يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التصوير MALDI الكتلة الطيفي للتحقيق في المستقلبات في

18.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51434

⸱

مارس 5, 2014

 , 
1Department of Chemistry, University of Wisconsin- Madison, 2School of Pharmacy, University of Wisconsin- Madison

في هذه المقالة

ملخص

الكتلة الطيفي التصوير (MSI) هو أداة قوية التي يمكن استخدامها لاكتشاف وتحديد الأنواع الكيميائية المختلفة في أنسجة سليمة، والحفاظ على المركبات في بيئاتها المحلية، والتي يمكن أن توفر رؤى جديدة في العمليات البيولوجية. هنا يتم وصف أسلوب MSI وضعت لتحليل جزيئات صغيرة.

الملخص

معظم التقنيات المستخدمة لدراسة الجزيئات الصغيرة، مثل العقاقير الدوائية او نواتج الذاتية، وتوظيف مقتطفات الأنسجة التي تتطلب تجانس الأنسجة من الاهتمام التي يمكن أن تسبب تغيرات في المسارات الأيضية التي تجري دراستها 1. الكتلة الطيفي التصوير (MSI) هو أداة تحليلية قوية التي يمكن أن توفر المعلومات المكانية من analytes داخل شرائح سليمة من عينات الأنسجة البيولوجية 1-5. وقد استخدمت هذه التقنية على نطاق واسع لدراسة أنواع مختلفة من المركبات بما في ذلك البروتينات والببتيدات، والدهون، والجزيئات الصغيرة مثل الأيض الذاتية. مع بمساعدة الليزر مصفوفة الامتزاز / التأين (MALDI) MSI، التوزيعات المكانية من نواتج متعددة في وقت واحد يمكن اكتشافه. هنا، يتم تقديم وسيلة وضعت خصيصا لإجراء التجارب غير مستهدفة الايض MSI على جذور البقوليات والعقد الجذرية التي يمكن أن تكشف عن نظرة ثاقبة العمليات البيولوجية التي تحدث. الالطريقة المعروضة هنا يبين سير العمل MSI نموذجي، من إعداد العينات إلى الحصول على الصور، ويركز على خطوة تطبيق المصفوفة، مما يدل على تطبيق عدة تقنيات المصفوفة التي هي مفيدة للكشف عن جزيئات صغيرة. مرة واحدة يتم إنشاء الصور MS، ويناقش تحليل وتحديد نواتج الأيض من الاهتمام وبرهن. سير العمل القياسية المعروضة هنا يمكن تعديلها بسهولة لأنواع مختلفة الأنسجة، والأنواع الجزيئية، والأجهزة.

المقدمة

مجال متزايد من الايض العديد من التطبيقات البيولوجية الهامة بما في ذلك اكتشاف العلامات البيولوجية، فك رموز المسارات الأيضية في النباتات وغيرها من النظم البيولوجية، وعلم السموم التنميط 4،6-10. ويتمثل أحد التحديات التقنية الكبرى عند دراسة النظم البيولوجية هو دراسة مسارات metabolomic دون تعطيل لهم 11. MALDI-MSI يسمح للتحليل المباشر للأنسجة سليمة تمكن من analytes كشف حساسة في أجهزة احد 12،13 وحتى 14،15 الخلايا واحد.

إعداد نموذج هو خطوة حاسمة في إنتاج الصور الطيفية الشامل استنساخه وموثوق بها. جودة الصور تعتمد إلى حد كبير على عوامل مثل الأنسجة التضمين المتوسطة، شريحة سمك، MALDI مصفوفة، وتقنية تطبيق المصفوفة. لتطبيقات التصوير، قسم مثالية سمك هو العرض من خلية واحدة (8-20 ميكرون اعتمادا على نوع العينة). يتطلب MALDI ترسب عضوي، غلوبولين العدسةه مصفوفة مركب، وعادة حمض ضعيف، على عينة لتحليلها ومساعدة الاجتثاث التأين. توفير 16 مصفوفات مختلفة كثافات مختلفة إشارة، أيونات التدخل، والكفاءة التأين من فئات مختلفة من المركبات.

