مقالة منهجية

تقييم وظيفة الأوعية الدموية في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن

DOI:

10.3791/51478

⸱

يونيو 16, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Renal Diseases and Hypertension, University of Colorado, Denver, 2Department of Integrative Physiology, University of Colorado, Boulder

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

درجة ضعف الأوعية الدموية والمساهمة الآليات الفسيولوجية يمكن تقييمها في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن عن طريق قياس العضدية الشريان تدفق بوساطة تمدد، الأبهر نبض سرعة الموجة، والأوعية الدموية البطانية التعبير بروتين الخلية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المرضى الذين يعانون من مرض مزمن في الكلى (كد) قد زادت بشكل ملحوظ خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية بالمقارنة مع السكان عامة، ويفسر هذا جزئيا فقط عن عوامل خطر الأمراض القلبية الوعائية التقليدية. ضعف الأوعية الدموية هو عامل خطر غير التقليدية الهامة، والتي تتميز ضعف بطانة الأوعية الدموية (تقييم الأكثر شيوعا في قيمتها تعتمد على البطانة تمدد [EDD]) وتشنج الشرايين مرنة كبيرة. في حين وجود تقنيات مختلفة لتقييم EDD وتصلب الشرايين الكبيرة المرنة، والأكثر شيوعا هي الشريان العضدي بوساطة تدفق للدم (FMD BA) والأبهر سرعة نبض الموجة (aPWV)، على التوالي. كل من هذه التدابير موسع ضعف الأوعية الدموية هي تنبئ مستقلة للأحداث القلب والأوعية الدموية في المستقبل في المرضى الذين يعانون من أمراض الكلى وبدون. المرضى الذين يعانون من كد تثبت على حد سواء ضعف الحمى القلاعية على درجة البكالوريوس، وزيادة aPWV. في حين أن الآليات الدقيقة التي ضعف الأوعية الدموية ديفييشذب في كد وغير مفهومة، وزيادة الاكسدة وانخفاض لاحق في اكسيد النيتريك (NO) التوافر البيولوجي هي المساهمة الهامة. التغيرات الخلوية في الاكسدة يمكن تقييمها من خلال جمع خلايا بطانة الأوعية الدموية من الوريد المرفقية وقياس البروتين التعبير عن علامات الاكسدة باستخدام المناعي. نحن نقدم هنا مناقشة هذه الأساليب لقياس مرض الحمى القلاعية على درجة البكالوريوس، aPWV، والأوعية الدموية البطانية التعبير بروتين الخلية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض مزمن في الكلى (كد) هو مصدر قلق كبير للصحة العامة التي وصلت إلى مستويات وبائية، والتي تؤثر ~ 11.5٪ من السكان في الولايات المتحدة وحدها 1. يتم زيادة خطر الموت القلب والأوعية الدموية أو الحدث القلب والأوعية الدموية في المرضى الذين يعانون من كد بكثير بالمقارنة مع عامة السكان 2-4. على الرغم من أن المرضى الذين يعانون من كد تظهر ارتفاع معدل انتشار عوامل الخطر التقليدية القلب والأوعية الدموية، وهذا يفسر جزءا فقط من لهم زيادة حدوث أمراض القلب والأوعية الدموية (الأمراض القلبية الوعائية) 5. ضعف الأوعية الدموية هو عامل خطر غير تقليدية القلب والأوعية الدموية المهم كسب اعتراف متزايد في مجال أمراض الكلى 6-9.

بينما العديد من التغييرات من المرجح أن تسهم في تطوير ضعف الشرايين، من بين تلك الأكثر إثارة للقلق هي تطوير ضعف بطانة الأوعية الدموية، المقررة الأكثر شيوعا في قيمتها تعتمد على البطانة تمدد (EDD)، وتشنج لللاRGE الشرايين مرنة 10. توجد تقنيات مختلفة لتقييم EDD وتصلب الشرايين مرنة كبيرة، ولكن الأكثر شيوعا هي الشريان العضدي بوساطة تدفق تمدد الحمى القلاعية BA الأبهر وسرعة نبض الموجة (aPWV)، على التوالي. آخر تقنية تستخدم عادة لتقييم EDD يتم قياس استجابة الساعد تدفق الدم إلى وكلاء الدوائية مثل أستيل باستخدام الوريدي انسداد تخطيط التحجم 11،12. ومع ذلك، وهذا يتطلب منهجية القسطرة من الشريان العضدي، والتي هي أكثر الغازية من مرض الحمى القلاعية على درجة البكالوريوس، ويمكن بطلان في المرضى الذين يعانون من كد. تقنية بديلة لتقييم تصلب الشرايين هو لقياس الامتثال الشرياني المحلية (معكوس صلابة) من الشريان السباتي، على الرغم من أن هذه ليست كما تستخدم على نطاق واسع أو التأكد من صلاحيتها مع النهاية السريرية كما aPWV 13.

