يستخدم-الرحم البوقي نقل الأجنة في الرحم الوصل الأنبوبي كحاجز لمنع تدفق الجنين التي قد تحدث عند تنفيذ نقل الرحم. ويلزم الذكور أجريت لهم هذه العمليات للحصول على المتلقين pseudopregnant لنقل الأجنة. وتناقش كل من التقنيات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الرحم-البوقي نقل الأجنة وقطع القناة الدافقة في نموذج الفأر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نقل الأجنة الإناث سابق للانغراس إلى بديل هو خطوة لازمة لإنتاج الفئران المعدلة وراثيا أو لدراسة الآثار المترتبة على تعديلات جينية نشأت أثناء التطور سابق للانغراس على التنمية وتعليم الكبار صحة الجنين اللاحقة. استخدام تقنية فعالة ومتسقة نقل الأجنة أمر بالغ الأهمية لتعزيز جيل من الحيوانات المعدلة وراثيا وتحديد تأثير العلاجات المختلفة على معدلات البقاء على قيد الحياة لغرس والمدى. وعادة ما يتم نقل الأجنة في مرحلة الكيسة عن طريق التحويل الرحم، وأداء ثقب في جدار الرحم لإدخال ماصة التلاعب الجنين. فتحة أجريت في الرحم لا يغلق بعد أن تم سحب ماصة، ويمكن للأجنة تدفق إلى تجويف البطن بسبب الضغط الايجابي من الرحم. ثقب يمكن أن تنتج أيضا من نزيف في أن يضعف زرع، وكتل ماصة نقل ويمكن أن تؤثر الجنين دالتطور، وخاصة عندما يتم نقل الأجنة دون زونا. بالتالي، هذا الأسلوب غالبا ما يؤدي إلى انخفاض معدلات بقاء الجنين متغير جدا والشاملة. تجنب هذه الآثار السلبية، البوقي-الرحم نقل الأجنة الاستفادة من مفرق-الرحم البوقي كحاجز طبيعي أن يعرقل تدفق الجنين وتجنب ثقب في جدار الرحم. ويلزم الذكور أجريت لهم هذه العمليات للحصول على المتلقين pseudopregnant. يوصف تقنية لإجراء عملية قطع قناة المني كتكملة لنقل الجنين داخل الرحم، الأنبوبي.
المقدمة
نقل الأجنة وربما كان إجراء العمليات الجراحية الأكثر شيوعا التي تؤدى في نموذج الفأر. هذه التقنية أمر ضروري للحصول على ذرية من الأجنة في المختبر تعرض لتقنيات التلاعب، وبالتالي، يشكل خطوة ضرورية لتطوير نماذج المعدلة وراثيا عن طريق الحقن pronuclear، تنبيغ lentiviral، أو تشكيل الوهم. الى جانب ذلك، هذه التقنية تسمح دراسة الآثار التنموية من الشتائم المتنوعة التي تحدث أثناء تطور سابق للانغراس. استخدام تقنيات الاستنساخ الاصطناعي 1 أو التعرض لتركيزات غير طبيعية من المواد او نواتج 2 مختلفة قد تؤثر تطور الجنين مما يؤدي إلى زرع أو المشيمة الفشل والآثار على المدى الطويل في النسل. وهناك تقنية نقل الأجنة موثوق بها وقابلة للتكرار أمر حاسم لاختبار الآثار السلبية المحتملة لعلاج تجريبي على غرس ونمو الجنين في رجل متسقةنير.
