مقالة منهجية

دليل ل في الجسم الحي تسجيل وحدة واحدة من التي تم تحديدها Optogenetically القشرية التثبيطي Interneurons

DOI:

10.3791/51757

⸱

نوفمبر 7, 2014

 , 
1Institute of Neuroscience, University of Oregon

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا نصف إستراتيجيتنا للحصول على تسجيلات وحدة واحدة مستقرة ومعزولة جيدا من الخلايا العصبية الداخلية المثبطة المحددة في قشرة الفأر المخدرة. يتم التعرف على الخلايا العصبية التي تعبر عن ChR2 من خلال استجابتها للضوء الأزرق. تستخدم هذه الطريقة معدات تسجيل قياسية خارج الخلية ، وتعمل كبديل غير مكلف لتصوير الكالسيوم أو الترقيع الموجه بصريا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وثمة تحد رئيسي في الفسيولوجيا العصبية لتوصيف خصائص الاستجابة وظيفة من العديد من أنواع الخلايا المثبطة في القشرة الدماغية. نحن هنا نشارك إستراتيجيتنا للحصول مستقرة، معزولة جيدا تسجيلات وحدة واحدة من interneurons المثبطة التي تم تحديدها في القشرة الماوس تخدير باستخدام الطريقة التي وضعتها ليما و1 الزملاء. وتجرى التسجيلات في الفئران معربا عن Channelrhodopsin 2 (ChR2) فى فئة محددة العصبية. يتم التعرف على أفراد من السكان من قبل ردهم إلى مضة قصيرة من الضوء الأزرق. هذه التقنية - يطلق عليه "PINP"، أو تحديد ضوئي بمساعدة من السكان العصبية - يمكن تنفيذها مع المعدات القياسية تسجيل خارج الخلية. يمكن أن تكون بمثابة بديل رخيص الثمن وفي متناول التصوير الكالسيوم أو الترقيع الموجهة بصريا، لغرض استهداف التسجيلات خارج الخلية إلى الخلايا المحددة وراثيا. Hيحرث نحن نقدم مجموعة من الإرشادات لتحسين الأسلوب في الممارسة اليومية. نحن المكرر استراتيجيتنا خصيصا لاستهداف (PV +) خلايا parvalbumin إيجابي، ولكن وجدت أنه يعمل لأنواع عصبون أخرى أيضا، مثل (CR +) interneurons، معربا عن calretinin (SOM +)، معربا عن السوماتوستاتين و.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كان توصيف أنواع الخلايا التي لا تعد ولا تحصى التي تشكل دماغ الثدييات هدفا مركزيا ولكنه بعيد المنال منذ فترة طويلة في الفيزيولوجيا العصبية. على سبيل المثال ، تعد خصائص ووظيفة أنواع الخلايا المثبطة المختلفة في القشرة الدماغية موضوعات ذات أهمية كبيرة ولكنها لا تزال غير معروفة نسبيا. ويرجع ذلك جزئيا إلى أن تقنيات التسجيل التقليدية للمكفوفين في الجسم الحي محدودة في قدرتها على التمييز بين أنواع الخلايا المختلفة. يمكن استخدام عرض السنبلة خارج الخلية لفصل الخلايا العصبية المثبطة المفترضة الإيجابية للبارفألبومين عن الخلايا الهرمية المثيرة ، لكن هذه الطريقة تخضع لكل من أخطاء النوع الأول والنوعالثاني 2،3. بدلا من ذلك ، يمكن ملء الخلايا العصبية المسجلة واستعادتها وتلطيخها لتأكيد هويتها المورفولوجية والجزيئية لاحقا ، ولكن هذه عملية شاقة وتستغرق وقتا طويلا. في الآونة الأخيرة ، أصبح الوصول إلى مجموعات الخلايا العصبية الداخلية المثبطة المحددة وراثيا عن طريق تصوير الكالسيوم أو تسجيلات التصحيح الموجهة بصريا. في هذه الأساليب ، يسمح التعبير الفيروسي أو المعدل وراثيا لمراسل الكالسيوم (مثل GCaMP) أو البروتين الفلوري (مثل GFP) بتحديد وتوصيف أنواع الخلايا المحددة بواسطة تعبير المروج. تستخدم هذه الأساليب الفحص المجهري ثنائي الفوتون ، والذي يتطلب معدات باهظة الثمن ، ويقتصر أيضا على الطبقات القشرية السطحية بسبب خصائص تشتت الضوء لأنسجة المخ.

