Method Article

اللسان الإلكترونية توليد أنماط الاعتراف المستمر لتحليل البروتين

DOI:

10.3791/51901

⸱

September 16th, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Structure et Propriétés d'Architectures Moléculaires, Institut Nanosciences et Cryogénie, CEA-Grenoble, 2Institut de Chimie Moléculaire et des Matériaux d'Orsay, Université Paris-Sud, 3Institut de Biologie Structurale

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = 'jove_content'> تم وصف نهج جديد لبناء اللسان الإلكتروني (eT) ، والذي يبسط إلى حد كبير تصميم وإنتاج مواد الاستشعار ، ويسمح ل eT بإنشاء ملفات تعريف تطور مستمر ومناظر طبيعية للعينات في السائل. يعتبر eT الذي تم الحصول عليه فعالا في تحليل البروتين الشائع مثل التمييز.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في البروتوكول الحالي ، تم تطوير نهج اندماجي لتبسيط تصميم وإنتاج مواد الاستشعار لبناء الألسنة الإلكترونية (eT) لتحليل البروتين. من خلال خلط عدد صغير من الجزيئات البسيطة والتي يسهل الوصول إليها بخصائص فيزيائية وكيميائية مختلفة ، وتستخدم ككتل بناء (BBs) ، بنسب متفاوتة وخاضعة للرقابة والسماح للمخاليط بالتجمع الذاتي على السطح الذهبي للمنشور ، تم إنشاء مجموعة من الأسطح الاندماجية التي تتميز بخصائص مناسبة لاستشعار البروتين. بهذه الطريقة ، يمكن الحصول على عدد كبير من المستقبلات التفاعلية المتقاطعة بسرعة وكفاءة. من خلال الجمع بين هذه المجموعة من المستقبلات التوافقية التفاعلية المتقاطعة (CoCRRs) مع نظام الكشف البصري مثل التصوير بالرنين البلازمي السطحي (SPRi) ، يمكن ل eT الذي تم الحصول عليه مراقبة أحداث الربط في الوقت الفعلي وإنشاء أنماط التعرف المستمر بما في ذلك ملف تعريف التطور المستمر ثنائي الأبعاد (CEP) ومشهد التطور المستمر ثلاثي الأبعاد (CEL) للعينات في السائل. نظام eT هذا فعال في تمييز البروتينات المنقاة الشائعة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أساليب البروتين الاستشعار الدقيقة والسريعة مهمة جدا في التشخيص الطبي والبروتينات. وتستند المصفوفات للكشف عن البروتين الكلاسيكية، مثل biochips، على "قفل ومفتاح" مبدأ الاعتراف وتتطلب مستقبلات محددة مثل الأبتامرات، والأجسام المضادة، أو علم المحاكاة الحيوية.

في السنوات الأخيرة، والاستشعار التفاضلية مستوحاة من الشم والذوق البشري برزت كبديل 1. هذا الأنف الالكتروني / اللسان ويستند (EN / ET) على نهج التفاضلية ملزمة من التحاليل لمجموعة من مستقبلات عبر رد الفعل (CRRs)، التي لا تحتاج إلى أن تكون محددة للغاية أو انتقائية لالجزيئات المستهدفة وبالتالي تسمح للتغلب....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد محاليل مختلفة وعينات البروتين

  1. إعداد 100 مل من محلول العازلة الفوسفات (PBS-G) التي تحتوي على 50 ملي ناه 2 ص 4، 50 مم كلوريد الصوديوم، و 10٪ الجلسرين في درجة الحموضة 6.8.
  2. إعداد 250 مل من HEPES حل العازلة التي تحتوي على 10 ملي HEPES، 150 مم كلوريد الصوديوم، 0.005٪ توين 20 في درجة الحموضة 7.4.
  3. إعداد محلول المخزون من عرقلة البناء 1 (BB1) اللاكتوز وبناء كتلة 2 (BB2) مكبرت اللاكتوز (الشكل 1) في 0.2 م....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

للتحقيق في قدرة اللسان الإلكتروني لتحليل البروتين المشترك، استخدمت ثلاثة بروتينات: AHL، الميوجلوبين والليزوزيم. لكل بروتين، و2D الشخصي التطور المستمر متميزة، CEP، تكونت من قبل وآخرون، كما هو مبين في الشكل 6.

وبالإضافة إلى ذلك، وذلك بفضل سبري، والتي هي قادرة على رصد الوقت الحقيقي الامتزاز والمج حركية، لكل بروتين وقت نمط الاعتراف المستمر يعتمد، ودعا 3D المشهد تطور مستمر (CEL)، تكونت. في الش.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملتزمون الخطوات الأكثر أهمية لبناء هذا ET لضمان استنساخ جيد للنظام. على سبيل المثال، وتنظيف سطح الذهب من منظور مع إجراءات موحدة قبل الاستخدام، واضاف ان 10٪ من الجلسرين في أحد عشر حلول النقية والمختلطة وBB1 BB2 للقضاء على تبخر المذيبات خلال بب تجميع الذاتي على سطح الذهب من المنشور، إيداع مكررات متعددة لكل [BB1] / ([BB1] + [BB2]) نسبة، الخ. أما بالنسبة للبروتين عن طريق الاستشعار عن سبري، واختيار زاوية العمل أمر بالغ الأهمية. عادة، فهي ثابتة على أعلى المنحدر من منحنيات.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى أصحاب البلاغ تضارب في المصالح للإعلان.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفون أن يعرب عن تقديرهم لمنح الدكتوراه من LANEF في غرونوبل لدعم Laurie-Amandine Garçon. تم دعم هذا العمل ماليا من قبل الوكالة الوطنية الفرنسية للبحوث (ANR-grant 06-NANO-045).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
جهاز SPRi Horiba Scientific-GenOpticsSPRi في حاضنة منظمة لدرجة الحرارة عند 25 درجة مئوية.
حاضنةحقنة Memmert
 كافرو الآلات العلميةكافرو XLP 6000
مايكرو إيليت ديساسر AlltechAT590507
صمام حقن الضغط المتوسط ذو 6 منافذUpchurch Scientificحجم حلقة الحقن المستخدمة هو 500 ميكرو لتر.
منظف البلازما فيمتو (الإصدار 7)تفريغ الغاز الإلكترونيالإنترنت مع 2 قناة.
نصابSiliflowإنه نصاب كهرضغطية غير ملامس.
SPRi-BiochipHoriba Scientific-GenOptics36000067يتكون المنشور من منشور زجاجي عالي معامل الانكسار مطلي بغشاء ذهبي رقيق (45 نانومتر) وتم تطويره خصيصا لأغراض التصوير.
Erythrina cristagalli lectin Sigma-AldrichL5390
Arachis hypogaea ليكتين سيجما ألدريتشL0881
الميوغلوبينسيجما ألدريتشM1882
ليزوزيمسيجما ألدريتشL6876
CXCL12 & ألفا ؛مقدمة من الدكتور هيوز لورتات جاكوب ؛ للحصول على تفاصيل التحضير ، انظر المعلومات الداعمة في المرجع 9
CXCL12 & gamma;  مقدمة من الدكتور هيوز لورتات جاكوب ؛ للحصول على تفاصيل التحضير ، انظر المعلومات الداعمة في المرجع 9
اللاكتوزالمقدم من البروفيسور ديفيد بوناف ؛ للحصول على تفاصيل التحضير ، انظر المعلومات الداعمة في المرجع 9
اللاكتوزالمقدمة من البروفيسور ديفيد بوناف ؛ للحصول على تفاصيل التحضير ، انظر المعلومات الداعمة في المرجع 9
الجلسرينسيجما ألدريتشG5150
SDSسيجما ألدريتشL4509
توين 20سيجما ألدريتش274348
هيبسسيجما ألدريتشH3375
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدةسيجما ألدريتشS0751
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتشS3014
يتم وضع جهاز مضخة نظام عبر الكبريتات

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Margulies, D., Hamilton, A. D. Combinatorial protein recognition as an alternative approach to antibody-mimetics. Current Opinion in Chemical Biology. 14, 705-712 (2010).
  2. Umali, A. P., Anslyn, E. V. A general app....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Electronic TongueProtein AnalysisCombinatorial ApproachSurface Plasmon Resonance ImagingContinuous Evolution ProfileContinuous Evolution LandscapeCross Reactive ReceptorsSelf Assembly MonolayersBuilding Block MixturesKinetic Binding Curves

Related Articles