يمكن نقل الأجنة سابق للانغراس الفئران الإناث إلى المتلقي إما إلى قناة البيض عن طريق الأمبولات من 0.5 أيام تال للجماع (DPC) المتلقين pseudopregnant (نقل قناة البيض) أو 3،4 في الرحم من 2.5 DPC pseudopregnant المتلقي (نقل الرحم) 5،6 اعتمادا على مرحلة نموهم. الأجنة في مرحلة الكيسة الأريمية، مثل تلك المستخدمة لتوليد الفئران خيالية عن طريق الحقن للخلايا الجنينية الجذعية المحفزة أو المستحثة، وعادة ما ينقل عن طريق التحويل الرحم. يمكن أيضا نقل مثانات بلاستولية إلى قناة البيض من 0.5 DPC المتلقي، لكنه يشكل اختبارا أقل الفسيولوجية لاختلال التنموية، وذلك لأن الجنين يخضع لفترة البيات ولها 2 أيام للتعافي من الإهانة قبل أن يتم زرع مكانها. نقل الرحم ينطوي على ثقب جدار الرحم بإبرة الضيقة من أجل توليد الفتحة التي تسمح للحصول على التلاعب ماصة الجنين في تجويف الرحم. Although هذه التقنية يمكن أن تحقق نتائج جيدة، والبقاء على قيد الحياة لمدة (أي النسبة المئوية للأجنة نقل أن تتطور إلى الجرو) غالبا ما تكون منخفضة وغير متوقعة 7،8.
ثقب في جدار الرحم يستتبع بعض الآثار الجانبية الضارة. الأولى، عضل الرحم هو نسيج أوعية دموية للغاية وثقب في كثير من الأحيان يؤدي إلى نزف صغيرة. الدم قد منع ماصة نقل الأجنة أو تغزو التجويف الرحمي يسبب الوفاة الجنينية و / أو فشل الزرع. وهذا هو ذات الصلة ولا سيما عندما يتم نقل الأجنة دون زونا، مثل خلايا الدم والحطام يمكن أن نعلق على عن Blastomeres. الثانية، وفتح يؤديها لا ختم بعد أن تم نقل الأجنة، بحيث يمكن أن تتدفق مرة أخرى من خلال فتحة ويطرد إلى تجويف البطن عندما يكون حجم كبير جدا وقد ندخل في الرحم. نقل-الرحم الجنين البوقي الموصوفة هنا الاستفادة من مفرق-الرحم الأنبوبي لتسليم EMBRيوس في الرحم من دون الحاجة إلى ثقب جدار الرحم وتجنب العواقب السلبية 9 بذلك.
ويتم الحصول على الإناث المتلقي pseudopregnant تستخدم لنقل الأجنة عن طريق التزاوج مع الذكور الطبيعية أجريت لهم هذه العمليات 8. يطلب من الإفرازات المنوية التي ينتجها الذكور العقيمة لالرحم لتصبح تقبلا لنقل الأجنة. للحصول على المستلم، يتم وضع حد أقصى قدره 2 الإناث من 8 أسابيع إلى 6 أشهر من العمر مع رجل أجريت لهم هذه العمليات في فترة ما بعد الظهر. في صباح اليوم التالي، ويتم التحقق من الإناث لوجود سد الجماع المهبلي، أجمة من البروتينات متخثر من السائل المنوي من الذكور. كما يحدث التزاوج عادة خلال منتصف الليل، ويعتبر اليوم من الكشف عن المكونات المهبلي ليكون 0.5 DPC. على الرغم من أن الذكور أجريت لهم هذه العمليات يمكن شراؤها من بعض البائعين، وإجراء العمليات الجراحية الموصوفة هنا من السهل نسبيا ولا تتطلب أي أدوات إضافية مما هو مطلوب لنقل الأجنة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل بلتسفيل المساحة رعاية الحيوان واستخدام Comittees (BAACUC 11-015) وفقا لوزارة الزراعة الأميركية رعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية.
1. التخدير وتسكين (المشتركة لكلا العمليات الجراحية)
- تزن الماوس وتحميل التخدير والمسكنات التالية في اثنين 1 مل المحاقن مع الإبر 27 G:
- الكيتامين (0.1 ملغ / غ: 0.01 مل / غرام من حل 10 ملغ / مل) وزيلازين (0.01 ملغ / غ: 0.005 مل / غرام من حل 2 ملغ / مل).
