الدماغ هو موقع فريد من نوعه مع الصفات التي ليست ممثلة تمثيلا جيدا من قبل في المختبر أو التحليلات خارج الرحم. نماذج الماوس مثلي مع الموقع ونمو الخصائص استنساخه يمكن إنشاء موثوق مع الحقن داخل الجمجمة باستخدام أداة تثبيت التجسيمي وانخفاض ضغط ضخ حقنة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
خلق تشريحيا دقيقة وقابلة للتكرار داخل الجمجمة Xenografts من أورام الدماغ البشري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نماذج ورم مثلي حاليا أفضل طريقة لدراسة خصائص نوع الورم، مع وبدون تدخل، في سياق الحيوانات الحية - وخاصة في المواقع ذات الصفات الفسيولوجية ومعمارية فريدة مثل الدماغ في المختبر ونماذج خارج الرحم لا يمكن. تشكل ميزات مثل الأوعية الدموية، حاجز الدم في الدماغ، والتمثيل الغذائي، والتسليم المخدرات وسمية، ومجموعة من العوامل الأخرى ذات الصلة. نماذج مثلي لها حدودها أيضا، ولكن مع الخلايا السرطانية الأسلوب السليم من الفائدة يمكن المغروسة بدقة في الأنسجة أن معظم كثب الأوضاع في يحاكي الدماغ البشري. من خلال توظيف الأساليب التي توفر كميات قياسها بدقة للتعرف بدقة المواقع بمعدل ثابت والضغط، ونماذج الماوس من أورام الدماغ مع معدلات نمو متوقعة يمكن إنشاء بتكاثر ومناسبة لتحليل موثوق التدخلات المختلفة. بروتوكول الموصوفة هنا يركز على الشركة المصرية للاتصالاتالتفاصيل chnical تصميم والتحضير لحقنة داخل الجمجمة، وإجراء عملية جراحية، وضمان نمو الورم ناجحة وقابلة للتكرار ويوفر نقطة الانطلاق لمجموعة متنوعة من الظروف التي يمكن تخصيصها لمجموعة من نماذج مختلفة ورم في المخ.
المقدمة
دراسات في المختبر من خلايا ورم في المخ لا تقدر بثمن للتشريح الآليات الجزيئية دفع عجلة النمو والبقاء، والهجرة، وغزو الخلايا السرطانية. يمكن التجارب خلايا مستنبتة تحديد مسارات إشارات توحي الأهداف العلاجية المحتملة، وتميز استجابة الخلايا للعلاج بالعقاقير. ولكن في المختبر أنظمة بعيدة مبسطة جدا التنبؤ تجاوب عضوي إلى المستحضرات الصيدلانية؛ أنها تفتقر إلى التفاعلات الفسيولوجية، والاستجابات المناعية، المكروية الخلية، وعدم التجانس الكلي للأنظمة الحية الحيوانية. المهندسة وراثيا نماذج لا تقدر بثمن، عندما متاحة، ولكن توجد اختلافات بين الأنواع الجزيئية والخلايا الفئران قد لا ألخص الأحداث في العمليات الإنسانية، مما أدى إلى ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم استعراض جميع الإجراءات الموضحة وافقت لجنة رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية لدينا.
1. خطة التجربة
- اختيار الخلايا ليتم حقنه. الخلايا من مجموعة متنوعة من المصادر المرشحين للحقن: ملتصقة خطوط ثقافة الخلية، استنساخ المعدلة وراثيا، وخلايا neurosphere والثقافات الأولية، أو الأورام مفصلة. ونوع النموذج المطلوب تحديد الموقع الأنسب للحقن.
- تحديد عدد الخلايا للحقن. يختلف عدد الخلايا المطلوبة لتش....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمكن إنشاء xenografts داخل القحف موثوق بها مع هذه التقنية وصفها. وتحديد الهياكل الحرجة من الجمجمة الماوس (الشكل 1) السماح للاعتراف bregma وتوجيه المحققين إلى موقع الحقن الدقيق وقابلة للتكرار. في هذه الدراسات خط الوالدين U251، U251 خلايا transfected مع وسيفيراز (U251 لوك)، أو U87 تخليد علقت خلايا زراعة الأنسجة GBM الإنسان في 4-6 ميكرولتر من SF-DMEM وضخت 2.5 ملم الجانبي (يمين)، و 1.5 ملم الأمامي ، و 3.5 ملم بطني فيما يتعلق bregma (الشكل 2).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نماذج الماوس مثلي من سرطان الدماغ البشري يمكن أن يكون أداة ممتازة لتقييم فعالية العلاجات السريرية، ولكن يجب الحرص على تحسين وضع الخلايا في أنسجة المخ. وقد أظهرت الدراسات أن حجم قسامة المفرطة، تقنية الحقن دون المستوى الأمثل ومعدلات الحقن متسرعة يمكن أن يؤدي إلى التسرب وظهور الخلايا السرطانية في مواقع غير مرغوب فيها (البطينين، والحبل الشوكي، والمناطق الجافية، الخ) والتباين الكبير في حجم الورم 2 (الملاحظات الشخصية ). وجد تحليل لتسليم يحركها المعالجات الدقيقة للعين.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
ويتم تمويل الدكتور كيتينغ بواسطة CA100335 منحة وزارة الدفاع ومؤسسة هو الباحث القديس Baldrick ل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
الأدوات < / strong>مسنن ذو رؤوس دقيقة< td colspan = "4" ><قوي>مستلزمات تنظيف
البصرية 1.0 تسخين نظام والموصلات تجسيمي < td colspan = "4" >
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي> المعدات < / قوي > | |||
| أداة تجسيمية للحيوانات الصغيرة مع وحدة تحكم العرض الرقمية | Kopf | موديل 940 | |
| حامل رأس تخدير غاز الماوس | Kopf | موديل 923-B | |
| قضبان أذن الماوس | Kopf | Medel 922 | |
| إضاءة الألياف | فيشر | 12-562-36 | |
| معالج دقيق UltraMicroPump III | WPI | UMP3 | |
| Micro4 | WPI | UMC4 | |
| مثقاب دوار محمول باليد متغير السرعة مثقاب | أسنان Dremel | Model 300 | |
| ، محول | 514554 | Spoelting | |
| مم لمثقاب الأسنان: 3/32 بوصة كوليت | Dremel | 481 | |
| وسادة | للفئران | ||
| مبخر Isoflurane | للفئران | ||
| الأنابيب | الطبية لتوصيل مبخر الأيزوفلوران بإطار | ||
| الدقة 25 & ل حقنة صغيرة | هاميلتون ؛ | 7636-01 | موديل 702 ، بدون |
| إبر حقنة دقيقة ، 26s G | Hamilton & nbsp ؛ | 7804-04 | RN ، نمط نقطة 25 مم 2 |
| مقص ذو رؤوس دقيقة (مستقيم ، حاد / حاد) مقص | |||
| قياسي متوسط الحجم | |||
| ملقط | |||
| قياسي مرقئ مسنن (2) | |||
| ملقط | |||
| 5-0 فيكريل P-3 13 مم (إيثيكون) MWI | J463G | ||
| شفرات جراحية # 10 ، غير قابلة للصدأ (ريشة) فيشر | 296 # 10 | ||
| إيزوفلوران (فلوريسو) ؛ | VetOne | NDC 13985-528-60 | البند #502017. مخدر استنشاق السائل. يقيد القانون الفيدرالي استخدام هذا الدواء من قبل أو بناء على أمر من طبيب بيطري مرخص. |
| كاربروفين (ريماديل عن طريق الحقن 50 مجم / مل) | فايزر | NDC 61106-8507-01 | مخفف في مرهم العين الملحي |
| (الدموع الاصطناعية) | الرجبي | NDC 0536-6550-91 | |
| مضاد حيوي موضعي (AK-Poly-Bac) | Akorn | NDC 17478-238-35 | |
| مطهر موضعي بوفيدون اليود ، 10٪ (بيتادين) | بيتادين | NDC 67618-150-04 | |
| بيروكسيد الهيدروجين ، 30٪ | فيشر | H325-100 | لتصور معالم الجمجمة |
| معقم محلول ملحي | VetOne | NDC 13985-807-25 | لتخفيف المحاليل ، تنظيف الأنسجة |
| شمع العظام | WPI | البند #501771 | |
| ستائر معقمة | McKesson | 25-517 | |
| قفازات جراحية معقمة | McKesson | (لتناسب) | |
| وسادات شاش معقمة ، 2 × 2 | Fisherbrand ؛ | 22028556 | |
| وسادات شاش معقمة ، 4 × 4 | Fisherbrand ؛ | 22-415-469 | |
| ضمادات تحضير الكحول (متوسطة) | PDI | B603 | |
| أدوات تطبيق معقمة ذات رؤوس | قطنية Fisherbrand ؛ | 23-400-114 | |
| أنبوب غطاء لولبي معقم 0.5 مل مع أغطية للخلايا | الولايات المتحدة الأمريكية العلمية | 1405-4700 | للخلايا |
| ماصات ديسبو معقمة ملفوفة بشكل فردي | فيشر | BD 357575 | لحلول تنظيف الإبرة |
| محاقن الأنسولين BD مع الإبر ؛ | فيشر 329461 | للمسكن | |
| 70٪ إيثانول | للتنظيف | ||
| معقم diH2< / sub>O | لتنظيف | ||
| أنابيب الطرد الدقيق لتنظيف محاليل | الإبر | ||
| قلم طرف شعر (مخصص) | لتمييز الجمجمة |
المراجع
- Heyer, J., Kwong, L. N., Lowe, S. W., Chin, L. Non-germline genetically engineered mouse models for translational cancer research. Nature reviews. Cancer. 10, 470-480 (2010).
- Yamada, S., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