تقنية تطبيق مصفوفة يلعب أيضا دورا في نوعية الصور الطيفية الشامل والتقنيات المختلفة المناسبة لفئات مختلفة من التحاليل. يتم عرض ثلاثة أساليب تطبيق المصفوفة في هذا البروتوكول: البخاخة، بخاخ التلقائي، والتسامي. وقد استخدم على نطاق واسع البخاخة تطبيق مصفوفة في مجال التصوير MALDI. ميزة البخاخة تطبيق مصفوفة هو أنه سريع نسبيا وسهلة. ومع ذلك، فإن نوعية تطبيق مصفوفة البخاخة يعتمد إلى حد كبير على مهارة المستخدم ويميل إلى أن يكون أقل استنساخه وتسبب نشر التحاليل، خصوصا جزيئات صغيرة 17. نظم الرش التلقائي ديك ميكانيكا مماثلة لالبخاخة تطبيق مصفوفة، ولكن هفه تم تطويرها لإزالة التباين ينظر مع دليل تطبيق البخاخة، مما يجعل من رذاذ أكثر استنساخه. هذا الأسلوب يمكن أن يكون في بعض الأحيان أكثر تستغرق وقتا طويلا من التقليدية البخاخة تطبيق المصفوفة. كلا البخاخة اليدوية وأنظمة الرش التلقائي وسائل تطبيق مصفوفة المذيبات. التسامي هو جاف مصفوفة تقنية التطبيقات التي أصبحت أكثر وأكثر شعبية للتصوير الطيفي الشامل من المركبات والجزيئات الصغيرة لأنها تقلل الحليلة نشرها، إلا أنها تفتقر إلى ما يلزم من المذيبات لاستخراج ومراقبة المركبات الشامل أعلى 18.

تحديد واثق من المركبات عادة ما يتطلب قياسات دقيقة الشامل للحصول على هويات المفترضة تليها جنبا إلى جنب الشامل (MS / MS) للتحقق من صحة التجارب، مع MS / MS الأطياف يجري مقارنة للمعايير والأدب، أو أطياف النظرية. في هذا البروتوكول عالية الدقة (حل شامل قوة 60،000 في م / ض 400)، اللوني السائل (ويقترن LC)-MS لMALDI-MSI إلى الحصول على كل المعلومات المكانية والتعرف على ثقة من نواتج الأيض الذاتية، وذلك باستخدام Medicago truncatula الجذور والعقد الجذرية مثل النظام البيولوجي. تجارب MS / MS يمكن القيام بها مباشرة على النسيج مع MALDI-MSI أو على مقتطفات الأنسجة مع LC-MS وتستخدم للتحقق من هويات الأيض.

يوفر هذا البروتوكول طريقة بسيطة لرسم خريطة نواتج الأيض الذاتية في M. truncatula، والتي يمكن تكييفها وتطبيقها على MSI من الجزيئات الصغيرة في مختلف أنواع الأنسجة والنظم البيولوجية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. الأجهزة

  1. MALDI-TOF/TOF MSI. استخدام مطياف الكتلة مجهزة مصدر MALDI لتحليل الجزيئات الصغيرة (انظر جدول المواد / المعدات). أداء عمليات الاستحواذ في وضع أيون إيجابية أو سلبية اعتمادا على التحاليل من الفائدة. تحديد نطاق شامل من الفائدة وجمع 500 طلقات الليزر / بقعة في 50 ميكرومتر فترات في كل من x و أبعاد ذ عبر سطح العينة لتوليد الصور أيون. ويمكن تعديل العرض النقطية وعدد من الطلقات ليزر للحصول على القرار المكانية أعلى وأقصى كثافة إشارة على التوالي. استخدام DHB قمم مصفوفة أو المعايير الداخلية المطبقة على الشريحة أو مباشرة إلى الأنسجة لمعايرة الأطياف الشامل.
  2. ارتفاع القرار LC-MS. (انظر جدول المواد / المعدات) مقتطفات عينة تشغيل مع LC-MS باستخدام إما المرحلة عكسها (RP) LC مع عمود C-18، أو مرحلة طبيعية (NP) مع عمود HILIC اعتمادا على التحاليل من الفائدة. استخدام المحمول ومراحلالتدرجات بما يتناسب مع نوع عينة محددة. تنفيذ عمليات استحواذ في وسائط أيون إيجابية أو سلبية تبعا لنوع العينة.

