يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يصف هذا البروتوكول الكشف اللونية السريع للالقولونية، السالمونيلا، والليستيريا المستوحدة كميات كبيرة من (10 لتر) من المياه الزراعية. هنا، يتم تصفية المياه من خلال التعديل العقيمة مور مسحات (MMS)، والتي تتكون من مرشح الشاش بسيطة المغلقة في خرطوشة من البلاستيك، لتركيز البكتيريا. بعد الترشيح، يتم تنفيذ التخصيب غير انتقائية أو انتقائية للبكتيريا المستهدفة في MMS. للكشف اللونية من البكتيريا المستهدفة، ثم يتم يعاير التخصيب باستخدام الورقية الأجهزة التحليلية (μPADs) جزءا لا يتجزأ مع البكتيريا الإرشادية ركائز. كل الركيزة يتفاعل مع الانزيمات البكتيرية الهدف الإرشادي، وتوليد المنتجات الملونة التي يمكن أن يتم الكشف عن البصر (الكشف النوعي) على μPAD. بدلا من ذلك، يمكن أن تتولد الصور الرقمية من μPADs تفاعلت مع المسح المشترك أو أجهزة التصوير وتحليلها باستخدام برنامج ImageJ، آلخوار لمزيد من التفسير الموضوعي وموحدة من النتائج. على الرغم من أن تصميم إجراءات الفرز البيوكيميائية لتحديد مسببات الأمراض البكتيرية المذكورة آنفا، في بعض الحالات تنتج الأنزيمات التي كتبها مجهريات البقعة الخلفية أو تدهور ركائز اللونية قد تنتج إيجابية كاذبة. وبالتالي، هناك حاجة إلى تأكيد التشخيص باستخدام أكثر التمييزية. ومع ذلك، وهذا التركيز والكشف عن منصة البكتيرية غير مكلفة وحساسة (0.1 كفو / مل حد الكشف)، من السهل القيام بها، والسريع (يتم تنفيذ التركيز، والإثراء، والكشف غضون ما يقرب من 24 ساعة)، لتبرير استخدامه كطريقة الفحص الأولي لجودة الميكروبيولوجية للمياه الزراعية.
المقدمة
من المهم أن يتم الكشف عن الأمراض المنقولة بالأغذية وكلاء بسرعة ويفضل في إعدادات ميدانية من أجل الحد من عبء الأمراض المنقولة بالأغذية. وتشمل استراتيجيات مشتركة للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية المنقولة عن طريق الأغذية التنميط الكيمياء الحيوية، وزراعة انتقائية والتفضيلية، والعزلة المناعية والكشف، والكشف الجزيئي. غير أن ما يعرقل هذه الأساليب التي تلوث متفرقة، وأحجام عينة صغيرة اختبارها، وتركيزات منخفضة في كثير من الأحيان من البكتيريا المسببة للأمراض المنقولة عن طريق الأغذية، تتطلب أوقات المعالجة طويلة، و / أو غير قابلة للتطبيق لإعدادات المجال. علاوة على ذلك، في كثير من المركبات المصفوفات الغذائية المثبطة لكشف والتطبيقات التشخيصية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. تركيز البكتيريا من كميات كبيرة من المياه للأغراض الزراعية عن طريق MMS
- إعداد MMS
- قطع مستطيلة المقطع من 4 رقائق جبن قياس 40 × 12 سم.
- طي القماش القطني على طول المحورين للحصول على مستطيل من 20 × 6 سم.
- لفة القماش القطني بإحكام على طول المحور الطويل لتشكيل أسطواني مسحة من حوالي 6 سم و 3 سم في القطر.
- الأوتوك....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
كما هو موضح في هذا البروتوكول، وتركيز البكتيريا باستخدام رسائل الوسائط المتعددة (الشكل 1) لا يمكن أن يؤديها في حوالي 15-20 دقيقة. وMMS في شيدت من الستايرين الأكريلونيتريل (ABS) في اثنين من مكونات منفصلة؛ غطاء وخرطوشة على حد سواء مع التجمع حنفية دمجها والتي يتم إدراجها في شاش مسحة أسطواني (الشكل 1A). ثم يتم ثمل كل من المكونات معا تشكيل MMS (الشكل 1B). هو الدافع وتجهيز مقرها MMS-بواسطة مضخة تحوي بطارية تعمل بالطاقة، والسماح للعينات .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يصف هذا البروتوكول وسيلة متكاملة للكشف عن E. القولونية، السالمونيلا، وL. المستوحدة في المياه الزراعية. هنا، وتركيز MMS البكتيريا كميات كبيرة من (10 لتر) من المياه للأغراض الزراعية، ويقترن مع تخصيب البكتيرية، والكشف اللونية بكتيريا الإرشادية باستخدام μPADs. الإجراء MMS يمكن التعامل مع محتوى الجسيمات عالية في عينات المياه مع التركيز على البكتيريا 10 أضعاف، قوي وبسيط لا يكفي التطبيقات الميدانية من قبل أفراد مدربين الحد الأدنى، ويمكن أن يؤديها مع الحد الأدنى من التكاليف. من خ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
نعرب عن امتناننا لتمويل هذا المشروع من منح المعهد الوطني للأغذية والزراعة التابع لوزارة الزراعة الأمريكية 2009-01208 و 2009-01984.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الزراعية مياه الري ، إنتاج مياه الغسيل ، مياه الآبار ، إلخ. | |||
| أنابيب الفينيل | Wilmar | BN-CVT1005 | 1/4 "القطر الداخلي, 3/8 "القطر الخارجي ، متوفر في: http://www.wilmar.com |
| خرطوشة مسحة مور المعدلة ؛ | Lumiere Diagnostics | 11 & frac12; سم في الطول و 4 ½ سم في العرض, متاح على: http://www.lumierediagnostics.com. بدلا من ذلك ، يمكن استخدام نسخة غير قابلة للتصرف من الخرطوشة (راجع النص) | |
| Cheesecloth | Chesapeake Wiper & amp شركة العرض | CC90 | Grade # 90 ، نسج 44 × 36 ، متوفر في: www.raglady.com |
| مبيض منزلي | هيبوكلوريت الصوديوم مختلف | ||
| ثيوسلفات الصوديوم 5-هيدرات | Mallinckrodt Baker Inc | 8100-04 | |
| مشعب | مدمج في المنزل | اختياري ، يمكن بناء الجهاز من أنابيب PVC والتجهيزات المناسبة | |
| مضخة تمعجية | ميكرون متر | RPP1300 | متوفر في: http://www.micronmeters.com |
| ماصة مصلية | مختلفة | يمكن التخلص منها ، 10 مل | |
| مرق تخصيب عالمي | Difco | 223510 | |
| ماء الببتون | المخزن Difco | 218105 | |
| مكمل السالمونيلا | Biom & eacute. صناعة RIEUX | 42650 | http://www.biomerieux-usa.com |
| VIDAS UP Listeria (LPT) مرق | Biom & eacute ؛ 410848 صناعة rieux | http://www.biomerieux-usa.com | |
| Vancomycin | Sigma-Aldrich | 861987 | http://www.sigmaaldrich.com |
| Pipet-Aid | مختلف | Drummond DP-110 المستخدمة هنا | |
| حاضنة اهتزاز | مختلفة | Excella E25 ، نيو برونزويك Scientific المستخدمة هنا | |
| Micropipette ؛ | مختلف | 10 مو ؛ لتر ، 1 مل | |
| أطراف ماصة دقيقة | حاجز مختلف | ، 10 مو ؛ ل ، 1 مل | |
| 1.5 أنابيب الطرد المركزي | الدقيقة مختلف | RNase و DNase | |
| مسبار سونيكاتير | Q Sonica LLC | XL-2000 series | |
| & PADs | Avant | دوائر مطبوعة بالشمع بقطر 7 مم ، بسماكة خط 4 نقطة. اتصل بالدكتور تشارلز هنري للحصول على معلومات إضافية | |
| HEPES [N< / em>-(2-Hydroxyethyl) piperazine-N & prime; < / م >-2-حمض الإيثان سلفونيك] | سيجما ألدريتش | H3375 | |
| ألبومين مصل الأبقار | سيجما ألدريتش | A8022 | |
| كلوروفينول أحمر جالاكتوبيرانوسيد (CPRG) | سيجما ألدريتش | 59767 | |
| 5-برومو -4-كلورو-3-إندوليل-بيتا ؛ -د-جلوكورونيد (X-Gluc) | سيجما ألدريتش | B8174 | |
| 5-برومو-6-كلورو-3 إندوليل كابريلات (أرجواني) caprylate) | سيجما ألدريتش | 53451 | |
| 5-برومو-4-كلورو-ميو-إينوزيتول فوسفات (X-InP) | أطباق Sigma-Aldrich | 38896 | |
| Petri ، البوليسترين 100 مم × 15 مم | |||
| Xerox USB ماسح ضوئي | |||
المراجع
- Guidance for industry: Guide to minimize microbial food safety hazards for fresh fruits and vegetables. , U.S. Dept. of Health and Human Service, Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Applied Nutrition (CFSAN). (1998).
- Bisha, B., Pérez-Méndez, A., Danyluk, M. D., Goodridge, L. D.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