المرضى الذين يعانون من كد تثبت على حد سواء ضعف الحمى القلاعية BA 14-16 الأبهر وزيادة نبض سرعة الموجة ا ف بWV 13،17،18، حتى قبل الحاجة لغسيل الكلى. الأهم من وجهة نظر سريرية، وكلاهما من هذه التدابير موسع ضعف الأوعية الدموية هي تنبئ مستقلة للأحداث القلب والأوعية الدموية في المستقبل على حد سواء والوفيات في المرضى الذين يعانون من كد 19-21، وكذلك في غيرهم من السكان 22-26. هذه التقنيات يمكن تطبيقها على دراسة مختلف السكان المعرضين لخطر الأمراض القلبية الوعائية، بما في ذلك المرضى الذين يعانون من كد.

وغير مفهومة تماما الآليات الدقيقة التي ضعف الشرايين يتطور في كد؛ ومع ذلك، خفضت أكسيد النيتريك (NO) التوافر البيولوجي هو المساهم الحرجة 27-30 وآلية المشتركة لكلا ضعاف EDD وزيادة تصلب الشرايين 10،31. في كد، وزيادة الاكسدة ويساهم في خفض NO التوافر البيولوجي 32-34. يتم تعريف الاكسدة كما التوافر البيولوجي المفرط للأنواع الاكسجين التفاعلية (ROS) نسبة إلى الدفاعات المضادة للأكسدة. المنبهات الفسيولوجية، المؤتمر الوطني العراقيluding إشارات التهابات، وتعزيز نظم الانزيم المؤكسد لإنتاج ROS، بما في ذلك أنيون الفائق (O 2 ● -) (على سبيل المثال، انزيم أوكسيديز NADPH أكسدة.) 35. إنتاج الفائق يؤدي في النهاية إلى يقلل من التوافر البيولوجي من أكسيد النيتريك (NO).

ضعاف NO التوافر الحيوي قد يساهم بدوره في تطوير كد، واختلال وظيفي البطانية هو مؤشرا مستقلا للحادث كد 36. وهذا يتفق مع البيانات الحيوانية مشيرا إلى أن ارتفاع ضغط الدم يؤدي الى تثبيط أنوش (النظامية والكبيبي)، نقص التروية الكبيبي، الكبيبات، وانبوبية الخلالي إصابة 37. في الواقع، يبدو خفض NO التوافر البيولوجي الضرورية لتطور وتقدم مرض الكلى التجريبية التي تحاكي الأمراض التي تصيب البشر، مما يشير إلى الدور الرئيسي لاختلال وظيفي البطانية في كد الإنسان 38،39.

يمكن تقييم علامات الاكسدة الأوعية الدموية في الخامسascular الخلايا البطانية التي تم جمعها من الموضوعات البحثية الإنسان، وذلك باستخدام تقنية ضعت أصلا من قبل كولومبو وآخرون 40 وتعديل الأختام وآخرون 41-43. باستخدام 2 العقيمة J-الأسلاك، يتم جمع الخلايا من الوريد المرفقية، تعافى، ثابتة، وبعد ذلك حددت بشكل إيجابي كما الخلايا البطانية وتحليلها من أجل التعبير عن البروتينات ذات الاهتمام باستخدام المناعي.

نحن نقدم هنا مناقشة هذه المنهجية التي يمكن استخدامها لأ) تدبير الحمى القلاعية BA؛ ب) قياس aPWV؛ ج) قياس الأوعية الدموية البطانية التعبير البروتين خلية من علامات الاكسدة. وينصب التركيز على المرضى الذين يعانون من كد، لا تتطلب غسيل الكلى المزمن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية كولورادو متعددة مجلس المراجعة المؤسساتي (COMIRB).

1. التحضير لاختبار الدورة

  1. ينبغي للمشاركين اتبع القيود المفروضة على قياسات أدق: 12 ساعة بسرعة من الطعام والكافيين، 12 ساعة من ضبط النفس وممارسة، 12 ساعة ضبط النفس عن التدخين، إن وجدت،> 4 نصف العمر ضبط النفس من الأدوية إذا كان ذلك ممكنا (قد لا يكون ممكنا في وينبغي اختبار السكان مثل المرضى كد)، والنساء قبل انقطاع الطمث في الأيام 1-7 من الدورة الشهرية للحد من التأثيرات الهرمونية.
  2. إعداد 500 مل من العازلة تفارق بإضافة 2 مل من 0.5 M حمض ethylenediaminetetraacetic (EDTA)، 0.05 غرام من الهيبارين (180 وحدة USP / ملغ)، و 2.5 غرام من ألبومين المصل البقري إلى 476.8 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في الرقم الهيدروجيني 7.4. هذا ويمكن تخزينها في 4 درجات مئوية لعدة أشهر.
  3. بدوره على الموجات فوق الصوتية، والكمبيوتر، والدورة الدموية غير الغازيةمحطة العمل (NIHem، ومعدات تصلب الشرايين). توصيل الكابلات إخراج الموجات فوق الصوتية إلى الكمبيوتر R-موجة مربع الزناد.

