يصف هذا البروتوكول التصميم والزرع الجراحي لآلية تقييد الرأس لمراقبة النشاط العصبي في هياكل الدماغ تحت القشرية في الفئران التنبيهية. يحدد إجراءات عزل الخلايا العصبية المفردة في التكوين الخلوي المجاور وتحديد مواقعها التشريحية بكفاءة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
رصد Juxtacellular وتوطين واحدة الخلايا العصبية داخل الدماغ الهياكل الفرعية القشرية للتنبيه، الجرذان-ضبط النفس رئيس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
هناك مجموعة متنوعة من التقنيات لمراقبة النشاط خارج الخلية للوحدات العصبية المفردة. ومع ذلك ، فإن مراقبة هذا النشاط من هياكل الدماغ العميقة في تصرف لا تزال تمثل تحديا تقنيا ، خاصة إذا كان يجب استهداف الهياكل بشكل نمطي. يصف هذا البروتوكول التقنيات الجراحية والفيزيولوجية الكهربية الملائمة التي تحافظ على رأس في المستوى التجسيمي وتعزل بشكل لا لبس فيه النشاط المتصاعد للخلايا العصبية المفردة. يجمع البروتوكول بين تقييد رأس القوارض التنبيهية ، والمراقبة المتجاورة مع أقطاب الماصة الدقيقة ، وحقن الصبغة الأيونية لتحديد موقع الخلايا العصبية في علم الأنسجة اللاحق. في حين أن كل من هذه التقنيات راسخة في حد ذاتها ، يركز البروتوكول على تفاصيل استخدامها المشترك في تجربة واحدة. يتم الجمع بين هذه التقنيات الفيزيولوجية العصبية والتشريحية العصبية مع المراقبة السلوكية. في المثال الحالي ، يتم استخدام التقنيات المدمجة لتحديد كيفية ترميز حركات الاهتزاز ذاتية الإنشاء في نشاط الخلايا العصبية داخل المهاد الحسي الجسدي. بشكل عام ، من السهل تكييف هذا البروتوكول لمراقبة نشاط الخلايا العصبية بالتزامن مع مجموعة متنوعة من المهام السلوكية في الفئران والفئران الأخرى. بشكل حاسم ، يسمح الجمع بين هذه الأساليب للمجرب بربط الإشارات الفيزيولوجية العصبية المحددة تشريحيا بالسلوك.
المقدمة
مراقبة نشاط الخلايا العصبية في حيوان في حالة تأهب تشارك بنشاط في مهمة السلوكية أمر بالغ الأهمية لفهم وظيفة وتنظيم الجهاز العصبي. وقد تم تسجيل خارج الخلية من النشاط الكهربائي من وحدات الخلايا العصبية واحدة لفترة طويلة أداة الأساسية لنظم علم الأعصاب وما زال على نطاق واسع في استخدام في الوقت الحاضر. تتوفر مجموعة متنوعة من أنواع القطب وتكوينات اعتمادا على المطالب العلمية والتقنية للتجربة معينة. مزروع مزمنة ميكرودريفيس أو وغالبا ما تستخدم صفائف الكهربائي في الحيوانات تتحرك بحرية، بما في ذلك الطيور والقوارض، والرئيسيات غير البشرية 1-4. بدلا من ذلك، وغالبا ما تستخدم الاختراقات الحادة مع المعدن أو الزجاج الميكروية عبر مياداة مجهرية الخارجي لتسجيل من الحيوانات تخدير أو تقييد الرأس. زجاج كهربائي ممص مكروى لديها ميزة أنها يمكن أن تستخدم في juxtacellular أو "خلية المرفقة" التكوين لعزل لا لبس فيهنشاط الخلايا العصبية واحدة دون مضاعفات ارتفاع اللاحق الفرز 5. هذه الأقطاب مزيد يسمح التسجيل من الخلايا التي تم تحديدها تشريحيا أو المواقع، لأنها يمكن أن تستخدم لحقن دائع صغيرة من الصبغة أو تشريحي عصبي استشفاف، أو حتى لملء سجلت الفرد الخلية. وقد تم تطبيق هذا التكوين بنجاح في الجرذان والفئران والطيور 6-10. وتركز تقنية وصفها حاليا على مراقبة juxtacellular والودائع صبغ خارج الخلية في حالة تأهب، الفئران ضبط النفس الرأس. لاحظ أنه على عكس خلية واحدة juxtacellular يملأ، هذه الودائع صبغ لا تقدم معلومات حول مورفولوجيا الخلايا أو إسقاطات محور عصبي 11، لكنها تمكين التوطين التشريحي الدقيق إلى ما يقرب من 50 ميكرون، وخطيرة، ولها عائد أعلى بكثير في الحيوانات تنبيه. المعلومات المتعلقة خلية واحدة juxtacellular يملأ مع ذلك يتم توفير كاستراتيجية بديلة لوضع العلامات التشريحية.