2. إعداد الأنسجة

  1. تقليم العقيدات الجذرية من النبات، وترك 3-4 ملم من الجذر تعلق على العقيدات.
  2. مباشرة بعد تشريح، واستخدام ملقط لوضع الأنسجة في كوب ناظم البرد، وتغطي مع الجيلاتين (100 ملغ / مل في الماء منزوع الأيونات). فمن الضروري لأنسجة ليكون عالقا في قاع الكأس مع عدم وجود فقاعات الهواء.
  3. فلاش تجميد الأنسجة عن طريق وضع كوب في حمام الثلج الجاف / الإيثانول حتى يصلب الجيلاتين ويصبح غير شفاف. مخزن العينات في -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  4. إزالة عينات من الفريزر -80 درجة مئوية، وقطع بعيدا ناظم البرد كوب من البلاستيك وتقليم بعيدا الجيلاتين الزائدة. تركيب الأنسجة جزءا لا يتجزأ من لتشاك ناظم البرد مع كمية سنتات الحجم من درجة الحرارة المثلى القطع (أكتوبر) وسائل الإعلام، في حين أن عدم السماح للأكتوبر تلمس الأنسجة. وضع في ناظم البردمربع حتى يتصلب أكتوبر.
  5. السماح للتشوك والجيلاتين لكي تتوازن في مربع ناظم البرد (مجموعة إلى -20 أو -25 درجة مئوية) لمدة حوالي 15 دقيقة.
  6. استخدام ناظم البرد (انظر جدول المواد / المعدات) إلى قسم الأنسجة تقريبا سمك خلية واحدة (8-20 ميكرون تبعا لنوع الأنسجة) وذوبان الجليد جبل كل شريحة على الزجاج ايتو المغلفة من قبل ارتفاع درجة حرارة الظهر (غير ايتو- المغلفة الجانب) من شريحة زجاجية ايتو المغلفة على الجزء الخلفي من يدك. وضع الجانب ايتو المغلفة من الشريحة تحسنت بالقرب من شريحة الأنسجة المجمدة والسماح للشريحة التمسك على الشريحة. ووضع المقاطع قريبة من بعضها البعض على الشريحة توفير المحاذاة أفضل أثناء MSI.