- البوبرينورفين (0.1 ميكروغرام / غرام: 0.01 مل من محلول 0.01 ملغ / مل).
- لشل حركة الماوس عن طريق التقاط القفا من عنقه أقرب إلى فكي ممكن مع الإبهام والسبابة وعقد الذيل بين القليل وخاتم الأصابع.
- حقن الكيتامين زيلازين-خليط الغشاء البريتونى. من أجل تجنب ثقب الأعضاء الداخلية، مع الاستمرار على الماوس معرئيسها أقل قليلا من مستوى الوركين لها (الشكل 1A)
- حقن تحت الجلد البوبرينورفين في القفا من الرقبة عقد بين الإبهام والسبابة (الشكل 1B).
- ترك الماوس في القفص (نظيفة ودون أي حيوان آخر) على مسرح الحارة.
- مرة واحدة وعيه، والتحقق من عدم وجود منعكس القدم الخلفية (فحصها من قبل قرصة أخمص قدميه). تطبيق مرهم العين لتجنب جفاف العين وللتحقق من عدم وجود منعكس الجفن (الشكل 1C).
- يوفر هذا البروتوكول طائرة التخدير الجراحي مدة لا تقل عن 30 دقيقة، ما يكفي لتنفيذ الإجراءات الموضحة أدناه (البروتوكولات 2 و 3). إذا كانت هناك حاجة أوقات أطول، حقنة إضافية من الكيتامين زيلازين + مع نصف الجرعة الموصوفة في 1.1.1 يمكن تطبيقها بعد 30 دقيقة. إن التغيير في نمط التنفس لواحدة بشكل أسرع وعدم انتظام يدل على الصغرىق ق الطائرة التخدير المناسبة.
2. قطع القناة الدافقة
- استخدام الذكور مع أداء التزاوج التي أثبتت جدواها.
- تعقيم الأدوات الجراحية، وتنظيف الأسطح حيث سيتم إجراء الجراحة وتصفيتهم مع الايثانول 70٪.
- أداء التخدير كما هو مفصل سابقا (بروتوكول 1)، والتحقق من فقدان ردود الفعل.
- ضع الماوس على مسرح الحارة، وإزالة الفراء مع كليبرز الكهربائية من منطقة بطني بين خطين مستعرضة وهمية وضعت 0.5 سم و 2.5 سم فوق القضيب (الشكل 2A).
- تطهير منطقة حلق بواسطة المسح متتابعة مع 10٪ البوفيدون اليود والايثانول 70٪.
- ضع الماوس في موقف ضعيف مع ذيله نحو الجراح والغطاء بمنشفة العقيمة مع وجود ثقب تعريض منطقة حلق. إلقاء الضوء على منطقة العمليات الجراحية.
- إجراء 10-15 ملم طولية incisio الجلدن في خط وسطي من البطن، وحوالي 1 سم فوق القضيب. عقد الجلد مع ملقط مسنن خلع الملابس ثم قطع مع مقص (أرقام 2A و 2B).
- إجراء 5-10 ملم شق طولي في ألبا الخط. عقد العضلات مع ملقط مسنن microdissecting وقطع مع مقص (الشكل 2C).
- انتزاع لوحة الدهنية الخصية من جانب واحد مع الدقيقة تشريح ملقط مسنن وتسحبه لفضح الخصية، البربخ والأسهر. يقع الأسهر الإنسي إلى الخصية وذلك عبارة عن أنبوب الحرة تمييزها بوضوح (لا تعلق على جدار الخصية مثل البربخ) مع الأوعية الدموية ممتدة على طول جانب واحد (الشكل 2D).
- عقد الأسهر مع ملقط مسنن تشريح الصغرى، ملقط خلع الملابس اللهب حتى إلى اللون الأحمر (الشكل 2E )، ومن ثم استخدامها لخفض ويكوي الأسهر في نقطتين في آن واحد (الشكل 2F). خفض يجب إزالة جزء من حوالي 5 ملم وترك اثنين يفصل بوضوح الغايات أكتوي (الشكل 2G).