وباختصار، فإنيتكون البروتوكول من ثلاث مراحل رئيسية. في المرحلة الأولى، وتأقلم الفئران على ضبط النفس في الجسم جورب القماش (الشكل 1) على مدى فترة من 6 أيام. في المرحلة الثانية، وهو جهاز مساند الرأس (الشكل 2) وغرفة تسجيل تزرع جراحيا مثل هذه أن الفئران يمكن الحفاظ في الطائرة التجسيمي خلال عدة جلسات تسجيل اللاحقة (الشكل 3)؛ يتيح هذا الإجراء المجرب لاستهداف مناطق معينة دون القشرية من الدماغ للدراسة الكهربية على أساس مرجعية معيارية تنسق 12. المرحلة الثالثة تتضمن وضع الفئران في رقصة المناسبة لإجراء التجارب السلوكية والكهربية (الشكل 4)، بناء القطب من أنبوب الكوارتز الشعرية (الشكل 5)، مما يجعل التسجيلات العصبية juxtacellular أن عزل لا لبس فيه وحدة واحدة 6-9، و بمناسبة locati التشريحيةعلى الموقع تسجيل مع شيكاغو السماء الزرقاء صبغ (أرقام 6 و 7). يتم تنفيذ التسجيلات مع الرصد السلوكي في وقت واحد. ومع ذلك، فإن التفاصيل الفنية للسلوك يعتمد على الأهداف العلمية من كل تجربة، وبالتالي فهي خارج نطاق بروتوكول واحد. بعد الانتهاء من إجراء التجارب، والتي يمكن أن تتكرر في أيام متعددة، والموت الرحيم للحيوان. يتم استخراج الدماغ ومعالجتها وفقا للتقنيات القياسية تشريحي عصبي باستخدام الحقل مشرق أو مضان المجهر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ البروتوكولات التجريبية خارجا على إناث فئران لونغ إيفانس (250-350 ز) وفقا لرعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية المنصوص عليها اتحاديا وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في جامعة كاليفورنيا في سان دييغو.
1. التأقلم الفئران على الجسم ضبط النفس
ملاحظة: ضع الفئران على نظام غذائي مقيدة. إطعام الفئران مرة واحدة يوميا مباشرة بعد كل دورة المعالجة اليومية للتأقلم الفئران على ضبط النفس (موضح أدناه). توفير تغذية كافية للحفاظ على الحيوانات في 80٪ من وزنه الأولي. هذا المبلغ هو ما يقرب من 6 غرامات من الأعلاف يوميا لمدة 250 غ أنثى طويل ايفانز الفئران.
- تأقلم الفئران ليجري التعامل معها من قبل البشر. بلطف كبح جماح الفئران باليد لفترات من حوالي 5 ثانية كل 30 ثانية. القيام بذلك لمدة 15 دقيقة يوميا في 2 أيام متتالية. مراقبة الفئران يوميا لعلامات الإجهاد أثناء فترة التدريب. وتشمل علامات تكافح طاستجابة ن إلى ضبط النفس، والنطق، والأسنان الثرثارة.
- في يوم 3 الثالثة، وضع الفئران في قطعة قماش جورب-يقيد الجسم (الشكل 1) لمدة 15 دقيقة يوميا على يومين متتاليين.
- في يوم 5 الجاري، وضع الفئران داخل جورب، ووضع جورب داخل أنبوب جامدة على رقصة التجريبية (الشكل 4). ترك الفئران في الأنبوب لمدة 15 دقيقة يوميا في 2 أيام متتالية.
- إطعام الفئران مباشرة بعد كل دورة تدريبية. في نهاية الدورة الأخيرة (ال يوم 6) منح حق الوصول غير المقيد إلى الغذاء. اختر لزرع فقط تلك الفئران التي لا تظهر عليها علامات الإجهاد المفرط في اليوم التدريب الأخير.
ملاحظة: على الرغم من اختيار الفئران لزرع هو ذاتي، في أيدينا تم العثور على أكثر من 90٪ من الفئران أن تكون استجابة لالتعود وقادرة على الخضوع لزرع.