2. جمع وتجهيز الخلايا البطانية الوعائية

  1. ممرضة مدربة أو الطبيب يؤدي جمع (الخطوات 2،2-2،5، 2.7) ويجمع الباحث والعمليات الأسلاك (الخطوات 2.6، 2،8 حتي 2،19)
  2. الإعدادية موقع المرفقية مع موضعي مطهر، وتطبيق وقف النزف، موقع الوريد، ويقني؛ يدخل القنية مع القسطرة G 18. وضع محول heplock على نهاية الرابع.
  3. وضعت على قفازات معقمة ووضع الستائر منوفذة معقمة خلال الموقع.
  4. وضع 2 J-الأسلاك على الستائر. سحب قوس "J" لتفك "ي" شكل من كلا الأسلاك.
  5. إرفع قبعة على heplock وتغذية J-الأسلاك في الوريد حوالي 8 سم. دفع ذهابا وإيابا عدة مرات قبل إزالة الأسلاك. تجنب الدم الإجمالي على السلك.
  6. استخدام قواطع للاسلاك لقص الأسلاك بحيث تناسب في50 مل المخروطية أنبوب يحتوي ~ 30 مل من العازلة تفارق
  7. كرر الخطوة 2.5 لسلك الثاني.
  8. كرر الخطوة 2.6 لسلك الثاني. العودة إلى أنبوب المختبر الرطب.
  9. قفل الأسلاك مع زوج من ملقط وعقد الأسلاك داخل الأنبوب، ولكن قبل الحل. لمدة 10 دقيقة، واستخدام pipetter الآلية لجمع مرارا تفارق العازلة من 50 مل أنبوب مخروطي والافراج عنها لذلك يعمل باستمرار على طول الأسلاك لشطف ويهتز الأسلاك، ثم التخلص من السوائل الزائدة من الأسلاك في أنبوب.
  10. أجهزة الطرد المركزي لمدة 7 دقائق في 400 x ج و 4 درجة مئوية.
  11. إعداد الحل الفورمالديهايد في احباط تغطية أنبوب من خلال الجمع بين 100 مل الفورمالديهايد حل + 900 مل PBS.
  12. إزالة أنبوب من أجهزة الطرد المركزي ببطء، بدوره على مضخة فراغ، ضع طرف ماصة على نهاية خرطوم شفط وترك ~ 400 مل في أنبوب، وكنس قبالة بقية من دون إزعاج بيليه.
  13. مع تغطية احباط وماصة 1 مل من محلول الفورمالديهايد فيأنبوب لإصلاح العينة. لا في resuspend. احتضان لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  14. 8 إعداد الشرائح عن طريق وضع العلامات مع الموضوع والمعلومات زيارة دراسية ورسم شكل بيضاوي على كل شريحة مع القلم حلمة الثدي.
  15. إضافة 15 مل PBS، في resuspend، وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 400 x ج و 4 درجة مئوية.
  16. كرر الخطوة 2.15، إضافة 12 مل PBS، في resuspend، وأجهزة الطرد المركزي لمدة 6 دقائق في 400 x ج و 4 درجة مئوية.
  17. إزالة أنبوب من أجهزة الطرد المركزي ببطء، بدوره على مضخة فراغ، ضع طرف ماصة على نهاية خرطوم شفط وترك ~ 2 مل في أنبوب، وكنس قبالة بقية من دون إزعاج بيليه.
  18. في resuspend وماصة بالتساوي على 8 الشرائح في المناطق البيضاوي.
  19. مكان في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 5 ساعة ثم تخزين في -80 درجة مئوية حتى جاهزة للتحليل (عينات وسوف يكون على ما يرام لسنوات عديدة).

