار الجنيني (FBS)مختبرات PAA, Coelbe, ألمانياA11-151 
فئران CD-1 ، أنثىنهر تشارلز ، سولزفيلد ، ألمانياCD1SIFE06W08Wأنثى فئران CD-1 ، كيتامين من ستة إلى ثمانية أسابيع
500 مجم ، محلول حقن CuramedSchwabe-Curamed ، كارلسروه ، ألمانيا  ؛
Rompun 2٪ ، محلول الحقنBayer Animal Health ، Monheim ، ألمانيا 
BD Plastipak 1 مل محاقنBecton Dickinson ، هايدلبرغ ، ألمانيا300015محاقن Luer-Lok المعقمة مع إبرة
Gel Loader TipsPeqLab81-13790M & micro ؛ نصائح ltiFlex
HyaluronidaseSigma-AldrichH3884-100mgHyaluronidase Type IV-S من اختبار
الأبقار OxygenAir Liquide ، D & uuml ؛ sseldorf, GermanyM1001L50R2A001 
IsofluraneBaxter, Unterschleiß heim, Germany 
pGEM-T EasyPromega, Mannheim, Germany 
قليل النوكليوتيدات Eurofins MWG, Ebersberg, Germany 
Qiaprep تدور Midiprep Kit  Qiagen, Hilden, Germany27104 
طقم تنقية الحمض النووي PCRQiagen ، هيلدن ، ألمانيا28106  ؛
برنامج Living Image 4.1Caliper Life Sciences / PerkinElmer ، Rodgau ، ألمانيا 
XGI-8 نظام التخدير بالغازCaliper Life Sciences / PerkinElmer ، Rodgau ، ألمانيا  ؛
نظام التصوير الطيفي IVIS Caliper Life Sciences / PerkinElmer ، Rodgau ، ألمانيا  ؛
المقياس الضوئي الحيويEppendorf AG ، هامبورغ ، ألمانيا  ؛