2. غرس غرفة تسجيل وجها لضبط النفس آلية
- جعل إعادةسلك املؤمتر عن طريق لحام أسلاك مكشوفة الفولاذ المقاوم للصدأ لموصل دبوس. قطع الأسلاك بحيث تبقى 3-5 ملم كشفت من قبل دبوس. الأوتوكلاف السلك إشارة، جنبا إلى جنب مع جميع الأدوات الجراحية.
- إدارة الكيتامين / زيلازين التخدير. إدارة 95 ملغم / كغم من الكيتامين مختلطة مع 5 ملغ / كغ زيلازين البريتونى. الجرعة الأولي يستمر لمدة 1½ إلى 2 ساعة. تكملة التخدير كل 30-45 دقيقة بعد ذلك، حسب الحاجة. تليين عيون الحيوان مع مرهم للعين.
- تحقق منعكس اصبع القدم انسحاب لتحديد الطائرة من التخدير، والحفاظ على التخدير عند الضرورة.
- وضع الفئران في إطار عقد التجسيمي بقضبان الأذن (الشكل 3A). حلق الشعر على الرأس وتطهير مكان الجرح مع بوفيدون اليود (حل 10٪). احرص على إدراج القضبان الأذن بشكل مناسب بحيث لا تضر طبلة الأذن. القضبان الأذن مع نصائح صريحة هي الأفضل.
- إجراء شق مع مشرط يقاربالمطاف على طول خط الوسط من الجمجمة من مستوى rostro الذيلية للعيون إلى الجزء الخلفي من الأذنين. استخدام مقص لقطع وإزالة 2-3 ملم شريط من الجلد على جانبي الشق.
- كشط بعيدا السمحاق لفضح سطح الجمجمة إلى التلال الجانبية. تغطية الجمجمة يتعرض مع طبقة رقيقة من superglue.
- حفر حفرة صغيرة، وقطره أصغر قليلا من 0-80 مسامير، وذلك باستخدام ½ مم لدغ الحفر (انظر قسم المواد). حفر حفرة الخلفي فورا إلى حيث تجتمع خياطة bregma الحافة الجانبية، وبزاوية 30-45 درجة في الجمجمة، بحيث المسمار يمكن أن تذهب في مع الجزء العلوي الجانبي أكثر من القاع.
- برغي في المسمار 0-80 آلة مسطحة القاع إلى الحفرة (تقريبا 3 أدوار)، في 30-45 درجة زاوية. يجب الحرص على عدم المسمار في عميق جدا لتجنب إتلاف أنسجة الدماغ الكامنة.
- كرر هذا الإجراء لمدة 6 مسامير إضافية في تكوين معروضة (الشكل 3B). تطبيق superglue إلى قاعدة جميع المسامير.
- وضع إبرة حقنة في تتلاعب stereotax. قياس من خياطة bregma، وإحداث تأثير في الجمجمة مع الإبرة القريب، ولكن خارج موقع حج القحف المطلوب، كعلامة مرجعية.
ملاحظة: في هذه التظاهرة، الإحداثيات التجسيمي للعلامة هي 3 ملم الخلفي و 1 مم الجانبية للخياطة bregma. - بمناسبة دنت مع علامة دائمة. ملاحظة إحداثيات التجسيمي للعلامة، لأنها سوف تكون بمثابة نقطة مرجعية التجسيمي (الشكل 3B).
- جعل حج القحف تركزت على الإحداثيات المطلوبة (3 ملم الخلفي و3 مم الجانبية لbregma في هذا المثال). ترك الأم الجافية سليمة. تغطية حج القحف مع تعديل السائل الدماغي الشوكي الاصطناعي (125 مم كلوريد الصوديوم، و 10 ملي الجلوكوز، 10 ملي HEPES، 3.1 ملي CaCl 2، 1.3 ملي MgCl 2، ودرجة الحموضة 7.4) 13 (الشكل 3C).
- قطع أنبوب 0.2 مل الطرد المركزي إلى 4-5 ملم في الطول، وقطع الغطاء. وضع أنبوب على الجمجمة ومركز على مدى حج القحف.
- تطبيق الاسمنت الأسنان حول الجزء السفلي من الأنبوب لاغلاق القاعدة من الأنبوب إلى الجمجمة. يجب الحرص على عدم تسرب الأسمنت في حج القحف يتعرض (الشكل 3D).
- حفر ثقب صغير آخر (حوالي ½ مم) في لوحة الجمجمة المقابل وإدراج بعناية السلك المرجعية. بناء الأسلاك إشارة عن طريق لحام دبوس التي واجهات مع مكبر للصوت تسجيل لنهاية السلك (انظر القسم المعدات). لا تتحرك السلك إشارة مرة واحدة هو في الدماغ لأن هذا قد يسبب الضرر.
