تعميم الخلايا السرطانية (التدرجي) هي النذير في العديد من أنواع السرطان النقيلي. يصف هذا المخطوط الذهب نظام موحد CellSearch (CSS) منصة التعداد لجنة مكافحة الإرهاب ويسلط الضوء على الأخطاء الشائعة الخطأ في التصنيف. بالإضافة إلى ذلك، يتم وصف بروتوكولين تكييفها لتوصيف علامة المعرفة من قبل المستخدم من التدرجي وCTC التعداد في نماذج الماوس قبل السريرية لورم خبيث باستخدام هذه التكنولوجيا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التكيف من Semiautomated اعارة ورم الخلية (CTC) فحوصات للتطبيقات السريرية وقبل السريرية البحوث
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
غالبية الوفيات المرتبطة بالسرطان تحدث لاحقة لتطوير المرض المنتشر. ويرتبط هذا مرحلة المرض قاتلة للغاية مع وجود تعميم الخلايا السرطانية (التدرجي). وقد أثبتت هذه الخلايا النادرة لتكون ذات أهمية سريرية في الثدي النقيلي والبروستات، وسرطان القولون والمستقيم. معيار الذهب الحالية في الكشف السريري جنة مكافحة الإرهاب والتعداد هو نظام CellSearch ادارة الاغذية والعقاقير تطهيرها (CSS). يحدد هذا المخطوط بروتوكول قياسي يستخدم بها هذه المنصة فضلا عن اثنين من البروتوكولات الإضافية تكييفها التي تصف عملية مفصلة من المعرفة الأمثل لتوصيف البروتين علامة من التدرجي المريض وبروتوكول مشابه لالتقاط لجنة مكافحة الإرهاب في أحجام منخفضة جدا من الدم، وذلك باستخدام معيار الكواشف CSS، للدراسة في نماذج الماوس قبل السريرية المجراة من ورم خبيث. بالإضافة إلى ذلك، ارتفعت فروق في نوعية جنة مكافحة الإرهاب بين الدم المانحة صحية مع الخلايا من نسيج الثقافة مقابل مريض عصيدة الدمويسلط الضوء ليه. أخيرا، وترد عدة بنود خلافات شيوعا التي يمكن أن تؤدي إلى أخطاء سوء تصنيف لجنة مكافحة الإرهاب. أخذت معا، فإن هذه البروتوكولات توفر مصدرا مفيدا للمستخدمين من هذا المنبر المهتمين في مجال البحوث قبل السريرية والسريرية المتعلقة ورم خبيث والتدرجي.
المقدمة
في عام 2013 يقدر أن 580350 الأفراد سوف يموت من السرطان وسيتم تشخيص الحالات الجديدة التي 1660290 من هذا المرض في الولايات المتحدة وحدها 1. غالبية هذه الوفيات تحدث لاحقة لتطوير المرض المنتشر 2. النقص الحالي من العلاجات الفعالة في علاج الانبثاث وفهم محدود من تتالي النقيلي يجعل هذه المرحلة من المرض فتاك بدرجة عالية. وقد ثبت وجود الخلايا السرطانية المنتشرة (التدرجي) داخل مجرى الدم لربط مع المرض المنتشر 3. هذه الخلايا هي نادرة للغاية والكشف عنها يدل على البقاء على قيد الحياة عموما في الثدي النقيلي 4، 5 البروستاتا، والقولون والمستقيم سرطان 6. في هؤلاء المرضى، فإن وجود ≥ 5 (الثدي و....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع الدراسات الإنسانية وصفها في هذه المخطوطة في إطار البروتوكولات التي وافق عليها مجلس أخلاقيات البحوث البشرية بجامعة الغربية. أجريت جميع الدراسات الحيوانية وفقا لتوصيات المجلس الكندي للرعاية الحيوان، في إطار البروتوكولات التي وافقت عليها جامعة ويسترن الفرعية استخدام الحيوان.
