مقالة منهجية

الكشف عن Exosomal العلامات البيولوجية التي يسببها الميدانية الكهربائية الإصدار والقياس (EFIRM)

DOI:

10.3791/52439

⸱

يناير 23, 2015

 ,  ,  , 
1School of Dentistry, University of California, Los Angeles, 2School of Medicine, Clinical Nutrition, University of California, Los Angeles

في هذه المقالة

إشعار تصحيح

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Exosomes هي هياكل حويصلية دقيقة موجودة داخل السوائل الحيوية التي يحتمل أن تحمل مؤشرات حيوية تمييزية مهمة للمرض. هنا ، يتم استخدام طريقة جديدة لاستخراج الإكسوسومات على وجه التحديد واختبار الشحنة الخارجية بسرعة لكل من أهداف الحمض النووي الريبي / البروتين بعد تعطيل الإكسوسومات باستخدام موجات مربعة دورية كهربائية غير منتظمة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Exosomes والهياكل صغير الحويصلات التي تلعب دور الوسيط في الاتصالات بين الخلايا. ومن مصلحة لدراسة البضائع الداخلية للexosomes لتحديد ما إذا كانت تحمل مرض المؤشرات الحيوية التمييزية. لأداء تحليل exosomal، فمن الضروري وضع طريقة لاستخراج وتحليل exosomes من biofluids الهدف دون الإضرار المحتوى الداخلي.

الإفراج الكهربائية الناجم عن الميدان والقياس (EFIRM) هي طريقة لاستخراج تحديدا exosomes من biofluids، تفريغ حمولتها، واختبار داخلي المحتوى RNA / البروتين. باستخدام CD63 محددة الأجسام المضادة microparticle المغناطيسي مكافحة الإنسان، وعجلت exosomes أول من biofluids. وتطبق التالية الاستخراج، ذات الجهد المنخفض الموجات مربع دوري الكهربائية (CSW) لتعطيل الغشاء الحويصلي وتسبب تفريغ البضائع. والمهجنة محتوى exosome إلى الاشعال DNA أو الأجسام المضادة يجمد على سطح القطب للغنى عنهntification من المحتويات الجزيئي.

طريقة EFIRM هو مفيد لاستخراج exosomes والبضائع تفريغ للتحليل دون تحلل العازلة. هذا الأسلوب هو قادرة على أداء كشف معين من كل من RNA والبروتين العلامات البيولوجية أهداف في exosome. EFIRM مقتطفات exosomes تستند بشكل خاص على علامات سطحها بدلا من التقنيات المعتمدة على الحجم.

المجهر انتقال الإلكترون (TEM) والفحص تبين وظيفة طريقة لالتقاط exosome والتحليل. تم تطبيق طريقة EFIRM إلى exosomal تحليل 9 الفئران المحقونة مع رئة الإنسان خلايا H640 السرطان (خط الخلية transfected للتعبير عن علامة exosome البشري CD63-GFP) من أجل اختبار الشخصية exosome ضد 11 الفئران تلقي الضوابط المالحة. وعثر على مستويات مرتفعة من المؤشرات الحيوية exosomal (المرجع GAPDH الجينات والبروتينات السطحية علامة البشري CD63-GFP) لH640 حقن الفئران في كل من المصل واللعاب العينات. وعلاوة على ذلك، ساليوقد أثبتت فا وعينات المصل لديك الخطي (R = 0.79). هذه النتائج توحي للبقاء المؤشرات الحيوية exosome اللعابية للكشف عن الأمراض البعيدة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البحث Exosome هو المجال الناشئ من التحقيق الذي يدرس microvesicles الدهون التي تحمل RNA 1، 2 DNA، والبروتين 3 البضائع. وقد أدت التحقيقات السابقة من exosome الأحياء لتحديد exosomes في biofluids مثل الدم 4، 5 البول وحليب الثدي 6، واللعاب 7. وقد أثبتت الدراسات أن exosomes تلعب دورا في مسارات الخلوية المختلفة، التأمل التواصل بين أنظمة مختلفة من الجسم 8 عن بعد. بسبب الدور الذي تلعبه في التواصل بين الخلايا exosomes، والافتراض أنهم قد حزمة أهداف جزيء حيوي (البروتين، RNA، DNA و) المترابطة مع الحالات المرضية. في المختبر 3 والحيوان نموذج تظهر 9 الدراسات لإثبات هذه الفرضية. في التحقيق المحتوى exosomal لاكتشاف العلامات البيولوجية، فمن الضروري وضع منهجية لانتقائية العزلة exosome من biofluids، expulsi يسببهاعلى البضائع من exosomes، وتقدير حجم الجزيئات الحيوية exosome. في نطاق هذا العمل، وسيتم تحديد exosomes كهيكل وجود قطرها حوالي 70-100 نانومتر وتملك سطح علامة CD63.

