بيضة في ودودة (EIW) الاختبار هو طريقة مفيدة لتحديد وضع البيض السلوك. يمكن إجراء تعديلات في وضع البيض يكون ردا السلوكية للكائن نموذج انواع معينة ايليجانس للمواد البيئية الضارة المحتملة مثل تلك التي تنتجها البكتيريا المسببة للأمراض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يتأثر C. ايليجانس سلوك وضع البيض من قبل العظة البيئية مثل الأسمولية 1 والاهتزاز 2. في غياب الأغذية C. وقف ايليجانس أيضا وضع البيض والاحتفاظ البويضات المخصبة في الرحم بهم 3. ومع ذلك، فإن تأثير مصادر مختلفة من المواد الغذائية، وخصوصا البكتيريا المسببة للأمراض وخاصة المعوية البرازية، على سلوك وضع البيض لا تتميز بشكل جيد. البيضة في ودودة (EIW) الاختبار هو أداة مفيدة لقياس الآثار المترتبة على أنواع مختلفة من البكتيريا، في هذه الحالة E. البرازية، على سلوك وضع البيض.
المقايسات EIW تنطوي على إحصاء عدد البيض الاحتفاظ بها في رحم C. ايليجانس 4. مقايسة EIW ينطوي تبيض نظموا، حامل الكبار C. ايليجانس لإزالة إهاب وفصل البيض المدورة من الحيوان. قبل التبييض، ويتعرضون للبكتيريا والديدان (أو أي نوع من جديلة البيئية) لفترة محددة من الزمن. بعد التبييض، واحد هو بسهولة جدا قادرة على الاعتماد على عدد من البيض الاحتفاظ داخل الرحم من الديدان. في هذا الاختبار، زيادة قابلة للقياس الكمي في الاحتفاظ البيض بعد E. التعرض البرازية يمكن قياسها بسهولة. مقايسة EIW هو فحص السلوكية التي يمكن استخدامها للكشف عن الجراثيم المحرضة أو وجود السموم البيئية. وبالإضافة إلى ذلك، قد يكون مقايسة EIW أداة للكشف عن الأدوية التي تؤثر على الموصلات العصبية مما يشير السلوك منذ وضع البيض هو عن طريق التضمين الناقلات العصبية مثل السيروتونين وأستيل كولين 5-9.
المقدمة
انواع معينة ايليجانس، وهو المجهرية، الدودة التي تعيش بحرية، هو كائن نموذج يستخدم تقليديا لدراسة العمليات التنموية وخلية يشير بسبب التشريح مهامها بشفافية، وتنمية تتميز بشكل جيد، تماما التسلسل الجينوم، وباختصار جيل من الوقت، والتماثل الجيني للبشر . وفي الآونة الأخيرة، C. أصبح ايليجانس كائن نموذج في مجال علم السموم البيئية والمناعة الفطرية 10، 11.
هذه الديدان خنثوي التسميد الذاتي تصبح ناضجة جنسيا في غضون 2-3 أيام من الفقس من البيض. خلال دورة حياتها، C. ايليجانس يمر عبر أربع مراحل اليرقات (L1-L4)، قبل أن تصل إلى سن ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1) إعداد وسائط النمو الخيطية (NGM)
- لجعل 50 لوحات، إضافة 1.5 غرام كلوريد الصوديوم، 8.5 غرام عالى النقاء آجار، و1.25 ز ببتون إلى Lflask 1.
- أضف 487.5 مل من DH 2 O إلى القارورة. دوامة بلطف لمزج وتغطية افتتاح قارورة مع قطعة من رقائق الألومنيوم.
- تعقيم الحل عن طريق التعقيم في الظروف القياسية (121 رطل، 120 ° C، 20 دقيقة).
