التنميط الجزيئي للالمكروية ورم الغازية في نموذج 3 الأبعاد للخلايا سرطان القولون والمستقيم و<em&gt; خارج الحي</em&gt; الخلايا الليفية

ملخص

التنميط الجزيئي للخلايا الليزر microdissected وسدى من الاصطناعية، ونماذج سرطان القولون والمستقيم الأنسجة المهندسة يمثل الرواية والنهج manipulatable لتوصيف وتشريح الأحياء المتميزة في مجال التفاعل بين الخلايا السرطانية في الجبهة الغازية وسرطان الخلايا اللحمية المرتبطة.

الملخص

غزو ​​سرطان القولون والمستقيم قد المكتسب (CRC) الخلايا القدرة على التحرر من الخلايا أختهم، اختراق سدى، ويعيد المصفوفة خارج الخلية (ECM). يمكن أن تميز بيولوجيا هذه المجموعة المتميزة ظاهريا من خلايا تحسين فهمنا بشكل كبير من الأحداث في وقت مبكر خلال تتالي النقيلي.

غزو ​​الورم هو عملية ديناميكية سهلت التفاعلات ثنائية الاتجاه بين ظهارة الخبيثة والسرطان المرتبطة سدى. من أجل دراسة استجابات الخلايا المحددة في الورم سدى واجهة جمعنا بين عضوي النمط ثقافة مشتركة والتقنيات الدقيقة تشريح الليزر.

نماذج عضوي النمط، الذي المكونات الرئيسية مثل انسجة الخلايا الليفية هي 3 dimentioanally شارك في تربيتها مع سرطان الخلايا الظهارية، هي أدوات تجريبية manipulatable للغاية التي تمكن الغزو والتفاعلات السرطان سدى لدراستها في شبه فتاهشروط ysiological.

الليزر تسليخ مجهري (LMD) هو الأسلوب الذي ينطوي على تشريح الجراحي واستخراج الطبقات المختلفة داخل أنسجة الورم، مع مستوى الدقة ميكرون.

من خلال الجمع بين هذه التقنيات مع التنميط الجيني، transcriptomic وجينية ونحن نهدف إلى تطوير فهم أعمق للخصائص الجزيئية لغزو الخلايا السرطانية والأنسجة المحيطة اللحمية، وبذلك يحتمل أن تكشف المؤشرات الحيوية والفرص المتاحة لتطوير الأدوية في CRC الرواية.

المقدمة

عضوي النمط المشترك الثقافات نماذج الأنسجة المهندسة التي تساعد في إعادة بناء في الجسم الحي الورم المكروية في 3 أبعاد ازدواجية بواسطة الخلايا الظهارية الخبيثة والخلايا اللحمية في هلام الكولاجين تحتوي على مكونات المصفوفة خارج الخلية الأساسية ^1-3. تصور أساسا كوسيلة لقياس غزو الورم، organotypics تقليل الاعتماد على النماذج الحيوانية في الجسم الحي، وتجنب أوجه القصور في غيرها من تقنيات في المختبر مثل فحوصات Transwell، التي يضطر فيها الخلايا الغازية بشكل مصطنع في حالة تشتت أحادية ^2-4. إدراج الخلايا اللحمية في هذه النماذج، مثل الخلايا الليفية، ويعكس الدور الأساسي للالمكروية الورم الخبيث في....

البروتوكول

1. مؤسسة الثقافات الخلايا الليفية الأولية من القولون إإكسبلنتس

1. الحصول على عينات من الأنسجة الطبيعية القولون المخاطي الإنسان مباشرة من غرفة العمليات الجراحية، ووقف في 7-10 مل من برنامج تلفزيوني تستكمل مع 100 وحدة / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين، و 0.25 ميكروغرام / مل Fungizone.
2. في المختبر، ضع عينة في وسط طبق 10 سم زراعة الأنسجة ويغسل 3 مرات مع برنامج تلفزيوني / القلم بكتيريا / Fungizone. لا نضح بعد غسل النهائي.
3. مع ملقط معقم و....

النتائج

لقد طبقنا الأسلوب أعلاه إلى مجموعات متعددة من خطوط الخلايا اتفاقية حقوق الطفل والخلايا اللحمية. أحد الأمثلة المعروضة هنا هي خطوط الخلايا الظهارية SW480 جنة حقوق الطفل مع فيفو السابقين الخلايا الليفية القولون الإنسان الأساسية. هي التي شيدت 3 الابعاد المشترك الثقافات (الشكل 1)، تعرض لالمجهري والليزر التقاط تسليخ مجهري (الشكل 2)، وتحليلها من قبل الرنا الميكروي (ميرنا) التنميط (الشكل 3) للمقارنة لل miRNAs وأعرب تفاضلي بين الخ.......

المناقشة

نحن هنا تصف طريقة لعزل وتوصيف تحديدا الخلايا السرطانية التي حصلت على القدرة على غزو السرطان المرتبطة سدى خلال المراحل الأولى من تطور المنتشر في 3 الابعاد بناء ثقافة مشتركة من الخلايا الظهارية واللحمية.

واستخدمت نماذج التعاون ثقافة تتألف من اتفاقية حقوق الطفل الخلايا الظهارية جنبا إلى جنب مع سدى الاصطناعية التي تحتوي على فيفو السابقين الخلايا الليفية القولون الإنسان لدراسة الغزو اتفاقية حقوق الطفل في 3 أب.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
خطوط خلايا سرطان القولون والمستقيم - على سبيل المثال الموضح SW480	ATCC	ATCC CCL-228
الكولاجين	BD Biosciences	354265
Matrigel	BD Biosciences	354234
غشاء النايلون	Merck Millipore	VVLP01300
الشبكة المعدنية	شركة Mesh	Company WSS20-A4	themeshcompany.com
ليزر منصة التشريح المجهري	Leica Microsystems	Leica AS LMD
شرائح مثبتة على الغشاء			الجزيئية
Cresyl Violet	Merck Millipore	1052350025

الأجهزة