مقالة منهجية

تطوير في المختبر نظام نموذجي لدراسة تفاعل ايكوس الحصانية إيج مع مستقبلات لها عالية تقارب FcεRI

DOI:

10.3791/52222

⸱

نوفمبر 1, 2014

 ,  , 
1Biological Department, King Abdulaziz University, 2The Krebs Institute for Biomolecular Research, Department of Molecular Biology and Biotechnology, The University of Sheffield

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف الدراسة الحالية تطوير وتطبيقات نظام فحص معدل وراثيا يعتمد على تعدي خلايا سرطان الدم القاعدية للفئران بجين FcεRIα للخيول. تعبر الخلايا المنقولة عن مستقبل وظيفي حيث يمكن تنشيط إطلاق وسطاء الاستجابة التحسسية بواسطة IgE والمستضد.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن تفاعل IgE مع مستقبلات Fc عالية التقارب (FcεRI) متبوعا بتحدي مستضد هو المسار الرئيسي في ردود الفعل التحسسية بوساطة IgE. نتيجة للارتباط العالي بالتقارب بين IgE و FcεRI ، جنبا إلى جنب مع الإنتاج المستمر ل IgE بواسطة الخلايا البائية ، تستمر الحساسية عادة طوال الحياة ، مع عدم توفر علاج دائم حاليا. الخيول ، وخاصة خيول السباق ، التي عادة ما تكون فطرية ، هي نوع من الثدييات المعرضة جدا لتطور استجابات فرط الحساسية ، والتي يمكن أن تؤثر بشكل خطير على أدائها. تعكس الاستجابات الفسيولوجية للحساسية التحسسية في الخيول التي لوحظت في البشر. في هذه الورقة ، نصف تطوير نظام فحص في الموقع للتقييم الكمي لإطلاق وسطاء الاستجابة التحسسية المتعلقة بنظام الخيول. تحقيقا لهذه الغاية ، تم نقل الجين الذي يشفر الخيول FcεRIα إلى خلايا ابيضاض الدم القاعدي للفئران الأبوية (RBL-2H3.1) والتعبير عنها على سطح خلايا سرطان الدم القاعدي للفئران (RBL-2H3.1). شكل المنتج الجيني لسلسلة α الخيول المنقولة مركب مستقبلات وظيفية مع سلاسل الفئران β و γ الداخلية 1. سهل نظام الفحص الناتج تقييم كمية الوسيط المفرز من خلايا RBL-2H3.1 المنقولة للخيول FcεRIα بعد التحسس باستخدام IgE للخيول والتحدي المستضد باستخدام إطلاق β-hexosaminidase كقراءة 2 ، 3. بلغ إطلاق الوسيط ذروته عند 36.68٪ ± 4.88٪ عند 100 نانوغرام مل -1 من المستضد. تم تعديل هذا الاختبار من المقايسات السابقة المستخدمة لدراسة الاستجابات التحسسية للإنسان: 4 ، 5. لقد أظهرنا أيضا أن هذا النوع من نظام الفحص له تطبيقات متعددة لتطوير أدوات التشخيص وتقييم سلامة استراتيجيات التدخل العلاجي المحتملة في أمراض الحساسية 6 ، 2 ، 3.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد عرفت الحساسية لآلاف السنين. ووصف علاج الربو في النص الطبية المصرية القديمة المعروفة باسم بردية إبيرس (~ 1550 قبل الميلاد) وناقش العلاجات العشبية لعلاج النتيجة 7.

وتصنف الحساسية اليوم كرد فعل فرط الحساسية من النوع الأول، حيث T نوع من الخلايا المساعد 2 (TH 2) ذراع الجهاز المناعي يرسم إنتاج الغلوبولين المناعي E (IgE و) الأضداد استجابة لمستضدات البيئية تسمى المواد المسببة للحساسية. هذه هي المواد المتنوعة التي تتفاعل عادة مع الخلايا في جهاز المناعة، وتحفيز تخليق وإفراز السيتوكينات الموالية للالتهابات، بما في ذلك انترلوكين 4 وانترلوكين 13 8، 9 كما لم الجسيمات في دخان السجائر أو جزيئات عادم الديزل التي تعزز إيج التوليف 10.

ويعزى الارتفاع في مظاهر الحساسية في البلدان الصناعية في السنوات ال 50 الماضية لمزيج من تأثيرالملوثات البيئية والاتجاه إلى بيئة أكثر مطهرة، والتي تتضافر لتحول الاستجابة المناعية تجاه لمحة سادت قبل TH 2 السيتوكينات، على النحو الذي اقترحه "فرضية النظافة" 11.

كما ذكر أعلاه، والبشر ليسوا الثدييات الوحيدة التي تعاني من الحساسية. وخاصة الخيول والكلاب ويمكن أيضا تطوير استجابات حساسية الكلاسيكية وأظهرت دراسة أجرتها أن 12، كما هو الحال في البشر، ويعزى الحساسية الخيول إلى العوامل الوراثية والبيئية. ونتيجة لذلك، فإن هذه الحيوانات تمثل نماذج جيدة لدراسة التفاعل بين الأسباب الوراثية والبيئية للحساسية، تقدمه من توعية لمرض، واستراتيجيات التدخل الممكنة مرة واحدة وضعت في المظاهر السريرية

في عام 1887، كان أول شخص Stömmer لوصف التشابه بين الإنسان والربو الخيلي 13، وتأثير الهستامين على نظام القلب والأوعية الدموية الخيول هومشابهة جدا لتلك التي للبشر 14. الخيول هي أيضا حجر الزاوية في صناعة سباقات الخيل، الذي يستحق 72 مليار دولار مع الرهان دوران من 115 مليار دولار سنويا 15.

معظم خيول السباق المعاصرة هي من نسل عدد قليل من الخيول العربية ولدت من قبل السيدة آن بلنت من عام 1878 فصاعدا. والفطرية السباق الحديثة عادة لتحديد لقدرات الأداء. هم عرضة للاضطرابات وراثية، واحدة منها هي قابليتها لتركيب استجابات حساسية. لديهم أيضا 1000 مرة أعلى من المصل مستويات إيج حتى الأكثر حساسية شديدة البشر 16. وعادة ما تتجلى الحصان استجابات حساسية مثل فرط الحساسية لدغة حشرة (IBH) 17، 18. IBH النتائج في التهاب الجلد بسبب لدغات الحشرات تشكل في جنس البعضوضيات. شكل آخر من أمراض الحساسية الخيول هو انسداد لمجرى الهواء المتكررة (راو)، وهذا يتجلى في الرئتين والشعب الهوائية. ويتميز هذا الصفير ومختبرored التنفس. راو يحدث عادة استجابة لجراثيم العفن، وسجلت حساسية عالية خاصة بمستويات IgE في الخيول التي تعاني من راو في دراسة واحدة 19 على الرغم من تحقيق آخر لم يؤكد هذا 20.

تدور دراسات عن حساسية الخيول حول محاولة لرصد وتحييد الخيول إيج من خلال تطوير إيج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة للالفروسية (MABS) 21، 22. وعلاوة على ذلك الدراسة بنسبة 23 تناقش إنتاج المجالات خارج الخلية من α من الخيول عالية تقارب-FC مستقبلات ل سلسلة (FcεRIα) مستقبلات في محاولة لكشف وquantitate مصل الخيول إيج. تناقش دراسة ذلك من قبل لدين 24 نهج جديد يهدف إلى تحييد إيج المصل بواسطة فتيلة الجهاز المناعي باستخدام مستمنع الذات / غير المتمتعة بالحكم الذاتي. كل هذه الدراسات، ومع ذلك، تفتقر مقايسة فعالة لاختبار سلامة وفعالية بروتوكولاتها. في هذه المقالة، ونحن الآن تقديم مثل هذا الفحص SYSتيم ينطبق على دراسة الاستراتيجيات التشخيصية والعلاجية ذات الصلة لنظام الفروسية، حيث الإفراج β-هيكسوزامينيداز، كمؤشر الوسيط خلية تحبب، تم تقييمها على الخلايا ربل-2H3.1 معربا عن فرسي FcεRIα. ويعتمد هذا البروتوكول على المنشورات السابقة 25، 4، 5، 2، 3 اصفا الهندسة خلايا RBL transfected مع الجينات ترميز المجال الجلوبيولين ملزمة لمستقبلات عالية تقارب لفريق الخبراء الحكومي الدولي من مختلف الأنواع. ويوضح البروتوكول كيفية تنفيذ بيان فحص β-هيكسوزامينيداز، وتعرض نتائج التي كما يعني ± الانحراف المعياري للتجارب ثلاث نسخ.

