يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تقييم خصائص الخلايا الجذعية في الإنسان خلايا سرطان المبيض عن طريق متعدد واحدة على أساس خلية المجالات فحوصات

9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52259

⸱

يناير 3, 2015

 ,  , 
1Department of Biomedicine, University Hospital Basel, 2Department of Internal Medicine II, University Hospital Tübingen

في هذه المقالة

ملخص

تستخدم فحوصات المجالات في المختبر بشكل شائع لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية. هنا نقارن المقايسات المفردة مع المجالات متعددة الخلايا. تعطي المقايسات القائمة على الخلية المفردة الأكثر صعوبة أو مكملات ميثيل السليلوز نتائج أكثر دقة بينما يمكن أن تتأثر المقايسات المستندة إلى خلايا متعددة التي يتم إجراؤها في وسط سائل بشكل كبير بكثافة الخلايا.

الملخص

تشير سنوات البحث

إلى أن سرطانات المبيض تحتوي على مزيج غير متجانس من الخلايا بما في ذلك مجموعة سكانية فرعية من ما يسمى ب "الخلايا الجذعية السرطانية" (CSCs) المسؤولة عن بدء الورم وصيانته والانتكاس بعد العلاجات الكيميائية التقليدية. لذلك يعد تحديد الخلايا الجذعية الدماغية السرطانية للمبيض هدفا مهما. من الطرق الشائعة الاستخدام لتقييم إمكانات CSC في المختبر اختبار الكرات التي يتم فيها طلاء الخلايا في ظل ظروف زراعة غير ملتصقة في وسط خال من المصل مكمل بعوامل النمو ويتم تسجيل تكوين الكرة بعد بضعة أيام. هنا ، نقوم بمراجعة البروتوكولات المتاحة حاليا لمقايسات مجالات سرطان المبيض البشري وإجراء تحليل جنبا إلى جنب بين المقايسات متعددة الخلايا شائعة الاستخدام ونظام أكثر دقة يعتمد على طلاء الخلية الواحدة. تشير نتائجنا إلى أنه يمكن استخدام كل من المقايسات متعددة الخلايا وكذلك المجالات القائمة على الخلية المفردة للتحقيق في تكوين الكرة في المختبر. تعد المقايسات المستندة إلى الخلية المفردة الأكثر صعوبة وتكلفة أكثر ملاءمة للتقييم الوظيفي للخلايا الفردية وتؤدي إلى نتائج أكثر دقة بشكل عام بينما يمكن أن تتأثر المقايسات المستندة إلى الخلايا المتعددة بشدة بكثافة الخلايا المطلية وتتطلب تجارب معايرة بالتحليل الحجمي مقدما. يمكن استخدام مكملات ميثيل السليلوز إلى المقايسات متعددة الخلايا بشكل فعال لتقليل القطع الأثرية الميكانيكية.

المقدمة

هناك أدلة متزايدة على أن سرطان المبيض يتكون من مخاليط غير متجانسة من الخلايا ويؤوي ما يسمى ب "الخلايا الجذعية السرطانية" (CSCs) المسؤولة عن بدء المرض والحفاظ عليه والانتكاس بعد العلاجات التقليدية السامة للخلايا1-3. لذلك ، فإن تطوير الاستراتيجيات الجزيئية التي تستهدف الخلايا الجذعية الدماغية المبيضية هو هدف مهم ويعد بتحسين علاج مرضى سرطان المبيض.