- يسمح الحل لتبرد إلى 45 درجة مئوية في حمام مائي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هذا الاختبار يسمح احد لتحديد عدد البيض المدورة ضمن C. ايليجانس بعد التعرض لE. البرازية. نظمت L4 تعرضوا الديدان (التي تتميز مساحة شفافة فوق الفرج، والشكل 1) إلى E. البرازية من خلال مرحلة البلوغ. بعد أربعين ساعة من التعرض للE. البرازية، وتبيض تم تنفيذها. كما تفككت بشرة في الحبرية التبييض، أصبحت أكثر وضوحا البيض (الشكل 2). وكان كميا عدد البيض الاحتفاظ بسهولة عن طريق عد أثناء عرض تحت مجهر تشريح.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخطوات الأكثر أهمية في أداء هذا الاختبار بنجاح هي: 1) باستخدام مخزونات تغذية جيدة من C. ايليجانس، 2) زراعة أنواع من البكتيريا واحدة على لوحة فحص، 3) تحديد بدقة نظموا L4 الديدان التعرض للE. البرازية، 4) حفظ الوقت التعرض لE. البرازية متناسقة عبر جميع المحاكمات و5) تبيض الوقت يجب أن لا تتجاوز عشر دقائق لمنع تفكك البيض.
لهذا الاختبار من المهم لاختيار صحي، والديدان التي تتغذى بشكل جيد. المج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر يونيو ميدلتون لتوريد E. سلالات البرازية وللتوجيه مع ثقافة البكتيريا. C. وقدمت ايليجانس من قبل CGC، الذي يتم تمويله من قبل المعاهد الوطنية للصحة مكتب برامج البنية الأساسية للبحوث (P40 OD010440).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أجار ، فائق النقاء | Affymetrix | 10906 | |
| باكتو بيبتون | بيكتون ديكنسون | 211677 | |
| باكتو التربتون | بيكتون ديكنسون | 211705 | |
| ضخ القلب في الدماغ مجفف متوسط | كارولينا الإمداد البيولوجي | 781781 | |
| C. elegans< / em> ، N2 سلالة | Caenorhabditis مركز | علم الوراثة | http://www.cbs.umn.edu/cgc |
| ثقافة الكوليسترول | Alfa Aesar | A11470 | |
| ل C. elegans< / em> | Tritech Research Inc. | T3308 | |
| لوحات الثقافة ل E. faecalis< / em> Fisher | Scientific-Fisherbrand | 875713 | |
| E. القولونية < / em> (OP50) | مركز Caenorhabditis لعلم الوراثة | http://www.cbs.umn.edu/cgc | |
| تم تأكيد جميع العزلات على أنها المكورات المعوية | |||
| < p > نمت جميع السلالات عند 44.5 & ordm. C وكانت سلبية الكاتلاز وتحلل الإسكولين. مبسط مفتاح ثنائي التفرع يعتمد على تفاعلات التصبغ والتخمير لستة سكريات & nbsp ؛ < / span> (أرابينوز ، مانيتول ، ميثيل - ألفا ؛ - جلوكوبيرانوسيد (MGP) ، ريبوز ، سوربوز وسوربيتول) مسموح به ؛ < / span>تحديد المفترض لجميع E. سلالات faecalis< / em> (يفتقر Efs إلى التصبغ وهو أرابينوز ، MGP & nbsp ؛ < / span>والسوربوز سلبي والسوربيتول والمانيتول والريبوز الإيجابي). جميع سلالات Efs المفترضة < / span>تم تأكيدها باستخدام نظام API 20 STREP (Biomerieux).< / span >< / p> | |||
| المجهر | Motic | SMZ 168B يجب | أن يكون أي مجهر مع إضاءة مرسلة وتكبير 50X كافيا |
| كبريتات الستربتومايسين | فيشر الكواشف الحيوية | BP910-50 | |
| Tryptic Soy Agar (فول الصويا والكازين Digest Agar Medium) ، Difco | Becton Dickinson | 236950 | |
| مرق الصويا Trypticase (فول الصويا والكازين Digest Medium) ، BBL | Becton Dickinson | 211768 | |
| مستخلص الخميرة | Acros | 61180-1000 |
المراجع
- Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans. Science. 216, 1012-1014 (1982).
- Sawin, E. R. Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]. , Massachusetts Insti....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