- نقل الخصية، البربخ والأسهر يعود إلى تجويف البطن.
- ننطلق من الخطوة رقم 9 في الخصية الأخرى.
- خياطة العضلات مع واحد أو اثنين من غرز فراش الأفقية المصنوعة من 5/0 خياطة للامتصاص (الشكل 2H).
- خياطة الجلد مع واحد أو اثنين كليبرز الجرح (الشكل 2I).
- تحديد الذكور vasectomised (حلقة الأذن، الوشم إصبع ...)، نقله القفص وضعها على المسرح دافئة ومراقبة حتى يتعافى من التخدير (واعية والحفاظ على الاستلقاء القصية). A 0.5-1 الحقن تحت الجلد مل من محلول ملحي دافئ يحسن إعادةcovery. تسجيل حوادث ممكن تحدث أثناء نقل قطع القناة الدافقة، إضافة المضادات الحيوية إلى مياه الشرب.
- مقاطع الجرح يمكن إزالتها بعد 10 يوما قطع القناة الدافقة مع مزيل الجرح مجز أو زوج من ملقط الأسنان. فإن الذكور أجريت لهم هذه العمليات تكون جاهزة للتزاوج 2 أسابيع بعد الجراحة.
- اختبار العقم من الذكور أجريت لهم هذه العمليات عن طريق التزاوج مع الإناث الخصبة قبل استخدامه للحصول على المتلقين.
3. الرحم-البوقي نقل الأجنة
- الماوس morulae أو مثانات بلاستولية يمكن نقلها بواسطة هذه التقنية إلى المتلقي pseudopregnant الإناث عند 2.5 DPC.
- إعداد الجنين الزجاج التلاعب ماصة:
- تلميع نصائح من الشعيرات الدموية الزجاج من أجل تجنب إتلاف حامل ماصة.
- تخفيف جزء منتصف الزجاج الشعرية عن طريق تسخين بلهب غرامة في حين تناوب قليلاالشعرية بكلتا يديه بشكل متزامن. مرة واحدة يصبح المقطع الشعري لينة وطيعة (لون الضوء الأحمر)، سحبها بسرعة من اللهب وسحب طرفي لتضييق قطرها الخارجي إلى 130-150 ميكرون.
- انتظر الزجاج ليبرد ثم قطع عليه بتسجيله طفيفة الجزء الضيق مع قلم رصاص الماس نقطة، حجر جلخ أو ملف الأظافر وسحب من كلا الجانبين. يجب أن تكون نظيفة وكسر عمودي
- تلميع غيض من قبل المشتعلة بسرعة كبيرة، وترك فتحة 100-130 ميكرون. ويمكن تخزين الماصات لاستخدامها لاحقا.
- دافئ وسائل الاعلام التلاعب الجنين (CZBH أو M2، انظر المناقشة).
- تعقيم الأدوات الجراحية، وتنظيف الأسطح حيث سيتم إجراء الجراحة وتصفيتهم مع الايثانول 70٪.
- أداء التخدير كما هو مفصل سابقا (بروتوكول 1)، والتحقق من فقدان ردود الفعل.
- حفظ رانه الماوس على مسرح الحارة، وإزالة الفراء مع كليبرز الكهربائية من المنطقة الظهرية بين الركبتين والأضلاع البعيدة (أرقام 3A 3B و).
- تطهير منطقة حلق بواسطة المسح متتابعة مع 10٪ البوفيدون اليود والايثانول 70٪.
- نقل الأجنة من الحاضنة إلى prewarmed وسائل الاعلام التلاعب الجنين.
- نقل المتلقي إلى مرحلة دافئة تحت stereomicroscope ووضعه في موقف المعرضة أفقيا للجراح (مع رئيسها تتطلع إلى الجانب الأيمن أو الأيسر من جراح).
- تغطية المنطقة بمنشفة العقيمة مع وجود ثقب تعريض منطقة حلق وإلقاء الضوء على منطقة العمليات الجراحية.