الشرط المسبق لفهم السمات الجزيئية ل CSCs هو عزلها الموثوق به عن غير CSCs. ومع ذلك ، يبدو تحديد CSCs المبيضية أمرا صعبا. بينما تم الإبلاغ عن تعبير CD133 ونشاط نازعة هيدروجين الألدهيد (ALDH)4،5 لتمييز CSCs المبيضية ، تشير بعض البيانات إلى أن هذه العلامات غير مستقرة6. باستمرار ، في سرطان المبيض ، بخلاف سرطان الثدي7 على سبيل المثال ، يرتبط التعبير عن ALDH1 بالنتيجةالإيجابية 8 والتعبير عن متغير علامة الخلايا الجذعية CD44 المقترح ليس له قيمة تنبؤية9. في الآونة الأخيرة ، أظهرنا أن التعبير عن بروتين الخلايا الجذعية الجنينية SOX2 يمنح جذعية لخلايا سرطان المبيض10 ويرتبط التعبير العالي SOX2 بسرطان المبيض والثدي العدوانيسريريا 11،12. لذلك ، نستخدم في هذا التقرير بنية مراسل فيروسي يحتوي على بروتين مضان أحمر (RFP) يتم التحكم في تعبيره بواسطة منطقة تنظيمية SOX2 ، كطريقة لعزل CSCs المبيض المفترض.

بحكم التعريف ، يمكن أن تتجدد الخلايا السرطانية الذاتية وتتمايز ، مما يؤدي إلى ظهور جميع أنواع الخلايا السرطانية. تحتاج مجموعات CSC المفترضة إلى التحليل في المقايسات الوظيفية التي يتم إجراؤها في الجسم الحي. لأسباب واضحة ، في الخلايا البشرية ، تقتصر هذه الاختبارات الوظيفية على فحوصات الطعم الغريب ، والتي تشمل في الغالب زرع الخلايا السرطانية البشرية في الفئران التي تعاني من ضعف المناعة10،13.

تم تقديم طريقة بديلة في المختبر من قبل برنت رينولدز وسام فايس اللذين أبلغا أولا عن ما يسمى بمقايسة الغلاف العصبي كمقايسة بديلة لتقييم الإمكانات الجذعية في الخلاياالعصبية 14. أكد دونتو وزملاؤه لاحقا استخدام هذا الاختبار لتقييم إمكانات الخلايا الجذعية في خلايا الثدي15،16. هنا ، تم طلاء الخلايا الثديية البشرية بأعداد مختلفة في وسط خال من المصل مكمل بعامل نمو البشرة (EGF) ، وعامل نمو الخلايا الليفية الأساسي (bFGF) ، و B-27 والهيبارين وتم زراعتها في ظروف غير ملتصقة لمدة سبعة إلى عشرة أيام قبل أن يتم تسجيل تكوين الكرة بواسطة الفحص المجهري. باتباع هذا البروتوكول مع بعض التعديلات في أعداد الخلايا ووسط النمو والمكملات الغذائية ، استكشفت عدة مجموعات إمكانات الخلايا الجذعية في المختبر من عدة أنواع من السرطان مثل أورام الثدي17 والدماغ18 والبنكرياس19 والقولون20. في سرطان المبيض ، أبلغنا مؤخرا عن جدوى فحص المجالات وقارنا نتائجه بتلك التي تم جمعها في نماذج xenograft الفئران في الجسم الحي 10. وجدنا أن الإفراط في التعبير عن بروتين الخلايا الجذعية SOX2 عزز كلا من تكوين المجال في المختبر وكذلك في الجسم الحي ورم خلايا سرطان المبيض البشري10. ومع ذلك ، كان تواتر الخلايا التي تبدأ الكرة أعلى من تواتر الخلايا البادئة للورم المقاسة في الجسم الحي10 مما يشير إلى أن مقايسة المجال قد تؤدي إلى نتائج إيجابية خاطئة لأسباب فنية أو ، بدلا من ذلك ، قد يكون الاختبار في الجسم الحي غير فعال ويؤدي إلى نتائج سلبية خاطئة.

في هذا التقرير ، نقوم بتحليل فحوصات مجالات المبيض متعددة الخلايا بمزيد من التفصيل ، ومراجعة البروتوكولات المختلفة المتاحة في الأدبيات ومقارنتها بفحص قائم على خلية واحدة. نوضح أن المقايسة المستندة إلى الخلية المفردة توفر نتائج أكثر دقة وقابلية للتكرار من المقايسات متعددة الخلايا ، والتي يمكن أن تتأثر بشكل كبير بكثافة الخلايا المطلية ما لم تتم إضافة ميثيل السليلوز إلى الثقافات لشل حركة الخلايا. ومع ذلك ، أيضا في المقايسات القائمة على الخلية المفردة ، لوحظ إمكانية بدء المجال في المختبر بتردد أعلى من إمكانات بدء الورم في الجسم الحي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. توليد OVCAR-3 خلايا سرطان المبيض الإنسان Transduced ستابلي مع Lentiviruses احتواء مراسل تعبيد SOX2 منطقة تنظيم

  1. توليد جزيئات lentiviral عليها بنقل خط خلية 293T التعبئة والتغليف HEK مع بناء مراسل الاعتراف المنطقة التنظيمية SOX2 كما هو موضح 10،21.
    ملاحظة: المراسل بناء مزيد يحتوي على نطاق زعزعة استقرار نظام الدرع ProteoTuner قبل البروتين tdTomato مضان. Shield1 يربط إلى المجال زعزعة الاستقرار وبالتالي منع proteasome وأن تتحلل البروتين مضان 22.
  2. تنبيغ OVCAR-3 الخلايا مع جزيئات lentiviral على مدى فترة زمنية من 24 ساعة. بعد ذلك، إزالة طاف الفيروسي وغسل الخلايا مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ومثقف في المتوسط ​​كاملة (RPMI تستكمل مع 10٪ FBS، و 100 U / البنسلين مل، 100 ميكروغرام / مل الستربتومايسين).
  3. بعد 48 ساعة، 10 ميكروغرام / مل بوروأضيفت mycin إلى الثقافات والحفاظ لمدة 5 أيام للسماح للاختيار من خلايا transduced بشكل صحيح.

2. إعداد الفرز خلية والتصفيحات

  1. إضافة Shield1 في 1: 1،000 التخفيف 24 ساعة قبل الفرز الخلية. استخدام transduced ستابلي OVCAR-3 خلايا بدون علاج Shield1 والضوابط السلبية (الشكل 1). وسائل الإعلام نضح من القارورة، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني 1X ويعرض للتريبسين الخلايا مع 0.05٪ التربسين-EDTA لمدة 3 دقائق.
  2. وقف التربسين باستخدام المتوسطة كاملة (انظر أعلاه)، عد أعداد الخلايا، والخلايا الطرد المركزي في 300 x ج في RT (15-25 درجة مئوية) لمدة 5 دقائق.
  3. طاف صب وResuspend الخلايا بعناية في 0،5-1 مل PBS العقيمة.
  4. استخدام 40 ميكرون الغطاء مصفاة الخلية مرشح للحصول على تعليق وحيد الخلية.
  5. ضبط عدد الخلايا إلى 5 مليون خلية لكل مليلتر.
  6. إعداد-مرفق منخفض لوحات 96-جيدا جدا مع 100 ميكرولتر المجالات المتوسطة (MEGM تستكمل مع عوامل النمو، السيتوكينات، والمكملات الغذائية،B-27، heparine الصوديوم. أو DMEM / F12 تستكمل مع عوامل النمو، السيتوكينات، والمكملات الغذائية، B-27، heparine الصوديوم مع أو بدون إضافة 1٪ ميثيل، انظر أيضا الجدول 1). اختياريا إضافة المضادات الحيوية إلى متوسطة بتركيز 100 U / مل البنسلين و 100 ميكروغرام / مل الستربتومايسين للحد من مخاطر التلوث ممكن.
  7. نوع طلب تقديم العروض + والخلايا RFP- إلى إعداد لوحات 96-جيدا من فوق (1)، خلية لكل بئر (وحيد خلية القاعدة مجالات الفحص) و 100 خلايا لكل بئر (متعدد المجالات خلية القاعدة فحص)، على التوالي. أداء فارز خلية نوع على المتاحة تجاريا (انظر المواد) باستخدام طريقة واحدة الخلية، وترتيب الإعداد: 100 μ فوهة، غمد ضغط 20 رطل، والعائد قناع 0، قناع نقاء 32، قناع المرحلة 16.
  8. تقييم كفاءة الطلاء بتسجيله مجهريا الآبار التي تحتوي على الخلايا (للمقايسة على أساس وحيد الخلية) وعن طريق عد الأرقام خلية في الآبار الفردية (للفحص متعددة القائم على الخلية؛ الشكل 2 ).
  9. احتضان الخلايا تحت الظروف القياسية في المجالات المتوسطة (للتكوين راجع الخطوة 2.6) عند 37 درجة مئوية وCO 2 5٪. الملحق اليومي bFGF (20 نانوغرام / مل)، وEGF (20 نانوغرام / مل).
  10. بعد أسبوع واحد، عد الأرقام من المجالات الناشئة الورم باستخدام مجهر القياسية مع 4X أو 10X التكبير ومضان المجهر للكشف عن إشارة مضان من النظام مراسل متكامل. عدد المجالات التي يبلغ قطرها تتجاوز 100 ميكرون كما المجالات "كبيرة"، والمجالات التي يبلغ قطرها 50-100 ميكرون كما المجالات "صغيرة" (الشكل 3). تأكد من أن كنت تعول المجالات حقيقية وليست الخلية مجموعات.
    ملاحظة: في المقايسات القائم على خلية واحدة تشكيل المجال هو أسهل ليسجل مجهريا بعد 10 (مقابل 7) أيام من الثقافة.
  11. حساب نسبة الخلايا المكونة المجال في RFP + والخلايا RFP- على التوالي في المقايسات القائم على خلية واحدة (واحد لوحة 96-جيدا لكل تجربة فردية) أو متعددة الخلية بامجالات المقايسات سد (بئر واحدة لكل تجربة فردية) على النحو الذي عرضه شو وآخرون (16).
    ملاحظة: نسبة المجال تشكيل الخلايا (٪) = (عدد من المجالات) / (عدد الخلايا المصنف) × 100

3. الركض المسلسل من المجالات

  1. وضع محتوى كل بئر في أنبوب معقم مناسب وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة في RT. لخلية القاعدة متعددة المجالات المقايسات، وجمع معا المجالات من بئر واحد. يغسل جيدا 3-5 مرات مع برنامج تلفزيوني وأجهزة الطرد المركزي 2 دقيقة لفترة أطول. لالقائم على خلية واحدة المجالات المقايسات، وجمع المجالات الفردية. نظرا لانخفاض عدد الخلايا، استخدام 1.5 مل أنابيب الطرد المركزي وغسل الخطوات.
  2. إزالة طاف و resuspend بيليه في 200 ميكرولتر من 0.05٪ التربسين-EDTA.
  3. من أجل تحقيق فصل الخلية الأمثل، واحتضان تعليق خلية عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق في شاكر لينة. تحسين trypsinization الوقت لخط الخلية لانخفاض معدل موت الخلايا: إذا لم كبيرةمجالات هي يسحن مرئية بلطف باستخدام ماصة غيض 100 ميكرولتر. في حالة مجالات كبيرة لا تزال موجودة، واحتضان مع التربسين 3 دقائق أخرى ثم انتقل إلى الخطوة سحن. في حالة واحدة المقايسات خلية مقرها تأكد لتحسين العائد الوقت لخلية الأمثل للخلايا الحية خلال الخطوة trypsinization.
  4. لإبطال نشاط التربسين، إضافة 500 ميكرولتر المتوسطة كاملة وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة، في حالة المقايسات خلية واحدة، الطرد المركزي لمدة 2 دقيقة إضافية.
  5. إزالة الخلايا طاف و resuspend بعناية في المجالات المتوسطة.
  6. استخدام 40 ميكرون الغطاء مصفاة الخلية مرشح للحصول على تعليق وحيد الخلية.
  7. في حالة استخدام RFP + والخلايا RFP- في المقايسات bassed خلية متعددة، وتقييم نسبة الخلايا الفلورسنت في كل إعادة تعليق جيدا بعد عن طريق تدفق عداد الكريات التحليل.
  8. لفحوصات replating المسلسل من الخلايا واحد، والبذور 1 خلية لكل بئر في فائقة مرفق منخفض لوحة 96-جيدا جديدة أعدت على النحو المفصل أعلاه. من مجال واحد على حدة، البذور حوالي 20 بئرا الفردية. لفحوصات replating من خلية القاعدة الأجواء الأولية متعددة، وخلايا البذور التي تم الحصول عليها من بئر واحدة من المجالات الرئيسية في جديدة لوحة 96 جيدا والعد أعداد الخلايا اليوم التالي بواسطة المجهر.
  9. تقييم نسبة الخلايا المكونة المجال في المجالات الثانوية فحوصات باستخدام الصيغة هو موضح في الخطوة 2.11.

4. تحليل النتيجة

  1. تحليل النتائج من التجارب التي أجريت في يثلث مستقلة واستخدام الطلاب على الوجهين في اختبار t لتحليل القيم وزعت بشكل طبيعي وغير ذلك مان ويتني-اختبارات التحليل الإحصائي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في المجالات المقايسات التقليدية، وقدم ما يقرب من 40٪ من RFP + OVCAR-3 خلايا مقابل 20٪ من خلايا RFP- الارتفاع إلى مجال الأورام الفردية في المجالات الأساسي فحص (الشكل 4A). وعلاوة على ذلك، كانت المجالات التي شكلتها RFP + خلايا أكبر حجما من تلك التي شكلتها خلايا RFP-.

عندما مطلي في المقايسات القائم على خلية واحدة، شكل خلايا RFP + أيضا المزيد من المجالات من خلايا RFP-، تؤكد النتائج أعلاه. ومع ذلك، كان...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

المجالات الثقافات هي طريقة تستخدم على نطاق واسع لفحص سرطان الخلايا الجذعية إمكانيات وإثراء للخلايا الجذعية التي تشبه في مجموعة واسعة من الخلايا السرطانية البشرية 15،25،26. في ظل هذه الظروف والثقافة، ومن المتوقع أن يفرق والخضوع في النهاية موت الخلايا الخلايا السرطانية التي تفتقر إلى القدرة التجديد الذاتي. على الرغم من أنها قد تشكل في البداية مجموعات الخلايا أو حتى المجالات الورم خصوصا في المقايسات الابتدائية، فهي ليست قادرة على الحفاظ على القدرة على تشكيل المجال على repl...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذه الدراسة بمنحة من مؤسسة بادن فورتمبيرغ (برنامج الخلايا الجذعية البالغة II) الممنوحة إلى C.L. نشكر الدكتورة مارتينا كونانتز على المدخلات النقدية ومراجعة المخطوطة. نشكر إيمانويل تراونيكر وتوني كريبس من مرفق DBM FACS (مستشفى بازل الجامعي) للمساعدة في فرز FACS.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
لوحة منخفضة التعلقCorning3474
MEGMLonzaCC-3151
الأنسولينLonzaCC-4136SingleQuots & trade ؛ كيت
هيدروكورتيزونلونزاCC-4136SingleQuots & trade ؛ كيت
EGFLonzaCC-4136SingleQuots & trade ؛ مجموعة
EGFSigmaE9644التركيز النهائي: 20 نانوغرام / مل
FGFPeproTech100-18Bالتركيز النهائي: 20 نانوغرام / مل
B-27Invitrogen / Gibco17504-044التركيز النهائي: 1X
Heparin-Natrium-25000 IERatiopharmN68542.02التخفيف 1: 1،000
القلم / البكتيرياGibco15140-122
FCSGibco10500-064
RPMI 1640Gibco21875-034
Trypsin-EDTAGibco25300-054
Dulbecco ' s PBS (1X)Gibco14190-094
Shield1Clontech632189التخفيف 1: 1،000
DMEM / F12Gibco21041-025
DMEM / F12 (مسحوق)Gibco42400-010
ميثيل السليلوزSigmaM0387
Puromycin ثنائي هيدروكلوريدApplichemA2856
خلية فارزBDAria III فارز الخلايا
محلل FACSBDAccuri c6 مقياس التدفق
الخلوي مجهرأوليمبوسIX50 أوزوريس

المراجع

  1. Pardal, R., Clarke, M. F., Morrison, S. J. Applying the principles of stem-cell biology to cancer. Nat Rev Cancer. 3 (12), 895-902 (2003).
  2. Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., Weissman, I. L. Stem cells, cancer, and cancer stem cells. Nature. 414 (6859), 105-111 (2001).
  3. Ahmed, N., Abubaker, K., Findlay, J. K. Ovarian cancer stem cells: Molecular concepts and relevance as therapeutic targets. Mol Aspects Med. 39, 110-125 (2014).
  4. Silva, I. A., et al. Aldehyde dehydrogenase in combination with CD133 defines angiogenic ovarian cancer stem cells that portend poor patient survival. Cancer Res. 71 (11), 3991-4001 (2011).
  5. Kryczek, I., et al. Expression of aldehyde dehydrogenase and CD133 defines ovarian cancer stem cells. Int J Cancer. 130 (1), 29-39 (2012).
  6. Stewart, J. M., et al. Phenotypic heterogeneity and instability of human ovarian tumor-initiating cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (16), 6468-6473 (2011).
  7. Ginestier, C., et al. ALDH1 is a marker of normal and malignant human mammary stem cells and a predictor of poor clinical outcome. Cell Stem Cell. 1 (5), 555-567 (2007).
  8. Chang, B., et al. ALDH1 expression correlates with favorable prognosis in ovarian cancers. Mod Pathol. 22 (6), 817-823 (2009).
  9. Cannistra, S. A., et al. CD44 variant expression is a common feature of epithelial ovarian cancer: lack of association with standard prognostic factors. J Clin Oncol. 13 (8), 1912-1921 (1995).
  10. Bareiss, P. M., et al. SOX2 expression associates with stem cell state in human ovarian carcinoma. Cancer Res. 73 (17), 5544-5555 (2013).
  11. Pham, D. L., et al. SOX2 expression and prognostic significance in ovarian carcinoma. Int J Gynecol Pathol. 32 (4), 358-367 (2013).
  12. Lengerke, C., et al. Expression of the embryonic stem cell marker SOX2 in early-stage breast carcinoma. BMC Cancer. 11, 42(2011).
  13. Lapidot, T., et al. A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice. Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).
  14. Reynolds, B. A., Weiss, S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).
  15. Dontu, G., et al. In vitro propagation and transcriptional profiling of human mammary stem/progenitor cells. Genes Dev. 17 (10), 1253-1270 (2003).
  16. Shaw, F. L., et al. A detailed mammosphere assay protocol for the quantification of breast stem cell activity. J Mammary Gland Biol Neoplasia. 17 (2), 111-117 (2012).
  17. Leis, O., et al. Sox2 expression in breast tumours and activation in breast cancer stem cells. Oncogene. 31 (11), 1354-1365 (2012).
  18. Higgins, D. M., et al. Brain tumor stem cell multipotency correlates with nanog expression and extent of passaging in human glioblastoma xenografts. Oncotarget. 4 (5), 792-801 (2013).
  19. Wang, Y. J., Bailey, J. M., Rovira, M., Leach, S. D. Sphere-forming assays for assessment of benign and malignant pancreatic stem cells. Methods Mol Biol. 980, 281-290 (2013).
  20. Li, Y. F., Xiao, B., Tu, S. F., Wang, Y. Y., Zhang, X. L. Cultivation and identification of colon cancer stem cell-derived spheres from the Colo205 cell line. Braz J Med Biol Res. 45 (3), 197-204 (2012).
  21. Wu, F., et al. Identification of two novel phenotypically distinct breast cancer cell subsets based on Sox2 transcription activity. Cell Signal. 24 (11), 1989-1998 (2012).
  22. Banaszynski, L. A., Chen, L. C., Maynard-Smith, L. A., Ooi, A. G., Wandless, T. J. A rapid, reversible, and tunable method to regulate protein function in living cells using synthetic small molecules. Cell. 126 (5), 995-1004 (2006).
  23. Kawase, Y., Yanagi, Y., Takato, T., Fujimoto, M., Okochi, H. Characterization of multipotent adult stem cells from the skin: transforming growth factor-beta (TGF-beta) facilitates cell growth. Exp Cell Res. 295 (1), 194-203 (2004).
  24. Walia, V., et al. Loss of breast epithelial marker hCLCA2 promotes epithelial-to-mesenchymal transition and indicates higher risk of metastasis. Oncogene. 31 (17), 2237-2246 (2012).
  25. Leung, E. L., et al. Non-small cell lung cancer cells expressing CD44 are enriched for stem cell-like properties. PLoS One. 5 (11), e14062(2010).
  26. Bertolini, G., et al. Highly tumorigenic lung cancer CD133+ cells display stem-like features and are spared by cisplatin treatment. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (38), 16281-16286 (2009).
  27. Ma, L., Lai, D., Liu, T., Cheng, W., Guo, L. Cancer stem-like cells can be isolated with drug selection in human ovarian cancer cell line SKOV3. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 42 (9), 593-602 (2010).
  28. Wang, H., Zhang, Y., Du, Y. Ovarian and breast cancer spheres are similar in transcriptomic features and sensitive to fenretinide). Biomed Res Int. 2013, 510905(2013).
  29. Du, Y. R., et al. Effects and mechanisms of anti-CD44 monoclonal antibody A3D8 on proliferation and apoptosis of sphere-forming cells with stemness from human ovarian cancer. Int J Gynecol Cancer. 23 (8), 1367-1375 (2013).
  30. Xiang, T., et al. Interleukin-17 produced by tumor microenvironment promotes self-renewal of CD133 cancer stem-like cells in ovarian cancer. Oncogene. , (2013).
  31. Liu, T., Cheng, W., Lai, D., Huang, Y., Guo, L. Characterization of primary ovarian cancer cells in different culture systems. Oncol Rep. 23 (5), 1277-1284 (2010).
  32. Soritau, O., et al. Enhanced chemoresistance and tumor sphere formation as a laboratory model for peritoneal micrometastasis in epithelial ovarian cancer. Rom J Morphol Embryol. 51 (2), 259-264 (2010).
  33. Shi, M. F., et al. Identification of cancer stem cell-like cells from human epithelial ovarian carcinoma cell line. Cell Mol Life Sci. 67 (22), 3915-3925 (2010).
  34. Zhang, S., et al. Identification and characterization of ovarian cancer-initiating cells from primary human tumors. Cancer Res. 68 (11), 4311-4320 (2008).
  35. Liang, D., et al. The hypoxic microenvironment upgrades stem-like properties of ovarian cancer cells. BMC Cancer. 12, 201(2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

SOX2
تقييم خصائص الخلايا الجذعية في الإنسان خلايا سرطان المبيض عن طريق متعدد واحدة على أساس خلية المجالات فحوصات
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.