هنا ، نقدم بروتوكولا حول كيفية تحديد كمية وتوزيع المعادن في عينة باستخدام مضان الأشعة السينية السنكروتروني. نحن نركز على الخلايا الملتصقة ، ونصف طريقة التثبيت الكيميائي لتحضير هذه العينة. ثم نصف كيفية تركيب العينة وتصويرها باستخدام الأشعة السينية السنكروترونية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إعداد خلايا منتسب للتصوير الإسفار الأشعة السينية من قبل التثبيت الكيميائية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يسمح لنا التصوير الفلوري بالأشعة السينية
بقياس التوزيع المكاني وتركيز عناصر متعددة بشكل غير مدمر في وقت واحد على مساحات عينات كبيرة أو صغيرة. تم تطبيقه في العديد من مجالات العلوم ، بما في ذلك علوم المواد وعلوم الأرض ودراسة أعمال التراث الثقافي والبيولوجيا الكيميائية. في حالة البيولوجيا الكيميائية ، على سبيل المثال ، يسمح لنا تصور توزيعات المعادن داخل الخلايا بدراسة كل من أيونات المعادن التي تحدث بشكل طبيعي في الخلايا ، وكذلك المعادن التي يتم إدخالها خارجيا مثل الأدوية والجسيمات النانوية. نظرا للطبيعة المرطبة بالكامل لجميع العينات البيولوجية تقريبا ، فإن التثبيت بالتبريد متبوعا بالتصوير تحت درجة حرارة مبردة يمثل طريقة التصوير المثالية المتاحة حاليا. ومع ذلك ، في ظل الظروف التي لا يمكن فيها الوصول إلى مثل هذا المزيج بسهولة أو عملي ، يظل التثبيت الكيميائي القائم على الألدهيد مفيدا وأحيانا لا مفر منه. تصف هذه المقالة بأكبر قدر ممكن من التفصيل في تحضير خلايا الثدييات الملتصقة عن طريق التثبيت الكيميائي للتصوير الفلوري بالأشعة السينية.
المقدمة
الأشعة السينية التصوير مضان يسمح لكل من الهوية وكمية من العناصر الموجودة في عينة لحلها مكانيا. حادث الأشعة السينية، من الطاقة مختارة لتكون أكبر من الإلكترون الطاقة من أعنف عنصر من مصلحة ملزمة، والتغلب على طاقة الربط الإلكترونات الداخلية قذيفة إلى النواة 1. وهذا يخلق "ثقب" في قذيفة الإلكترون. كما الإلكترونات طاقة أعلى تسقط في هذه الثقوب، وتنبعث الفلورسنت الأشعة السينية التي تعتمد على الطول الموجي فصل الطاقة من تلك المدارات. منذ تباعد الطاقة في المدارات هو سمة من عنصر معين، لديه الانبعاثات مضان الأشعة السينية أيضا موجات مميزة، تعتمد على العنصر. هذا هو الانبعاثات في الطول الموجي المميز الذي يتيح التعرف على العناصر الحال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد الآلات، ركائز، الثقافة وسائل الإعلام وأطباق
- التعامل مع من السيليكون نتريد (سي 3 ن 4) النوافذ.
- فتح الكبسولة قليلا من خلال الضغط على نهاية واحدة تحتوي على نافذة في مثل هذه الطريقة لعدم الضغط على نافذة نفسه، في حين تناوب على الطرف الآخر من الكبسولة مع جهة أخرى.
- تحقق زوج من الاتجاه المعاكس، ملاقط غرامة ذات الرؤوس تحت stereomicroscope للتأكد من عدم وجود لاصق، ثغرات أو الانحناء....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
قدرة التصوير مضان الأشعة السينية لتوفير المعلومات حول العينات البيولوجية تتوقف على هذه العينات التي يجري إعدادها في مثل هذه الطريقة أنها متماسكة إلى أضرار الإشعاع على مقياس الوقت من التجربة، وبعد هم الكيميائية والسمات الهيكلية بشكل جيد الحفاظ عليها. في عرض نتيجة العينة التي تم إعدادها على النحو المبين أعلاه وتصويرها، فمن الممكن أن نرى أن هناك تباين في العناصر الحالية - مشيرا إلى أن التثبيت الحفاظ على هذه الجوانب من الخلية (الشكل 1).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الأشعة السينية التصوير مضان مفيد في العديد من المجالات، بما في ذلك علوم الأرض، وعلوم المواد، والبيولوجيا الكيميائية 26-34. أنتجت التقدم في السنكروترون الأشعة السينية، والتركيز، وللغاية الحزم عالية الكثافة. الحزم تركيزا الأشعة السينية كافية لإثارة المعادن المحلية في خلايا موجودة الآن، وتنتج إشارة التي يمكن قياسها مع المتاحة حاليا تكنولوجيا السيليكون كاشف الانجراف. ودراسة البيولوجيا الكيميائية للمعادن في الخلية هي تطبيق واحد على وجه الخصوص أن يجعل من استخدام العديد من الت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يقر المؤلفون ب Stefan Vogt لمساعدته في ملاءمة البيانات التمثيلية الموضحة في هذه الورقة ، والمناقشات المفيدة. كما يقر المؤلفون بكريس جاكوبسن لدعمه ل Q. J.
تم دعم استخدام مصدر الفوتون المتقدم ، خطوط الشعاع 2-ID-E و 8-BM-B ، في مختبر Argonne الوطني من قبل وزارة الطاقة الأمريكية ، مكتب العلوم ، مكتب علوم الطاقة الأساسية ، بموجب رقم العقد. DE-AC02-06CH11357.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| نوافذ نيتريد السيليكون | Silson Ltd / J B J BUSINESS PARK / Northampton Rd ، Northampton NN7 3DW ، المملكة المتحدة | SiRN-5.0-200-2.0-200. اطلب حسب الحجم. حجم الغشاء: 1.5 مم × 1.5 مم. السماكة: 200 & nbsp ؛ نانومتر. حجم الإطار: 5 ؛ مم × 5 مم. سمك الإطار: 200 ميكرو ؛ م. | المصدر البديل: SPI Supplies / Structure Probe، Inc. ويست تشيستر ، بنسلفانيا. |
| الملقط العكسي | علوم المجهر الإلكتروني ، ص. ب 550 ، 1560 طريق الصناعة ، هاتفيلد ، بنسلفانيا 19440 ، هاتف: 215-412-8400 ، الرقم المجاني: 800-523-5874 ، فاكس: 215-412-8450 | 78520-5X | EMS 5X ، NC & ndash ؛ ملاقط فائقة الدقة |
| حصيرة شبكة مطاطية | علوم المجهر الإلكتروني ، ص.ب 550 ، 1560 طريق الصناعة ، هاتفيلد ، بنسلفانيا 19440 ، هاتف: 215-412-8400 ، الرقم المجاني: 800-523-5874 ، الفاكس: 215-412-8450 | 71170 | حصيرة الشبكة المستديرة |
| حمض الخليك | سيجما ألدريتش ، 3050 شارع شجرة التنوب ، سانت لويس ، ميزوري 63103 ، هاتف: 800-325-3010 ، فاكس: 800-325-5052 | 338826 | المعادن النزرة الصف أنابيب حمض الأسيتيك المركز |
| عازلة | سيجما ألدريتش ، 3050 شارع شجرة التنوب ، سانت لويس ، ميزوري 63103 ، هاتف: 800-325-3010 ، فاكس: 800-325-5052 | P6757 | الأنابيب الصلبة عازلة |
| محلول مخزون الفورمالديهايد | علوم المجهر الإلكتروني ، ص.ب. 550 ، 1560 طريق الصناعة ، هاتفيلد ، بنسلفانيا 19440 ، هاتف: 215-412-8400 ، الرقم المجاني: 800-523-5874 ، الفاكس: 215-412-8450 | RT 17113 | 10 × 10 مل أمبولات من 20٪ بارافورمالديهايد مائي |
المراجع
- Thompson, A. C. Center for X-ray Optics and Advanced Light Source. , 1-53 (2009).
- Helliwell, J. R. Synchrotron radiation facilities. Nat. Struct. Biol. 5, 614-617 (1988).
- Lai, B., et al. X-ray Phase Zone Plate Fabricated by Lithographic Techniques. Appl. Phys. Lett. 6....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