- تطبيق superglue إلى الحفرة التي تم إدراج السلك. وهذا ختم دبوس والأسلاك في مكانها مؤقتا.
- مزيج شطري عدة هلام السيليكون (انظر قسم المواد) في أجزاء متساوية تقريبا. انتظر دقيقتين لخلط وفيلل أنبوب الطرد المركزي حوالي ⅓ الكامل مع هلام.
- إرفاق آخر زاوية الحق المشبك (انظر قسم المواد) إلى شريط الرأس ضبط النفس. نعلق لوحة الرأس (الشكل 2A) إلى شريط القابضة (الشكل 2B) في زاوية 45 درجة الملعب بحيث الجزء السفلي من لوحة هو نحو الأنف من الحيوان. ومن المفيد لاستخدام الميل لضبط زاوية الملعب في المباراة التي من رقصة التجريبية (الشكل 4).
- إرفاق شريط عقد على الذراع stereotax مناور بحيث شريط موازية للالقضبان الأذن. خفض شريط وصفيحة بحيث لوحة هي الخلفي للخياطة امدا والأمامية إلى الذيلية أقصى المسمار.
- فهم الأمامي رئيس الترباس (وهو 8-32 مسمار أو برغي، راجع قسم المواد) في حوالي 45 درجة زاوية مع يد العون الذراع والمشبك، حتى أن رئيس المسمار يواجه أسفل ونحو ذيل الحيوان. خفض المسمار بحيث أنها تمس النملةerior 0-80 مسامير (الشكل 3F، G).
- تأمين الترباس ولوحة في مكان مع الاكريليك الأسنان. تطبيق الاكريليك الأسنان في جميع أنحاء رؤساء المسمار العظام، دبوس المرجعية، وحول جوانب أنبوب الطرد المركزي. انتظر حوالي 10 دقيقة لالاكريليك الأسنان لتجف (الشكل 3H).
- ضع طبقة من الاسمنت الأسنان حول حواف الاكريليك الأسنان، وتقوية الجلد لعملية الزرع. انتظر حتى يجف الأسمنت.
- كزة عدة فتحات في السقف من أنبوب الطرد المركزي، ووضع غطاء على أنبوب.
- إزالة يد العون المشبك. ثم إزالة بعناية شريط-عقد رئيس من stereotax، ثم قم بإزالة لوحة الرأس من شريط (الشكل 3I).
- إزالة الحيوان من stereotax وإدارة الرعاية والمراقبة اللاحقة للعمليات الجراحية وفقا لكل القواعد واللوائح والقوانين (على سبيل المثال، البوبرينورفين 0.02 مغ / كغ، كل 8-12 ساعة مدة لا تقل عن 24ساعة). إذا التهاب يتطور حول حواف الزرع، وتطبيق طبقة رقيقة من مرهم مضاد حيوي لموقع المتضررين يوميا حتى حلها.
3. رصد Juxtacellular من وحدات الخلايا العصبية
- سحب الكوارتز أنابيب الشعرية على غاز ثاني أكسيد الكربون ممص مكروى الليزر مجتذب (انظر القسم المعدات) بأقطار غيض من أقل من 1 ميكرون (الشكل 5A).
ملاحظة: سوف تختلف المعلمات التدفئة وفقا لأداة معينة، وأن قطر الرقبة المطلوبة سوف تختلف تبعا لبنية الدماغ من الفائدة. للتسجيلات في المهاد الفئران، بال micropipettes لها أعناق تتراوح 5-7 ملم. - تأمين ماصة في مكان تحت المجهر النقيض تدخل الفرق (DIC) مجهزة أهداف العمل الطويلة المسافة. استخدام الصلصال لعقد ماصة في مكان على المسرح المجهر.
- التحرك ببطء كتلة الزجاج (0،5-1 سم سميكة، قطعة من الزجاج تستخدم لماكالسكاكين مشراح جدا جي مريحة) في مجال الرؤية مع طرف ماصة. باستخدام مياداة مجهرية المرحلة، المس بلطف طرف ماصة على الزجاج، الامر الذي ادى الى كسر. كرر حسب الضرورة حتى ماصة قطرها الخارجي هو بين 1-3 ميكرون (الشكل 5B، C). التأكد من أن هذه بال micropipettes لها ممانعات بين ما يقرب من 5-15 MΩ.
