إنتاج واستخدام الفيروسة البطيئة إلى خلايا انتقائي تنبيغ الابتدائية دبقية قليلة التغصن السلائف ل في المختبر فحوصات تكون الميالين

Haley M. Peckham; Anita H. Ferner; Lauren Giuffrida; Simon S. Murray; Junhua Xiao

doi:10.3791/52179

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إنتاج واستخدام الفيروسة البطيئة إلى خلايا انتقائي تنبيغ الابتدائية دبقية قليلة التغصن السلائف ل في المختبر فحوصات تكون الميالين

14.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52179

⸱

يناير 12, 2015

Haley M. Peckham¹ , Anita H. Ferner¹ , Lauren Giuffrida¹ , Simon S. Murray¹^,² , Junhua Xiao¹^,²

¹Department of Anatomy and Neuroscience, The University of Melbourne, ²The Florey Institute of Neuroscience and Mental Health Research, The University of Melbourne

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا بروتوكولات توفر أساسا مرنا واستراتيجيا للتلاعب الفيروسي بالخلايا السليفة قليلة التغصن للإفراط في التعبير عن البروتينات ذات الأهمية من أجل استجواب دورها على وجه التحديد في الخلايا قليلة التغصن عبر النموذج المختبري لتكوين النخاع في الجهاز العصبي المركزي.

الملخص

تكون الميالين هو عملية معقدة تشمل كل من الخلايا العصبية والمايلين تشكيل الخلايا الدبقية، قليلة التغصن في الجهاز العصبي المركزي (CNS) وخلايا شوان في الجهاز العصبي المحيطي (السندات الإذنية). نستخدم في المختبر تكون الميالين الفحص، وهو نموذج أنشئت لدراسة الجهاز العصبي المركزي تكون الميالين في المختبر. للقيام بذلك، يتم إضافة خلايا دبقية قليلة التغصن السلائف (يجد OPCs) إلى تنقية القوارض الظهرية العقدة الجذر الابتدائية (DRG) الخلايا العصبية لتشكيل myelinating المشترك الثقافات. من أجل استجواب تحديدا الأدوار التي البروتينات المحددة التي أعربت عنها قليلة التغصن تمارس عليه تكون الميالين ضعنا البروتوكولات التي تنبيغ انتقائي يجد OPCs باستخدام الفيروسة البطيئة overexpressing النوع البري والبروتينات السلبية النشطة جوهري أو المهيمنة قبل أن تبذر على الخلايا العصبية DRG. وهذا يسمح لنا لاستجواب تحديدا أدوار هذه البروتينات oligodendroglial في تنظيم تكون الميالين. ويمكن أيضا البروتوكولات تطبيقها في دراسة بعد التمديدأنواع الخلايا لها، وبالتالي توفير نهج الذي يسمح التلاعب الانتقائي للبروتينات التي أعربت عنها نوع من الخلايا المطلوبة، مثل قليلة التغصن لدراسة المستهدفة من الإشارات وآليات التعويض. في الختام، والجمع بين الفحص في المختبر تكون الميالين مع lentiviral المصابين يجد OPCs يوفر أداة استراتيجية لتحليل الآليات الجزيئية المشاركة في تكون الميالين.

المقدمة

تكون الميالين من المحاور أمر بالغ الأهمية لنقل سريعة وفعالة من إمكانات العمل في كل من الجهاز العصبي المركزي والمحيطي. الخلايا المتخصصة، خلايا شوان في الجهاز العصبي المحيطي و oligodendrocytes في الجهاز العصبي المركزي، والتفاف حولها ويغمد محاور في المايلين، وعزل فعال العصب وتسهيل التوصيل قفزي ^1. ويمكن دراسة عملية تكون الميالين في المختبر باستخدام الخلايا العصبية الشبكية العقدة ^2، ألياف النانو المهندسة ^3، أو الخلايا العصبية العقدة الجذرية الظهرية شارك في تربيتها مع أي خلايا شوان ⁴ أو قليلة التغصن ^5-7. في المختبر تكون الميالين الفحص هو نموذج أنشئت لدراسة العصب....