المراجع

  1. Niederman, M. S., et al. Guidelines for the management of adults with community-acquired pneumonia. Diagnosis, assessment of severity, antimicrobial therapy, and prevention. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 163, 1730-1754 (2001).
  2. WHO, The global burden of disease: 2004 update. World Health Organization. , (2008).
  3. Bogaert, D., et al. Colonisation by Streptococcus pneumoniae and Staphylococcus aureus in healthy children. Lancet. 363, 1871-1872 (2004).
  4. Gamez, G., Hammerschmidt, S. Combat pneumococcal infections: adhesins as candidates for protein-based vaccine development. Curr. Drug Targets. 13, 323-337 (2012).
  5. Mook-Kanamori, B. B., Geldhoff, M., vander Poll, T., Dvan de Beek, D. Pathogenesis and pathophysiology of pneumococcal meningitis. Clin. Microbiol. Rev. 24, 557-591 (2011).
  6. Musher, D. M. How contagious are common respiratory tract infections. N. Engl. J. Med. 348, 1256-1266 (2003).
  7. Brueggemann, A. B., Pai, R., Crook, D. W., Beall, B. Vaccine escape recombinants emerge after pneumococcal vaccination in the United States. PLoS Pathog. 3, (2007).
  8. Munoz-Almagro, C., et al. Emergence of invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes in the era of 7-valent conjugate vaccine. Clin. Infect. Dis. 46, 174-182 (2008).
  9. Whitney, C. G. Impact of conjugate pneumococcal vaccines. Pediatr. Infect. Dis. J. 24, 729-730 (2005).
  10. Whitney, C. G., et al. Decline in invasive pneumococcal disease after the introduction of protein-polysaccharide conjugate vaccine. N. Engl. J. Med. 348, 1737-1746 (2003).
  11. Lynch, J. P. 3rd, Zhanel, G. G. Streptococcus pneumoniae: epidemiology and risk factors, evolution of antimicrobial resistance, and impact of vaccines. Curr. Opin. Pulm. Med. 16, 217-225 (2010).
  12. Singleton, R. J., et al. Invasive pneumococcal disease caused by nonvaccine serotypes among Alaska native children with high levels of 7-valent pneumococcal conjugate vaccine coverage. JAMA. 297, 1784-1792 (2007).
  13. Dockrell, D. H., Whyte, M. K., Mitchell, T. J. Pneumococcal pneumonia: mechanisms of infection and resolution. Chest. 142, 482-491 (2012).
  14. Lieberman, T. D., et al. Parallel bacterial evolution within multiple patients identifies candidate pathogenicity genes. Nat. Genet. 43, 1275-1280 (2011).
  15. Yang, J., Tauschek, M., Robins-Browne, R. M. Control of bacterial virulence by AraC-like regulators that respond to chemical signals. Trends Microbiol. 19, 128-135 (2011).
  16. Young, B. C., et al. Evolutionary dynamics of Staphylococcus aureus during progression from carriage to disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 4550-4555 (2012).
  17. Kadioglu, A., Weiser, J. N., Paton, J. C., Andrew, P. W. The role of Streptococcus pneumoniae virulence factors in host respiratory colonization and disease. Nat. Rev. Microbiol. 6, 288-301 (2008).
  18. Voss, S., Gamez, G., Hammerschmidt, S. Impact of pneumococcal microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules on colonization. Mol. Oral Microbiol. 27, 246-256 (2012).
  19. Koppe, U., Suttorp, N., Opitz, B. Recognition of Streptococcus pneumoniae by the innate immune system. Cell. Microbiol. 14, 460-466 (2012).
  20. Paterson, G. K., Mitchell, T. J. Innate immunity and the pneumococcus. Microbiology. 152, 285-293 (2006).
  21. Gerber, J., et al. A mouse model of Streptococcus pneumoniae meningitis mimicking several features of human disease. Acta Neuropathol. 101, 499-508 (2001).
  22. Gingles, N. A., et al. Role of genetic resistance in invasive pneumococcal infection: identification and study of susceptibility and resistance in inbred mouse strains. Infect. Immun. 69, 426-434 (2001).
  23. Holmes, A. R., et al. The pavA gene of Streptococcus pneumoniae encodes a fibronectin-binding protein that is essential for virulence. Mol. Microbiol. 41, 1395-1408 (2001).
  24. Koedel, U., Klein, M., Pfister, H. W. New understandings on the pathophysiology of bacterial meningitis. Curr. Opin. Infect. Dis. 23, 217-223 (2010).
  25. Medina, E. Murine model of pneumococcal pneumonia. Methods Mol. Biol. 602, 405-410 (2010).
  26. Hartel, T., et al. Impact of glutamine transporters on pneumococcal fitness under infection-related conditions. Infect. Immun. 79, 44-58 (2011).
  27. Hermans, P. W., et al. The streptococcal lipoprotein rotamase A (SlrA) is a functional peptidyl-prolyl isomerase involved in pneumococcal colonization. J. Biol. Chem. 281, 968-976 (2006).
  28. Jensch, I., et al. PavB is a surface-exposed adhesin of Streptococcus pneumoniae contributing to nasopharyngeal colonization and airways infections. Mol. Microbiol. 77, 22-43 (2010).
  29. Kadioglu, A., et al. Pneumococcal protein PavA is important for nasopharyngeal carriage and development of sepsis. Mol. Oral Microbiol. 25, 50-60 (2010).
  30. Orihuela, C. J., Gao, G., Francis, K. P., Yu, J., Tuomanen, E. I. Tissue-specific contributions of pneumococcal virulence factors to pathogenesis. J. Infect. Dis. 190, 1661-1669 (2004).
  31. Francis, K. P., et al. Visualizing pneumococcal infections in the lungs of live mice using bioluminescent Streptococcus pneumoniae transformed with a novel gram-positive lux transposon. Infect. Immun. 69, 3350-3358 (2001).
  32. Basavanna, S., et al. The effects of methionine acquisition and synthesis on Streptococcus pneumoniae growth and virulence. PLoS One. 8, (2013).
  33. Hartel, T., et al. Characterization of central carbon metabolism of Streptococcus pneumoniae by isotopologue profiling. J. Biol. Chem. 287, 4260-4274 (2012).
  34. Hammerschmidt, S., et al. The host immune regulator factor H interacts via two contact sites with the PspC protein of Streptococcus pneumoniae and mediates adhesion to host epithelial cells. J. Immunol. 178, 5848-5858 (2007).
  35. Voss, S., et al. The choline-binding protein PspC of Streptococcus pneumoniae interacts with the C-terminal heparin-binding domain of vitronectin. J. Biol. Chem. , (2013).
  36. Cartwright, K. Pneumococcal disease in western Europe: burden of disease, antibiotic resistance and management. Eur. J. Pediatr. 161, 188-195 (2002).
  37. vander Linden, M., Al-Lahham, A., Nicklas, W., Reinert, R. R. Molecular characterization of pneumococcal isolates from pets and laboratory animals. PLoS One. 4, (2009).
  38. Brehm,, et al. Sequence of the adenine methylase gene of the Streptococcus faecalis plasmid pAM beta 1. Nucleic Acids Res. 15, 3177 (1987).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

العدوى عن طريق الأنفالعدوى داخل الصفاقتقدير التلألؤ البيولوجي كمياًنظام التصوير البصريStreptococcus pneumoniaeالبروتين الدهني الرابط للميثيونينالمراقبة في الوقت الحقيقي
التالية في الوقت الحقيقي تأثير العوامل الالتهاب الرئوي الحاد الفوعة في نموذج الفأر الالتهاب الرئوي عن طريق البكتيريا للإضاءة الحيوية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.