- إجراء 1 سم مستعرضة (العمودي) شق في الجلد في بقعة تقع على الجمجمة ⅓ من الخط الفاصل بين الضلع الماضي والوركين و⅓ الظهرية من الخط الفاصل بين الظهر والبطن (أرقام 3A لالثانية 3B). عقد الجلد مع ملقط مسنن خلع الملابس وقطع مع مقص (الشكل 3C).
- مرة واحدة وقد تم قطع الجلد، والمبيض (أحمر / برتقالي) أو لوحة الدهنية المحيطة المبيض (أبيض) يمكن تصور من خلال جدار الجسم. إجراء 0.3-0.5 سم مستعرضة (العمودي) شق في جدار الجسم على المبيض أو وسادة الدهنية في مكان حيث لا يقطع شق أي الأوعية الدموية الكبيرة. عقد العضلات مع ملقط تشريح الصغرى مسننة وقطع مع مقص (الشكل 3D).
- تحريك الماوس ليكون رئيسها يواجه نحو الجراح.
- تحميل التلاعب ماصة الجنين (الشكل 3E):
- السماح لوسائل الإعلام CZBH ليصعد بواسطة الشعرية من خلال الجزء الضيق من ماصة التلاعب حتى حوالي 5 ملم من الجزء الأوسع.
- يستغرق فقاعة الهواء الصغيرة (0.2-0.5 ملم).
- يعرض الأجنة (5-10) فيالحد الأدنى من وسائل الإعلام (2-4 ملم).
- تناول فقاعة أخرى صغيرة الهواء (0.2-0.5 ملم) وكمية صغيرة من وسائل الاعلام (0.5-1 مم).
- ترك ماصة الزجاج التي تعلق على حامل الشافطة أو الفم إلى الجهاز اليد التي تديرها، وعلى استعداد لخطوة 3.17.
- انتزاع لوحة الدهنية المحيطة المبيض مع ملقط تشريح الصغرى مسننة وتسحبه نحو الرأس الماوس لفضح المبيض، قناة البيض، وجزء صغير من الرحم العلوي من تجويف البطن (أرقام 3F و3G).
- عقد قطعة الشافطة الفم في الفم، وعلى استعداد لاستخدامها، والاستيلاء على وسادة الدهنية مع ملقط تشريح الصغرى مسننة لنقل قناة البيض وفضح مفترق-الرحم البوقي (أي حيث يلتقي قناة البيض الرحم).
- الحفاظ على مفترق-الرحم البوقي يمكن الوصول إليها، واتخاذ طفيف منحني ملقط تشريح الصغرى مع يدك اليسرى (إذا كان الحق وسلم) ووضعها تحت فقطملتقى-الرحم البوقي الاستيلاء على قناة البيض حوالي 2 مم فوق ذلك الجزء.
- عقد ملتقى-الرحم الأنبوبي مع ملقط تشريح طفيف المنحنية الدقيقة، ثقب الباب قناة البيض على مقربة من ملقط مع 27 G إبرة (الشكل 3H).
- إدراج الجنين التلاعب ماصة في فوهة يؤديها مع الإبرة والتقدم إلى الرحم من خلال تقاطع-الرحم الأنبوبي (أرقام 3I و3J). مرة واحدة وقد مرت ماصة للالبوقي تقاطع الرحم (الشكل 3K) أنه ينزلق بسهولة. لا تقدم بعيدا جدا في الرحم لمنع الضرر بطانة الرحم (لا يزيد عن 3 ملم) وماصة حجب من قبل الحطام.
- الافراج عن الأجنة إلى الرحم عن طريق النفخ بلطف (الشكل 3L). يجب على كل من فقاعات الهواء تمر عبر الرحم. بعض وسائل الإعلام أعلاه فقاعة الأولىويمكن أيضا أن تطلق في الرحم، ولكن تجنب إدخال المزيد من الهواء، لأنها قد تعيق التوطين.
- إزالة ماصة فقط بعد أن تم الإفراج الأجنة في الرحم.