3. تقييم مرض الحمى القلاعية وBA aPWV

  1. يكون تغيير موضوع البحث في شورت المتاح ولها حايم / لها مستلق تكمن في ذلك، الخافت، والمناخ تسيطر غرفة هادئة.
  2. وضع العدد المناسب من تخطيط القلب بالموجات فوق الصوتية للجهاز محددة وتصلب الشرايين (يستخدم هذا الإجراء في الدورة الدموية محطة العمل غير الغازية [NIHem] لقياس تصلب الشرايين، الأمر الذي يتطلب 4 أقطاب)، والكفة ضغط الدم على الموضوع.
  3. بعد 20 دقيقة، تبدأ قراءات ضغط الدم. أداء لا يقل عن 3، وكرر حتى القياسات هي ضمن 5 ملم زئبقي، يستريح 2 دقيقة بين كل قراءة.
  4. بدء قياس توتر بواسطة التلمس لنبض الشريان العضدي، ووضع مقياس التوتر لتسجيل الطول الموجي العضدية باستخدام برنامج حاسوبي.
  5. تكرار للشرايين شعاعي، والفخذ السباتي.
  6. قياس المسافة إلى كل من هذه المواقع من الدرجة supersternal باستخدام شريط قياس (العضدية، وشعاعي السباتي) والحاكم مخصص / الفرجار (الفخذ).
  7. حساب السباتي-العضدية، السباتي، شعاعي، والسباتي الفخذ (aPWV) باستخدام برنامج حاسوبي.
  8. مكانالساعد ضغط الدم الكفة فقط البعيدة لعملية الزج وسجل على الأقل 10 دورات القلب من صور الموجات فوق الصوتية الشريان العضدي خط الأساس وقياسات سرعة تدفق الدم، مع البرمجيات الأوعية الدموية تعيين لتحريك الوضع. A ذراع ميكانيكية يمكن استخدامها لتحقيق استقرار مسبار الموجات فوق الصوتية اذا شئت.
  9. تضخيم الساعد ضغط الدم الكفة إلى 250 ملم زئبقي ويبدأ الموقت. إرشاد المشاركين على البقاء لا يزال جدا.
  10. بدء تسجيل سرعات مع مجموعة البرمجيات الأوعية الدموية يؤدي إلى وضع عندما يقرأ الموقت 04:45. الزناد الافراج عن صفعة في الساعة 5:00 وتغيير الموجات فوق الصوتية لتسجيل B-وضع (قطر) الصور عند الساعة 5:10 يقرأ.
  11. مواصلة تسجيل حتى يقرأ على مدار الساعة 7:00.
  12. سجل على الأقل 10 دورات القلب من خط الأساس الصور الشريان العضدي بالموجات فوق الصوتية مع البرمجيات الأوعية الدموية تعيين لتحريك الوضع.
  13. تأخذ ضغط الدم الشخص المعني. إذا كان ضغط الدم الانقباضي> 100 ملم زئبقي، وضع 0.4 ملغ من النتروجليسرين تحت اللسان تحت موضوع و# 39؛ ق اللسان ويبدأ الموقت، إلا إذا كان المريض لديه موانع أخرى.
  14. بدء تسجيل B-واسطة (صور قطر) عند الساعة 3:00 يقرأ مع البرنامج الأوعية الدموية تعيين لتحريك الوضع.
  15. إيقاف التسجيل عند الساعة 8:00 يقرأ.
  16. مراقبة ضغط الدم حتى يعود إلى خط الأساس

4. إعداد الإنسان الوريد السري البطانية الخلية (HUVEC) الشرائح تحكم

  1. تنمو HUVECs لمرور 5-6 و ~ 80٪ confluency.
  2. يعرض للتريبسين مع 3 مل من التربسين أو كل ما هو ضروري للطبق / القارورة.
  3. تحييد التربسين باستخدام حجم مساو من محلول التربسين تحييد.
  4. أجهزة الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 5 دقائق ~ وإزالة التربسين وحل تحييد قبل فراغ.
  5. ~ resuspend في 10 مل PBS لغسل.
  6. أجهزة الطرد المركزي في 200 x ج ~ 5 دقائق. إزالة برنامج تلفزيوني.
  7. إزالة برنامج تلفزيوني والإصلاح في عام 1800 ميكرولتر PBS + 200 ميكرولتر الفورمالديهايد.
  8. resuspend في برنامج تلفزيوني (~ 10 مل).
  9. أجهزة الطرد المركزي في 200 x ج ~5 دقائق. إزالة برنامج تلفزيوني، resuspend في حجم مناسب لإضافة 200 ميكرولتر ~ لكل شريحة.
  10. مخزن الشرائح في -80 درجة مئوية حتى جاهزة للتحليل (عينات وسوف يكون على ما يرام لسنوات عديدة).