الباحثون عادة أولا تنقية exosomes بواسطة تنبيذ فائق 10 ثم معالجة المحتوى exosomal من خلال استخدام مجموعات تحلل العازلة. استخدام أساليب تحلل العازلة يتطلب مرات حضانة تتراوح بين دقائق إلى ساعات. هذه العملية قد يحتمل أن تضر البضائع exosome وتؤدي إلى تدهور عينة. على سبيل المثال، اللعاب RNA exosome صدر عن طريق تحلل العازلة في البيئة المحيطة خارج الخلية يمتلك عمر نصف أقل من 1 دقيقة، مما يجعل قياس exosomal RNA بعد تحلل العازلة مهمة صعبة للغاية بدون إضافة الكواشف لتحقيق الاستقرار 11. تأثير مركب مضيفا الكواشف المختلفة للتحلل والاستقرار قد يعرض العوامل التي تعقد وتتداخل مع analyجهاز الأمن والمخابرات من المحتويات exosomal. قد يكون نهجا بديلا مفيدة لتفريغ بسرعة المحتوى exosomal والحفاظ بأمان البضائع لتوصيف.

في هذا العمل، نقترح استخدام حقل كهربائي غير موحدة للإفراج عن المحتوى exosomal. من المعروف أن الحقول الكهربائية لنقل القدرة على استقطاب وتعطيل طبقة ثنائية المادة الدهنية التي تشكل أغشية الخلايا. لدينا العمل التجريبي يستكشف استخدام موجات مربع دوري غير موحدة (CSW) لتعطيل البنية microvesicle من exosomes والإفراج عن البضائع المنقولة. وتستخدم هذه الطريقة الفولتية في عدة مئات من مجموعة الميليفولت، وهذا يعني أن معظم الجزيئات الحيوية لن يعرقلها. علينا أن نبرهن على استخدام موجة دوري مربعا قادر على تحفيز إطلاق سراح اللعابية exosome المحتوى مرنا في البيئة المحيطة الموائعية. تم دمج هذا الإصدار من المحتويات exosomal بسلاسة مع نظام الكهربائي التي يمكن استخدامها لقياس مستويات التعبير العلامات البيولوجية 12،13. وتسمح هذه الطريقة المقترحة لالسريع، حساسة، وتحلل العازلة تحليل خالية من المحتوى exosome.

figure-introduction-1
الشكل 1. نظرة عامة على EFIRM سير العمل. وينقسم طريقة EFIRM على نطاق واسع في المراحل الرئيسية الثلاث التي هي ضرورية لتنقية وتحليل exosomes.

ويستخدم هذا استنادا الإفراج المحتوى exosomal وتحليل طريقة لجنة وضع المرأة بالتعاون مع ميكروبيدات CD63 محددة المغناطيسية لexosome العزلة. هذه الخرز CD63 تقارب تسمح لعزل انتقائية من exosomes من عينات اللعابية (وbiofluids أخرى). وبعد حضانة واستخراج exosomes باستخدام الخرز الممغنطة، يتم ترحيل حبات إلى نظام الاستشعار الكهروكيميائية للجنة وضع المرأة استنادا الإفراج المحتوى وتحليل جزء من التجربة. الشكل 1 لمحة عامة عن عملتدفق طريقة EFIRM.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. المغناطيسي Exosome استخراج مقرها الخرزة-