1. معيار لجنة مكافحة الإرهاب تعداد من عينات الدم للمريض باستخدام CSS
1. الدم البشري جمع العينات والتحضير لتجهيز على إعداد الصك
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
معيار لجنة مكافحة الإرهاب تعداد الفحص
حساسية وخصوصية CSS تم توثيقه جيدا في الأدب. ومع ذلك، للتحقق من صحة الانتعاش CTC ما يعادلها، ارتفعت (1،000 LNCaP خلايا سرطان البروستاتا البشرية) وتمت معالجة unspiked عينات الدم البشري من المتبرعين الأصحاء على CSS باستخدام بروتوكول CSSCTC القياسية. كما هو متوقع، كانت عينات unspiked خالية من التدرجي، 0.00 ± 0.00٪، وتجلى الانتعاش جنة مكافحة الإرهاب أن تكون 86.9 ± 4.71٪ للعينات ارتفع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
على الرغم من تطوير العديد من التقنيات الجديدة لجنة مكافحة الإرهاب منذ إدخال المغلق في عام 2004، هذه التقنية لا تزال التكنولوجيا المعتمدة فقط سريريا في السوق اليوم، وبالتالي فهو يعتبر المعيار الذهبي الحالي للكشف عن لجنة مكافحة الإرهاب والتعداد. وقد أثبتت هذه المخطوطة على الرغم من أن CSS لديه معايير صارمة لمراقبة الجودة يمكن أن تكون عرضة للتحيز وتفسير أن تحديد رابع كلوريد الكربون في عينات المرضى يختلف كثيرا عن تحديد الهوية في عينات ارتفعت. وقد تم تحديد ست فئات من البنود خلافات شيوعا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلف (ALA) تلقت تمويلا التي تم توفيرها من قبل يانسن الأورام، الذي جونسون آند جونسون كما تمتلك يانسن تشخيص ذ م م، التي تنتج الكواشف والأدوات المستخدمة في هذه المقالة الشركة الأم.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من معهد أونتاريو للبحوث السرطان (# 08NOV230)، ومؤسسة كندا للإبداع (# 13199)، سرطان البروستاتا كندا، يانسن الأورام، وبرنامج سرطان الإقليمي لندن، ودعم الجهات المانحة من جون ودونا بريستول من خلال مؤسسة العلوم الصحية في لندن (لALA). يتم اعتماد الحد الأدنى للانفجار من قبل فريدريك بانتينغ وتشارلز أفضل كندا العليا منحة جائزة الدكتوراه. ويدعم ALA من قبل جائزة الباحث جديد CIHR وجائزة الباحث في وقت مبكر من وزارة أونتاريو للبحوث والابتكار.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5 متر EDTA | |||
| مضاد للإنسان CD44-FITC | BD Pharmigen | 555478 | |
| مضاد للإنسان CD44-PE | BD Pharmigen | 555479 | |
| مضاد للإنسان HLA-Alexa Fluor 488 | BioLegend | 311415 | |
| مضاد للفأر CD45-APC | eBioscience | 17-0451-82 | |
| بوند الأجسام المضادة الأولية المخففة | Leica | AR9352 | |
| CellSave أنابيب حافظة | فيريدكس | 952820 (20 عبوة) 79100005 (100 عبوة) | |
| التحكم CellSearch CTC | من سيل سيرش | 7900003 | |
| سيل سيرش سي تي | فيريدكس | 7900001 | |
| سيل سيرش كيت كنترول | فيريدكس | 7900018 كيت | |
| سيل سيرش سي اكس سي | فيريدكس | 7900017RUO | |
| عازلة | Veridex | 7901003 | |
| حافظة لخلايا Streck (المعروفة أيضا باسم CytoChex) | Streck | 213350 | |
| 1 مل حقنة | |||
| 10 مل ماصة | |||
| 1,000 وميكرو ؛ ل ماصة | |||
| 1,000 & مايكرو; ل أطراف | |||
| 12 مم × 75 مم أنابيب | |||
| 200 & micro; ل نصائح | |||
| 200 & مايكرو ؛ ل ماصة | |||
| 22 جم إبرة | |||
| 5 3/4 في ماصة باستور يمكن التخلص | VWR | 14672-200 | |
| 5 مل ماصة | |||
| الماصة | |||
| (EDTA) | BD Microtainer | 365974 | |
| CellSearch Analyzer II | Veridex | 9555 | يتضمن magnests والتحقق |
| CellSearch AutoPrep | Veridex | 9541 | |
| MagCellect Magnet | R & D Systems | MAG997 | |
| لمبة لاتكس صغيرة | VWR | 82024-550 | |
| دوامة |
المراجع
- Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics. 63 (1), 11-30 (2013).
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat. Rev. Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
- Pantel, K., Brakenhoff, R. H.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