5. تلون الخلايا البطانية الوعائية

  1. تأخذ الشرائح من -80 ° C الفريزر وانتظر 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (هذا الإجراء هو مجموعة من 10 الشرائح، بما في ذلك واحدة تحكم HUVEC الشريحة).
  2. يمحو المياه الزائدة مع مهمة حساسة مسح (لا تلمس وسط الشريحة).
  3. إعادة ترطيب الشرائح بإضافة PBS غيرت إلى كل شريحة وتركها لمدة 10 دقيقة.
  4. في حين أن الشرائح واقفا، وإعداد 5٪ مصل حمار وغيرها من الحلول.
    1. إعداد 5٪ المصل حمار بإضافة 300 ميكرولتر من المصل حمار إلى 5،700 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني المتغيرة (لدرجة الحموضة من 7.4) لمدة تصل إلى 10 الشرائح (زيادة هذا المبلغ للمزيد).
    2. تمييع الأجسام المضادة الأولية من الاهتمام في 1،000 ميكرولتر من 5٪ مصل. على سبيل المثال، nitrotyrosine وNADPHأوكسيديز (1:300 و1:1،500) يمكن أن تستخدم كعلامات الاكسدة.
    3. إعداد AF568 الثانوية عن طريق تمييع 5 ميكرولتر من AF568 إلى 1،500 μll من 5٪ مصل.
    4. إعداد VE كادهيرين عن طريق تمييع 2 ميكرولتر من VE كادهيرين إلى 1،000 ميكرولتر من 5٪ مصل.
    5. إعداد AF488 عن طريق تمييع 5 ميكرولتر من VE كادهيرين إلى 1،000 ميكرولتر من 5٪ مصل.
    6. إبقاء AF568، VE كادهيرين وAF488 تحت احباط من خلال العملية برمتها ومن ثم وضع على الكرسي الهزاز في 4 درجات مئوية الثلاجة أثناء إعداد الشرائح.
  5. بعد 10 دقيقة من الإماهة، والشرائح الجافة مع مهمة حساسة قضاء.
  6. إضافة 5٪ المصل حمار لمدة 60 دقيقة، ووضع قطعة من فيلم البارافين البلاستيك فوق منطقة دائري لضمان تغطية كاملة للمادة الكيميائية.
  7. تجاهل الفيلم البارافين البلاستيك والشرائح الجافة مع مهمة حساسة قضاء. لا يغسل. إضافة الأجسام المضادة الأولية لمدة 60 دقيقة، ووضع قطعة من فيلم البارافين البلاستيك فوق منطقة دائري لضمانتغطية كاملة للمادة الكيميائية.
  8. تجاهل الفيلم البارافين البلاستيك، وشطف مع برنامج تلفزيوني غيرت من زجاجة بخ ونقع في الأعمدة الشريحة لمدة 5 دقائق. في حين أن الشرائح وتمرغ، نقلها إلى غرفة مظلمة. العمل في الظلام لجميع الخطوات المتبقية.
  9. الشرائح الجافة مع Kimwipes، إضافة AF568 (الضد الثانوية) لمدة 45 دقيقة، ووضع قطعة من فيلم البارافين البلاستيك فوق منطقة دائري لضمان تغطية كاملة للمادة الكيميائية. تغطية من الضوء.
  10. تجاهل الفيلم البارافين البلاستيك في حاوية نفايات بيولوجية. شطف مع برنامج تلفزيوني غيرت من زجاجة بخ، ومن ثم نقع في الأعمدة لمدة 5 دقائق.
  11. الشرائح الجافة مع Kimwipes، ثم يضاف VE كادهيرين لمدة 60 دقيقة، ووضع قطعة من فيلم البارافين البلاستيك فوق منطقة دائري لضمان تغطية كاملة للمادة الكيميائية. تغطية من الضوء.
  12. تجاهل الفيلم البارافين البلاستيك في حاوية نفايات بيولوجية. شطف مع برنامج تلفزيوني غيرت من زجاجة بخ، ومن ثم نقع في الأعمدة لمدة 5 دقائق.
  13. الشرائح الجافة معمهمة حساسة القضاء، إضافة AF488 لمدة 30 دقيقة ووضع قطعة من فيلم البارافين البلاستيك فوق منطقة دائري لضمان تغطية كاملة للمادة الكيميائية. تغطية من الضوء.
  14. تجاهل الفيلم البارافين البلاستيك في حاوية نفايات بيولوجية. شطف مع برنامج تلفزيوني غيرت من زجاجة بخ، ومن ثم نقع في الأعمدة لمدة 5 دقائق.
  15. الشرائح الجافة مع مهمة حساسة مسح وتسمح الشرائح لتجف لمدة 20 دقيقة. تغطية من الضوء.
  16. إضافة قطرة واحدة فقط من fluoroshield تصاعد المتوسطة مع 4 '، 6 diamidino-2-phenylindole هيدروكلوريد (دابي) إلى كل شريحة وتغطية كل مع انزلاق الغطاء.
  17. وضع الشرائح في 4 درجات مئوية الثلاجة مغطاة احباط. يحتاج التصوير أن تكتمل في غضون 48 ساعة.