- إعداد المالحة خارج الخلية (135 مم كلوريد الصوديوم، 5.4 ملي بوكل، 1.8 ملي CaCl 2، 1 ملم MgCl 2، 5 ملي HEPES، ودرجة الحموضة 7.2 مع هيدروكسيد الصوديوم) 8 وإضافة 2٪ (ث / ت) شيكاغو السماء الزرقاء. باستخدام حقنة بإبرة G 30 أو أصغر، وملء نهاية الجزء الخلفي من ماصة مع الحل. بدلا من ذلك، لخلية واحدة وضع العلامات juxtacellular إضافة 2٪ (ث / ت) Neurobiotin أو أمين ديكستران المعقدة البيروكسيديز (BDA-3000 أو BDA-10000) إلى محلول ملحي في مكان شيكاغو السماء الزرقاء.
- وضع الفئران داخل جورب من القماش داخل الأنبوب جامدة على رقصة التجريبية المناسبة ( الشكل 4) .Wait ما لا يقل عن 72 ساعة بعد الجراحة قبل وضع الحيوان على رقصة الرأس ضبط النفس. تشديد الرباط حول القص العلوي، بدلا من الرقبة، لتجنب انسداد مجرى الهواء. إذا ظهر التنفس إلى أن جاهد أو إعاقة، وتخفف من الرباط أو تحريكه من الخلف. تنفيذ هذا الإجراء في حين أن الفئران هو في حالة تأهب.
- نعلق لوحة الرأس زجرية على الفئران على قطعة المقابل على رقصة. للقيام بذلك، أولا يعلقون لوحة وجها لضبط النفس في المكان، ثم ثبته باستخدام 4-40 المسمار. مما لا شك فيه أن تنتظر حتى الحيوان هو الهدوء من أجل تجنب تطبيق عزم الدوران المفرط في الرأس. وبعد ذلك، وضع الجوز 8-32 على الترباس تقييد الرأس الذي هو مزروع على الفئران. ثم المسمار في الخيوط قضيب الفولاذ المقاوم للصدأ لرئيس الترباس. يضعوا قضيب إلى رقصة التجريبية في مثل هذه الطريقة التي يمكن أن شددت في مكان (الشكل 4).
ملاحظة: تأمين الحيوان مع رئيس الترباس فضلا عن لوحة وجها لضبط النفس دقيقةimizes الانحناء للأجهزة ويحسن الاستقرار التسجيل. في معظم الحالات يمكن تسجيل تبدأ في اليوم الأول من الحيوان هو-ضبط النفس الرأس. ومع ذلك، إذا يتململ الحيوان بشكل مفرط أو يتذرع، وتوفير يوم واحد من الرأس ضبط النفس التدريب التعود قبل بدء أي تسجيلات. في هذه الحالة، وترك الحيوان على رقصة لمدة 15 دقيقة ومن ثم وضعها مرة أخرى في قفصه. كرر هذه الخطوة في اليوم التالي وتواصل مع البروتوكول. - فتح غرفة تسجيل وإزالة هلام السيليكون. تنظيف حج القحف باستخدام ملقط غرامة إذا الأنسجة وإعادة نمت في حج القحف.
- إرفاق ماصة للمياداة مجهرية الآلية، والمكونات في headstage قبل مكبر للصوت.
ملاحظة: في مظاهرة الحالية، يتم استخدام الدائرة تتابع صغيرة على headstage للتبديل بين أسلاك من الرصاص مكبر للصوت ومصدر الجاري الخارجي مع الامتثال عالية (الشكل 6A-C). لاحظ أن بعض مكبرات الصوت لديها الاقتضاء المدمج في مصدر الامتثال عالية(انظر الأقسام مناقشة والمواد). - استخدام مياداة مجهرية الآلية للتحرك غيض من ماصة لعلامة حددت stereotaxically في غرفة تسجيل. ملاحظة إحداثيات هذا الموقع. يجب الحرص على عدم كسر غيض من ماصة على الجمجمة.
- نقل ماصة إلى الموقع التسجيل المطلوب في المحاور الأمامية-الخلفية وميديو الأطراف. ثم دفع ماصة البطني من خلال الجافية إلى أن ما يقرب من 500 ميكرون الظهرية إلى الموقع تسجيل المقصود.
- تقدم ببطء ماصة أثناء الاستماع لارتفاعه الأحداث على رصد الصوت من الجهد تضخيم سجلت بين طرف ماصة وسلك المرجعية. وبمجرد تحديد ارتفاعه الأحداث، والاستمرار في تحريك ميكرون ماصة 0-100 حتى الانحرافات الإيجابية الذهاب الجهد أكبر من ويلاحظ ما يقرب من 500 μV.