  1. ماصة حل تمتزج جيدا من 5 ميكرولتر من المجهرية الدقيقة المغناطيسي Streptavidin المغلفة إلى 495 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) عازلة في أنبوب microcentrifuge ل resuspend الخرز. غسل و resuspend حبات مع 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني ثلاث مرات باستخدام رف المغناطيسي. رف هو مجموعة من مغناطيس على جانب وحدة سكنية التي يمكن أن تعقد الأنابيب عينة ميكروسنتريفوج.
    1. لكل غسل، دعونا أولا الأنابيب الجلوس على الرف لمدة 1 دقيقة، ثم استخدام طرف ماصة لإزالة بعناية المخزن المؤقت طاف دون إزعاج الخرز.
    2. وضع أنابيب على رف منتظم دون المغناطيس في الجانب. إضافة 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في أنابيب، واستخدام ماصة لخلط الحل والخرز معا. ثم وضع الأنابيب مرة أخرى على رف المغناطيسي لفصل حبات مرة أخرى من الحل.
    3. تنفيذ هذا إزالة عازلة عن طريق مغنطة وإعادة تعليق في برنامج تلفزيوني لمجموعه ثلاث مرات. هذا ينفذ غسل الأولي من الجسيمات المغناطيسية.
  2. resuspend والخرز في 490 ميكرولتر من العازلة PBS، مع أنبوب يوضع على الجزء غير ممغنط من رف المغناطيسي. الماصة 5 ميكرولتر من الأجسام المضادة الماوس المعقدة البيروكسيديز CD63 مكافحة الإنسان في 1.0 ملغ / مل تركيز الأسهم في خليط من الخرز. استخدام ماصة لخلط حبات والأجسام المضادة في الحل.
  3. وضع أنابيب microcentrifuge مع حبة والمعقدة البيروكسيديز مزيج الأجسام المضادة على محور دوار العينة. تعيين المعلمات المدورة لمحور دوار عينة للتناوب المتبادل في 90 درجة إمالة لمدة 5 ثوانى وتهتز في 5 درجة ل1 ثانية. تدوير أنابيب خليط عينة حبة في هذه المعلمات لمدة 30 دقيقة في RT.
  4. إزالة الأجسام المضادة غير منضم بعد الاقتران.
    1. وبعد 30 دقيقة من الدوران في RT، ووضع الأنابيب مرة أخرى في رف المغناطيسي لمدة 5 دقائق.
    2. تنفيذ ثلاث يغسل من الخرز عن طريق إزالة الطور السائل باستخدام micropipette ويغسل مع 500 μ؛ ل من برنامج تلفزيوني. بعد غسل الثلاثي، resuspend والخرز في 490 ميكرولتر من الكازين-PBS ومكان على الجزء unmagnetized من الرف.
  5. استخراج Exosome باستخدام الخرز المغلفة الأضداد.
    1. تسمية كل أنبوب مع استهدافا ID العينة. ماصة عينة 10 ميكرولتر من المصل أو اللعاب في أنبوب microcentrifuge. استخدام ماصة لخلط العينة وحبات مغناطيسية من قبل pipetting عدة مرات.
    2. وضع أنابيب مع عينة ومكافحة الإنسان الخرز CD63 الأجسام المضادة على محور دوار وتناوب لمدة 2 ساعة على RT. استخدام نفس المعلمات المدورة كما هو موضح في الخطوة 1.2.
    3. بعد 2 ساعة من عينة الدورية، إجراء غسل الثلاثي التي كتبها جذب لحبات منفصلة عن حل، وإزالة الطور السائل مع ممص مكروى، وإعادة التعليق الخرز في 500 ميكرولتر من العازلة تريس، حمض الهيدروكلوريك. حبات الناتجة الآن منضمة إلى exosomes ونحن على استعداد لإطلاق سراح مجال كهربائي والقياس.