6. التصوير وتحليل الخلايا البطانية الوعائية

  1. إعداد المجهر لتصوير الخلايا البطانية الملون وفقا لمواصفات محددة المجهر. فني واحد أعمى يجب تحليل أي بروتين معين عن الخفافيشالفصل من الخلايا.
  2. مسح الشرائح بشكل منهجي. تحديد الخلايا البطانية التي كتبها تلطيخ إيجابية لVE كادهيرين وتأكيد سلامة النووية عن طريق تلطيخ إيجابية للدابي.
  3. صورة 30 خلايا لكل شريحة لتحليلها لاحقا. تكرار لكل شريحة في الدفعة الملون، بما في ذلك HUVEC.
  4. تحليل كثافة تلطيخ للالأجسام المضادة الأولية ذات الاهتمام باستخدام البرمجيات النوعية.
  5. لتقليل تأثير التباس ممكن من الاختلافات في كثافة تلطيخ بين جلسات تلطيخ مختلفة، والقيم التقرير بأنه نسبة التعبير البروتين في الخلايا البطانية التي تم جمعها لنفس البروتين التعبير في HUVEC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكميا الحمى القلاعية BA كما تغير الذروة في قطر الشريان العضدي التالية تبيغ رد الفعل. وبالتالي، تتم مقارنة في بقية القطر لقطر بعد انتهاء فترة 5 دقائق ضغط الدم الكفة انسداد (الشكل 1). لوحة ويظهر صورة الموجات فوق الصوتية ممثل الشريان العضدي، وفريق B يعرض الرسم البياني للتغيير R-موجة بوابات في القطر من الإفراج الكفة إلى 2 دقيقة التالية، كما تم الحصول عليها باستخدام البرمجيات المتاحة تجاريا. كما تغير غالبا ما تكون ضئيلة جدا (في الشكل 1 التغي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الحصول على نتائج دقيقة لمرض الحمى القلاعية وBA aPWV يتطلب الحصول على صور الموجات فوق الصوتية عالية الجودة والطول الموجي الضغط، على التوالي. المركزية لهذا هو التدريب المناسب والمستمر واستخدام كل تقنية من قبل المشغل 44. بالإضافة إلى ذلك، فمن الأهمية بمكان للسيطرة على العديد من المتغيرات الخارجية التي قد تؤثر على النتائج ممكن عن طريق توحيد جلسة الاختبار (على سبيل المثال، قبل 12 ساعة بسرعة، والمناخ تسيطر الغرفة، الخ) 44،45. كما ذكر أع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفين أشكر نينا Bispham للحصول على المساعدة الفنية لها. وأيد هذا العمل من قبل جمعية القلب الأمريكية (12POST11920023)، والمعاهد الوطنية للصحة (K23DK088833، K23DK087859).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
J-wireSt. Jude4045842 لكل مجموعة
شورتات يمكن التخلص منها (MediShorts) QuickMedical4507
محطة عمل ديناميكية دموية غير جراحية (NIHem) هندسةالقلب والأوعيةN / Aتتضمن مسطرة مخصصة. النظام البديل هو Sphygmocor
UltrasoundG.E.الموديل: Vivid7 Dimensionنحن نستخدم GE ، ولكن هناك العديد من الشركات والنماذج
برامج الأوعية الدموية (Vascular Imager)  تطبيقات التصوير الطبيN / A
صندوق الزناد R-waveتطبيقات التصوير الطبيN / A
تضخم الكفة السريعالمصنوع حسب الطلب Hokansonنموذج: Hokanson E20
سوار ضغط الدم في الساعدHokansonN / Aصفعة مخصصة مع مثانة 6.5 × 34 سم   ؛
HUVECsInvitrogrenC-015-5C
مصل الحمارجاكسون017-000-121
قلم عنقالرحم منتجات البحوث الدولية195505
VE CadherinAbcamab33168
AF568Life TechnologiesA11011يعتمد على مواصفات microscpe   ؛
يعتمد AF488Life TechnologiesA11034على مواصفات microscpe   ؛
الأجسام المضادة للنيتروتيروزين Abcamab7048
NADPH الأجسام المضادة أوكسيديزUpstate07-001
DAPI   ؛ناقلاتH-1200
المهام الدقيقة (Kimwipe) فيشر ساينتفيك06-666-A
فيلم بارافين بلاستيكي (parafilm) فيشر ساينتفيك13-374-10
مجهر متحد البؤر  أوليمبوس: FV1000 FCS / RICSالعديد من الخيارات موجودة 
الدموية نظام مسح نموذج

