مقالة منهجية

إعداد وتوصيف SDF-1α-الشيتوزان-ديكستران سلفات النانوية

DOI:

10.3791/52323

⸱

يناير 22, 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital and Harvard Medical School, 2Laboratory for Biomaterials and Drug Delivery, Department of Anesthesiology, Division of Critical Care, Boston Children's Hospital

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من هذا البروتوكول هو دمج SDF-1α ، وهو عامل موجه للخلايا الجذعية ، في الجسيمات النانوية لكبريتات الكبريتات والكيتوزان. يتم قياس الجسيمات الناتجة لحجمها وإمكانات زيتا ، بالإضافة إلى المحتوى والنشاط ومعدل الإطلاق في المختبر ل SDF-1α من الجسيمات النانوية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الشيتوزان (CS) وكبريتات ديكستران (DS) عبارة عن عديد السكاريد المشحون (الجليكان) ، والتي تشكل جزيئات نانوية قائمة على مركب متعدد الإلكتروليت عند مزجها في ظل ظروف مناسبة. تعتبر جزيئات الجليكان النانوية ناقلات مفيدة لعوامل البروتين ، مما يسهل توصيل البروتينات في الجسم الحي وتحافظ على الاحتفاظ بها في الأنسجة المستهدفة. تعتبر مجمعات البولي إلكتروليت الجليكان مثالية أيضا لتوصيل البروتين ، حيث يتم الدمج في محلول مائي ، مما يقلل من احتمالية تعطيل البروتينات. تلتصق البروتينات ذات موقع ربط الهيبارين بكبريتات الديكستران بسهولة ، وبالتالي يتم تثبيتها بواسطة الربط. هذه الجسيمات هي أيضا أقل التهابا وسمية عند تسليمها في الجسم الحي. في البروتوكول الموضح أدناه ، يتم خلط SDF-1α (العامل المشتق من الخلايا اللحمية -1α) ، وهو عامل موجه للخلايا الجذعية ، أولا وتحضنه بكبريتات ديكستران. يضاف الشيتوزان إلى الخليط لتشكيل مجمعات متعددة الكهارل ، تليها كبريتات الزنك لتثبيت المجمعات بجسور الزنك. يتم قياس جزيئات SDF-1α-DS-CS الناتجة من حيث الحجم (القطر) والشحنة السطحية (إمكانات زيتا). يتم تحديد كمية SDF-1α المدمجة ، متبوعة بقياسات معدل إطلاقها في المختبر ونشاطها الكيميائي في شكل مرتبط بالجسيمات.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كبريتات ديكستران (DS) والشيتوزان (CS) هي السكريات مع عدة مجموعات استبداله سلفات سالبة الشحنة (في DS)، أو مجموعات أمين موجبة الشحنة (deacetylated CS). عندما مختلطة في محلول مائي، والسكريات اثنين تشكل المجمعات متضاعف الكتروليتي من خلال التفاعلات كهرباء. المجمعات الناتجة قد شكل المجاميع الكبيرة التي سيتم فصل-التخلص من محلول مائي (رواسب)، أو الجسيمات الصغيرة التي هي المياه التشتت (الغروية). الظروف الخاصة التي تساهم في هذه النتائج وقد تم دراسة على نطاق واسع، كما تم تلخيص وتوضيح بالتفصيل في استعراض حديث 1. ومن بين هذه الشروط، واثنين من المتطلبات الأساسية لإنتاج جزيئات الماء تبعثر هي يجب أن 1) لديهم البوليمرات اتهم معاكس مختلفة إلى حد كبير الكتلة المولية. و 2) أن تكون مختلطة في نسبة غير متكافئة. هذه الظروف ستسمح للقطاعات البوليمرية المعقد المسؤول محايد الناتجة عن تهمةتحييد لفصل وتشكل جوهر الجسيمات، والبوليمر الزائد لتشكيل الغلاف الخارجي 1. المقصود من تلك الجسيمات غليكان الموصوفة في هذا البروتوكول للتسليم الرئوي، وتهدف إلى أن تكون صافية سالبة الشحنة، وذات أبعاد نانومتر. التهمة سطح السلبي يقلل من احتمال امتصاص الخلايا للجسيمات 2،3. الجسيمات البعد نانومتر تسهيل المرور عبر الممرات الهوائية البعيدة. لتحقيق هذا الهدف، ومقدار DS المستخدمة في هذا المستحضر هو ما يزيد من CS (نسبة الوزن 3: 1)؛ وعالية الوزن الجزيئي DS (الوزن المتوسط ​​MW 500،000) ومنخفضة الوزن الجزيئي CS (المدى MW 50-190 كيلو دالتون، 75-85٪ deacetylated) وتستخدم.

SDF-1α عامل صاروخ موجه الخلايا الجذعية، والذي يمارس وظيفة صاروخ موجه من خلال نشاطها الكيميائي. SDF-1α يلعب دورا هاما في صاروخ موجه وصيانة الخلايا الجذعية المكونة للدم في نخاع العظام، وتوظيف PROGEخلايا nitor إلى الأنسجة الطرفية لإصلاح إصابة 4،5. SDF-1α له موقع ملزم الهيبارين في تسلسل البروتين، مما يسمح للبروتين لربط الهيبارين / كبريتات heparan، dimers النموذج، تكون محمية من البروتيني (CD26 / DPPIV) تعطيل، وتتفاعل مع الخلايا المستهدفة من خلال مستقبلات سطح الخلية 6-8. DS له خصائص هيكلية مماثلة الهيبارين / كبريتات heparan. وبالتالي فإن الربط من قوات الدفاع الذاتى-1α لDS تكون مماثلة لتلك التي بروابط لها البوليمرية الطبيعية.

في بروتوكول التالية، ونحن تصف إعداد النانوية SDF-1α-DS-CS. وتمثل الإجراءات احدة من الصيغ التي تم دراستها سابقا 9. ويتم تكييف البروتوكول في الأصل من التحقيق النانوية VEGF-DS-CS 10. ووصف إعداد نطاق ضيق، والتي يمكن زيادتها بسهولة مع حلول الأسهم نفسها وظروف التحضير. بعد التحضير، وتتميز الجزيئات بذ فحص حجمها، وإمكانات زيتا ومدى التأسيس SDF-1α، في المختبر الافراج عن الوقت، ونشاط دمج قوات الدفاع الذاتى-1α.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد SDF-1α غليكان النانوية

ونظرا لغرض في الجسم الحي التسليم، وتعقيم جميع الحاويات، الماصات، ونصائح المستخدمة في إعداد.

  1. إعداد الحلول الأسهم التالية في عالى النقاء المياه: 1٪ كبريتات ديكستران. 1 M هيدروكسيد الصوديوم (العقيمة التي تمت تصفيتها مع غشاء PES)؛ 0.1٪ الشيتوزان في 0.2٪ حمض الخليك الجليدي (فلتر من خلال 0.8 و 0.22 ميكرون مرشحات على التوالي، وضبط درجة الحموضة إلى 5.5 مع هيدروكسيد الصوديوم بعد ذلك)؛ 0.1 M ZnSO 4؛ 15٪ مانيتول، و0.92 ملغ / مل SDF-1α (المخزنة في aliquots في 80 ° C، والاحتفاظ بها في 4 درجات مئوية إذابة مرة واحدة).
  2. تعقيم حلول الأوراق المالية من خلال 0.22 ميكرون أغشية الترشيح. تقييم مستويات الذيفان الداخلي في حل استعداد مع الليمول خلية أميبية الشكل المحللة (LAL) هلام تجلط الفحص. تأكد من أن مستويات هي <0.06 EU / مل.
  3. إضافة 0.18 مل عالى النقاء المياه للكوب 1.5 مل قارورة تحتوي على شريط مغناطيسي. ضبط سرعة ضجة في 800 دورة في الدقيقة. إضافة 0.1 مل 1٪كبريتات ديكستران وتحرك المكونات لمدة 2 دقيقة. إضافة 0.08 ملغ SDF-1α (0.087 مل من 0.92 ملغ / مل SDF-1α الحل) ويقلب لمدة 20 دقيقة.
  4. إضافة 0.33 مل 0.1٪ الشيتوزان قطرة قطرة ويقلب لمدة 5 دقائق. تغيير السرعة ضجة إلى أقصى حد وإضافة 0.1 مل 0.1 M ZnSO 4 ببطء مع حقنة 0.1 مل (أكثر من 1 دقيقة).
  5. العودة سرعة ضجة إلى 800 دورة في الدقيقة ويقلب لمدة 30 دقيقة. إضافة 0.4 مل 15٪ مانيتول ويقلب لمدة 5 دقائق. نقل خليط التفاعل إلى أنبوب 1.5 مل microfuge. الطرد المركزي في 16،000 x ج في 4 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
    ملاحظة: إن وجود مانيتول يسهل إعادة تعليق من الجسيمات بعد الطرد المركزي. اعتمادا على الاكتناز من بيليه، يمكن أن تختلف تركيز مانيتول من 0٪ إلى 5٪. إعادة تعليق كامل للجسيمات بعد كل الطرد المركزي أمر بالغ الأهمية لتجنب المجاميع في تعليق النهائي.
  6. نضح طاف واستخدام ماصة لإزالة آخر قطرة من السائل ببطء. إضافة 0.2 مل 5٪ مانيتول. تعليق بيليه مع 0.5 مل، 29 G نيحقنة DLE. إضافة 1 مل 5٪ مانيتول. أجهزة الطرد المركزي في 16،000 x ج لمدة 15 دقيقة.
  7. كرر الخطوة 1.6.
  8. نضح طاف. Resuspend وبيليه في 0.2 مل 5٪ مانيتول. تخزين تعليق الجسيمات في 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: تعليق الجسيمات يمكن أيضا تخزينها في المجمد -80 ° C أو مجفف بالتجميد. بما في ذلك 5٪ مانيتول في تعليق ضروري لمنع تجميع الجسيمات بعد تجميد والذوبان أو بعد تجفيد والإماهة. يمكن إزالتها مانيتول بواسطة الطرد المركزي للتعليق بعد التخزين.

2. قياس حجم الجسيمات وزيتا المحتملة

ويتم تحليل حجم الجسيمات وزيتا المحتملة من قبل ديناميكية تشتت الضوء وتشتت الضوء الكهربي، على التوالي، مع محلل الجسيمات هو مبين في قائمة المواد.

  1. إعداد المعلمات التالية لقياس حجم الجسيمات: مرات تراكم: 70. كرر مرات: 4؛ درجة الحرارة: 25 ° C.مخفف: المياه؛ كثافة التعديل: السيارات.
  2. تمييع عينة SDF-1α-DS-CS مع الماء (التخفيف 10 أضعاف). تحميل 100 ميكرولتر من العينة إلى كوفيت الأشعة فوق البنفسجية يمكن التخلص منها مثل كفيت إيبندورف. إدراج كفيت في حامل الخلية. انتظر لتعديل كثافة للوصول إلى "الأمثل" (~ 10،000 من القانون الجنائي). بدء الحصول على البيانات.
  3. بعد الانتهاء من القياس، تسجيل نتائج cumulants من قطر (نانومتر) ومؤشر التشتت المتعدد. متوسط ​​النتائج المتحصل عليها من كل من القراءات المتكررة 4 وحساب الانحراف المعياري.
  4. تحميل 500 ميكرولتر من 10 أضعاف المخفف عينة الجسيمات إلى خلية تدفق لقياس المحتملة زيتا. إعداد المعلمات التالية لقياس: مرات تراكم: 10؛ كرر مرات: 5؛ درجة الحرارة: 25 ° C. مخفف: المياه؛ كثافة التعديل: السيارات. تسجيل نتائج إمكانات زيتا (بالسيارات). متوسط ​​النتيجة التي حصل عليها من كل من قراءات متكررة 5، وحساب deviatio القياسيةن.

3. الكمي لقوات الدفاع الذاتى-1α في الجسيمات

  1. تمييع مجانا شكل قوات الدفاع الذاتى-1α لتركيزات من 0.01، 0.02، 0.03، 0.04، و 0.05 ملغ / مل في 1.3x Laemmli عينة العازلة. تمييع 6 ميكرولتر عينات SDF-1α-DS-CS مع 40 ميكرولتر 1.3x Laemmli عينة العازلة. (إعداد 4X Laemmli عازلة الأسهم التي تحتوي على 0.25 M تريس، حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 7.5، 8٪ SDS، الجلسرين 40٪، 0.05 ملغ / مل برموفينول الأزرق، و 8٪ 2-المركابتويثانول. يقسم الحل الأسهم إلى مأخوذة الصغيرة والحفاظ على -20 ° C للاستخدام مرة واحدة).
  2. تسخين العينات عند 100 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. دوامة العينات مرتين (كل لمدة 10 ثانية في أقصى سرعة) خلال فترة التسخين 10 دقيقة من أجل فصل الجزيئات تماما. تهدئة عينات لRT لمدة 2 دقيقة. الطرد المركزي في 10،000 x ج لمدة 0.5-1 دقيقة لاسقاط المكثفات المياه. دوامة مرة أخرى إلى المزيج جيدا.
    ملاحظة: عند هذه النقطة، يجب أن يكون الحل عينة واضح مع أي راسب مرئية الحاضر.
  3. تحميل 10 &# 181؛ ل عينة / جيد إلى 4-20٪ هلام SDS. تشغيل الكهربائي في 200 V لمدة 20 دقيقة. وصمة عار الجل مع Coomassie الأزرق البروتين وصمة عار.
  4. فحص كثافة الفرقة البروتين من قوات الدفاع الذاتى-1α باستخدام الجزيئي تصوير وتحليل كثافة البرامج. حساب كمية من قوات الدفاع الذاتى-1α في الجسيمات ضد منحنى القياسية التي شيدت مع معايير SDF-1α الحرة.

4. في المختبر الإصدار الفحص

  1. خلط جزيئات غليكان SDF-1α مع الفوسفات مخزنة المالحة Dulbecco ودون الكالسيوم والمغنيسيوم (D-PBS) في نسبة 1: 1 (ت / ت).
  2. تقسيم تعليق الجسيمات إلى 0.05 مل مأخوذة في 1.5 مل أنابيب. تحميل العينات إلى أسفل الأنابيب. تجنب إدخال فقاعات الهواء أو إزعاج سطح السائل. ختم الجزء العلوي من الأنابيب مع بارافيلم.
    ملاحظة: في القيام بذلك، سوف يظل السائل في أسفل أثناء الدوران من أعلى إلى أسفل لاحق على خلاط أنبوب.
  3. تدوير أنابيب في 37 و# 176؛ C على الدوارة الصغيرة أنبوب خلاط. إزالة مأخوذة من الأنابيب في الأوقات المعينة وأجهزة الطرد المركزي على الفور العينات عند 16،000 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
  4. فصل supernatants والكريات، وإعادة تشكيل بيليه مع 0.05 مل D-PBS. تخزين العينات في -20 ° C. بعد أن يتم جمع كل العينات، دراسة supernatants والكريات على هلام SDS كما هو موضح أعلاه.

5. هجرة الفحص

ويقيس هذا الاختبار النشاط الكيميائي لقوات الدفاع الذاتى-1α. تفاعل SDF-1α مع مستقبلات لها (CXCR4) على سطح الخلية يسبب هجرة الخلية نحو الانحدار SDF-1α. في هذا الاختبار، يتم تحميل الخلايا في بئر العلوي (مفصولة غشاء نصف نافذ من أقل أيضا) حل وSDF-1α إلى أقل أيضا.

  1. تمييع SDF-1α (مجانا أو شكل محدد الجسيمات) مع العازلة الهجرة (متوسطة RPMI-1640 تحتوي على 0.5٪ ألبومين المصل البقري) في 3-FOالتخفيف المتسلسل دينار لتركيزات النهائية من 100، 33، 11، 3.7، 1.2، 0.41، 0.14، و 0.05 نانوغرام / مل.
  2. إضافة 0.6 مل من محلول SDF-1α المخفف أو عازلة الهجرة فقط (المراقبة السلبية) إلى بئر في لوحة 24-جيدا. إضافة 0.57 مل عازلة الهجرة إلى بئر (سيطرة خلية الإدخال). احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. وضع نفاذية إدراج الثقافة الخلية مثل Transwell (حجم المسام 5 ميكرون، وقطرها 6.5 ملم) على أعلى من أقل أيضا. تحميل 0.1 مل خلايا Jurkat (5 × 10 5) في Transwell إدراج. تحميل 0.03 مل الخلايا مباشرة لسيطرة خلية إدخال جيدا. احتضان لوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة في 5٪ CO 2 الحاضنة.
  3. إزالة إدراج Transwell. نقل الخلايا التي هاجروا إلى انخفاض الآبار إلى أنبوب البوليسترين 4 مل. عد الخلايا هاجر مع عداد الكريات التدفق.
  4. حساب الهجرة كنسبة مئوية من عدد الخلايا الإدخال (عدد الخلايا في السيطرة خلية إدخال جيدا س 100/30) بعد الطرح من الأرقام في negatإيف الضوابط (خلايا هاجروا إلى الآبار التي تحتوي عازلة الهجرة الوحيد).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تحديد حجم وزيتا إمكانات مستعدة الجسيمات SDF-1α-DS-CS مع محلل الجسيمات الشكل 1 يوضح تحليل قياس الحجم. من نتائج cumulants تم الحصول عليها من أربعة القياسات المتكررة، فإن متوسط ​​قطرها الهيدروديناميكية من الجسيمات SDF-1α-DS-CS هو 661 ± 8.2 (نانومتر) والتشتت المتعدد هو 0.23 ± 0.02. وأظهرت نتيجة قياس المحتملة زيتا في الشكل 2. من القياسات خمسة المتكررة، وإمكانات زيتا من الجسيمات SDF-1α-DS-CS هي -24.8 ± 0.5 بالسيارات. وكما ذكر أعلاه، فإن وجود 5٪ ماني...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما ذكر أعلاه، يتم تشكيل النانوية DS-CS من خلال تحييد تهمة بين polyanion (DS) وpolycation (CS) الجزيئات. منذ التفاعل تهمة يحدث بسهولة خلال الاصطدام الجزيئية، وتركيز الحلول البوليمر وسرعة التحريك أثناء الخلط هو أمر حاسم لحجم الجسيمات الناتجة. والاتجاه العام هو أن أكثر المخفف DS وCS حلول 15 وأعلى نتيجة سرعة التحريك في جسيمات أصغر.

يمكن أن تختلف صياغة النانوية غليكان SDF-1α. على سبيل المثال، للمبالغ ونسب ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة: ​​HL671795، HL048743، وHL108630.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
كبريتات ديكسترانفيشرBP1585-100
شيتوزان ، وزن جزيئي منخفض   ؛سيجما448869
كبريتات الزنك سباعي هيدراتسيجما204986
D-MannitolSigmaM9546
ماء فائق النقاء  Invitrogen 10977-023
SDF-1αأعدت حسب المرجع 8.
مرشح حقنة ، غشاء PES 0.22   ؛ μ mMilliporeSLGP033RS
قضبان التحريك المغناطيسية الدقيقة (2 & nbsp ؛ x  7  مم)فيشر   ؛14-513-63
طقم قارورة زجاجية ؛ SUN-SRiفيشر 14-823-182
محلل الجسيمات Delsa Nano C باكمان كولتر
إيبندورف UVette CuvetsEppendorf952010069
4 & ndash ؛ 20٪ Mini-PROTEAN TGX GelBio-Rad456-1096
GelCode Blue Safe Protein StainFisher & nbsp ؛PI-24592
التصوير الجزيئي VersaDoc MP 4000 SystemBioRad170-8640
Corning Transwell النفاذية يدعمCorning3421
Accuri C6 Flow CellularBD Biosciences
Dulbecco ' s فوسفات مخزن محلول ملحي مجموعة SigmaD8537
Pyrogent plusFisherNC9753738

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Delair, T. Colloidal polyelectrolyte complexes of chitosan and dextran sulfate towards versatile nanocarriers of bioactive molecules. Eur J Pharm Biopharm. 78 (1), 10-18 (2011).
  2. Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles. Pharmacol Rev. 64 (3), 505-519 (2012).
  3. Yue, Z. G., et al. Surface charge affects cellular uptake and intracellular trafficking of chitosan-based nanoparticles. Biomacromolecules. 12 (7), 2440-2446 (2011).
  4. Ghadge, S. K., Muhlstedt, S., Ozcelik, C., Bader, M. SDF-1alpha as a therapeutic stem cell homing factor in myocardial infarction. Pharmacol Ther. 129 (1), 97-108 (2011).
  5. Sharma, M., Afrin, F., Satija, N., Tripathi, R. P., Gangenahalli, G. U. Stromal-derived factor-1/CXCR4 signaling: indispensable role in homing and engraftment of hematopoietic stem cells in bone marrow. Stem Cells Dev. 20 (6), 933-946 (2011).
  6. Sadir, R., Baleux, F., Grosdidier, A., Imberty, A., Lortat-Jacob, H. Characterization of the stromal cell-derived factor-1alpha-heparin complex. J Biol Chem. 276 (11), 8288-8296 (2001).
  7. Amara, A., et al. Stromal cell-derived factor-1alpha associates with heparan sulfates through the first beta-strand of the chemokine. J Biol Chem. 274 (34), 23916-23925 (1999).
  8. Sadir, R., Imberty, A., Baleux, F., Lortat-Jacob, H. Heparan sulfate/heparin oligosaccharides protect stromal cell-derived factor-1 (SDF-1)/CXCL12 against proteolysis induced by CD26/dipeptidyl peptidase IV. J Biol Chem. 279 (42), 43854-43860 (1074).
  9. Yin, T., et al. SDF-1alpha in glycan nanoparticles exhibits full activity and reduces pulmonary hypertension in rats. Biomacromolecules. 14 (11), 4009-4020 (2013).
  10. Huang, M., Vitharana, S. N., Peek, L. J., Coop, T., Berkland, C. Polyelectrolyte complexes stabilize and controllably release vascular endothelial growth factor. Biomacromolecules. 8 (5), 1607-1614 (2007).
  11. McCall, R. L., Sirianni, R. W. PLGA nanoparticles formed by single- or double-emulsion with vitamin E-TPGS. J Vis Exp. (82), 51015(2013).
  12. Carrillo-Conde, B. R., Roychoudhury, R., Chavez-Santoscoy, A. V., Narasimhan, B., Pohl, N. L. High-throughput synthesis of carbohydrates and functionalization of polyanhydride nanoparticles. J Vis Exp. (65), 3967(2012).
  13. Xu, J., Amiji, M. Therapeutic gene delivery and transfection in human pancreatic cancer cells using epidermal growth factor receptor-targeted gelatin nanoparticles. J Vis Exp. (59), e3612(2012).
  14. Lauten, E. H., et al. Nanoglycan complex formulation extends VEGF retention time in the lung. Biomacromolecules. 11 (7), 1863-1872 (2010).
  15. Schatz, C., Domard, A., Viton, C., Pichot, C., Delair, T. Versatile and efficient formation of colloids of biopolymer-based polyelectrolyte complexes. Biomacromolecules. 5 (5), 1882-1892 (2004).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

SDF 1 SDF 1 SDS

مقالات ذات صلة