نصف طريقة لتوليد نموذج محتمل لسمك الزرد لمرض الكلى المتعدد الكيسات. استخدمنا أسماك Tg (wt1b: GFP) لتصور بنية الكلى. كانت ضربة قاضية من wnt5a عن طريق حقن مورفولينو. لوحظ تكوين كيس كيلي بعد ضربة قاضية wnt5a في أسماك الزرد المعدلة وراثيا GFP.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج الزرد ممكن من مرض الكلى المتعدد الكيسات: ضربة قاضية لل wnt5a أسباب الخراجات في الكلى اسماك الزرد
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مرض الكلى المتعدد الكيسات (PKD) هو أحد الأسباب الأكثر شيوعا لمرض الكلى في المرحلة النهائية ، وهو مرض مدمر لا يوجد علاج له. لا تزال الآليات الجزيئية التي تؤدي إلى تكوين الكيس في PKD غير واضحة إلى حد ما ، ولكن يعتقد أن العديد من الجينات متورطة. Wnt5a هو بروتين سكري غير متعارف عليه ينظم مجموعة واسعة من العمليات التنموية. يعمل Wnt5a من خلال مسار قطبية الخلية المستوية (PCP) الذي ينظم انقسام الخلايا الموجه أثناء استطالة الخلايا الأنبوبية الكلوية. تم العثور على عيوب في مسار PCP تسبب تكوين كيس كلى. تصف ورقتنا طريقة لتطوير نموذج مرض الكلى الكيسي لسمك الزرد عن طريق ضربة قاضية لجين wnt5a مع قليل النوكليوتيدات المورفولينو المضادة للمعنى (MO). تم استخدام أسماك الزرد المعدلة وراثيا Tg (wt1b: GFP) لتصور بنية الكلى وتكيسات الكلى بعد ضربة قاضية wnt5a. تم استخدام اثنين من MOs المضادة للمعنى (AUG - وموقع اللصق) وكلاهما أدى إلى نمط ظاهري مجعد لأسفل وتكوين كيس بعد ضربة قاضية wnt5a. أدى حقن الفأر Wnt5a mRNA ، المقاوم ل MOs بسبب اختلاف في بنية زوج القاعدة الأولية ، إلى إنقاذ النمط الظاهري غير الطبيعي ، مما يدل على أن النمط الظاهري لم يكن بسبب التأثيرات "غير المستهدفة" للمورفولينو. يدعم هذا العمل صحة استخدام نموذج سمك الزرد لدراسة وظيفة wnt5a في الكلى.
المقدمة
وقد استخدمت على نطاق واسع الزرد (دانيو rerio) الأجنة كنموذج لدراسة تطوير الكلى ومرض الكلى المتعدد الكيسات. وهناك العديد من المزايا لاستخدام الزرد كنموذج للحيوانات: جدوى دراسة التفاعلات الوراثية، والقدرة على استخدام العقاقير morpholinos (MO) للبروتين ضربة قاضية، وفرصة لفحص بسرعة أعداد كبيرة من الأجنة، وسهولة عرض الظواهر الجهاز في اليرقات 1 الحية. وسليفة الكلوة هي الكلى الأول لتطوير في الفقاريات وهي وظيفية في الزرد اليرقات 2. هيكل سليفة الكلوة الزرد مقارنة بسيطة نسبيا إلى الكلوة التالية الثدييات، والكلى الثالث والأخير لتطوير في الثدييات. نفرون هو وحدة عمل الكلى، مع كل الكلى البشرية تحتوي على ما بين 500،000-1،000،000 النيفرون 3،4 وكل الكلى الماوس وجود ما يقرب من 13،000 النيفرون 5، مما يجعل من الصعب مراقبة هيكل كليون واحد طن كلى الانسان أو الماوس. الزرد اثنين فقط النيفرون، ولكل كليون الزرد يحتوي على كافة المكونات الرئيسية وجدت في الكبيبة والأنابيب من الفئران والبشر 6 وأنواع الخلايا الكلوية المتخصصة مماثلة. بالمقارنة مع النماذج الفقاريات الأخرى مثل الضفدع، وكليون الزرد أكثر شبها نفرون الثدييات لأنه يحتوي على نظام مغلق 7.
في السنوات الأخيرة، تم التسلسل الجينوم الزرد، والسماح للمقدمة واسعة من الأدوات الوراثية، والموارد متحولة واسعة، ومجموعات من خطوط مراسل المعدلة وراثيا في نماذج الزرد. أشكال سليفة الكلوة الزرد بين 12-72 ساعة بعد الإخصاب (HPF) ويمكن تصور بسهولة في الأجنة شفافة. بروتين ورم في WILM في WT1 هو عامل أساسي للتنمية الكلى. خطوط الزرد المعدلة وراثيا التعبير عن بروتين الفلورية الخضراء (GFP) تحت سيطرة المروج wt1b تيراغرام (wt1b: GFP) تظهر GFP expression تقع تحديدا في المناطق سليفة الكلوة في الأجنة الزرد، بدءا من 17 HPF 8. سحاف الكلية (NPHP)، جسمية متنحية أمراض الكلى الكيسي، والتي تسببها طفرات الجينات NPHP 9. NPHP4 ضربة قاضية من قبل morpholino تسبب تشكيل الكيس في تيراغرام (wt1b: GFP). الأسماك 10 لذلك، هذا السمك المعدلة وراثيا هو نموذج مناسب لمراقبة الهياكل الكلى وتشكيل الكيس أثناء التطور الكلى. الأهم من ذلك، تأثير جهري التنمية الكلى يمكن دراستها باستخدام هذه السلالة في وقت وبكفاءة العمل.
وتصف ورقتنا استخدام تيراغرام (wt1b: GFP) الأسماك كنموذج لتصور تشكيل الكيس الكلى بعد تعديل الجينات. كنا البدء ولصق الموقع مكافحة الشعور المنظمات الأعضاء لاسقاط الجين wnt5a في الزرد. Wnt5a هو بروتين سكري يفرز غير متعارف عليه من عائلة WNT التي تلعب دورا هاما في تطوير مختلف الأجهزة وبعد الولادة الخلويةوظيفة 11. Wnt5a يعمل من خلال مسارات WNT غير متعارف عليها، بما في ذلك قطبية خلية مستو (PCP) المسار، الذي تم العثور على لعب دور في انقسام الخلايا الموجهة خلال استطالة الأنبوبية الكلوية. Wnt5a ينظم WNT / PCP المسار من خلال تشكيل مجمع مع مستقبلات التيروزين كيناز مثل (ريك)، والتي transduces مزيد Wnt5a الإشارات من خلال تشكيل مجمع مع VANGL البروتين قطبية خلية مستو 2 (Vangl2)، وبالتالي تعزيز الاستقرار Vangl2 12. عيوب في مسار PCP يمكن أن يؤدي إلى انقسام الخلايا بشكل عشوائي وتسبب تشكيل الكيس الكلوي. استخدمنا تيراغرام (wt1b: GFP) خط الزرد لمراقبة تشكيل الكيس الكلى التالية wnt5a ضربة قاضية. تيراغرام (wt1b: GFP) نموذج الزرد يسمح التصوير الحي والمراقبة في الوقت المناسب من هيكل الكلى. بعد wnt5a ضربة قاضية، تم العثور على تشكيل الكيس الكلى ابتداء من الساعة 24 HPF. في 72 HPF، الخراجات يمكن العثور عليها في الكبيبات والأنابيب القريبة. ويمكن أيضا أن هذه الطريقة يمكن استخدامها إلى screen الجينات الأخرى التي قد تتسبب في تشكيل الكيس الكلى.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
بيان الأخلاق: ملاحظة: تمت الموافقة على جميع التجارب الزرد من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في مدرسة الطب في فيرجينيا الشرقية.
1. إعداد Morpholino
- تصميم وتركيب الترجمة حجب (AUG-) وتثبيط لصق (Splice-) لمكافحة الشعور morpholino (MO) [أليغنوكليوتيد لهذا الجين من الفائدة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة (الشكل 1A). يرجى الاطلاع على معلومات الشركة المصنعة في الجدول 1.
يتم شحن المنظمات الأعضاء كما أسهم مجفف بالتجميد في عبوات زجاجية: ملاحظة. - إضافة عالية الجودة الماء المعقم للنفايات وقوارير زجاجية على اعادة تعليق أشهر للتركيز النهائي من 25 ميكروغرام / ميكرولتر. تأكد من أن قليل النوكليوتيد يذوب تماما. وإذا كان بعض بقايا صلبة، تسخين قارورة تحتوي على محلول المخزون قليل النوكليوتيد عند 65 درجة مئوية لمدة 5 إلى 10 دقائق ودوامة لفترة وجيزة.
- تخزين محلول المخزون MO في RT. لا تخزينها في 4 درجات مئوية أو -20 °، C بسبب انخفاض درجات الحرارة يمكن أن يسبب قليل النوكليوتيد MO لربط الجدار حاوية. قياس تركيز محلول المخزون باستخدام مقياس الطيف الضوئي (يرجى الرجوع إلى TABLE1) في كل مرة يتم حل الأسهم MO الجديد.
- إعداد الحل العمل MO في يوم حقن عن طريق تمييع الحل الأسهم مع الدرجة العالية الماء المعقم إلى الجرعة المطلوبة. إضافة 0.5٪ الفينول الأحمر للوصول إلى تركيز 0.05٪. على سبيل المثال، لجعل الحل العمل 5 ميكرولتر مع تركيز 15 نانوغرام / NL، إضافة 3 ميكرولتر MO حل سهم و 0.5 ميكرولتر 0.5٪ الفينول الأحمر إلى 1.5 ميكرولتر من الماء.
ملاحظة: مع هذا تركيز العمل، كل قطرة (500 رر) الحقن يحتوي على 7.5 نانوغرام من MO واثنين من قطرات تحتوي على 15 نانوغرام من MO.
2. إعداد جهاز حقن
- الزجاج شراء الإبر وانسحب قبل (انظر الجدول 1 للحصول على معلومات مفصلة). بدلا من ذلك، وسحب الإبرة واي حقن الزجاجث مجتذب الإبرة.
- بدوره على ضاغط الهواء وضبط ضغط الإعداد ل50 رطل. بدوره على المجهر مصدر الضوء تشريح وبيكو مضخة حقن الصغرى وضبط الإعدادات كما يلي: عقد ضغط 20 رطل، إخراج ضغط 10 رطل، قيمة الفترة من 2.5 و 100 μsec مجموعة من النابضة.
- تحميل الزجاج إبرة قبل سحبها مع 5 ميكرولتر من محلول الحقن ووضع الإبرة في وضع عمودي مع طرف إلى الانخفاض. الانتظار حتى يصل كل الحل طرف الإبرة مع عدم وجود فقاعات الهواء مرئية. ضع حامل إبرة في الموقف المناسب المقبل لالمجهر وادخال الإبرة الزجاج في حامل. ضبط زاوية الحقن الى 45 درجة.
- جلب رأس الإبرة في عرض تحت المجهر، وارتفاع قبالة المرحلة، والتركيز على نحافة المنطقة من غيض. قطع رأس إبرة مع ملاقط نقطة غرامة.
- وضع مسطرة وأنبوب شعري مع القطر الداخلي من 0.15 ملم جنبا إلى جنب تحت المجهر.حقن المحلول في واحدة من نهاية الأنابيب الشعرية لجعل عمود السائل. ضبط الوقت الإخراج لتصل إلى كل 17 قطرات لكل 1 ملم طول عمود السائل، ثم حجم كل قطرة من 1 NL (حجم قطرة = π س دائرة نصف قطرها 2 × طول (من عمود السائل) / عدد (قطرات).
ملاحظة: انخفاض يبلغ قطرها 0.1 ملم تعطي حجم الحقن حوالي 500 رر (حجم قطرة = 4/3 س س π دائرة نصف قطرها 3).
3. إعداد أسمدة اسماك الزرد الأجنة وحقن مع Morpholinos
- إعداد تيراغرام (wt1b: GFP) المعدلة وراثيا أزواج تربية الزرد وفقا لبروتوكولات تنشر لتربية الزرد القياسية والصيانة. جمع الأجنة بعد تفرخ الطبيعي، والاحتفاظ بها في 10 سم طبق بتري مملوءة بالماء E3 (5MM كلوريد الصوديوم، 0.17mM بوكل، 0.33 ملي CaCl 2، 0.33 ملي MgSO 4). بدء حقن MO على الفور 13. مراقبة الجنين التشكل تحت المجهر والتأكد من حقن MO هو في واحدة-مرحلة الخليوي، أو في موعد لا يتجاوز المرحلة أربعة خلايا.
- نقل الأجنة إلى طبق بتري 10 سم مع إسفين على شكل أحواض أجار. نضح الماء E3 اضافية واضغط بلطف الأجنة في أحواض.
- التلاعب في الأجنة مع ممص مكروى لتصور 1 خلية الأجنة مرحلة تحت المجهر تشريح. اختراق المشيمه ثم صفار البيض لحقن واحدة أو قطرتين من MO في صفار البيض (1 قطرة = 500 رر). نقل الأجنة المحقونة إلى 10 سم طبق بتري بالماء E3 واحتضان عند 28.5 درجة مئوية.
- بعد الحقن، وإزالة الأجنة الميتة وتسجيل عدد من الأجنة المحقونة. استبدال الماء E3 في طبق كل 24 إلى 48 ساعة.
4. التجارب النمط الظاهري الإنقاذ
- حدد orthologue من الأنواع آخر لديه مختلف بنية الزوج القاعدة الأساسية (عادة 3-7 عدم التطابق الزوج القاعدة) وذلك، من مقاومة للMO، للانقاذ. على سبيل المثال، في هذه التجربة، اخترناالماوس لأن تسلسل الماوس Wnt5a مرنا يختلف عن تسلسل الزرد.
- تصميم التمهيدي مع مجموعة من التمهيدي إلى الأمام بدأت في موقع متعدية والتمهيدي العكسي عند مقربة من نهاية المنطقة الترميز مرنا. إضافة تسلسل T7 المروج في 5'- نهاية تسلسل التمهيدي إلى الأمام. في هذه التجربة، وكنا ما يلي تسلسل التمهيدي. إلى الأمام: 5'- TAA تاك GAC TCA CTA العلامة GGA CTA TGA TGC TGC TGA AGC TGA أ 3 "وعكس: 5'- TCA CTT الائتلاف GAC GTA CTG gtc- 3".
- إجراء 50 ميكرولتر البلمرة المتسلسل (PCR) مع مجموعة التمهيدي (0.5 ميكرومتر من كل التمهيدي) مصممة فوق و 0.1 ميكروغرام قالب DNA التي تحتوي على الماوس تسلسل Wnt5a [كدنا مع برنامج PCR التالية: 1 دورة في 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. 35 دورات من 95 درجة مئوية (30 ثانية)، 58.5 ° C (30 ثانية)، 72 ° C (1 دقيقة)؛ وخطوة التمديد النهائي في 72 درجة مئوية لمدة 7 دقائق.
- بعد الانتهاء رانه دورة، تشغيل 2 ميكرولتر من المنتج PCR على agarose هلام 1٪ للتأكد من أن الفرقة هو الحجم الصحيح. تنقية المنتج PCR مع مجموعة تنقية PCR وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. تحقق من تركيز الحمض النووي مع معمل. تخزين المنتج PCR المنقى في -20 ° C أو استخدامها مباشرة في توج النسخ RNA في الخطوة التالية.
- توليف في المختبر توج مرنا مع مجموعة تخليق الحمض النووي الريبي توج وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. تمييع مرنا في 20 ميكرولتر المياه مجانا ريبونوكلياز وتحديد تركيز. قسامة الحمض النووي الريبي وتخزينها في -80 ° C.
- في يوم من الحقن، وإعداد محلول العمل في مرنا مع ريبونوكلياز الماء المعقم مجانا. لاحظ أن 40 خريج عموما أعلى جرعة RNA الذي آثار غير محددة أو السامة من الحمض النووي الريبي لا تحدث. حافظ على حل العمل على الجليد. حقن الجنين مع MO ثم مرنا الإنقاذ، أو شارك في حقن كلاهما معا. على سبيل المثال، إذا كان تركيز prepar مرناإد في الخطوة 4.5 هو 0.6 ميكروغرام / ميكرولتر، إضافة 0.67 ميكرولتر من الرنا المرسال (0.4 ميكروغرام) إلى 4.33 ميكرولتر من ريبونوكلياز المياه مجانا لجعل تركيز النهائي من 0.08 ميكروغرام / ميكرولتر، ثم قطرة واحدة (500 رر) من كل حقنة يحتوي على 40 خريج من مرنا. إعداد MO كما هو موضح في الخطوة 3.
5. إعداد الأجنة المحقونة التصوير الفلورسنت
- بعد مرور فترة الحضانة في 28.5 درجة CO / N، إضافة 0.003٪ N-الفنيل (PTU) إلى الماء E3 لمنع التصبغ، مما يؤثر مراقبة هيكل سليفة الكلوة باستخدام المجهر مضان. ومع ذلك، لا تضيف PTU قبل تكون المعيدة، لأنه يؤثر على التطور الجنيني المبكر.
- في 48 HPF، dechorionate الأجنة مع ملاقط غرامة يدويا. التقاط صور ل48 و 72 الأجنة HPF تحت المجهر تشريح الضوء.
ملاحظة: يمكن أن تؤخذ هذه الصور من دون تخدير. - ما يقرب من 10 دقيقة قبل التصوير تحت المجهر مضان، تخدير الأجنة عن طريق وضعها في10 سم طبق بتري تحتوي على 160 ميكروغرام / مل مخزنة تريكين. الانتظار لمدة 5-10 دقائق، ثم مسة خفيفة الزرد للتأكد من أنها لا تتحرك وبالتالي التخدير هو العمل.
- بعد أن يتم تخدير الأجنة، جبل لهم في 3٪ السليلوز الميثيل وتوجيهها في وضعية الرقود تحت المجهر تشريح (يرجى الرجوع إلى الجدول 1).
- مراقبة هيكل سليفة الكلوة تحت المجهر مضان (يرجى الرجوع إلى الجدول رقم 1) والتقاط الصور في تكبير مختلفة (10X 20X و).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد تحقق Wnt5a نهدم عن طريق إدخال الترجمة حجب MO (AUG-MO) أو اكسون / إنترون لصق الحدود MO (لصق-MO) إلى الأجنة الزرد في مرحلة خلية واحدة. وAUG-MO يستهدف كودون بداية، وبالتالي يمنع كلا رسالة wnt5a الأم واقحي. ولصق-MO يستهدف الموقع الثالث المانحة لصق ويمنع فقط نص اقحي من wnt5a (الشكل 1A). وAUG- وmorphants splice- phenocopied بعضها البعض مع عيوب متعددة، بما في ذلك الذيل أسفل محور الجسم مجعد وذمة التامور (الشكل 1B). الماوس Wnt5a مرنا ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
مرض الكلى المتعدد الكيسات (PKD) هي واحدة من الأسباب الرئيسية للنهاية مرحلة المرض الكلوي في البشر ويتميز تشكيل التدريجي الكيس، وتضخم الكلى، والتنمية أنبوب صغير غير طبيعية 14. راثي PKD السائد (ADPKD) هو مرض وراثي الذي تحور إما PKD1، ترميز polycystin-1 (PC1)، أو PKD2، ترميز polycystin-2 (PC2)، والنتائج في الكلى المتعدد الكيسات. العديد من الجينات الأخرى، وخاصة تلك ترميز البروتينات الموجودة في هدب الابتدائي، ويعتقد أن تشارك في تطوير الكيسات الكلوية، وحتى الآن لا يوجد أي أداة...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (DK093625 لLH، وDK069909 وDK047757 إلى JHL) وVA (جائزة الاستحقاق I01BX000820 إلى JHL). ونود أن نشكر الدكتور مايكل حزمة والدكتور جي وفي جامعة ولاية بنسلفانيا اسماك الزرد الأساسية لتوفير الدعم الضروري.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5٪ مؤشر لون الفينول الأحمر | سيجما | P0290 | للحقن |
| Morpholino | Genn Tools، LLC | (حسب الطلب) | مصممة خصيصا للجين محل الاهتمام |
| إبرة مسحوبة مسبقا | Tritech Research | MINJ-PP | إذا كانت هناك حاجة إلى كمية كبيرة من الإبرة ، يمكنك أيضا شراء مجتذب إبرة وإعداد الإبرة في المختبر |
| T7 mMessage Kit | Ambion | 1344 | للنسخ في المختبر لعمل mRNA مغطى لتجربة الإنقاذ |
| N-Phenylthiourea | Sigma | P7629 | للوقاية من الميلانين |
| Tricaine | Sigma | A5040 | وتسمى أيضا ethyl 3-aminobenzoate ، لتخدير سمك الزرد |
| ميثيل السليلوز | Sigma | M-0387 | لموضع سمك الزرد ؛ |
| طقم تنقية QIAquick PCR | Qiagen | 28104 | لتنقية منتج PCR لتخليق الحمض النووي الريبي الغطاء. |
| مزيج dNTP | Promega | U1511 | لعلامة PCR |
| DNA Polymerase | Invitrogen | 10342-053 | |
| لمقياس الطيف الضوئي PCR NanoDrop | Thermo Scientific | ND-1000 | لقياس تركيز المورفولينو والحمض النووي الريبي |
| ضاغط الهواء | Werther International، Inc. | Panther Compact 106 | مصدر هواء للحقن |
| الحقن الدقيقة بيكو | World Precision Instruments Inc | PV830 Pneumatic PicoPump | يمكن استخدام أنواع أخرى من نظام الحقن المجهري. |
| Micro-manuplator | World Precision Instruments Inc | MMJR | اليد اليمنى (MMJL لليد اليسرى) |
| حامل الإبرة | World Precision Instruments Inc | 5430-ALL | لعقد إبرة للتلاعب الدقيق |
| Dumont Tweezers | Fine Surgical | Tools 11253-20 | لكسر طرف الإبرة |
| تشريح المجهر | Leica M205C & nbsp ؛ | لمراقبة وتصوير أجنة الزرد | |
| المجهر الفلورسكوب | Zeiss Axio Obserer D1m & nbsp ؛ | لتصوير أنبوب شعري لسمك الزرد | |
| (معرف 0.15 مم) | VitroCom | CV1525Q-100 | لقياس حجم كل قطرة محقونة |
المراجع
- Choi, S. Y., et al. Cdc42 deficiency causes ciliary abnormalities and cystic kidneys. J Am Soc Nephrol. 24 (9), 1435-1450 (2013).
- Hostetter, C. L., Sullivan-Brown, J. L., Burdine, R. D. Zebrafish pronephros: a model for understanding cystic kidney disease. Dev Dyn. 228 (3), 514-522 (2003).
- Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man. Anat Rec. 232 (2), 514-201 (1992).
- Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. Nephron number in patients with primary hypertension. N Engl J Med. 348 (2), 101-108 (2003).
- Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice. Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).
- Gerlach, G. F., Wingert, R. A. Kidney organogenesis in the zebrafish: insights into vertebrate nephrogenesis and regeneration. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2 (5), 559-585 (2013).
- Igarashi, P. Overview: nonmammalian organisms for studies of kidney development and disease. J Am Soc Nephrol. 16 (2), 296-298 (2005).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299 (5), 1040-1047 (2010).
- Liu, S., et al. A defect in a novel Nek-family kinase causes cystic kidney disease in the mouse and in zebrafish. Development. 129 (24), 5839-5846 (2002).
- Slanchev, K., Putz, M., Schmitt, A., Kramer-Zucker, A., Walz, G. Nephrocystin-4 is required for pronephric duct-dependent cloaca formation in zebrafish. Hum Mol Genet. 20 (16), 3119-3128 (2011).
- Huang, L., et al. The role of Wnt5a in prostate gland development. Dev Biol. 328 (2), 188-199 (2009).
- Andre, P., et al. The Wnt coreceptor Ryk regulates Wnt/planar cell polarity by modulating the degradation of the core planar cell polarity component Vangl2. J Biol Chem. 287 (53), 44518-44525 (2012).
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev Dyn. 203 (3), 253-310 (1995).
- Torres, V. E., Harris, P. C., Pirson, Y. Autosomal dominant polycystic kidney disease. Lancet. 369 (9569), 1287-1301 (2007).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
