الرحم-البوقي نقل الأجنة وقطع القناة الدافقة في نموذج الفأر

ملخص

يستخدم-الرحم البوقي نقل الأجنة في الرحم الوصل الأنبوبي كحاجز لمنع تدفق الجنين التي قد تحدث عند تنفيذ نقل الرحم. ويلزم الذكور أجريت لهم هذه العمليات للحصول على المتلقين pseudopregnant لنقل الأجنة. وتناقش كل من التقنيات.

الملخص

نقل الأجنة الإناث سابق للانغراس إلى بديل هو خطوة لازمة لإنتاج الفئران المعدلة وراثيا أو لدراسة الآثار المترتبة على تعديلات جينية نشأت أثناء التطور سابق للانغراس على التنمية وتعليم الكبار صحة الجنين اللاحقة. استخدام تقنية فعالة ومتسقة نقل الأجنة أمر بالغ الأهمية لتعزيز جيل من الحيوانات المعدلة وراثيا وتحديد تأثير العلاجات المختلفة على معدلات البقاء على قيد الحياة لغرس والمدى. وعادة ما يتم نقل الأجنة في مرحلة الكيسة عن طريق التحويل الرحم، وأداء ثقب في جدار الرحم لإدخال ماصة التلاعب الجنين. فتحة أجريت في الرحم لا يغلق بعد أن تم سحب ماصة، ويمكن للأجنة تدفق إلى تجويف البطن بسبب الضغط الايجابي من الرحم. ثقب يمكن أن تنتج أيضا من نزيف في أن يضعف زرع، وكتل ماصة نقل ويمكن أن تؤثر الجنين دالتطور، وخاصة عندما يتم نقل الأجنة دون زونا. بالتالي، هذا الأسلوب غالبا ما يؤدي إلى انخفاض معدلات بقاء الجنين متغير جدا والشاملة. تجنب هذه الآثار السلبية، البوقي-الرحم نقل الأجنة الاستفادة من مفرق-الرحم البوقي كحاجز طبيعي أن يعرقل تدفق الجنين وتجنب ثقب في جدار الرحم. ويلزم الذكور أجريت لهم هذه العمليات للحصول على المتلقين pseudopregnant. يوصف تقنية لإجراء عملية قطع قناة المني كتكملة لنقل الجنين داخل الرحم، الأنبوبي.

المقدمة

نقل الأجنة وربما كان إجراء العمليات الجراحية الأكثر شيوعا التي تؤدى في نموذج الفأر. هذه التقنية أمر ضروري للحصول على ذرية من الأجنة في المختبر تعرض لتقنيات التلاعب، وبالتالي، يشكل خطوة ضرورية لتطوير نماذج المعدلة وراثيا عن طريق الحقن pronuclear، تنبيغ lentiviral، أو تشكيل الوهم. الى جانب ذلك، هذه التقنية تسمح دراسة الآثار التنموية من الشتائم المتنوعة التي تحدث أثناء تطور سابق للانغراس. استخدام تقنيات الاستنساخ الاصطناعي ¹ أو التعرض لتركيزات غير طبيعية من المواد او نواتج ² مختلفة قد تؤثر تطور الجنين مما يؤدي إلى زرع أو المشيمة الفشل والآثار على المدى الطويل في النسل. وهناك تقنية نقل الأجنة موثوق به....

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل بلتسفيل المساحة رعاية الحيوان واستخدام Comittees (BAACUC 11-015) وفقا لوزارة الزراعة الأميركية رعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية.

1. التخدير وتسكين (المشتركة لكلا العمليات الجراحية)

1. تزن الماوس وتحميل التخدير والمسكنات التالية في اثنين 1 مل المحاقن مع الإبر 27 G:
   1. الكيتامين (0.1 ملغ / غ: 0.01 مل....

النتائج

يوفر-الرحم البوقي نقل الأجنة وسيلة لنقل الأجنة إلى الرحم تجنب بعض المضاعفات المرتبطة إلى الرحم نقل الأجنة ^2،9،10. في الجدول 1 نظهر بعض النتائج التي حصلنا عليها ممثل نقل مثانات بلاستولية CD1 يتعرضون لأنواع مختلفة من التلاعب إلى المستلمين CD1 بعد بروتوكول صفها. بقاء لمدة (٪ من الأجنة الناتجة في الجرو) أو البقاء على قيد الحياة إلى E15 (في حالة الفيروسة البطيئة التعرض) مشابه بين الأجنة مجرد مثقف في المختبر من مرحلة البيضة الملقحة (IVC)، الأجن.......