وقد تم تطوير هذا الفحص من خلال إطلاق أول Siraganian وهوك 25 لدراسة الحساسية الإنسان. كما وضعت المجموعة المختبر بقيادة الدكتور روبن Siraganian خط الخلية ربل. وقد وضعت هذه الخلايا ربل للتعبير عن FcεRIα البشرية ونشر بروتوكول بنسبة 4. الجزء الاخيروجاء الفحص مع وضع البلازميد ايندهوفن في الورقة التي نويبيرغر 26 التي وصفت إنتاج من الأجسام المضادة عن طريق الاستنساخ في سلسلة الجينات الثقيلة الخارجة من الجين الماوس لمنطقة متغيرة إيج التي تستهدف ناشبة 4-هيدروكسي-3 -nitro-phenacetyl (NP)، فإن الأجسام المضادة الناتجة خيالية وظيفية بالكامل. القدرة على تطوير أي فريق الخبراء الحكومي الدولي التي تستهدف نفس ناشبة، بينما الاستنساخ أيضا مستقبلات على سطح الخلايا ربل أدى إلى توحيد الفحص مما يجعل من بروتوكول مفيد لقياس تحبب الخلايا قعدة.

مقايسة لديه إيجابيات وسلبيات. الايجابيات من الفحص هو قدرتها على التكيف لاستخدامها في أي نظام الثدييات، وبالتالي تستخدم المختبر لاختبار للتحبب في النظم البشرية والكلاب والخيول، وهذا أمر يمكن تحقيقه ببساطة عن طريق تجميع فريق الخبراء الحكومي الدولي الكائن الحي واستنساخ مستقبله على سطح الخلايا ربل.

من ناحية أخرى،سلبيات الفحص هو أن خلايا RBL حساسة جدا للتغيرات الحرارية والميكانيكية ودرجة الحموضة، مما يجعلها تعطي تباين مستويات تحبب داخل نفس الفحص. وبالتالي ينصح بشدة أن المقايسات وتتكرر دائما في يثلث ثم يؤخذ بمعدل منها. وعلاوة على ذلك، فإن الخلايا ربل تميل إلى التحول نحو النمط الظاهري غير الإفراج إذا ما تركت في زراعة الأنسجة لمرات طويلة (> 10 أسبوعا) 27، مما يجعل صيانتها مرهقة. هم أيضا عرضة للعدوى من البكتيريا الميكوبلازما، والتي هي غير مرئية من الضوء والمجهر لا تغيير مورفولوجيا الخلية، ولكن من شأنه أن يغير بشكل جذري مستويات تحبب لهم. وبالتالي هناك حاجة إلى اختبارات الميكوبلازما العادية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) إعداد الخط الخلوي:

