Method Article

استقرار الكبدي النمط الظاهري عن طريق الأسطح الاصطناعية محسن

DOI:

10.3791/51723

⸱

September 26th, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1MRC Centre for Regenerative Medicine, University of Edinburgh, 2School of Chemistry, University of Edinburgh, 3MRC Centre for Inflammation Research, University of Edinburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه المادة سوف تركز على تطوير البوليمر المغلفة السطوح على المدى الطويل، ثقافة مستقرة من الخلايا الجذعية المستمدة خلايا الكبد البشرية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حاليا ، يتمثل أحد القيود الرئيسية في بيولوجيا الخلية في الحفاظ على النمط الظاهري للخلية المتمايزة. تستخدم المصفوفات البيولوجية بشكل شائع لزراعة خلايا الكبد المشتقة من الخلايا الجذعية الأولية ومتعددة القدرات والحفاظ عليها. في حين أن المصفوفات البيولوجية مفيدة ، إلا أنها تسمح بزراعة خلايا الكبد على المدى القصير ، مما يحد من تطبيقها على نطاق واسع. لقد حاولنا التغلب على القيود باستخدام طلاء بوليمر اصطناعي. تمثل البوليمرات واحدة من أوسع فئات المواد الحيوية وتمتلك مجموعة واسعة من الخصائص الميكانيكية والفيزيائية والكيميائية ، والتي يمكن ضبطها لهذا الغرض. الأهم من ذلك ، يمكن توسيع نطاق هذه المواد وفقا لمعايير مضمونة الجودة وعرض الاتساق من دفعة إلى دفعة. هذا ضروري إذا كان سيتم توسيع الخلايا من أجل الفحص العالي في صناعة الاختبارات الصيدلانية أو للعلاج الخلوي. البولي يوريثين (PUs) هي مجموعة واحدة من المواد التي أظهرت نتائج واعدة في زراعة الخلايا. يتم تقديم ومناقشة التقدم الذي أحرزناه مؤخرا في تحسين السطح المطلي بالبولي يوريثين ، من أجل استزراع خلايا الكبد البشرية على المدى الطويل التي تظهر نمطا ظاهريا مستقرا.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد استخدمت على نطاق واسع المواد البيولوجية في صيانة وتمايز الخلايا الجذعية المحفزة 1. مع تمكين، وهذه ركائز البيولوجية غالبا ما تحتوي على عدد لا يحصى من المكونات غير محددة. Matrigel هو الركيزة تستخدم عادة لزراعة الخلايا الجذعية وتمايز. للأسف، تكوينه المتغير يؤثر وظائف الخلايا والنمط الظاهري. على الرغم من مجموعة متنوعة من المصفوفات البيولوجية البديلة، وأكثر تحديدا استخدمت 2-7، أصل حيواني أو ضعف قابلية يجعلهم مرشحين غير صالحة للتصنيع الصناعي. ولتحديد البدائل الاصطناعية، مع تكوين المعرفة والأداء الموثوق بها، هي الأهداف الرئيسية في أبحاث الخلايا الجذعية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. توليف PHNGAD (بولى [1،6-hexanodiol / neopentyl غليكول / دي (جلايكول الإثيلين) حمض الأديبيك -alt-] ديول)

figure-protocol-1

مخطط 1: توليف PHNAGD تمثيل تخطيطي لتركيب PHNAGD. كان من رد الفعل من 1،6-Hexanodiol، جلايكول الاثيلين، وجلايكول neoppentyl وحمض الأديبيك أعدت PHNAGD. PHNAGD، بولي [1،6-hexanodiol / neopentyl غليكول / دي (جلايكول الإثيلين) حمض الأديبيك -alt-] ديول.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المذيب البوليمر يؤثر على تضاريس سطح البوليمر المغلفة

كان يذوب البولي يوريثين 134 في الكلوروفورم، إما وحدها أو بالاشتراك مع التولوين أو رباعي هيدرو الفوران أو ثنائي كلورو ميثان والشرائح الزجاجية المغلفة تدور مع تركيبات مختلفة. تم استخدام المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) والمجهري القوة الذرية (AFM) لوصف الخصائص الفيزيائية للطلاء البوليمر (الشكل 1). كان طلاء تم الحصول عليها باستخدام ا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتمد العديد من الطرق الحالية المستخدمة لتوليد خلايا الكبد من الخلايا الجذعية على المصفوفات غير محددة من أصل حيواني. يمكن لهذه ركائز يكون مكلفا ومتغير بدرجة كبيرة، مما يؤثر على وظائف الخلايا والاستقرار، وهو ما يمثل عائقا كبيرا أمام التطبيق. لذا، أجرينا شاشة للمواد الاصطناعية التي تدعم ثقافة الخلايا الجذعية خلايا الكبد المشتقة. حددنا، والبولي يوريثين بسيط (PU134)، التي شكلتها البلمرة PHNGAD، MDI والموسع، وذلك في توليفة مع نهج التمايز الكبدية قوي، تستقر النمط الظاهري الكبدية ويحسن و.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DCH هو منظمات المجتمع المدني، مدير مؤسس ومساهم في FibromEd المنتجات المحدودة MB وJPI على المساهمين المؤسسين في FibromEd المنتجات المحدودة

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ودعمت DCH، MB وFK قبل EPSRC اتبع على الصندوق. BL-V وDS تم دعم كل من MRC درجة الدكتوراة. وأيد KC بتمويل من منهاج الطب التجديدي المملكة المتحدة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Inmunostaining< / قوي> مصل الشركة المصنعة < td colspan = "4" ><قوي> ثقافة الخلية والمقايسة الوظيفية < / strong>

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوي> توليف وتحضير وطلاء وتوصيف أغطية البوليمر PU134 المطلية < / strong>
ShakerEdmun Bü ؛ hlerKS-15
IrradiatorCIS BiointernationalIBL 637   ;
الطلاء المتخصصP-6708
مجهر إلكتروني المسح الضوئي   ؛فيليبسXL30CPSEM
مجهر القوة الذريةالأبعاد V النانوسكوب ، VEECO
p4-GLO CYP3A4PromegaV8902
لمبة الأشعة فوق البنفسجيةESCO
برنامج تحليل NanoScopeVEECOالإصدار 1.20
المجهر الفلوريأوليمبوسTH45200استخدام برنامج Volocity 4
لوحات زراعة الأنسجةCorning, UK 3527
شرائح زجاجية لوازمالمختبرات العلميةMIC3308
ثنائي إيثيلين جلايكولسيجما & ndash ؛ Aldrich93171
1،6-hexanediolSigma– ألدريتش240117
نيوبنتيل جلايكولسيجما & - ndash ؛ ألدريتش408255
حمض الأديبيكسيجما & - - نداش ؛ Aldrich9582
اللامائي N,N-DimethylformamideSigma– ألدريتش227056
إيثيل الأثيرسيجما & نداش; ألدريتش676845
التيتانيوم (IV) بوتوكسيد  سيجما– Aldrich244112
1،4-butanediol سيجما– Aldrich493732
فرن فراغحراري
4،4'-ميثيلينبيس (فينيل إيزوسيانات)سيجما & نداش ؛ ألدريتش101688
TetrahydrofuraneSigma & ndash; Aldrich401757
Sputter CoaterBal-Tec SCD 050<
محلول ملحي عازل للفوسفات (-MgCl2< / sub> ، -CaCl 2< / sub>)Gibco10010031يخزن في درجة حرارة الغرفة
PBST ، PBS يتكون من 0.1٪ TWEEN 20 & nbsp ؛  مستلزمات المختبرات العلمية المحدودةEC607 
الميثانول  مستلزمات المختبرات العلمية المحدودةCHE5010
الأبقار الألبومينسيجما ألدريتش ، المملكة المتحدةA7906
MOWIOL 488 DAPICalbiochem475904مصنوع من Tris HCl والجلسرين وفقا لتعليمات
CYP3A نشاط pGLO kitPromegaV8902
HepatozymeGibco17705021
TryLE expressLife Technologies12604013
نظام طلاء ثنائي td colspan = "4" >

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhou, W., et al. SUMOylation of HNF4α regulates protein stability and hepatocyte function. J Cell Sci. 125 (15), 3630-3635 (2012).
  2. Banerjee, A., et al. The influence of hydrogel modulus on the proliferation and diffe....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hepatocyte PhenotypeSynthetic SurfacesPolyurethane CoatingSpin CoatingSterilization ProcedureScanning Electron MicroscopyAtomic Force MicroscopyDrug Metabolism AssaysStem Cell Derived HepatocytesGamma Irradiation

Related Articles