- نقل قناة البيض والمبيض إلى تجويف البطن عن طريق الاستيلاء على لوحة الدهنية.
- خياطة العضلات مع مرتبة غرزة أفقية مع 5/0 خياطة للامتصاص (الشكل 3M).
- خياطة الجلد مع المقص الجرح (الشكل 3N).
- ننطلق من الخطوة 10 على الجانب الآخر إذا لزم الأمر.
- تحديد المستلم (حلقة الأذن، الوشم إصبع ...)، نقله إلى قفصه (وضعت على المرحلة الدافئة) ومراقبة حتى يتعافى من التخدير (واعية والحفاظ على الاستلقاء القصية).
- علق حوادث ممكن تحدث أثناء نقل الأجنة وإضافة المضادات الحيوية إلى مياه الشرب. A 0.5-1 مل من الحقن تحت الجلد سالي الحارةالحل شمال شرق يحسن الانتعاش.
- مقاطع الجرح يمكن إزالتها بعد 10 يوما نقل الأجنة مع مزيل الجرح مجز أو اثنين من أزواج من ملقط (الشكل 3O). يمكن أن يكون وزنه المتلقي في ذلك اليوم لتقييم الحمل وتقدير عدد الجراء. توفير المواد عشش إلى المتلقي بعد 15 يوما نقل الأجنة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوفر-الرحم البوقي نقل الأجنة وسيلة لنقل الأجنة إلى الرحم تجنب بعض المضاعفات المرتبطة إلى الرحم نقل الأجنة 2،9،10. في الجدول 1 نظهر بعض النتائج التي حصلنا عليها ممثل نقل مثانات بلاستولية CD1 يتعرضون لأنواع مختلفة من التلاعب إلى المستلمين CD1 بعد بروتوكول صفها. بقاء لمدة (٪ من الأجنة الناتجة في الجرو) أو البقاء على قيد الحياة إلى E15 (في حالة الفيروسة البطيئة التعرض) مشابه بين الأجنة مجرد مثقف في المختبر من مرحلة البيضة الملقحة (IVC)، الأجن...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
قطع القناة الدافقة هو تقنية جراحية على التوالي إلى الأمام نسبيا التي لا تنطوي على صعوبات كبيرة. عندما التعقيم مع فيوسيدين والإيثانول تأكد من غسل الماضي (مع الإيثانول) يزيل البوفيدون اليود، لأنها قد تهيج الغشاء البريتوني. ويمكن أيضا الوصول إلى الأسهر أن يتحقق عن طريق كيس الصفن أو إجراء شق عرضي في البطن 8. وقد أوصى شق الصفن لمستعرضة شق البطن بسبب شق أصغر نسبيا اللازمة وأفضل قليلا السلوك بعد العملية الجراحية 11. ومع ذلك، ونحن نفضل شق البطن على الصفن لأن...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من جانب صناديق من قسم علوم الحيوان والطيور لBT.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كيتامين | فيدكو | كتافيد ANADA 200-257 | يطلبها طبيب بيطري مرخص. |
| مختبرات | زيلازين | Anased NADA # 139-236 | ليتم طلبها من قبل طبيب بيطري مرخص. |
| بوبرينورفين | عام | NDC 400-42-010-01 | يطلبها طبيب بيطري مرخص. |
| مرهم العين | Novartis | Genteal | |
| Antibiotic | Pfizer | Clavamox NADA # 55-101. | يضاف إلى مياه الشرب (0.3 ملغم/مل من أموكسيسيلين ثلاثي هيدرات و0.075 ملغم/مل من كلافولانات البوتاسيوم). أضف 1.5 مل من زجاجة 15 مل المعاد تكوينها إلى 250 مل من الماء. |
| ملقط مسننة | خلع الملابس ROBOZ | RS-8120 | أي ملقط مستقيم من الصلب متوسط الحجم من الدرجة الجراحية سيعمل |