3. مصفوفة التطبيق

  1. البخاخة تطبيق مصفوفة MALDI
    1. يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات البخاخة في غطاء الدخان.
    2. تماما تنظيف الحاويات الحل البخاخة وفوهة (انظر جدول المواد / المعدات) مع الميثانول وملء حاوية الحل مع حل DHB مصفوفة (150 ملغ / مل في 50٪ methanol/0.1٪ TFA ت / ت).
    3. عقد البخاخة حوالي 35 سم من العينة وتطبيق 10-15 المعاطف من المصفوفة على سطح الشريحة مع مدة 10 ثانية رذاذ و 30 ثانية في وقت التجفيف بين كل طبقة.
    4. تماما تنظيف البخاخة مرة أخرى مع الميثانول عند الانتهاء لتجنب انسداد من حل المصفوفة.
  2. التلقائي تطبيق البخاخ من MALDI مصفوفة
    1. اتبع الإرشادات بدء المقدمة من قبل الشركات المصنعة لنظام الرش التلقائي.
    2. لMSI من نواتج الأيض في العقد الجذرية باستخدام 40 ملغ / مل (في 50٪ methanol/0.1٪ TFA ت / ت) DHB مثل المصفوفة، ضبط درجة الحرارة إلى 80 درجة مئوية ~، والسرعة إلى 1،250 ملم / دقيقة، ومعدل التدفق الى 50 ميكرولتر / دقيقة، وعدد من يمر إلى 24. لأفضل تغطية، فمن المستحسن لتدوير فوهة 90 ° و / أو تعويض فوهة 1.5 ملم بين كل تمريرة. بدء طريقة الرش.
      كما الاشتراكيةدي علما، ونظام الرش خاصة مع ارتفاع درجات الحرارة المستخدمة هنا فوهة للتبخر أسرع من المذيبات. كما يتبخر المذيب، وتركيز مصفوفة يزيد بسرعة. مصفوفة تطبيقها على عينة مع البخاخة والرش التلقائي لديها تركيزات قابلة للمقارنة.
    3. اتبع الإرشادات اغلاق القناة التي تقدمها الشركات المصنعة لنظام الرش التلقائي.
  3. التسامي تطبيق مصفوفة MALDI
    1. تزن من 300 ملغ DHB في الجزء السفلي من الغرفة التسامي (انظر جدول المواد / المعدات).
    2. عصا شريحة زجاجية لالاصبع الباردة (الجزء العلوي من غرفة التسامي) مع أقسام الأنسجة أسفل مع الوجهين، والشريط موصل. تغطية الجزء الخلفي بأكمله من الشريحة مع الشريط مزدوجة من جانب لحتى الموصلية، وتنتج حتى ترسب مصفوفة.
    3. المشبك نصفي العلوي والسفلي من الغرفة التسامي جنبا إلى جنب مع C-المشبك. ربط الفراغ والإعلاند الجليد والماء البارد إلى الخزان العلوي.
    4. وضع غرفة التسامي في عباءة التدفئة التي هي في درجة حرارة الغرفة.
    5. بدوره على مضخة فراغ. انتظر 15 دقيقة وتشغيل عباءة التدفئة. عباءة التدفئة يجب أن تصل إلى 120 درجة مئوية على مدار 10 دقيقة.
    6. بعد 10 دقيقة، وإيقاف الحرارة، وصمام مقربة من فراغ (حتى داخل غرفة لا يزال تحت فراغ) وإيقاف مضخة فراغ.
    7. السماح للغرفة أن يأتي إلى درجة حرارة الغرفة، افتح صمام تحرير الضغط فراغ وإزالة العينة. فإن حجم الغرفة التسامي تحديد مقدار مصفوفة المتسامي إلى شريحة زجاجية. فإن أكبر غرف التسامي (حجم 400 مل دورق) استخدام حوالي 300 ملغ من DHB في حين أن غرف أصغر (حجم مل دورق 150) سيتم استخدام ما يقرب من 100 ملغ من DHB وسوف تتطلب قطع شريحة زجاجية بحيث تناسبها في الغرفة.

4. الحصول على الصور

    <لى> الأقسام نمط + على كل ركن من أركان عينة مع القلم WiteOut تصحيح السوائل لاستخدامها "تعليم نقاط". وضع شريحة زجاجية في MALDI لوحة محول الشريحة وتأخذ الصورة البصرية من العينة باستخدام الماسح الضوئي.
  1. إعداد ملف الحصول على الصور باستخدام البرامج المقدمة من قبل الشركة الصك مع النقطية حجم الخطوة من 50 ميكرون ويبلغ قطرها الليزر مساوية أو أصغر من حجم الخطوة النقطية. على هذا الصك وجه الخصوص، يعطي الإعداد ليزر الحد الأدنى يبلغ قطرها الليزر حوالي 10 ميكرون والصغيرة إعداد الليزر التي يبلغ قطرها 40-50 ميكرون.
  2. تحميل الصورة البصرية في البرنامج ومحاذاة اللوحة مع الصورة البصرية.
  3. معايرة أداة قبل البدء في اقتناء باستخدام أيونات مشتركة المصفوفة العنقودية، والمعايير الداخلية، أو مزيج المعايرة.
  4. تحديد مجالات الأنسجة لتحليلها مع MSI، بما في ذلك بقعة من مصفوفة نقية على الشريحة ليتم استخدامها ك "فارغة".
  5. يبدأ ميلانquisition.