ملاحظة: إن المقاومة القطب تزيد بعامل حوالي 1،5 حتي 10 WHأون يحدث هذا. - بدء تسجيل مرة واحدة وقد تم عزل وحدة كما وفقا لخطوة 3.11، جنبا إلى جنب مع جميع التدابير السلوكية والفسيولوجية الأخرى المثيرة للاهتمام. في التظاهرة الحالية، ويتم رصد تحركات شعرة أنفية المولدة ذاتيا مع سرعة عالية بالفيديو (انظر قسم المواد).
- لتسمية الموقع تسجيل، والتبديل القطب يؤدي إلى الاتصال بمصدر الحالي. هناك عدة طرق للقيام بذلك، وذلك باستخدام إما الدائرة تتابع (الشكل 6A - C)، المدمج في مصدر الحالي على مكبر للصوت، أو يدويا (الشكل 6D، راجع الخطوة 3.8 ومناقشة). تمرير -4 أمبير مع 2 البقول ثانية في دورة العمل 50٪ لمدة 4 دقائق لحقن iontophoretically شيكاغو السماء الزرقاء من خلال ماصة.
- قتل ويروي الحيوان بعد عدة إجراءات وضع العلامات وفقا للممارسة القياسية. قسم المخ ومباين الضرورة لتحديد موقع التشريحي للتسجيل الجلوسه. مباين الأنسجة لالسيتوكروم أوكسيديز التفاعل وفقا ل14. بدلا من ذلك، التعرف على الودائع شيكاغو السماء الزرقاء باستخدام المجهر مضان.
ملاحظة: لتفرق بدقة بين وحدات مختلفة وصفت من المهم أن يتم إجراء كافة العلامات مع نفس ماصة في اليوم نفسه، دون unclamping ماصة بين العلامات. في هذه الحالة يمكن التفريق بين مواقع التسجيل عن طريق المواقع النسبية في الأنسجة بعد خاصة مع إحداثيات تتلاعب أشار كل موقع (راجع الخطوة 3.9). لتحديد لا لبس فيه، بمناسبة التسميات لا يقل عن 200 ميكرون وبصرف النظر عن بعضها البعض، وليس أكثر من 3-5 تسميات لكل منطقة في الدماغ.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الوحدات العصبية في بطني الخلفي وسطي (VPM) المهاد ترميز مرحلة حركة شعرة أنفية أثناء المولدة ذاتيا الخفق 15،16. ويبين الشكل 7A عينة النشاط ارتفاعه وحدة المهادية VPM كما الفئران والخفق بنشاط. ويبين الشكل 7B الرسم البياني للارتفاع مرات محاذاة إلى المرحلة حظية من شعرة أنفية حركة 17. وهناك المزيد من المسامير خلال مرحلة التراجع من الخفقان. بعد التسجيل، وصفت موقع وحدة عبر الرحلان الشاردي شيكاغو السماء الصبغة الزرقاء، كما هو مبي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بناء رقصة التجريبية
تم حذف وصف الأجزاء الميكانيكية المستخدمة لبناء رقصة التجريبية (الشكل 4) من البروتوكول، كما أنه يمكن بناؤها في مجموعة متنوعة من الطرق. في هذا المعيار مظاهرة تستخدم البصريات الميكانيكية أجزاء والمشابك دعم لتركيب شريط الرأس ضبط النفس وضبط النفس أنبوب الجسم (انظر قسم المواد). أجزاء مماثلة البصريات الميكانيكية يمكن أن تستخدم لتركيب حا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
تعلن المؤلفين أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.