| ملقط مسننة تشريح | دقيق ROBOZ | RS-5137 | هذه الملقط منحنية بزاوية 90 درجة مئوية. يمكن استخدام ملقط مستقيم إذا كنت تفضل ذلك. |
| دقيق منحني طفيف | ROBOZ | RS-5136 | هذا النموذج مفيد بشكل خاص لتثبيت قناة البيض. |
| مقص | ROBOZ | RS-5880 | سيعمل أي مقص فولاذي صغير مستقيم من الدرجة الجراحية. |
| 27 جرام إبر | بيكتون ديكنسون | 305136 | يمكن أيضا استخدام إبر أصغر (30 جم). قد يكون 25 جم كبيرا جدا. |
| القصاصة | MiKRon | 42763 | |
| 9 مم مقاطع | MiKRon | 427631 | |
| مزيل القصاصة | MiKRon | 7637 | يمكن استخدام زوجين من ملقط الأسنان (ROBOZ RS-8160) بدلا من ذلك. |
| حامل إبرة خياطة | ROBOZ | RS-7820 | |
| خياطة | Dowist Gell | 5-0 Dexon S 7204-21 | يمكن استبداله بأي خياطة قابلة للامتصاص من 4-0 إلى 6-0 بإبرة منحنية ضيقة. |
| الشعيرات الدموية الزجاجية | VWR | 100 ul ماصات معايرة 53432-921 | يتضمن نظام شفاط الفم الذي يتطلب فقط إرفاق 0.22 &# 181 ؛ مرشح M في الأنبوب ليكون جاهزا للاستخدام. يمكن الحصول على مزيد من المعلومات في Nagy et al.8 |
| Burner | KISAG AG | Typ 2002 | الموقد الذي يعمل بالغاز ، يمكن شحنها ب Kigas (CH-4512 ، من نفس البائع). يمكن أيضا استخدام مواقد الكحول ، لكن الغاز يوفر درجة حرارة أعلى ويوفر هذا الموقد لهبا صغيرا ودقيقا. |
| المجهر المجسم | Leica | MZFLIII | هذا مجهر مجسم باهظ الثمن مع مضان ، ويمكن استخدامه أيضا لأغراض أخرى. هناك خيارات أرخص مثل Leica MZ8 أو Nikon SMZ-10 أو SMZ-2B ، على سبيل المثال لا الحصر. من الأفضل استخدام مجاهر مجسمة ، أحدهما للتعامل مع الأجنة (والذي لا يحتاج إلى أن يكون لطيفا جدا) والآخر للمتلقي. يجب أن يعرض الشخص المستخدم للمتلقي مسافة طويلة من لوحة المسرح إلى العدسة الموضوعية ، حتى تتمكن من التركيز 3-4 سم فوق لوحة المسرح (حيث سيتم وضع قناة البيض) ولا تزال تترك بعض المساحة للجراح ؛ يمكن لمعظم المجاهر المجسمة القيام بذلك ، لكن البعض لا يستطيع ذلك. |
| ألياف بصرية ilumination | Dolan Jenner | Fiber lite | لإضاءة المنطقة الجراحية. هناك أنظمة مختلفة متاحة. |
| المراحل الدافئة النطاق | الأمريكي | http://store.amscope.com/tcs-100.html< / a> | يمكن وضعها فوق لوحة المسرح في المجهر المجسم. قد تكون هناك حاجة إلى بعض التعديلات (إدخال عصا لتسوية المرحلة) إذا كانت قصيرة جدا بالنسبة للمجهر المجسم. يمكن استخدام مرحلة دافئة كبيرة لتدفئة القفص إذا كانت متوفرة. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فيمكن استخدام وسادة تدفئة عادية ، ولكن يجب فحص درجة الحرارة. |
| يمكن أيضا استخدام أطباق الاستزراع للتلاعب بالجنين | Falcon 353001 | 351008 ؛ لقد صنعوا قطرات أضيق. |
المراجع
- Fernandez-Gonzalez, R., et al. Long-term effect of in vitro culture of mouse embryos with serum on mRNA expression of imprinting genes, development, and behavior. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 101, 5880-5885 (2004).
- Bermejo-Alvarez, P., Roberts, R. M., Rosenfeld, C. S. Effect of glucose concentration during in vitro culture of mouse embryos on development to blastocyst, success of embryo transfer, and litter sex ratio. 79, 329-336 (2012).
- Tarkowski, A. K. Experiments on the development of isolated blastomers of mouse eggs. Nature. 184, 1286-1287 (1959).
- Whittingham, D. G. Fertilization of mouse eggs in vitro. Nature. 220, 592-593 (1968).
- McLaren, A., Biggers, J. D. Successful development and birth of mice cultivated in vitro as early as early embryos. Nature. 182, 877-878 (1958).
- McLaren, A., Michie, D. Studies on the transfer of fertilized mouse eggs to uterine foster-mothers. I. Factors affecting the implantation and survival of native and transferred eggs. J. Exp. Biol. 33, 394-416 (1956).
- Goto, Y., et al. The fate of embryos transferred into the uterus. J. Assist. Reprod. Gen. 10, 197-201 (1993).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. (2003).
- Chin, H. J., Wang, C. K. Utero-tubal transfer of mouse embryos. Genesis. 30, 77-81 (2001).
- Ramirez, M. A., Fernandez-Gonzalez, R., Perez-Crespo, M., Pericuesta, E., Gutierrez-Adan, A. Effect of stem cell activation, culture media of manipulated embryos, and site of embryo transfer in the production of F0 embryonic stem cell mice. Biol. Reprod. 80, 1216-1222 (2009).
- Miller, A. M., Wright-Williams, S. L., Flecknell, P. A., Roughan, J. V. A comparison of abdominal and scrotal approach methods of vasectomy and the influence of analgesic treatment in laboratory mice. Lab. Anim. 46, 304-310 (2012).
- Flecknell, P. A. Laboratory Animal Anaesthesia. , Academic Press. Oxford, UK. (2009).
- Erhardt, W., Hebestedt, A., Aschenbrenner, G., Pichotka, B., Blumel, G. A comparative study with various anesthetics in mice (pentobarbitone ketamine-xylazine,carfentanyl-etomidate). Res. Exp. Med. 184, 159-169 (1984).
- Tarin, D., Sturdee, A. Surgical anaesthesia of mice: evaluation of tribromo-ethanol, ether, halothane and methoxyflurane and development of a reliable technique. Lab. Anim. 6, 79-84 (1972).
- Zeller, W., Meier, G., Burki, K., Panoussis, B. Adverse effects of tribromoethanol as used in the production of transgenic mice. Lab. Anim. 32, 407-413 (1998).
- Lieggi, C. C., et al. Efficacy and safety of stored and newly prepared tribromoethanol in ICR mice. Contemp. Top. Lab. Anim. Sci. 44, 17-22 (2005).
- Lieggi, C. C., et al. An evaluation of preparation methods and storage conditions of tribromoethanol. Contemp. Top. Lab. Anim. Sci. 44, 11-16 (2005).
- Meyer, R. E., Fish, R. E. A review of tribromoethanol anesthesia for production of genetically engineered mice and rats. Lab. Anim. 34, 47-52 (2005).
- Chatot, C. L., Lewis, J. L., Torres, I., Ziomek, C. A. Development of 1-cell embryos from different strains of mice in CZB medium. Biol. Reprod. 42, 432-440 (1990).
- Quinn, P., Barros, C., Whittingham, D. G. Preservation of hamster oocytes to assay the fertilizing capacity of human spermatozoa. J. Reprod. Fertil. 66, 161-168 (1982).
- Dios Hourcade, de, Perez-Crespo, J., Serrano, M., Gutierrez-Adan, A., A,, Pintado, B. In vitro and in vivo development of mice morulae after storage in non-frozen conditions. Reprod. Biol. Endocrinol. 10, 62 (2012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