  1. تطوير خط الخلية ربل-2H3.1 معربا عن α FcεRI الفروسية:
    1. باستخدام تقنيات زراعة الأنسجة الأساسية للخطوط الخلايا أحادي الطبقة، بالنقل خلايا RBL-2H3.1 الأبوية استخدام البلازميد pEE6، تحمل الجين FcεRIα الخيول (بنك الجينات: Y18204.1) 28. إضافة 2 ميكروغرام ميكرولتر -1 من DNA البلازميد إلى 0.8 مل من الخلايا في مناطق ذات كثافة من 1.2 X10 7 خلايا مل -1. Electroporate الخلايا في 250 V 960 μF باستخدام 0.4 سم electrocuvette ثم احتضان فورا على الجليد لمدة 10 دقيقة.
    2. تحديد الخلايا تحولت باستخدام وسائل الإعلام التي تحتوي على 0.4 غرام من كبريتات geneticin G418، ثم فرز ما تبقى الخلايا الحية من خلال نظام مراقبة الأصول الميدانية من خلال وضع علامات عليها مع فريق الخبراء الحكومي الدولي الأجسام المضادة الفلورسنت. استخدام الناتج ربل-2H3.1 معربا عن الخيول خط الخلية FcεRIα للتحقيق 2، 3.
  2. قبل فحص الأجسام المضادة للتوعية:
      5 مل -1.
  3. إضافة إيج تهم الخلايا علقت لتركيز النهائي من 1 نانوغرام مل -1، ثم لوحة 100 ميكرولتر من الخلايا على 96 لوحة جيدا في الأعمدة 1-6 واحتضان عند 37 درجة مئوية + 5٪ CO 2 + 90٪ الرطوبة النسبية لمدة 16 ساعة. بعد فترة الحضانة، وقبل إجراء الفحص الإفراج، والتحقق من الآبار تحت المجهر لconfluency جيدا والتقيد الخلية.

2) بيان الفحص:

  1. غسل الخلايا:
    1. الإفراج الدافئ عازلة (25 ملم أنابيب، 120 ملي كلوريد الصوديوم، كلوريد البوتاسيوم 5 ملم، 0.04 ملم كلوريد المغنيسيوم وكلوريد الكالسيوم 1 ملم) عند 37 درجة مئوية للسماح للغسيل خلية لطيف.
    2. غسل الخلايا عن طريق التحريك لوحة لإزالة خلية الإعلام وإضافة 100 ميكرولتر الحارة 37 درجة مئوية، عازلة الإصدار. كرر مرتين.
  2. التحدي مستضد:
    1. إعداد التخفيف التسلسلي للمستضد (NIP-HSA أو إدارة التخطيط الوطني-HSA) 0 نانوغرام مل -1، 0.1 نانوغرام مل -1، 1 نانوغرام مل -1، 10 نانوغرام مل -1، 100 نانوغرام مل -1، 1000 نانوغرام مل -1، 10000 نانوغرام مل -1 في المخزن الإفراج ودافئة عند 37 درجة مئوية.
    2. بعد غسل الخلية الثانية، تجاهل وسائل الإعلام واستبدالها مع 100 ميكرولتر من الحلول مستضد. ضمان آبار في نفس الصف (A1-6 على سبيل المثال) لديها تركيز المستضد نفسه إضافتها.
    3. إنشاء سيطرة سلبية في الصف وذلك بإضافة 0 نانوغرام مستضد -1 مل. إضافة زيادة تركيز المستضد أسفل الصفوف (BG)، يليه تريتون X-عازلة (5٪ تريتون X-100) في H خلايا الصف لليز الخلايا لاستخدامها كعنصر تحكم إيجابية. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة للسماح للخلايا لاطلاق سراح الوسطاء لها.
  3. وضع الضوابط جيدا الفردية:
    1. بعد الحضانة، ونقل 50 ميكرولتر من طاف الخلية إلى النصف الآخر من لوحة (الآبار A1-6 A7-12 إلى الآبار، وغيرها). تجاهل 50 ميكرولتر المتبقية من طاف واستبدالها مع 50 ميكرولتر من تريتون X-عازلة للسماح بقياس كمية من الوسطاء أفرج عنه في كل بئر في الأعمدة 7-12 كنسبة مئوية من إجمالي الوسطاء داخل الخلايا في العمود 1-6 .
  4. الركيزة انزيم:
  5. إضافة 50 ميكرولتر من الركيزة β-هيكسوزامينيداز (50 ملي 4-nitrophenyl N-أسيتيل-β-D-glucosaminide أعد DMSO المخفف الى 2 مم عن طريق إضافته إلى عازلة سترات 0.2 M حمض الستريك و 0.2 M خلات الصوديوم، ودرجة الحموضة 4.5) لجميع الآبار لتسهيل تحويل الركيزة ل4-نيتروفينول بواسطة انزيم β-هيكسوزامينيداز. احتضان لوحات عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.

figure-protocol-1

  1. إنهاء رد فعل:
    1. وقف رد فعل من قبل مضيفا 150 ميكرولتر تريس العازلة (1 M تريس، حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 9) إلى كل جانب من درجة الحموضة العالية العازلة يتوقف رد الفعل، ويحول نيتروفينول 4 إلى اللون الأصفر.
  2. قراءة وتحليل النتائج:
    1. قراءة لوحة باستخدام لوحة معمل في 405 نانومتر لقياس الامتصاصية من اللون الأصفر. تحسب النسبة المئوية للصدر β-هيكسوزامينيداز باستخدام الصيغة التالية:

figure-protocol-2

  1. تطبيق هذه الصيغة على كل بئر، وبعد ذلك يؤخذ في المتوسط ​​لكل صف. A1 و A7 يمثل الموقع من الآبار في 96 لوحة جيدا. رسم بياني لنسبة الإفراج β-هيكسوزامينيداز (وهو ما يعادل إجمالي الإفراج الوسيط) ضد هبوطNST تركيز المستضد 2، 3.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت توعية الخلايا ربل-2H3.1 الأبوية وتلك transfected مع والخيول FcεRIα مستقبلات الجينات أولا مع الماوس فريق الخبراء الحكومي الدولي لمكافحة DNP-HSA وتحدى مع المستضد إدارة التخطيط الوطني، هائل سعيد أنعم. الماوس إيج تربط لمستقبلات الفئران الذاتية في كل من خطوط الخلايا وبالتالي تقوم بدور الرقابة لاختبار جدوى إطلاق سراح كل من خطوط الخلايا لاطلاق سراح الوسطاء (الشكل 1). هذا هو الاختيار مهم ويجب أن تنفذ منذ روتيني على الموسعة (> 10 أسبوعا) مرور في زراعة الخلايا، وخلاي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في ملخص أظهرت نتائج هذا التحقيق أنه عندما يتم توعية خلايا RBL-2H3.1 معربا عن FcεRIα مع فرسي فرسي إيج وتحدى من قبل المستضد، فإنها تعطي بيان الذروة سيط 36.68٪ ± 4.88٪ من المبلغ الإجمالي الوسيط داخل الخلايا، مقارنة مع ربل-2H3.1 الخلايا الأبوية لا تعبر عن فرسي FcεRIα.

وبالتالي يوفر هذا الاختبار أداة مفيدة للتحقيق ودراسة استجابات حساسية الخيول في المختبر. يسمح لها تحديد كمية الوسيط الصادرة عن خلايا الخلايا ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة في هذه الورقة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون الدكتورة ليندا بارتريدج على تقديم المشورة ومرافق المختبرات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
RBL-2H3.1 التعبير عن Equine FC & epsilon ؛ RI & alpha ؛-أنتجت في مختبر
Equine IgE anti NIP-HSA-أنتجت في المختبر
96 بئر لوحةسيجماCLS3595-متعددة
القنوات ماصةAnachem-
حاضنةغالاكسي R-
4 هيدروكسي -5-يودو -3-حمض الفينيل الخلفيكامبريدج للكيماويات الحيويةN-1070-1تم اقتران NIP-OH مع ألبومين المصل البشري لصنع NIP-HSA في المختبر
Dinitrophenyl مترافق مع ألبومين المصل البشريSigmaA6661DNP-HSA
المختصر Anthos Labtec HT2-
الأنابيبSigmaP1851-كلوريد
الصوديومSigmaS7653-كلوريد
البوتاسيومSigmaP9333-كلوريد
المغنيسيومسيجماM2670-كلوريد
الكالسيومسيجماC1016-تريتون
x100سيجما
N-acetyl-&beta-D-glucosaminideSigmaN9376محلول مخزون يسمى & beta الركيزة هيكسوسامينيداز كان 50 ملي مولار تم إعداده في DMSO
ثنائي ميثيل سلفوكسيدسيجماD2650-حامض
الستريكسيجما
251275-أسيتات الصوديومسيجماS7670-تريس
سيجماT5941-
مقياس الطيف الضوئي X100-4-نيتروفينيل

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Taudou, G., et al. Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE. Int Arch Allergy Immunol. 100 (4), 344-350 (1993).
  2. Sabban, S. Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity FcεRI Receptor. , The University of Sheffield. Sheffield. (2011).
  3. Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor FcεRI. Vet ImmunolImmunopathol. 153 (1-2), 6-10 (2013).
  4. Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor. Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).
  5. Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with FcεRIα. MolImmunol. 45 (8), 2262-2268 (2008).
  6. Rashid, A., et al. Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells. MolImmunol. 52 (3-4), 224-228 (2012).
  7. Cohen, S. G. Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus. Allergy Proc. 13 (3), 147-154 (1992).
  8. Dudler, T., et al. A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2. J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).
  9. Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE. Eur J Immunol. 26 (12), 2972-2980 (1996).
  10. Smyth, L. J., et al. Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke. Environ Sci Technol. 34 (7), 1370-1374 (2000).
  11. Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update. ClinExpImmunol. 160 (1), 1-9 (2010).
  12. Eder, C., et al. Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses. Equine Vet J. 33 (7), 714-720 (2001).
  13. Cook, W. R., Rossdale, P. D. The syndrome of 'Broken Wind' in the horse. Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).
  14. Eyre, P., Lewis, A. J. Acute systemic anaphylaxis in the horse. Br. J. Pharmacol. 48 (3), 426-437 (1973).
  15. Bruggink, M. Global betting stable, but some countries suffer recession. , International Federation of Horseracing Authorities. Available from: http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664 (2009).
  16. Wagner, B. IgE in horses: occurrence in health and disease. Vet ImmunolImmunopathol. 132 (1), 21-23 (2009).
  17. Hellberg, W., et al. Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract. Vet. Immunol. Immunopathol. 113 (1-2), 99-112 (2006).
  18. Schaffartzik, A., et al. Equine insect bite hypersensitivity: what do we know. Vet ImmunolImmunopathol. 147 (3-4), 113-126 (2012).
  19. Künzle, F., et al. IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses. J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54 (1), 40-47 (2007).
  20. Tahon, L., et al. In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction. Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).
  21. Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE. Vet ImmunolImmunopathol. 92 (1-2), 45-60 (2003).
  22. Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity. Vet ImmunolImmunopathol. 112 (3-4), 156-170 (2006).
  23. McAleese, S. M., et al. Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE. Vet ImmunolImmunopathol. 110 (1-2), 187-191 (2006).
  24. Ledin, A., et al. Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels. Vaccine. 24 (1), 66-74 (2006).
  25. Siraganian, R. P., Hook, W. A. Histamine release and assay methods for the study of human allergy. Manual of Clinical Immunology. , American Society for Microbiology. Washington, D. C. (1980).
  26. Neuberger, M. S., et al. A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function. Nature. 314 (6008), 268-270 (1985).
  27. Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line. The Journal of Biological Chemistry. 269 (30), 19300-19306 (1994).
  28. McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA. Immunogenetics. 1 (51), 878-881 (2000).
  29. Hongtu, Y. Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease. , The University of Sheffield. (2010).
  30. Sabban, S., et al. Towards a pan-anti-allergy vaccine. JIBTVA. 2 (2), 15-27 (2013).
  31. Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction. Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Equine IgEFc RI ReceptorRat Basophil Leukemia CellsMediator Release AssayBeta Hexosaminidase ReleaseAntigenic ChallengeAllergic ResponseEquine AllergyRBL 2H3 1 Cells

مقالات ذات صلة