شكر وتقدير
نحن ممتنون للمعاهد الكندية للبحوث الصحية (منحة MT-5877) ، والمعاهد الوطنية للصحة (منح NS058668 و NS066664) ، والمؤسسة الأمريكية الإسرائيلية ثنائية القومية (منحة 2003222) لتمويل هذه الدراسات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كيتاسيت (كيتامين هيدروكلورايد) | فورت دودج | N / A | |
| Anased (محلول Xylazine) | Lloyd Laboratories | N / A | |
| Betadyne (Povidone-Iodine) | صيدلية CVS | 269281 | |
| Loctite 495 | Grainger Industrial Supply | 4KL86 | 20-40 cp cyanoacrylate |
| Vetbond | 3M | 1469SB | |
| Grip الأسمنت مسحوق | Dentsply | Intl 675571 | لقاعدة غرفة التسجيل |
| سائل الأسمنت | Grip Dentsply Intl | 675572 | لقاعدة غرفة التسجيل |
| هلام السيليكون | Dow Corning | 3-4680 | |
| مسحوق الأكريليك لإصلاح طقم الأسنان النفاث | Lang Dental Manufacturing Co. | غير متاح | لتأمين جهاز مسند الرأس إلى الجمجمة |
| Ortho-Jet سريع المعالجة سائل راتنج الأكريليك لتقويم | Lang Dental Manufacturing Co. | N / A | لتأمين جهاز تقييد الرأس بالجمجمة |
| شيكاغو السماء الزرقاء | سيجما | C8679 | |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | للتروية وتثبيت |
| الأنسجة محلول ملحي مخزن بالفوسفات | Sigma | P3813 | للتروية وتثبيت الأنسجة |
| السيتوكروم C | Sigma | C2506 | لتلوين السيتوكروم أوكسيديز ، < قوي>الشكل 7< / قوي> |
| ديامينوبنزيدين | سيجما | D5905 | لتلوين السيتوكروم أوكسيديز ، <قوي>الشكل 7< / قوي> |
| جورب الفئران | خياطة أنيقة (سان دييغو ، كاليفورنيا) | N / A | مخصص ، <قوي> الأشكال 1 ، 4< / قوي > |
| أنبوب PVC 2 ½ ؛ " | شركة البلاستيك الأمريكية | 34108 | <قوي>الشكل 4< / قوي> |
| مصغر D دبابيس ومآخذ TE | Connectivity | 205089-1 | الشكل 3< / قوي> |
| سلك موسيقى من الفولاذ المقاوم للصدأ 0.010 "قطر | Precision Brand Products، Inc. | 21010 | الشكل 3< / strong> |
| إطار عقد تجسيمي | Kopf Instruments | موديل 900 | الشكل 3< / strong> |
| قضبان الأذن التجسيمية | Kopf Instruments | نموذج 957 | الشكل 3< / strong> |
| مناور Stereotaxic | Kopf Instruments | موديل 960 | الشكل 3< / قوي> |
| ½ لدغ الحفر مم | هنري شاين | 100-3995 | |
| مثقاب الأسنان الهادئ في الهواء | الغرب الأوسط للأسنان | 393-1600 | |
| الفولاذ المقاوم للصدأ 0-80 &frac18 ؛ ” برغي | السحابة سوبر ستور | 247438 | <قوي>الشكل 3< / قوي> |
| 0.2 مل أنبوب الطرد المركزي | فيشر العلمي | 05-407-8A | <قوي> الشكل 3< / قوي> |
| مخصص لشريط تثبيت الرأس | UCSD SIO Machine Shop | N / A | مخصص ، <قوي> الأشكال 2 - 4< / قوي > |
| لوحة مخصصة لحمل الرأس | UCSD SIO Machine Shop | N / A | مصنوعة حسب الطلب ، <قوية> الأشكال 2 - 4< / قوية > |
| زاوية قائمة بعد المشبك | نيوبورت | MCA-1 | الأشكال 3 ، 4< / قوي> ؛ الأجزاء الميكانيكية البصرية القياسية للرقصة التجريبية (<قوية>الشكل 4< / قوي>) هي أيضا من شركة نيوبورت كورب. |
| 8-32 ¾ ” برغي | السحابة Superstore | 240181 | لضبط النفس ، <قوي > الشكل 3< / قوي> |
| 4-40 ¼ ؛ ” برغي | السحابة Superstore | 239958 | لتقييد الرأس ، <قوي>الأشكال 3 ، 4< / قوي> |
| الكوارتز الشعرية أنابيب | Sutter Instruments | QF-100-60-10 | الشكل 5< / قوي> |
| أكسيد الكربون مجتذب الليزر | أدوات Sutter | P-2000 | |
| أداة مناور دقيق بمحركات | Sutter Instruments | MP-285 | |
| مضخم القطب الكهربائي الدقيق | الأجهزة الجزيئية | Multiclamp 700B | الجزء البديل: الأجهزة الجزيئية Axoclamp 900A |
| مضخم القطب الصغير مرحلة رأس | الأجهزة الجزيئية | CV-7B | الجزء البديل: HS-9Ax10 مع الأجهزة الجزيئية Axoclamp 900A |
| محفز النبض المعزول | أنظمة AM | موديل 2100 | الجزء البديل: HS-9Ax10 مع الأجهزة الجزيئية Axoclamp 900A |
| مراقب الصوت | راديو شاك | 32-2040 | |
| حامل الماصة | وارنر إنسترومنتس | #MEW-F10T | الأجزاء البديلة: انظر <قوي>مناقشة، <قوي>الشكل 6A< / قوي> |
| سلك الرصاص | الكهربائي سلك كونر | NEF34-1646 | (اختياري) ، <قوي>الشكل 6D< / strong> |
| Relay لمكبر | الرأس COTO Technology | # 2342-05-000 | (اختياري) تستخدم مع لوحة دوائر مطبوعة مصنوعة حسب الطلب (UCSD Physics Electronics Shop) ، <قوي >الشكل 6A-C< / قوي > |
| كاميرا فيديو رقمية | Basler | A602fm | (اختياري) للمراقبة السلوكية ، <قوي>الشكل 7< / قوي> |
| Puralube مرهم بيطري | Amazon.com، Inc | NC0138063 |
المراجع
- Fee, M. S., Leonardo, A. Miniature motorized microdrive and commutator system for chronic neural recording in small animals. Journal of Neuroscience Methods. 112 (2), 83-94 (2001).