المناقشة

قطع القناة الدافقة هو تقنية جراحية على التوالي إلى الأمام نسبيا التي لا تنطوي على صعوبات كبيرة. عندما التعقيم مع فيوسيدين والإيثانول تأكد من غسل الماضي (مع الإيثانول) يزيل البوفيدون اليود، لأنها قد تهيج الغشاء البريتوني. ويمكن أيضا الوصول إلى الأسهر أن يتحقق عن طريق كيس الصفن أو إجراء شق عرضي في البطن ^8. وقد أوصى شق الصفن لمستعرضة شق البطن بسبب شق أصغر نسبيا اللازمة وأفضل قليلا السلوك بعد العملية الجراحية ^11. ومع ذلك، ونحن نفضل شق البطن على الصفن لأن.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
كيتامين	فيدكو	كتافيد ANADA 200-257	يطلبها طبيب بيطري مرخص.
مختبرات	زيلازين	Anased NADA # 139-236	ليتم طلبها من قبل طبيب بيطري مرخص.
بوبرينورفين	عام	NDC 400-42-010-01	يطلبها طبيب بيطري مرخص.
مرهم العين	Novartis	Genteal
Antibiotic	Pfizer	Clavamox NADA # 55-101.	يضاف إلى مياه الشرب (0.3 ملغم/مل من أموكسيسيلين ثلاثي هيدرات و0.075 ملغم/مل من كلافولانات البوتاسيوم). أضف 1.5 مل من زجاجة 15 مل المعاد تكوينها إلى 250 مل من الماء.
ملقط مسننة	خلع الملابس ROBOZ	RS-8120	أي ملقط مستقيم من الصلب متوسط الحجم من الدرجة الجراحية سيعمل
ملقط مسننة تشريح	دقيق ROBOZ	RS-5137	هذه الملقط منحنية بزاوية 90 درجة مئوية. يمكن استخدام ملقط مستقيم إذا كنت تفضل ذلك.
دقيق منحني طفيف	ROBOZ	RS-5136	هذا النموذج مفيد بشكل خاص لتثبيت قناة البيض.
مقص	ROBOZ	RS-5880	سيعمل أي مقص فولاذي صغير مستقيم من الدرجة الجراحية.
27 جرام إبر	بيكتون ديكنسون	305136	يمكن أيضا استخدام إبر أصغر (30 جم). قد يكون 25 جم كبيرا جدا.
القصاصة	MiKRon	42763
9 مم مقاطع	MiKRon	427631
مزيل القصاصة	MiKRon	7637	يمكن استخدام زوجين من ملقط الأسنان (ROBOZ RS-8160) بدلا من ذلك.
حامل إبرة خياطة	ROBOZ	RS-7820
خياطة	Dowist Gell	5-0 Dexon S 7204-21	يمكن استبداله بأي خياطة قابلة للامتصاص من 4-0 إلى 6-0 بإبرة منحنية ضيقة.
الشعيرات الدموية الزجاجية	VWR	100 ul ماصات معايرة 53432-921	يتضمن نظام شفاط الفم الذي يتطلب فقط إرفاق 0.22 &# 181 ؛ مرشح M في الأنبوب ليكون جاهزا للاستخدام. يمكن الحصول على مزيد من المعلومات في Nagy et al.8
Burner	KISAG AG	Typ 2002	الموقد الذي يعمل بالغاز ، يمكن شحنها ب Kigas (CH-4512 ، من نفس البائع). يمكن أيضا استخدام مواقد الكحول ، لكن الغاز يوفر درجة حرارة أعلى ويوفر هذا الموقد لهبا صغيرا ودقيقا.
المجهر المجسم	Leica	MZFLIII	هذا مجهر مجسم باهظ الثمن مع مضان ، ويمكن استخدامه أيضا لأغراض أخرى. هناك خيارات أرخص مثل Leica MZ8 أو Nikon SMZ-10 أو SMZ-2B ، على سبيل المثال لا الحصر. من الأفضل استخدام مجاهر مجسمة ، أحدهما للتعامل مع الأجنة (والذي لا يحتاج إلى أن يكون لطيفا جدا) والآخر للمتلقي. يجب أن يعرض الشخص المستخدم للمتلقي مسافة طويلة من لوحة المسرح إلى العدسة الموضوعية ، حتى تتمكن من التركيز 3-4 سم فوق لوحة المسرح (حيث سيتم وضع قناة البيض) ولا تزال تترك بعض المساحة للجراح ؛ يمكن لمعظم المجاهر المجسمة القيام بذلك ، لكن البعض لا يستطيع ذلك.
ألياف بصرية ilumination	Dolan Jenner	Fiber lite	لإضاءة المنطقة الجراحية. هناك أنظمة مختلفة متاحة.
المراحل الدافئة النطاق	الأمريكي	http://store.amscope.com/tcs-100.html< / a>	يمكن وضعها فوق لوحة المسرح في المجهر المجسم. قد تكون هناك حاجة إلى بعض التعديلات (إدخال عصا لتسوية المرحلة) إذا كانت قصيرة جدا بالنسبة للمجهر المجسم. يمكن استخدام مرحلة دافئة كبيرة لتدفئة القفص إذا كانت متوفرة. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فيمكن استخدام وسادة تدفئة عادية ، ولكن يجب فحص درجة الحرارة.
يمكن أيضا استخدام أطباق الاستزراع للتلاعب بالجنين		Falcon 353001	351008 ؛ لقد صنعوا قطرات أضيق.

لويد ملقط تشريح تطبيق