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Levey, A. S., et al. A new equation to estimate glomerular filtration rate. Ann Intern Med. 150, 604-612 (2009).
  2. Foley, R. N., Parfrey, P. S., Sarnak, M. J. Epidemiology of cardiovascular disease in chronic renal disease. J Am Soc Nephrol. 9, (1998).
  3. Parfrey, P. S., Harnett, J. D. Cardiac disease in chronic uremia. Pathophysiology and clinical epidemiology. Asaio J. 40, 121-129 (1994).
  4. Schiffrin, E. L., Lipman, M. L., Mann, J. F. Chronic kidney disease: effects on the cardiovascular system. Circulation. 116, 85-97 (2007).
  5. Sarnak, M. J., et al. Cardiovascular disease risk factors in chronic renal insufficiency. Clin Nephrol. 57, 327-335 (2002).
  6. Kendrick, J., Chonchol, M. B. Nontraditional risk factors for cardiovascular disease in patients with chronic kidney disease. Nat Clin Pract Nephrol. 4, 672-681 (2008).
  7. Bellasi, A., Ferramosca, E., Ratti, C. Arterial stiffness in chronic kidney disease: the usefulness of a marker of vascular damage. Int J Nephrol. 2011, (2011).
  8. vander Zee, S., Baber, U., Elmariah, S., Winston, J., Fuster, V. Cardiovascular risk factors in patients with chronic kidney disease. Nat Rev Cardiol. 6, 580-589 (2009).
  9. Malyszko, J. Mechanism of endothelial dysfunction in chronic kidney disease. Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry. 411, 1412-1420 (2010).
  10. Lakatta, E. G., Levy, D. Arterial and cardiac aging: major shareholders in cardiovascular disease enterprises: Part I: aging arteries: a "set up" for vascular disease. Circulation. 107, 139-146 (2003).
  11. Seals, D. R., Jablonski, K. L., Donato, A. J. Aging and vascular endothelial function in humans. Clin Sci (Lond). 120, 357-375 (2011).
  12. Jablonski, K. L., et al. Dietary sodium restriction reverses vascular endothelial dysfunction in middle-aged/older adults with moderately elevated systolic blood pressure. J Am Coll Cardiol. 61, 335-343 (2013).
  13. Briet, M., et al. Arterial stiffness and enlargement in mild-to-moderate chronic kidney disease. Kidney Int. 69, 350-357 (2006).
  14. Thambyrajah, J., et al. Abnormalities of endothelial function in patients with predialysis renal failure. Heart. 83, 205-209 (2000).
  15. Ghiadoni, L., et al. Effect of acute blood pressure reduction on endothelial function in the brachial artery of patients with essential hypertension. J Hypertens. 19, 547-551 (2001).
  16. Yilmaz, M. I., et al. The determinants of endothelial dysfunction in CKD: oxidative stress and asymmetric dimethylarginine. Am J Kidney Dis. 47, 42-50 (2006).
  17. Wang, M. C., Tsai, W. C., Chen, J. Y., Huang, J. J. Stepwise increase in arterial stiffness corresponding with the stages of chronic kidney disease. Am J Kidney Dis. 45, 494-501 (2005).
  18. Shinohara, K., et al. Arterial stiffness in predialysis patients with uremia. Kidney Int. 65, 936-943 (2004).
  19. Karras, A., et al. Large artery stiffening and remodeling are independently associated with all-cause mortality and cardiovascular events in chronic kidney disease. Hypertension. 60, 1451-1457 (2012).
  20. Pannier, B., Guerin, A. P., Marchais, S. J., Safar, M. E., London, G. M. Stiffness of capacitive and conduit arteries: prognostic significance for end-stage renal disease patients. Hypertension. 45, 592-596 (2005).
  21. Yilmaz, M. I., et al. Vascular health, systemic inflammation and progressive reduction in kidney function; clinical determinants and impact on cardiovascular outcomes. Neprhol Dial Transplant. 26, 3537-3543 (2011).
  22. Sutton-Tyrrell, K., et al. Elevated aortic pulse wave velocity, a marker of arterial stiffness, predicts cardiovascular events in well-functioning older adults. Circulation. 111, 3384-3390 (2005).
  23. Tanaka, H., DeSouza, C. A., Seals, D. R. Absence of age-related increase in central arterial stiffness in physically active women. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18, 127-132 (1998).
  24. Mitchell, G. F., et al. Arterial stiffness and cardiovascular events: the Framingham Heart Study. Circulation. 121, 505-511 (2010).
  25. Yeboah, J., Crouse, J. R., Hsu, F. C., Burke, G. L., Herrington, D. M. Brachial flow-mediated dilation predicts incident cardiovascular events in older adults: the Cardiovascular Health Study. Circulation. 115, 2390-2397 (2007).
  26. Shechter, M., et al. Long-term association of brachial artery flow-mediated vasodilation and cardiovascular events in middle-aged subjects with no apparent heart disease. Int J Cardiol. 134, 52-58 (2009).