5. انشاء صورة

  1. فتح الملف في برنامج التصوير المتاحة تجاريا التي يقدمها البائع واستخراج الصور أيون. غيرها من البرامج مفتوحة المصدر متاحة لمعالجة البيانات MSI 19.

6. تحديد المستقلب

  1. اختيار محددة م / ض من الاهتمام من الطيف الشامل باستخدام برامج معينة بائع (انظر جدول المواد / المعدات). وتحليلها يمكن تمييزها عن أيون مصفوفة عند تحديد ذروة الحليلة من الطيف الشامل ويتم إنشاء الصور أيون المترجمة تحديدا إلى قسم الأنسجة.
  2. إنشاء قائمة من analytes من الاهتمام وإجراء تجارب MS / MS. انظر الجدول 1 والجدول 2 في ممثل النتائج للقوائم عينة من التحاليل.
  3. أداء المستهدفة تحليل LC-MS في مطياف الكتلة عالية الدقة (أو عالية الدقة MALDI-MS إذا كان متوفرا) للحصول دقيقةقياسات كتلة التحاليل من الاهتمام وأيضا تنفيذ LC-MS/MS من التحاليل المستهدفة للحصول على أنماط تجزئة مميزة.
  4. أداء قاعدة بيانات البحث لتحديد هويات المفترضة للالتحاليل المستهدفة. أمثلة على قواعد البيانات المستقلب تشمل: METLIN، ChemSpider، بوب كيم، KEGG، وHMDB.
  5. للتأكد من هويات المفترضة من دقيقة قاعدة بيانات البحث الشامل، تتناسب مع MS / MS من التحاليل التي تستهدف MS / MS أطياف المعايير، والأدب، و/ أو برامج التنبؤ تجزئة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يتم عرض لمحة عامة التجريبية من MSI في الشكل 1. في بداية التجربة، وإعداد العينات هو خطوة حاسمة. يتم قطع العقيدات من جذور النباتات وجزءا لا يتجزأ من الجيلاتين. يجب الضغط على الأنسجة شقة ضد الكأس ناظم البرد، مع عدم وجود فقاعات، بينما يتم تجميده، وهذا سوف ضمان المواءمة أسهل والسليم للأنسجة أثناء مقطوع به. عندما يتم شرائح الأنسجة، فمن المهم لقطع الأنسجة في سمك السليم؛ رقيقة جدا من المقاطع سوف المسيل للدموع، وتدمير سلامة الأنسجة، في حين سميكة جدا من المقاطع سوف يقلل من ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

كما نوقش أعلاه، وإعداد العينات هي الخطوة الأكثر أهمية في سير العمل MSI. سوف تضمين الأنسجة بشكل غير متساو تسبب باجتزاء ليكون من الصعب أو غير الممكن في بعض الحالات. حجم القسم والوقت الكافي موازنة ضرورية للحفاظ على سلامة الأنسجة وتجنب للطي والدموع. واختيار مصفوفة وتقنية تطبيق تلعب دورا في تحديد أنواع التحاليل ليتم الكشف عن والقرار المكانية، واستنساخ النتائج. يمكن استخدام مزيج من المصفوفات أو تقنيات التطبيق تقديم نتائج التكميلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

فإن الكتاب أود أن أنوه الدكتور جان ميشيل مرة في قسم الهندسة الزراعية في جامعة ويسكونس ماديسون لتقديم عينات truncatula Medicago. وأيد هذا العمل في جزء من التمويل من مؤسسة العلوم الوطنية (NSF) منحة CHE-0957784، ومدرسة جامعة ويسكونسن العليا ومؤسسة ولاية ويسكونسن الخريجين بحوث (وارف) وبرنامج زمالة Romnes بحوث كلية (ليرة لبنانية). يقر EG زمالة أبحاث الدراسات العليا NSF (DGE-1256259).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الجيلاتينDifco214340< / a>الحرارة لإذابة
Cryostat - HM 550Thermo Scientific956564A
زجاجية مطلية بأكسيد قصدير الإنديوم (ITO)   ؛دلتا تكنولوجيزCB-90IN-S10725 مم × 75 مم × 0.8 مم (العرض × الطول × السماكة)
2،5-حمض ثنائي هيدروكسي بنزويك (DHB) مصفوفة   ؛ICN BiomedicalsPI90033< / a>
AirbrushPaasche Airbrush CompanyTG-100Dإلى جانب نظام بخاخ المصفوفة الأوتوماتيكي لحاوية فولاذية 75
مل - TM-SsprayHTX Technologies، LLCHTX. TMSP. H021-Uسيتم إعطاء تعليمات محددة لبدء التشغيل والإغلاق عند تثبيت الجهاز
التسامي   ؛Chemglass Life ScienceCG-3038-01 < / a >
مضخة الفراغ - Alcatel 2008 AIdeal Vacuum ProductsP10976الضغط النهائي = 1 × 10 < sup>-4 < / sup> Torr
ultrafleXtreme MALDI-TOF / TOFBruker Daltonics276601
FlexImagingBruker Daltonics269841مثال واحد على "برنامج خاص بالبائع"
MALDI LTQ OrbitrapThermo ScientificIQLAAEGAAPFADBMASZأداة MALDI عالية الدقة لقياسات الكتلة الدقيقة
Q ExactiveThermo ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZRأداة LC-MS عالية الدقة لقياسات الكتلة الدقيقة
شرائح

المراجع

  1. Seeley, E. H., Schwamborn, K., Caprioli, R. M. Imaging of Intact Tissue Sections: Moving beyond the Microscope. J. Biol. Chem. 286, 25459-25466 (2011).
  2. van Hove, E. R. A., Smith, D. F., Heeren, R. M. A. A concise review of mass spectrometry imaging. J. Chromatogr. A. 1217, 3946-3954 (2010).
  3. Lietz, C. B., Gemperline, E., Li, L. Qualitative and quantitative mass spectrometry imaging of drugs and metabolites. Adv. Drug Deliv. Rev. 65, 1074-1085 (2013).
  4. Ye, H., et al. MALDI mass spectrometry-assisted molecular imaging of metabolites during nitrogen fixation in the Medicago truncatula-Sinorhizobium meliloti symbiosis. Plant J. 75, 130-145 (2013).
  5. Ye, H., Gemperline, E., Li, L. A vision for better health: mass spectrometry imaging for clinical diagnostics. Clin. Chim. Acta. 420, 11-22 (2013).
  6. Wei, R. Metabolomics and Its Practical Value in Pharmaceutical Industry. Curr. Drug Metab. 12, 345-358 (2011).
  7. Kobayashi, T., et al. A Novel Serum Metabolomics-Based Diagnostic Approach to Pancreatic Cancer. Cancer Epidem. Biomar. 22, 571-579 (2013).
  8. West, P. R., Weir, A. M., Smith, A. M., Donley, E. L. R., Cezar, G. G. Predicting human developmental toxicity of pharmaceuticals using human embryonic stem cells and metabolomics. Toxicol. Appl. Pharm. 247, 18-27 (2010).
  9. Spegel, P., et al. Time-resolved metabolomics analysis of beta-cells implicates the pentose phosphate pathway in the control of insulin release. Biochem. J. 450, 595-605 (2013).
  10. Pendyala, G., Want, E. J., Webb, W., Siuzdak, G., Fox, H. S. Biomarkers for neuroAIDS: The widening scope of metabolomics. J. Neuroimmune. Pharm. 2, 72-80 (2007).
  11. Prell, J., Poole, P. Metabolic changes of rhizobia in legume nodules. Trends Microbiol. 14, 161-168 (2006).
  12. Kutz, K. K., Schmidt, J. J., Li, L. J. In situ tissue analysis of neuropeptides by MALDI FTMS in-cell accumulation. Anal. Chem. 76, 5630-5640 (1021).
  13. Stemmler, E. A., et al. High-mass-resolution direct-tissue MALDI-FTMS reveals broad conservation of three neuropeptides (APSGFLGMRamide, GYRKPPFNGSIFamide and pQDLDHVFLRFamide) across members of seven decapod crustaean infraorders. Peptides. 28, 2104-2115 (2007).
  14. Rubakhin, S. S., Churchill, J. D., Greenough, W. T., Sweedler, J. V. Profiling signaling peptides in single mammalian cells using mass spectrometry. Anal. Chem. 78, 7267-7272 (1021).
  15. Neupert, S., Predel, R. Mass spectrometric analysis of single identified neurons of an insect. Biochem. Bioph. Res. Co. 327, 640-645 (2005).
  16. Caprioli, R. M., Farmer, T. B., Gile, J. Molecular imaging of biological samples: localization of peptides and proteins using. MALDI-TOF MS. Anal. Chem. 69, 4751-4760 (1997).
  17. Baluya, D. L., Garrett, T. J., Yost, R. A. Automated MALDI matrix deposition method with inkjet printing for imaging mass spectrometry. Anal. Chem. 79, 6862-6867 (2007).
  18. Hankin, J. A., Barkley, R. M., Murphy, R. C. Sublimation as a method of matrix application for mass spectrometric imaging. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 18, 1646-1652 (2007).
  19. Robichaud, G., Garrard, K. P., Barry, J. A., Muddiman, D. C. MSiReader: an open-source interface to view and analyze high resolving power MS imaging files on Matlab platform. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 718-721 (2013).
  20. Northen, T. R., et al. Clathrate nanostructures for mass spectrometry. Nature. 449, (2007).
  21. Shrivas, K., Hayasaka, T., Sugiura, Y., Setou, M. Method for simultaneous imaging of endogenous low molecular weight metabolites in mouse brain using TiO2 nanoparticles in nanoparticle-assisted laser desorption/ionization-imaging mass spectrometry. Anal. Chem. 83, 7283-7289 (2011).
  22. Thomas, A., Charbonneau, J. L., Fournaise, E., Chaurand, P. Sublimation of new matrix candidates for high spatial resolution imaging mass spectrometry of lipids: enhanced information in both positive and negative polarities after 1,5-diaminonapthalene deposition. Anal. Chem. 84, 2048-2054 (2012).
  23. Chen, S., et al. 2,3,4,5-Tetrakis(3',4'-dihydroxylphenyl)thiophene: a new matrix for the selective analysis of low molecular weight amines and direct determination of creatinine in urine by MALDI-TOF MS. Anal. Chem. 84, 10291-10297 (2012).
  24. Shroff, R., Rulisek, L., Doubsky, J., Svatos, A. Acid-base-driven matrix-assisted mass spectrometry for targeted metabolomics. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 10092-10096 (2009).
  25. Shroff, R., Svatos, A. Proton sponge: a novel and versatile MALDI matrix for the analysis of metabolites using mass spectrometry. Anal. Chem. 81, 7954-7959 (2009).
  26. Shimma, S., Setou, M. Mass Microscopy to Reveal Distinct Localization of Heme B (m/z 616) in Colon Cancer Liver Metastasis. J. Mass Spectrom. Soc. Jpn. 55, 145-148 (2007).
  27. Paschke, C., et al. Mirion-A Software Package for Automatic Processing of Mass Spectrometric Images. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 1296-1306 (2013).
  28. Parry, R. M., et al. omniSpect: an open MATLAB-based tool for visualization and analysis of matrix-assisted laser desorption/ionization and desorption electrospray ionization mass spectrometry images. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 646-649 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

التصوير MALDI الكتلة الطيفي للتحقيق في المستقلبات في
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.