- Ventakachalam, S., Fee, M. S., Kleinfeld, D. Ultra-miniature headstage with 6-channel drive and vacuum-assisted micro-wire implantation for chronic recording from neocortex. Journal of Neuroscience Methods. 90 (1), 37-46 (1999).
- Szuts, T. A. A wireless multi-channel neural amplifier for freely moving animals. Nature Neuroscience. 14 (2), 263-269 (2011).
- Roy, S., Wang, X. Wireless multi-channel single unit recording in freely moving and vocalizing primates. Journal of neuroscience. 203 (1), 28-40 (2012).
- Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. Quality metrics to accompany spike sorting of extracellular signals. Journal of Neuroscience. 31 (24), 8699-8705 (2011).
- Pinault, D. A novel single-cell staining procedure performed in vivo under electrophysiological control: morpho-functional features of juxtacellularly labeled thalamic cells and other central neurons with biocytin or Neurobiotin. Journal of neuroscience. 65 (2), 113-136 (1996).
- Person, A. L., Perkel, D. J. Pallidal neuron activity increases during sensory relay through thalamus in a songbird circuit essential for learning. The Journal of neuroscience. 27 (32), 8687-8698 (2007).
- Kock, C. P., Sakmann, B. Spiking in primary somatosensory cortex during natural whisking in awake head-restrained rats is cell-type specific. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 106 (38), 16446-16450 (2009).
- Connor, D. H., Peron, S. P., Huber, D., Svoboda, K. Neural activity in barrel cortex underlying vibrissa-based object localization in mice. Neuron. 67 (6), 10481061(2010).
- Hellon, R. The marking of electrode tip positions in nervous tissue. The Journal of physiology. 214, 12P(1971).
- Furuta, T., Deschênes, M., Kaneko, T. Anisotropic distribution of thalamocortical boutons in barrels. The Journal of Neuroscience. 31 (17), 6432-6439 (2011).
- Paxinos, G., Watson, C. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , Academic Press. (1986).
- Kleinfeld, D., Delaney, K. R. Distributed representation of vibrissa movement in the upper layers of somatosensory cortex revealed with voltage sensitive dyes. Journal of Comparative Neurology. 375 (1), 89-108 (1996).
- Wong-Riley, M. Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry. Brain research. 171 (1), 11-28 (1979).
- Moore, J. D., Deschênes, M., Kleinfeld, D. Self-generated vibrissa motion and touch are differentially represented throughout ventral posterior medial thalamus in awake, head-fixed rats. Society for Neuroscience Annual Meeting. 41 496.08/TT424 Society for Neuroscience. 41, (2011).
- Khatri, V., Bermejo, R., Brumberg, J. C., Zeigler, H. P. Whisking in air: Encoding of kinematics by VPM neurons in awake rats. Somatosensory and Motor Research. 27 (2), 344-356 (2010).
- Hill, D. N., Curtis, J. C., Moore, J. D., Kleinfeld, D. Primary motor cortex reports efferent control of vibrissa position on multiple time scales. Neuron. 72 (2), 344-356 (2011).
- Moore, J. D. Hierarchy of orofacial rhythms revealed through whisking and breathing. Nature. 497, 205-210 (2013).
- Duque, A., Zaborszky, L. Neuroanatomical Tract-Tracing 3. , Springer. 197-236 (2006).
- Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fsubstances.html Forthcoming.
- Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. , Kation Scientific. Available from: http://kationscientific.com/fdyes.html Forthcoming.
- Urbain, N., Deschênes, M. Neuroactive substances: Neuropharmacology by microiontophoresis. (Kation Scientific), Dyes and Tracers: Sitemarking and tracktracing by microiontophoresis. (Kation). Journal of Neuroscience. 27 (45), 12407-12412 (2007).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