  27. Baylis, C. Nitric oxide deficiency in chronic kidney disease. Am J Physiol Renal Physiol. 294, (2008).
  28. Wever, R., et al. Nitric oxide production is reduced in patients with chronic renal failure. Arterioscler Thromb Vasc. 19, 1168-1172 (1999).
  29. Endemann, D. H., Schiffrin, E. L. Endothelial dysfunction. J Am Soc Nephrol. 15, 1983-1992 (2004).
  30. Hasdan, G., et al. Endothelial dysfunction and hypertension in 5/6 nephrectomized rats are mediated by vascular superoxide. Kidney Int. 61, 586-590 (2002).
  31. Chue, C. D., Townend, J. N., Steeds, R. P., Ferro, C. J. Arterial stiffness in chronic kidney disease: causes and consequences. Heart. 96, 817-823 (2010).
  32. Dupont, J. J., Farquhar, W. B., Townsend, R. R., Edwards, D. G. Ascorbic acid or L-arginine improves cutaneous microvascular function in chronic kidney disease. J Appl Physiol. 111, (2011).
  33. Oberg, B. P., et al. Increased prevalence of oxidant stress and inflammation in patients with moderate to severe chronic kidney disease. Kidney Int. 65, 1009-1016 (2004).
  34. Cachofeiro, V., et al. Oxidative stress and inflammation, a link between chronic kidney disease and cardiovascular disease. Kidney Int Suppl. (111), (2008).
  35. Vila, E., Salaices, M. Cytokines and vascular reactivity in resistance arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 288, (2005).
  36. Perticone, F., et al. Endothelial dysfunction and subsequent decline in glomerular filtration rate in hypertensive patients. Circulation. 122, 379-384 (2010).
  37. Zatz, R., Baylis, C. Chronic nitric oxide inhibition model six years on. Hypertension. 32, 958-964 (1998).
  38. Nakagawa, T., Johnson, R. J. Endothelial nitric oxide synthase. Contrib Nephrol. 170, 93-101 (2011).
  39. Muller, V., Tain, Y. L., Croker, B., Baylis, C. Chronic nitric oxide deficiency and progression of kidney disease after renal mass reduction in the C57Bl6 mouse. Am J Nephrol. 32, 575-580 (2010).
  40. Colombo, P. C., et al. Biopsy coupled to quantitative immunofluorescence: a new method to study the human vascular endothelium. J Appl Physiol. 92, 1331-1338 (2002).
  41. Donato, A. J., Black, A. D., Jablonski, K. L., Gano, L. B., Seals, D. R. Aging is associated with greater nuclear NFkappaB, reduced IkappaBalpha, and increased expression of proinflammatory cytokines in vascular endothelial cells of healthy humans. Aging Cell. 7, 805-812 (2008).
  42. Donato, A. J., et al. Direct evidence of endothelial oxidative stress with aging in humans: relation to impaired endothelium-dependent dilation and upregulation of nuclear factor-kappaB. Circ Res. 100, 1659-1666 (2007).
  43. Jablonski, K. L., Chonchol, M., Pierce, G. L., Walker, A. E., Seals, D. R. 25-Hydroxyvitamin D deficiency is associated with inflammation-linked vascular endothelial dysfunction in middle-aged and older adults. Hypertension. 57, 63-69 (2011).
  44. Corretti, M. C., et al. Guidelines for the ultrasound assessment of endothelial-dependent flow-mediated vasodilation of the brachial artery: a report of the International Brachial Artery Reactivity Task Force. J Am Coll Cardiol. 39, 257-265 (2002).
  45. Harris, R. A., Nishiyama, S. K., Wray, D. W., Richardson, R. S. Ultrasound assessment of flow-mediated dilation. Hypertension. 55, 1075-1085 (2010).
  46. Donald, A. E., et al. Methodological approaches to optimize reproducibility and power in clinical studies of flow-mediated dilation. J Am Coll Cardiol. 51, 1959-1964 (2008).
  47. Widlansky, M. E. Shear stress and flow-mediated dilation: all shear responses are not created equally. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 296, (2009).
  48. Stewart, A. D., Millasseau, S. C., Kearney, M. T., Ritter, J. M., Chowienczyk, P. J. Effects of inhibition of basal nitric oxide synthesis on carotid-femoral pulse wave velocity and augmentation index in humans. Hypertension. 42, 915-918 (2003).
  49. Lantelme, P., Mestre, C., Lievre, M., Gressard, A., Milon, H. Heart rate: an important confounder of pulse wave velocity assessment. Hypertension. 39, 1083-1087 (2002).
  50. Jablonski, K. L., Seals, D. R., Eskurza, I., Monahan, K. D., Donato, A. J. High-dose ascorbic acid infusion abolishes chronic vasoconstriction and restores resting leg blood flow in healthy older men. J Appl Physiol. 103, 1715-1721 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة