Method Article

تطوير في المختبر نظام نموذجي لدراسة تفاعل ايكوس الحصانية إيج مع مستقبلات لها عالية تقارب FcεRI

DOI:

10.3791/52222

⸱

November 1st, 2014

 ,  , 
1Biological Department, King Abdulaziz University, 2The Krebs Institute for Biomolecular Research, Department of Molecular Biology and Biotechnology, The University of Sheffield

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف الدراسة الحالية تطوير وتطبيقات نظام فحص معدل وراثيا يعتمد على تعدي خلايا سرطان الدم القاعدية للفئران بجين FcεRIα للخيول. تعبر الخلايا المنقولة عن مستقبل وظيفي حيث يمكن تنشيط إطلاق وسطاء الاستجابة التحسسية بواسطة IgE والمستضد.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن تفاعل IgE مع مستقبلات Fc عالية التقارب (FcεRI) متبوعا بتحدي مستضد هو المسار الرئيسي في ردود الفعل التحسسية بوساطة IgE. نتيجة للارتباط العالي بالتقارب بين IgE و FcεRI ، جنبا إلى جنب مع الإنتاج المستمر ل IgE بواسطة الخلايا البائية ، تستمر الحساسية عادة طوال الحياة ، مع عدم توفر علاج دائم حاليا. الخيول ، وخاصة خيول السباق ، التي عادة ما تكون فطرية ، هي نوع من الثدييات المعرضة جدا لتطور استجابات فرط الحساسية ، والتي يمكن أن تؤثر بشكل خطير على أدائها. تعكس الاستجابات الفسيولوجية للحساسية التحسسية في الخيول التي لوحظت في البشر. في هذه الورقة ، نصف تطوير نظام فحص في الموقع للتقييم الكمي لإطلاق وسطاء الاستجابة التحسسية المتعلقة بنظام الخيول. تحقيقا لهذه الغاية ، تم نقل الجين الذي يشفر الخيول FcεRIα إلى خلايا ابيضاض الدم القاعدي للفئران الأبوية (RBL-2H3.1) والتعبير عنها على سطح خلايا سرطان الدم القاعدي للفئران (RBL-2H3.1). شكل المنتج الجيني لسلسلة α الخيول المنقولة مركب مستقبلات وظيفية مع سلاسل الفئران β و γ الداخلية 1. سهل نظام الفحص الناتج تقييم كمية الوسيط المفرز من خلايا RBL-2H3.1 المنقولة للخيول FcεRIα بعد التحسس باستخدام IgE للخيول والتحدي المستضد باستخدام إطلاق β-hexosaminidase كقراءة 2 ، 3. بلغ إطلاق الوسيط ذروته عند 36.68٪ ± 4.88٪ عند 100 نانوغرام مل -1 من المستضد. تم تعديل هذا الاختبار من المقايسات السابقة المستخدمة لدراسة الاستجابات التحسسية للإنسان: 4 ، 5. لقد أظهرنا أيضا أن هذا النوع من نظام الفحص له تطبيقات متعددة لتطوير أدوات التشخيص وتقييم سلامة استراتيجيات التدخل العلاجي المحتملة في أمراض الحساسية 6 ، 2 ، 3.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد عرفت الحساسية لآلاف السنين. ووصف علاج الربو في النص الطبية المصرية القديمة المعروفة باسم بردية إبيرس (~ 1550 قبل الميلاد) وناقش العلاجات العشبية لعلاج النتيجة 7.

وتصنف الحساسية اليوم كرد فعل فرط الحساسية من النوع الأول، حيث T نوع من الخلايا المساعد 2 (TH 2) ذراع الجهاز المناعي يرسم إنتاج الغلوبولين المناعي E (IgE و) الأضداد استجابة لمستضدات البيئية تسمى المواد المسببة للحساسية. هذه هي المواد المتنوعة التي تتفاعل عادة مع الخلايا في جهاز المناعة، وتحفيز تخليق وإفراز السيتوكينات الموالية للالتهابات، بما في ذلك انترلوكين 4 وانترلوكين 13 <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) إعداد الخط الخلوي:

  1. تطوير خط الخلية ربل-2H3.1 معربا عن α FcεRI الفروسية:
    1. باستخدام تقنيات زراعة الأنسجة الأساسية للخطوط الخلايا أحادي الطبقة، بالنقل خلايا RBL-2H3.1 الأبوية استخدام البلازميد pEE6، تحمل الجين FcεRIα الخيول (بنك الجينات: Y18204.1) 28. إضافة 2 ميكروغرام ميكرولتر -1 من DNA البلازميد إلى 0.8 مل من الخلايا في مناطق ذات كثافة من 1.2 X10 7 خلايا مل -1. Electroporate الخلايا في 250 V 960 μF....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت توعية الخلايا ربل-2H3.1 الأبوية وتلك transfected مع والخيول FcεRIα مستقبلات الجينات أولا مع الماوس فريق الخبراء الحكومي الدولي لمكافحة DNP-HSA وتحدى مع المستضد إدارة التخطيط الوطني، هائل سعيد أنعم. الماوس إيج تربط لمستقبلات الفئران الذاتية في كل من خطوط الخلايا وبالتالي تقوم بدور الرقابة لاختبار جدوى إطلاق سراح كل من خطوط الخلايا لاطلاق سراح الوسطاء (الشكل 1). هذا هو الاختيار مهم ويجب أن تنفذ منذ روتيني على الموسعة (> 10 أسبوعا) مرور في زراعة الخلايا، وخلاي.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في ملخص أظهرت نتائج هذا التحقيق أنه عندما يتم توعية خلايا RBL-2H3.1 معربا عن FcεRIα مع فرسي فرسي إيج وتحدى من قبل المستضد، فإنها تعطي بيان الذروة سيط 36.68٪ ± 4.88٪ من المبلغ الإجمالي الوسيط داخل الخلايا، مقارنة مع ربل-2H3.1 الخلايا الأبوية لا تعبر عن فرسي FcεRIα.

وبالتالي يوفر هذا الاختبار أداة مفيدة للتحقيق ودراسة استجابات حساسية الخيول في المختبر. يسمح لها تحديد كمية الوسيط الصادرة عن خلايا الخلايا ال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة في هذه الورقة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون الدكتورة ليندا بارتريدج على تقديم المشورة ومرافق المختبرات.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
RBL-2H3.1 التعبير عن Equine FC & epsilon ؛ RI & alpha ؛-أنتجت في مختبر
Equine IgE anti NIP-HSA-أنتجت في المختبر
96 بئر لوحةسيجماCLS3595-متعددة
القنوات ماصةAnachem-
حاضنةغالاكسي R-
4 هيدروكسي -5-يودو -3-حمض الفينيل الخلفيكامبريدج للكيماويات الحيويةN-1070-1تم اقتران NIP-OH مع ألبومين المصل البشري لصنع NIP-HSA في المختبر
Dinitrophenyl مترافق مع ألبومين المصل البشريSigmaA6661DNP-HSA
المختصر Anthos Labtec HT2-
الأنابيبSigmaP1851-كلوريد
الصوديومSigmaS7653-كلوريد
البوتاسيومSigmaP9333-كلوريد
المغنيسيومسيجماM2670-كلوريد
الكالسيومسيجماC1016-تريتون
x100سيجما
N-acetyl-&beta-D-glucosaminideSigmaN9376محلول مخزون يسمى & beta الركيزة هيكسوسامينيداز كان 50 ملي مولار تم إعداده في DMSO
ثنائي ميثيل سلفوكسيدسيجماD2650-حامض
الستريكسيجما
251275-أسيتات الصوديومسيجماS7670-تريس
سيجماT5941-
مقياس الطيف الضوئي X100-4-نيتروفينيل

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Taudou, G., et al. Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE. Int Arch Allergy Immunol. 100 (4), 344-350 (1993).
  2. Sabban, S.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Equine IgEFc RI ReceptorRat Basophil Leukemia CellsMediator Release AssayBeta Hexosaminidase ReleaseAntigenic ChallengeAllergic ResponseIn Vitro ModelEquine AllergyRBL 2H3 1 Cells

Related Articles