في الآونة الأخيرة ، طور ليما وزملاؤه1 تطبيقا جديدا لعلم البصريات الوراثي لاستهداف التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية لأنواع الخلايا العصبية المحددة وراثيا في الجسم الحي ، والتي تسمى "PINP" - أو تحديد مجموعات الخلايا العصبية بمساعدة التحفيز الضوئي. يتم إجراء التسجيلات في الفئران التي تعبر عن Channelrhodopsin-2 (ChR2) في مجموعات عصبية فرعية محددة. يتم التعرف على أفراد السكان من خلال استجابتهم لومض قصير من الضوء الأزرق. على عكس العديد من التطبيقات البصرية الوراثية الأخرى ، فإن الهدف ليس التلاعب بوظيفة الدائرة ولكن ببساطة تحديد الخلايا العصبية التي تنتمي إلى فئة محددة وراثيا ، والتي يمكن بعد ذلك تمييزها أثناء وظائف الدماغ الطبيعية. يمكن تنفيذ هذه التقنية باستخدام معدات التسجيل القياسية خارج الخلية ، وبالتالي يمكن أن تكون بمثابة بديل يمكن الوصول إليه وغير مكلف لتصوير الكالسيوم أو الترقيع الموجه بصريا. نصف هنا نهجا لأنواع معينة من الخلايا في القشرة السمعية المخدرة ، مع توقع أن النقاط الأكثر عمومية يمكن تطبيقها بشكل مفيد في المستحضرات الأخرى ومناطق الدماغ.

في القشرة ، يحمل PINP وعدا خاصا بالتحقيق في خصائص الاستجابة في الجسم الحي للخلايا العصبية الداخلية المثبطة. تتكون الخلايا العصبية الداخلية GABAergic من مجموعة فرعية صغيرة غير متجانسة من الخلايا العصبية القشرية4. وقد ثبت مؤخرا أن الأنواع الفرعية المختلفة ، التي تتميز بالتعبير عن علامات جزيئية معينة ، تؤدي أدوارا حسابية مختلفة في الدوائر القشرية5-9. مع تحسن الأدوات الجينية ، قد يكون من الممكن في النهاية التمييز بين الأنواع القابلة للفصل شكليا وفسيولوجيا والتي تقع ضمن هذه الفئات الواسعة. نشارك هنا استراتيجيتنا للحصول على تسجيلات مستقرة ومعزولة جيدا من الخلايا العصبية الداخلية المثبطة المحددة في قشرة الفأر المخدرة. تم تطوير هذه الإستراتيجية خصيصا لاستهداف الخلايا الإيجابية للبارفالبومين (PV +) ، لكننا وجدنا أنها تعمل مع أنواع الخلايا العصبية الداخلية الأخرى أيضا ، مثل الخلايا العصبية الداخلية التي تعبر عن السوماتوستاتين (SOM +) والخلايا العصبية الداخلية التي تعبر عن الكالريتينين (CR +). على الرغم من أن PINPing واضح من الناحية المفاهيمية ، إلا أنه يمكن أن يكون عنيدا بشكل مدهش في الممارسة. لقد تعلمنا عددا من النصائح والحيل من خلال التجربة والخطأ التي قد تكون مفيدة للآخرين الذين يحاولون هذه الطريقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: بروتوكول التالي هو وفقا للمعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية التي وافقت عليها جامعة ولاية أوريغون رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام.

1. جراحة الحاد

  1. تخدير الحيوانات مع كوكتيل الكيتامين medetomidine، عبر داخل الصفاق (IP) حقن (الجدول 1).
    ملاحظة: الفئران المستخدمة في هذه التجارب تم إنشاؤها بواسطة عبور تعتمد على لجنة المساواة العرقية ChR2-EYFP المعدلة وراثيا line10 إلى عصبون خطوط سائق (Pvalb-iCre11، PV +، SST-iCre12، SOM +، الكروم، iCre12، CR +). تسليم الفيروسي من ChR2 أو opsins ذات الصلة يجب أن تعمل بشكل جيد على قدم المساواة، على افتراض يتم الحصول على مستويات التعبير مماثلة.
  2. قبل البدء في عملية جراحية، تأكد من أن المعروضات الحيوانية لا استجابة لقرصة أخمص قدميه لطيف. إعادة إدارة التخدير في كافة مراحل التجربة عند الضرورة للحفاظ على هذا عمق التخدير. إذا باستخدام التخدير عن طريق الحقن، زرع اختياريا قسطرة الملكية الفكرية لحقن الصيانة.
  3. الحفاظ على الحيوانات المائية مع المياه المالحة أو محلول رينغر اللاكتاتي في كافة مراحل التجربة (حوالي 3 مل / كغ / ساعة)، على سبيل المثال باستخدام كوكتيل مخدر المخفف مناسب لحقن الصيانة (الجدول 1).
  4. وضع الحيوان في الجهاز الرأس عقد التجسيمي أو غيرها. ضمان أن يتم تأمين الجمجمة جيدا. هذا أمر ضروري للحفاظ على استقرار تسجيلات خلية واحدة.
  5. تطبيق مرهم opthalamic للعيون لمنع جفاف. الحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 36،5 حتي 37 درجة مئوية.
  6. إجراء استنزاف الصهريج لاستقرار تسجيل إضافية. باستخدام شفرة مشرط، وإزالة أنسجة من وجه الخلفي من الجمجمة لفضح ماجنا صهريج. إحداث شق صغير في الجافية لتصريف السائل النخاعي. استخدام سوى غيض جدا من شفرة، وتجنب الاتصال المخيخ أو المخ الجذعية.
  7. باستخدام مشرط، إجراء حج القحف صغيرة (~ 2 مم 2) على المنطقة القشرية من الفائدة (لالسمعيةالقشرة، تقريبا -2.3 ملم الخلفي من bregma، 4.5 ملم الوحشي من خط الوسط).
  8. إزالة الجافية، وتغطي القشرة يتعرض مع طبقة من الاغاروز الدافئ 0،5-1 مم (1.5٪ الاغاروز في المياه المالحة، 0.9٪ كلوريد الصوديوم، وتطبيق في ~ 37 درجة مئوية). الحفاظ على رطوبة الاغاروز في كافة مراحل التجربة من خلال تطبيق دوري عدة قطرات من المياه المالحة.

2. تسجيل مجموعة المتابعة

  1. إعداد القطب التنغستن (7-14 MΩ، 127 ميكرون قطر، 12 ° طرف مدبب، الايبوكسي المغلفة). Superglue القطب إلى أنبوب الزجاج الشعرية وإضافة الانكماش الحراري أنابيب لقبضة (الشكل 1).
  2. جبل الكهربائي على micromanipulator بمحركات (أو الهيدروليكي)، المقرر أن يسافر متعامد على السطح القشري. الانزلاق على الأرض الأسلاك تحت الجلد، ضد الجمجمة. تجنب الاتصال مع العضلات على جانبي الرأس والجزء الخلفي من الرقبة لأنها يمكن أن تولد التحف electromyographic.
  3. تضخيم الإشارات الكهربائية باستخدام أمبير خارج الخليةلي فاي إيه مناسبة للتسجيل وحدة واحدة، ومجهزة يفضل مع وضع الاختيار مقاومة. مراقبة نشاط ارتفاعه المستمر (الفرقة تمرير 300 - 5000 هرتز) مع اثنين من الذبذبات ومجموعة من المتحدثين بالطاقة. هنا، ورقمنة البيانات المسجلة بشكل مستمر بمعدل عينة من 10 كيلو هرتز. يتم استخراج المسامير حاليا.
  4. دفع الكهربائي من خلال الاغاروز حتى يصل الطرف سطح القشرة. ملاحظة هذه الخطوة من خلال المجهر. "صفر" هذا الموقف على مياداة مجهرية.
  5. لتقريب أفضل عمق التسجيل، وتأكيد بصريا أن طرف القطب يخرج على السطح القشري على عمق الصفر عندما سحب القطب في نهاية الاختراق.
    ملاحظة: هناك اختلاف بين القراءة مناور والموقف القطب وحظ تشير أنه قد جنحت نسبة إلى الأنسجة. يمكن أن يكون سبب هذا عدم الاستقرار في المخ أو الحيوان، أو تتلاعب الانجراف.
    1. كما الاختيار إضافية لضمان أنهذه مجموعة الصفر نقطة يتوافق مع سطح القشرة، ومراقبة امكانات الحقل، أثار التحفيز في حين تقدم من خلال أول عدة مئات ميكرومتر من الأنسجة. عند رصد امكانات الحقل، وانخفاض أقل الفرقة تمرير مرشح قطع من مكبر للصوت خارج الخلية إلى 10 هرتز. تأكد من أن الاستقطاب من إمكانات الميدانية المحلية في جميع أنحاء عكس عمق ~ 100 ميكرون، بالقرب من الحدود طبقة I / II 13. هذا هو نقطة مرجعية موثوقة للقشرة السمعية، ولكن قد تختلف عن المناطق القشرية الأخرى.
  6. تركيب الألياف البصرية إلى جانب لمصدر الضوء الأزرق (الشكل 2) الصعود إلى مياداة مجهرية اليدوي. باستخدام المجهر، ضع غيض من الألياف أقرب إلى سطح الاغاروز ممكن. مركز شعاع القطب حيث سيدخل الأنسجة.
  7. تنظيم الانتاج من مصدر الضوء مع وحدة تحكم قادرة على توصيل TTL (الترانزستور الترانزستور المنطق) قطار نبض العرض المحدد وduratioN- على سبيل المثال، وهو اردوينو (الشكل 3)، بطاقة الكمبيوتر I / O (كما هو موضح)، أو مولد النبض متاحة تجاريا.
    1. مراقبة إشارة على كل الذبذبات.
  8. قياس إجمالي الطاقة ضوء (ميغاواط) في غيض من الألياف الضوئية باستخدام السلطة متر. استخدام هذه القيمة لحساب الإشعاع (ميغاواط / مم 2) بقسمة من مساحة المقطع العرضي للألياف الأساسية. تبدأ قيمة كثافة في حدود 15 - 10 ميغاواط / مم 2 وضبط الأسفل إذا لزم الأمر، حتى يتم التخلص من القطع الأثرية.
  9. تحقق من التحف الخفيفة مع القطب في الاغاروز، استعدادا لدخول الأنسجة. بدء تشغيل قطار نبض البحث (على سبيل المثال، 30 ميللي ثانية البقول ضوء، 500 مللي ثانية فاصل interstimulus (ISI)).
    1. القضاء التحف ضوء عابرة (الشكل 4) من خلال اعادة تموضع الألياف البصرية قريب إلى القطب لتغيير زاوية ضوء الحادث. إذا استمرت الأعمال الفنية، في محاولة خفض قوة الضوء. في اله حالة نادرة أن القطع الأثرية لا يمكن القضاء تماما (الحد الأدنى فقط)، وتمديد مدة نبض البحث. هذا يمكن أن تساعد في تحديد طفرات العصبية الحقيقية.

3. مستقيم PINP في '

  1. تقدم القطب ببطء من خلال الدماغ بمعدل حوالي 1 ميكرون / ثانية. استخدام الذبذبات واحد لمراقبة نشاط مستمر. من جهة أخرى، يؤدي قبالة نبضات الليزر.
  2. الاستماع ل 'التجزئة' باهتة من المسامير أثار ضوئية على شاشة الصوت، مما يدل على أن القطب يقترب خلية ChR2 + وكثيرا ما يمكن أن ينظر جيدا قبل إشارة كهربائية هو ظاهر على الذبذبات. إبطاء معدل مسبقا.
    ملاحظة: إذا كانت الخلية تقع مباشرة في طريق القطب، فإن النشاط أثار خفيفة تنمو أكبر (وبصوت أعلى). مع اقتراب القطب عصبون واحد، فإن التجزئة في حل المسامير صغيرة ولكن محددة جيدا من حجم الزي والشكل.
  3. حالما لىأثار المسامير-GHT هي كبيرة بما يكفي لتحريك قبالة بشكل فردي على الذبذبات، والبدء في القيام بذلك. ضبط القياس على المحور الأفقي لمراقبة الشكل الموجي الدقيق للارتفاع.
  4. توقف وانتظر الأنسجة ليستقر. مقاومة إغراء للتحرك القطب أقرب إلى الخلية. هذه الخطوة الحاسمة لتسجيل مستقرة. إذا بعد عدة دقائق لم تحسن نسبة الإشارة إلى الضوضاء - وهذا هو، استقر الأنسجة، لكنها لم ترفع أي خلية أقرب إلى غيض من القطب - 5 ميكرون مزيد من التقدم والانتظار مرة أخرى.
    1. كرر هذه العملية حتى إما الذروة أو القاع من إمكانات العمل يمكن التقاط موثوق مع عتبة الجهد وضع جيد فوق أرضية الضوضاء (على سبيل المثال، +/- 300 μV أو أكبر).
      ملاحظة: هناك خطر ضئيل من ايجابيات كاذبة أو غموض عند PINPing interneurons المثبطة. يمكن أن معظم الخلايا بسهولة تتبع القطار من البقول مع مدة 30 ميللي ثانية، وبين بولفترة ذاتها 500 ميللي ثانية أو أسرع، مع موثوقة الأول الكمون ارتفاع من 2-5 مللي ثانية (الشكل 5). غالبية الخلايا الكهروضوئية +، على وجه الخصوص، يمكن أن تحافظ على اطلاق كامل 1 ثانية (الشكل 6). لأن هذه الخلايا العصبية المثبطة، ثنائي التشابك تفعيل (غير المباشرة) ليست مصدر قلق كبير.
  5. أثناء التسجيل، ومراقبة نشاط مستمر على الذبذبات الأولى. تراقب عن كثب على حجم وشكل التموج باستخدام الذبذبات الثانية. ملاحظة نوعية الصوت على السماعة.
    1. الإنصات للتغييرات المفاجئة، والتي تشير إلى أن الخلية إما رسم قريبة جدا من القطب (حيث تواجه خطر مخوزق أو تالف)، أو ينجرف بعيدا. إذا المسامير تصبح كبيرة ومشوهة، التراجع. إذا كانت تنمو أصغر، تقدم القطب. تحرك ببطء في 2 ميكرومتر الخطوات.
    2. تأكيد جودة التسجيل بعد خاصة من قبل بتركيب جميع الطول الموجي السنبلة، الانحياز إلى الذروة أو القاع. تختلف thres الجهدعقد. عبر مجموعة واسعة من القيم الحدية، ينبغي ألا يكون هناك أي وقت مضى واحد شكل ارتفاع ثابت من الارتفاع موحد (الشكل 5A).
  6. إذا في أي نقطة إشارة تصبح ملوثة مع المسامير من الخلايا العصبية المجاورة، على هذه الخطوة. تقدم ببطء، وعلى خارج فرصة أن القطب سيمر من مجموعة من الخلايا المجاورة، ولكن تبقى في نطاق من الخلايا العصبية المستهدفة. (هذا هو عادة غير ناجحة.)
  7. نقل الكهربائي من خلال عمق كامل من القشرة (900+ ميكرون) في كل اختراق. إذا واجهت أي الخلايا العصبية تستجيب للضوء بعد العديد من الاختراقات أو، على العكس، هي ملوثة التسجيلات بشكل روتيني مع المسامير من خلايا ChR2- المجاورة، حاول القطب الجديد.
    ملاحظة: حتى في دفعة واحدة، ومقاومة وغيض هندسة كهربائية الفردية يمكن أن تختلف إلى حد كبير. وتسهم كل من العوامل في فعالية "الاستماع دائرة نصف قطرها" من القطب، التي يجب أن تكون كبيرة بما يكفي للكشف عن طفرات أثار ضوئية WHالبحث إيل، بعد تقييد بما يكفي لتمكين تسجيل عصبون واحد في العزلة.
  8. اختبار مقاومة من الأقطاب الكهربائية على النحو المرغوب فيه. لتجنب إتلاف الأنسجة، والقيام بذلك مع غيض من قطب كهربائي في الجزء العلوي من طبقة الاغاروز، وأيضا خارج الدماغ. ضمن مجموعة من 7-14 MΩ، ومقاومة بالضبط ليست مؤشرا على يقين من الأداء، أو العائد، لهذا التطبيق. أن قال، انها وكيل معقول للاستماع دائرة نصف قطرها: أقطاب-مقاومة أقل التقاط المزيد من الوحدات. -مقاومة أعلى، أقل.
  9. في نهاية التجربة، الموت ببطء الحيوان عن طريق افق مؤسسيا، مثل جرعة زائدة من التخدير، أو خلع عنق الرحم تحت التخدير العميق الطائرة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن هنا نشارك إستراتيجيتنا للحصول على تسجيلات وحدة واحدة من interneurons المثبطة وراثيا المبوبة في القشرة الماوس تخدير، وذلك باستخدام طريقة optogenetic التي وضعتها ليما وآخرون 1. الجدول 1 تفاصيل كوكتيل مخدر المقترحة، الكيتامين-Medetomidine-آسيبرومازين (" KMA "). الشكل 1 يصور مسرى مكروي التنغستن، أعدت للتسجيل. الشكل 2 يحتوي على مخطط الرسم البياني للحصول على وحدة تحكم بسيطة LED الشكل 3 يحتوي على ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من PINP واضح ومباشر من الناحية النظرية، يمكن أن يكون صعبا من الناحية العملية. والمحدد الرئيسي للنجاح هو اختيار القطب. في دائرة نصف قطرها الاستماع الكهربائي المعلمة حرجة. يجب أن تكون كبيرة بما فيه الكفاية للكشف عن أثار المسامير الضوئية عند الطرف لا يزال على مسافة بعيدة من خلية ChR2 +، بحيث يمكن للمرء أن ضبط معدل مسبقا وفقا لذلك. في الوقت نفسه، يجب أن يقتصر بما فيه الكفاية لتمكين حسن حدة واحدة عزلة. وهذا يعني، ويجب ألا القطب ايضا التقاط المسامير من الوحدات المجاورة ChR2-. ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس للمؤلفين مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة Whitehall والمعاهد الوطنية للصحة. نشكر كليفورد داكس (إدارة الدعم الفني بجامعة أوريغون) على مساعدته وخبرته في تصميم دائرة لتوصيل الضوء.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ChR2-EYFP LineJackson Colonies12569
Pvalb-iCre (PV) LineJackson Colonies8069
Sst-iCre (SOM) LineJackson Colonies13044
Cr-iCre (CR) LineJackson Colonies10774
AgaroseSigma-AldrichA9793Type III-A ، High EEO
Micro Point (الجافية خطاف)FST10066-15
مقص جراحيFST14084-09
مشرطFST10003-12 (مقبض) ، 10011-00 (شفرات) مرهم
Puralube للعيونفوستر & سميث9N-76855
بطانية الحرارةهارفارد< اسم = "نطاق! C11 "> 507220F < / a >
أقطاب التنغستن الدقيقةأنظمة AM57720012 M & Omega ؛ مقاومة التيار المتردد ، 127 مو ؛ م القطر ، 12 درجة ؛ طرف مدبب ، أنابيب زجاجية شعرية مطلية بالإيبوكسي
Warner InstrumentsG150TF-3
أنابيب الانكماش الحراريDigiKeyA332B-4-ND
Zapit AcceleratorDVASKU ZA / ZAAاستخدم مع الغراء الفائق القياسي.
مضخم التيار المتردد الكهربائي الصغير 1800AM أنظمة700000
MP-285 مناور دقيق بمحركاتSutterMP-285
4 قنوات راسمات الذبذبات الرقميةTektronixTDS2000C
مكبرات الصوت التي تعمل بالطاقة Harmanنموذج JBL & nbsp ؛
ScientificaLBM-7
800 & micro; م كابل تصحيح الألياف البصريةThorLabsFC / PC BFL37-800
عداد الطاقةThorLabsPM100D (عداد الطاقة) ، S121C (مستشعر الطاقة القياسي)
475 نانومتر Cree XLamp XP-EDigiKeyXPEBLU-L1-R250-00Y01DKR-NDتتزايد قوة وكفاءة LED باستمرار ، لذلك نوصي بالتحقق من أحدث المنتجات (www.cree.com).
اردوينو أونوديجيكي1050-1024-ND
المنزلية جهاز مناور يدوي ثنائي LED

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lima, S. Q., Hromadka, T., Znamenskiy, P., Zador, A. M. PINP: a new method of tagging neuronal populations for identification during in vivo electrophysiological recording. PLoS One. 4, (2009).
  2. Moore, A. K., Wehr, M. Parvalbumin-expressing inhibitory interneurons in auditory cortex are well-tuned for frequency. J Neurosci. 33, 13713-13723 (2013).
  3. Merchant, H., de Lafuente, V., Pena-Ortega, F., Larriva-Sahd, J. Functional impact of interneuronal inhibition in the cerebral cortex of behaving animals. Prog Neurobiol. 99, 163-178 (2012).
  4. Markram, H., et al. Interneurons of the neocortical inhibitory system. Nat Rev Neurosci. 5, 793-807 (2004).
  5. Atallah, B. V., Bruns, W., Carandini, M., Scanziani, M. Parvalbumin-expressing interneurons linearly transform cortical responses to visual stimuli. Neuron. 73, 159-170 (2012).
  6. Wilson, N. R., Runyan, C. A., Wang, F. L., Sur, M. Division and subtraction by distinct cortical inhibitory networks in vivo. Nature. 488, 343-348 (2012).
  7. Letzkus, J. J., et al. A disinhibitory microcircuit for associative fear learning in the auditory cortex. Nature. 480, 331-335 (2011).
  8. Pi, H. J., et al. Cortical interneurons that specialize in disinhibitory control. Nature. 503, 521-524 (2013).
  9. Adesnik, H., Bruns, W., Taniguchi, H., Huang, Z. J., Scanziani, M. A neural circuit for spatial summation in visual cortex. Nature. 490, 226-231 (2012).
  10. Madisen, L., et al. A toolbox of Cre-dependent optogenetic transgenic mice for light-induced activation and silencing. Nat Neurosci. 15, 793-802 (2012).
  11. Hippenmeyer, S., et al. A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling. PLoS Biol. 3, 159(2005).
  12. Taniguchi, H., et al. A resource of Cre driver lines for genetic targeting of GABAergic neurons in cerebral cortex. Neuron. 71, 995-1013 (2011).
  13. Christianson, G. B., Sahani, M., Linden, J. F. Depth-dependent temporal response properties in core auditory cortex. J Neurosci. 31, 12837-12848 (2011).
  14. Povysheva, N. V., Zaitsev, A. V., Gonzalez-Burgos, G., Lewis, D. A. Electrophysiological heterogeneity of fast-spiking interneurons: chandelier versus basket cells. PLoS One. 8, 70553(2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة