نقدم بروتوكولا جراحيا يوضح بالتفصيل كيفية إجراء قطع أو سحق الملح على العصب الوجهي في الفأر. يمكن استخدام بضع إبطال العصب الوجهي لدراسة الاستجابة الفسيولوجية لإصابة الأعصاب واختبار التقنيات العلاجية.
مقالة منهجية
نقدم بروتوكولا جراحيا يوضح بالتفصيل كيفية إجراء قطع أو سحق الملح على العصب الوجهي في الفأر. يمكن استخدام بضع إبطال العصب الوجهي لدراسة الاستجابة الفسيولوجية لإصابة الأعصاب واختبار التقنيات العلاجية.
والهدف من هذا البروتوكول الجراحي هو لفضح العصب الوجهي، والتي يعصب عضلات الوجه، في خروجها من الثقبة الإبرية الخشائية وإما قطع أو التضييق عليه للحث على إصابة الأعصاب الطرفية. مزايا هذه الجراحة هي بساطته، استنساخ عالية، وعدم وجود تأثير على الوظائف الحيوية أو التنقل من شلل في الوجه لاحقة، مما أدى إلى نتائج جراحية خفيفة نسبيا بالمقارنة مع غيرها من نماذج إصابة العصب. والميزة الرئيسية لاستخدام نموذج إصابة العصب القحفي هي أن العصبونات الحركية يقيمون في السكان متجانسة نسبيا في نواة المحرك الوجه في بونس، وتبسيط دراسة أجسام الخلايا العصبون الحركي. بسبب طبيعة متناظرة من الوجه تعصيب العصبية وعدم الحديث المتبادل بين نواة المحرك الوجه، وهذه العملية لا يمكن أن يؤديها من جانب واحد مع الجانب unaxotomized أصبحت بمثابة الرقابة الداخلية المقترنة. مجموعة متنوعة من التحليلات يمكن أن يؤديها بعد العمل الجراحي لتقويمليالي الاستجابة الفسيولوجية وتفاصيل منها خارج نطاق هذا المقال. على سبيل المثال، يمكن استعادة وظيفة العضلات بمثابة علامة السلوكية للعودة التعصيب، أو العصبونات الحركية يمكن كميا لقياس بقاء الخلية. بالإضافة إلى ذلك، العصبونات الحركية يمكن التقاط بدقة باستخدام تسليخ مجهري ليزر لتحليل الجزيئي. لأن axotomy العصب الوجهي هو الغازية الحد الأدنى وجيد التحمل، ويمكن استخدامها على مجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا. أيضا، وهذا النموذج الجراحة يمكن استخدامها لتحليل فعالية من العلاجات الطرفية إصابة العصب. تقدم إصابة العصب الوجهي وسيلة للتحقيق في العصبونات الحركية فحسب، ولكن أيضا ردود المكروية المركزية والطرفية الدبقية، والجهاز المناعي، والجهاز العضلي الهدف. نموذج إصابة العصب الوجهي هو الأعصاب الطرفية نموذج إصابة مقبولة على نطاق واسع التي هي بمثابة أداة قوية لدراسة إصابة العصب والتجدد.
العديد من النماذج إصابة الأعصاب الطرفية موجودة، ولكن واحدة أن تبرز لدراسة العصبونات الحركية هو الوجه نموذج axotomy العصبية. العصب الوجهي، والمعروف أيضا باسم العصب القحفي السابع، ينشأ في بونس ويعصب عضلات تعبيرات الوجه 1،2. في هذا البروتوكول الجراحي، يتعرض العصب الوجهي في خروجها من الثقبة الإبرية الخشائية وإما خفض أو سحقهم. شدة إصابة العصب يمكن تصنيفها في أعقاب التصنيفات سندرلاند 3، والذي يميز الإصابة على أساس intactness من محاور عصبية، endoneurium، perineurium، وغلاف، والتي هي طبقات النسيج الضام الذي التفاف بالتتابع حول حزم محور عصبي. في إصابة سحق (انهتاك المحوار)، وقطعت محاور عصبية، ولكن يتم الاحتفاظ perineurium وغلاف. الانتعاش وظيفية كاملة من الوجه سحق العصب يحدث في حوالي 11 يوما لأن غمد العصب سليما يخدم كقناة ضمن المحاور التي تنمو 4،5. علىومن ناحية أخرى، إلى إصابة قطع (تهتك العصب)، وقطعت محاور وجميع 3 طبقات النسيج الضام، والعصب القاصي بأكمله يجب أن تنمو لاستعادة الجهاز العضلي تعصيب. وغالبا ما تتم إعادة الاتصال الجراحي للغلاف في المرضى من البشر يعانون من إصابات transection العصب، ولكن النتائج الانتعاش ونادرا ما تكون مثالية. مطلوب مزيد من الدراسة أن نفهم لماذا فشل العصب لتنمو إلى هدفه ويمكن استخدام ما العلاجات لتحسين وتسريع عملية التجدد.
هناك العديد من المزايا لدراسة إصابة العصب باستخدام الوجه نموذج axotomy العصبية. أولا، إجراء axotomy العصب الوجهي هو سريعة وسهلة، وتكرار للغاية. والشلل الناتج من عضلات الوجه لا يؤثر الوظائف الحيوية وجيد التحمل من قبل الحيوان. لأن هذا هو نموذج إصابة العصب القحفي، ودراسة أجسام الخلايا العصبون الحركي هو تبسيط لأن العصبونات الحركية يقيمون في السكان متجانسة نسبيا في عشرالبريد نواة المحرك الوجه في بونس. لا تختلف السكان استنادا إلى نمط النووية الدقيقة داخل النواة الحركية الوجه، كما أن هناك سبع subnuclei كل محددة لالتعصيب مجموعة معينة من العضلات، لذلك الخلافات النووية الدقيقة ردا على axotomy قد تؤثر النتائج 2،6،7.
وهناك فائدة كبرى من الوجه نموذج إصابة العصب هو أن الجانب unaxotomized يمكن أن تكون بمثابة الرقابة الداخلية يقترن لأن تعصيب العصبية هو متناظرة للغاية وليس هناك أي الحديث المتبادل بين نواة المحرك الوجه 8. ميزة أخرى لاستخدام هذا الأسلوب الجراحي هو عدم وجود صدمة مباشرة إلى الجهاز العصبي المركزي أو تعطيل حاجز الدم في الدماغ 9. مضاعفات مثل النزيف والعدوى نادرة مع هذا الإجراء.
مجموعة متنوعة من التحليلات يمكن القيام بها لتقييم الاستجابة الفسيولوجية للإصابة العصب. استعادة منعكس طرفة عين والنشاط الطولي يمكن أن تستخدم السلوكيةمقياس وظيفي الانتعاش 10،11. تسجيل الفيديو من النشاط vibrissae هو حاليا أقوى وسيلة للكشف عن انتعاش العصب الوجهي تعصيب 12،13. بعد القتل الرحيم، التحليل النسيجي من الدماغ يمكن أن يؤديها على أجسام الخلايا العصبون الحركي داخل النواة الحركية الوجه. تنقسم نواة المحرك الوجه إلى سبعة subnuclei، كل محددة لبعض عضلات الوجه، مما يسمح للفحص التفاضلي للردود على إصابة 2،6. العصبونات الحركية الوجه يمكن عدها لتحديد بقاء الخلية، أو يمكن أن تستخدم المناعية لتحديد المؤشرات الحيوية والسكان خلية معينة 14. نواة المحرك الوجه يمكن microdissected بدقة باستخدام القبض على الليزر لتحليل الجزيئي للاستجابة الخلوية لإصابة العصب 15،16. ويمكن تحليل آثار axotomy العصب الوجهي في القشرة الحركية 17،18. أيضا، العصب يمكن تشريح لدراسة ولري انحطاط 19 أومحور عصبي تجديد 20، والعضلات يمكن إزالتها لدراسة التقاطعات العصبية والعضلية 21. ويمكن أيضا أن axotomy العصب الوجهي أن تستخدم لدراسة الخلايا المركزية والطرفية المرفقة الدبقية 22، استهداف الجهاز العضلي 21، والجهاز المناعي استجابة 23. على الرغم من أن الكثير قد تم إنجازه في دراسة نموذج axotomy العصب الوجهي 24، مطلوب مزيد من الدراسة من إصابة الأعصاب الطرفية بسبب تلف الأعصاب هي مشكلة كبيرة للمرضى وتفشل العلاجات الحالية لإنتاج أفضل النتائج. هذا النموذج هو أداة قوية لفحص الاستجابة الفسيولوجية للإصابة الأعصاب وتحليل فعالية من العلاجات تجديد الأعصاب.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنفذها مدرسة جامعة إنديانا للطب المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام اللجنة ومتابعة المعهد الوطني للصحة المبادئ التوجيهية.
1. تقنية جراحية
2. التخدير والتحضير
3. المنهج الجراحي
4. الإنتهاء والإنعاش
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بعد إجراء axotomy العصب الوجهي، وفقدان العصبون الحركي يحدث نتيجة للإصابة. البقاء على قيد الحياة بعد إصابة العصبون الحركي يعتمد على العديد من المتغيرات، مثل الجنس والعمر الحيوان في وقت الجراحة، وtimepoint التي تتم التهم العصبون الحركي، وموران ومراجعة Graeber 24 و Jinno ومراجعة يامادا 22 كلا تلخيص البيانات بقاء العصبون الحركي. عادة، حوالي 86٪ من العصبونات الحركية البقاء على قيد الحياة في 28 يوما بعد axotomy 14،15،26. يتم وصف حركية فقدان العصبون الحرك...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تتمثل الخطوة الحاسمة لهذا البروتوكول في وضع الماوس بشكل صحيح قبل بدء الجراحة. إذا لم يكن الفأر مستلقيا على جانبه ، أو لم يتم تسجيل الأذن بالزاوية الصحيحة ، أو تم إجراء الشق في مكان غير صحيح ، يصبح العثور على العصب الوجهي أكثر صعوبة. عندما يتم إتقان هذه التقنية ، ستستغرق العمليات الجراحية دقائق فقط لكل فأر.
يمكن استخدام الغرز أو الغراء أو مشابك الجرح لإغلاق الجرح. يفضل استخدام مشابك الجرح بسبب صغر حجم الشق والسرعة التي يمكن تطبيقها بها. لقد قررنا أنه إذا تم استخدام مشابك الجرح ووضع الفئران معا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
يتم تمويل هذا العمل من قبل NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجهر ستيريو | Leica | M60 | |
| شريط وضع العلامات | فيشر Scientific | 15-952 | |
| Vannas-T & uuml; مقص زنبركي بينجن - مستقيم / حاد / 8.5 سم / 5 مم أدوات | العلوم الدقيقة | 15003-08 | تعقيم قبل الاستخدام |
| ملقط Dumont # 5/45 - أطراف قياسية / بزاوية 45 درجة ؛ / Dumoxel / 11 سم | أدوات العلوم الدقيقة | 11251-35 | تعقيم قبل الاستخدام |
| مشابك خياطة ميشيل - 7.5 مم × 1.75 مم | أدوات العلوم الدقيقة | 12040-01 | توصف بأنها "مشبك الجرح" في البروتوكول ، تعقيم قبل الاستخدام |
| Hagenbarth Cross Action Wound Clip Applier 5 " | George Tiemann & amp Co | 160-910 | يستخدم لتطبيق مشبك الجرح ، وتعقيم قبل الاستخدام |
| قضيب ومزيل مشبك خياطة ميشيل - لمشابك 7.5 مم أدوات | العلوم الدقيقة | 12029-12 | تستخدم لإزالة مشبك الجرح |
| 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم ، USP | Hospira | 0409-4888-10 | |
| Betadine ، 16 أونصة ، مع موزع | فيشر Scientific | 19-027132 | |
| 70٪ إيثانول | |||
| الخرز الزجاجي |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن