مقالة منهجية

تقييم خصائص الخلايا الجذعية في الإنسان خلايا سرطان المبيض عن طريق متعدد واحدة على أساس خلية المجالات فحوصات

DOI:

10.3791/52259

⸱

يناير 3, 2015

 ,  , 
1Department of Biomedicine, University Hospital Basel, 2Department of Internal Medicine II, University Hospital Tübingen

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تستخدم فحوصات المجالات في المختبر بشكل شائع لتحديد الخلايا الجذعية السرطانية. هنا نقارن المقايسات المفردة مع المجالات متعددة الخلايا. تعطي المقايسات القائمة على الخلية المفردة الأكثر صعوبة أو مكملات ميثيل السليلوز نتائج أكثر دقة بينما يمكن أن تتأثر المقايسات المستندة إلى خلايا متعددة التي يتم إجراؤها في وسط سائل بشكل كبير بكثافة الخلايا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
تشير سنوات البحث

إلى أن سرطانات المبيض تحتوي على مزيج غير متجانس من الخلايا بما في ذلك مجموعة سكانية فرعية من ما يسمى ب "الخلايا الجذعية السرطانية" (CSCs) المسؤولة عن بدء الورم وصيانته والانتكاس بعد العلاجات الكيميائية التقليدية. لذلك يعد تحديد الخلايا الجذعية الدماغية السرطانية للمبيض هدفا مهما. من الطرق الشائعة الاستخدام لتقييم إمكانات CSC في المختبر اختبار الكرات التي يتم فيها طلاء الخلايا في ظل ظروف زراعة غير ملتصقة في وسط خال من المصل مكمل بعوامل النمو ويتم تسجيل تكوين الكرة بعد بضعة أيام. هنا ، نقوم بمراجعة البروتوكولات المتاحة حاليا لمقايسات مجالات سرطان المبيض البشري وإجراء تحليل جنبا إلى جنب بين المقايسات متعددة الخلايا شائعة الاستخدام ونظام أكثر دقة يعتمد على طلاء الخلية الواحدة. تشير نتائجنا إلى أنه يمكن استخدام كل من المقايسات متعددة الخلايا وكذلك المجالات القائمة على الخلية المفردة للتحقيق في تكوين الكرة في المختبر. تعد المقايسات المستندة إلى الخلية المفردة الأكثر صعوبة وتكلفة أكثر ملاءمة للتقييم الوظيفي للخلايا الفردية وتؤدي إلى نتائج أكثر دقة بشكل عام بينما يمكن أن تتأثر المقايسات المستندة إلى الخلايا المتعددة بشدة بكثافة الخلايا المطلية وتتطلب تجارب معايرة بالتحليل الحجمي مقدما. يمكن استخدام مكملات ميثيل السليلوز إلى المقايسات متعددة الخلايا بشكل فعال لتقليل القطع الأثرية الميكانيكية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك أدلة متزايدة على أن سرطان المبيض يتكون من مخاليط غير متجانسة من الخلايا ويؤوي ما يسمى ب "الخلايا الجذعية السرطانية" (CSCs) المسؤولة عن بدء المرض والحفاظ عليه والانتكاس بعد العلاجات التقليدية السامة للخلايا1-3. لذلك ، فإن تطوير الاستراتيجيات الجزيئية التي تستهدف الخلايا الجذعية الدماغية المبيضية هو هدف مهم ويعد بتحسين علاج مرضى سرطان المبيض.

الشرط المسبق لفهم السمات الجزيئية ل CSCs هو عزلها الموثوق به عن غير CSCs. ومع ذلك ، يبدو تحديد CSCs المبيضية أمرا صعبا. بينما تم الإبلاغ عن تعبير CD133 ونشاط نازعة هيدروجين الألدهيد (ALDH)4،5 لتمييز CSCs المبيضية ، تشير بعض البيانات إلى أن هذه العلامات غير مستقرة6

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. توليد OVCAR-3 خلايا سرطان المبيض الإنسان Transduced ستابلي مع Lentiviruses احتواء مراسل تعبيد SOX2 منطقة تنظيم

  1. توليد جزيئات lentiviral عليها بنقل خط خلية 293T التعبئة والتغليف HEK مع بناء مراسل الاعتراف المنطقة التنظيمية SOX2 كما هو موضح 10،21.
    ملاحظة: المراسل بناء مزيد يحتوي على نطاق زعزعة استقرار نظام الدرع ProteoTuner قبل البروتين tdTomato مضان. Shield1 يربط إلى المجال زعزعة الاستقرار وبالتالي منع proteasome وأن تتحلل البروتين مضان 22.
  2. ت....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في المجالات المقايسات التقليدية، وقدم ما يقرب من 40٪ من RFP + OVCAR-3 خلايا مقابل 20٪ من خلايا RFP- الارتفاع إلى مجال الأورام الفردية في المجالات الأساسي فحص (الشكل 4A). وعلاوة على ذلك، كانت المجالات التي شكلتها RFP + خلايا أكبر حجما من تلك التي شكلتها خلايا RFP-.

عندما مطلي في المقايسات القائم على خلية واحدة، شكل خلايا RFP + أيضا المزيد من المجالات من خلايا RFP-، تؤكد النتائج أعلاه. ومع ذلك، كان.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المجالات الثقافات هي طريقة تستخدم على نطاق واسع لفحص سرطان الخلايا الجذعية إمكانيات وإثراء للخلايا الجذعية التي تشبه في مجموعة واسعة من الخلايا السرطانية البشرية 15،25،26. في ظل هذه الظروف والثقافة، ومن المتوقع أن يفرق والخضوع في النهاية موت الخلايا الخلايا السرطانية التي تفتقر إلى القدرة التجديد الذاتي. على الرغم من أنها قد تشكل في البداية مجموعات الخلايا أو حتى المجالات الورم خصوصا في المقايسات الابتدائية، فهي ليست قادرة على الحفاظ على القدرة على تشكيل المجال على repl.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذه الدراسة بمنحة من مؤسسة بادن فورتمبيرغ (برنامج الخلايا الجذعية البالغة II) الممنوحة إلى C.L. نشكر الدكتورة مارتينا كونانتز على المدخلات النقدية ومراجعة المخطوطة. نشكر إيمانويل تراونيكر وتوني كريبس من مرفق DBM FACS (مستشفى بازل الجامعي) للمساعدة في فرز FACS.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
لوحة منخفضة التعلقCorning3474
MEGMLonzaCC-3151
الأنسولينLonzaCC-4136SingleQuots & trade ؛ كيت
هيدروكورتيزونلونزاCC-4136SingleQuots & trade ؛ كيت
EGFLonzaCC-4136SingleQuots & trade ؛ مجموعة
EGFSigmaE9644التركيز النهائي: 20 نانوغرام / مل
FGFPeproTech100-18Bالتركيز النهائي: 20 نانوغرام / مل
B-27Invitrogen / Gibco17504-044التركيز النهائي: 1X
Heparin-Natrium-25000 IERatiopharmN68542.02التخفيف 1: 1،000
القلم / البكتيرياGibco15140-122
FCSGibco10500-064
RPMI 1640Gibco21875-034
Trypsin-EDTAGibco25300-054
Dulbecco ' s PBS (1X)Gibco14190-094
Shield1Clontech632189التخفيف 1: 1،000
DMEM / F12Gibco21041-025
DMEM / F12 (مسحوق)Gibco42400-010
ميثيل السليلوزSigmaM0387
Puromycin ثنائي هيدروكلوريدApplichemA2856
خلية فارزBDAria III فارز الخلايا
محلل FACSBDAccuri c6 مقياس التدفق
الخلوي مجهرأوليمبوسIX50 أوزوريس

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pardal, R., Clarke, M. F., Morrison, S. J. Applying the principles of stem-cell biology to cancer. Nat Rev Cancer. 3 (12), 895-902 (2003).
  2. Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., Weissman, I. L. Stem cells, cancer, and cancer stem cells. Nature. 414 (6859), 105-111 (2001).
  3. Ahmed, ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

SOX2

مقالات ذات صلة