صدر 2. الكهربائية المستحثة الميداني لالثانية قياس Exosomal المحتوى

  1. Precoating الأولي الكهربائي مع GADPH التمهيدي
    1. تطبيق البلاستيك بشكل جيد لمجموعة القطب لمنع انتقال التلوث من الأقطاب الكهربائية الفردية. لهذه التجربة، واستخدام مجموعة الكهربائي 16 أجهزة الاستشعار مع كل قطب كهربائي وحدة في مجموعة تتألف من العمل، ومكافحة، والقطب إشارة مصنوعة من الذهب العارية.
    2. تحضير خليط الأسهم من 100 نانومتر التحقيق DNA، 0.3 M بوكل، و 10 ملي بيرول من قبل pipetting الكواشف الأسهم في أنبوب مع الماء المقطر عالى النقاء. مزيج دقيق من قبل vortexing.
      ملاحظة: للحصول على هذه الدراسة، التحقيق DNA اختيار يتوافق مع الجين إشارة GAPDH، والذي يعرف في الوجود ضمن exosomes. تسلسل التحقيق المستخدمة هي: 5'-البيوتين-AGGTCCACCACTGACACGTTG-3 ". استخدام هذا الخليط على كل الأقطاب.
    3. الماصة 60 ميكرولتر من الحمض النووي مونومر خليط التحقيق على سطح كل قطب كهربائي الذهب. دراسة الأقطاب لضمان عدم وجود التغطية الكافية للعمل، جounter، وإشارة كهربائية من الخليط السائل.
    4. Electropolymerize خليط مونومر مسبار لخلق طبقة البوليمر إجراء على سطح القطب من خلال تطبيق دوري موجة مربع (CSW) لمحة الحقل الكهربائي إلى سطح القطب. ويتكون هذا الحقل الكهربائي تطبيق +350 بالسيارات لمدة 9 ثانية والتحول فورا إلى +950 بالسيارات ل1 ثانية. تطبيق هذا دوري مربع الملف الشخصي موجة إلى القطب لمدة 10 دورات، أي ما مجموعه 100 ثانية من الحقل الكهربائي تطبيقها.
    5. شطف السطح الاستشعار 3 مرات بالماء المقطر والجافة مع غاز النيتروجين لإزالة السائل من سطح القطب. ضمان أن تتم إزالة السائل بشكل صحيح من القطب.
  2. Exosome البضائع التفريغ
    1. تحميل 5 ميكرولتر من 1 ميكرومتر من التحقيق للكشف في 495 ميكرولتر من خليط حبة exosome المعقدة واستخدام ماصة لخلط.
      ملاحظة: لجنة التحقيق كاشف هو تسلسل الحمض النووي التمهيدي مترافق إلى جزيء فلوريسئين في نهاية 3 '. وغالبا كاشفتسلسل الإلكترونية المستخدمة في هذه الدراسة يتوافق مع مرنا GAPDH وجدت داخل exosomes. تسلسل فلوريسئين كاشف مترافق التحقيق هو: 5'-GCAGTGGGGACACGGAAGGCC-فلوريسئين-3 ".
    2. ماصة 60 ميكرولتر من التحقيق وحبة exosome خليط معقد على سطح القطب الذهب مع مجموعة المغناطيس تحتها. تتكون هذه المجموعة من ستة عشر المغناطيس 2.54 ملم مغناطيس النيوديميوم قطر الانحياز لتتوافق مع أقطاب العمل من أجهزة الاستشعار. ويوضح الشكل 2A موضع المغناطيس وحل حبة exosome.
    3. مرة واحدة يتم تحميل العينة على سطح القطب، وتطبيق 20 دورات من الحقل الكهربائي جنة وضع المرأة مع 9 ثانية في -300 بالسيارات و1 ثانية على +200 بالسيارات (200 ثانية المجموع). سوف البضائع exosomal التي يتم تحريرها هجن لالاشعال على سطح القطب. إذا علامات سطح exosome هي موضوع التحقيق، وتخطي هذا الجزء من التجربة. الشكل يوضح 2B هذه العملية.
      4. <لى> غسل قبالة التحاليل غير منضم على سطح القطب من ثلاثة أضعاف الشطف سطح القطب مع الماء المقطر. تجفيف الكهربائي مع غاز النيتروجين.
  3. مراسل الأجسام المضادة وقراءات
    1. إضافة 60 ميكرولتر من 150 وحدة / مل الأضداد المضادة للفلوريسئين مترافق إلى البيروكسيديز الفجل (HRP في 1: 1،000 التخفيف) المخفف في الكازين / برنامج تلفزيوني.
    2. استخدام اقتران مدفوعة الكهربائية ميدانية لمجمع HRP المضادة للفلوريسئين إلى شطيرة التحقيق. تطبيق -200 بالسيارات ل1 ثانية و+500 بالسيارات ل1 ثانية لمدة 5 دورات لسطح القطب. ويبين الشكل 2A القبض والتحقيق للكشف عن المجمعات لكل من بروتين ونظام الحمض النووي.
    3. الثلاثي سطح استشعار غسل استخدام الماء المقطر والجافة مع غاز النيتروجين.
    4. بعد غسل حالا من غير منضم الزائد الأضداد المضادة للفلوريسئين، إضافة 60 ميكرولتر من 3،3 '، 5،5'-Tetramethylbenzidine (TMB) الركيزة. تحميل هذا الركيزة على كل سطح مستشعر باستخدام الماصة الأقنية.
    5. أداء قراءات amperometric للتيار عن طريق قياس التيار الكهربائي في -200 بالسيارات لمدة 60 ثانية باستخدام potentiostat الكهروكيميائية قادرة على قياس وقت واحد من 16 قنوات الشكل 2C مثال على التعريف الحالي خلال قراءات.

figure-protocol-1

الشكل 2. مكونات EFIRM الطريقة. (A) طريقة استخراج exosomes من سائل حيوي باستخدام CD63 مكافحة الإنسان المغلفة المجهرية الدقيقة المغناطيسية ومن ثم تفريغ البضائع exosome باستخدام موجات مربع دوري تطبيقها على مجمع الجسيمات exosome. (ب) مخطط الكهربائي جهاز الاستشعار البيولوجي المستخدمة للكشف عن أهداف RNA / DNA / البروتين من exosome الافراج عنهم. (C) مثال ممثل قراءات amperometric من منهجية EFIRM حيث الحجم الحالي أكبر يتوافق رس مستويات أعلى من جزيء حيوي. هذا الرقم هو من وي وآخرون 14 الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التحقق من Exosome القبض على الخرز عن طريق TEM

تم التحقق من صحة عزل exosomes من اللعاب باستخدام CD63 حبات مغناطيسية مكافحة الإنسان التالية بروتوكول استخراج باستخدام المجهر الإلكتروني النافذ (TEM) الصور. TEM معارض حبات مغناطيسية مع 70-100 حبيبات نانومتر المجاورة مباشرة (انظر الشكل 3A، و3B)، بما يتفق مع خصائص المعروفة من exosomes. لم يلاحظ أي 70-100 حبيبات نانومتر لحبات مغناطيسية في...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما تشير النتائج، CD63 مكافحة الإنسان المغلفة الجسيمات النانوية المغناطيسية هي قادرة على التقاط تحديدا الجسيمات الصغيرة التي لديها حجم تتراوح 70-100 نانومتر. هذه الجسيمات القبض يتسق مع الملف الشخصى لوحظ سابقا من exosomes. وعلاوة على ذلك، يظهر الاستخدام للجنة وضع المرأة ذات الجهد المنخفض في أعقاب أسر الجسيمات لإزالتها من على سطح حبة وتسبب ملامح تدهور DNA مماثلة لتلك التي من الطريقة التقليدية القائمة على تحلل العازلة للإفراج البضائع. وتشير هذه البيانات إلى أن سير العمل للإفراج عنهم ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ديفيد وونج هو المؤسس المشارك لRNAmeTRIX المحدودة، وهي شركة التشخيص الجزيئي. PeriRx LLC sublicensed الملكية الفكرية المتعلقة التشخيص الجزيئي من RNAmeTRIX. ديفيد وونج هو مستشار لPeriRx.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل المركز الوطني للبحوث الموارد والمركز الوطني للنهوض بالحركة العلوم والمعاهد الوطنية للصحة، من خلال منحة UL1TR000124 (لFW)؛ فيليكس وميلدريد ييب هبوا الأستاذية وصندوق العائلة بارنز (لDTWW)، والمعهد الوطني طب الأسنان والجمجمة البحوث في المعاهد الوطنية للصحة تحت بجائزة عدد T90DE022734 (لMT). المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعاهد الوطنية للصحة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام قارئ هيليوس 16 قناة مع واجهة رقاقة Genefluidics, USA  رقاقة مستشعر RS-1000-16
16x ، ذهبية مكشوفة ، عبوة من 5 رقائقGenefluidics ، الولايات المتحدة الأمريكيةSC1000-16X-B
Biotinylated Antibody CD63 المضادة للإنسانAncell ، الولايات المتحدة الأمريكية215-030
Dynabeads MyOne Streptavidin T1Invitrogen ، الولايات المتحدة الأمريكية65601
نيودينيوم مغناطيسيس (1/10 بوصة قطر × 1/32 بوصة سميكة)K & amp J Magnetics ، الولايات المتحدة الأمريكيةDH101
UltraPure Water Life Technologies ، الولايات المتحدة الأمريكية10977-023
Mettler Toldeo 3 M KCl SolutionFisher Scientific ، الولايات المتحدةالأمريكية 1911512
PyrroleSigma-Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكيةW338605-100g
مضاد للفلورسين-POD ، شظايا فابروش ، ألمانيا11426346910
3،3 & prime;,5,5′-tetramethylbenzidine الركيزة (TMB / H2< / sub>O2< / sub> ، نشاط منخفض)Neogen ، الولايات المتحدة330175
المحلول الملحي المخزن بالفوسفات، الولايات المتحدة الأمريكية10010023
الكازين / PBSفيشر العلمية ، الولايات المتحدة الأمريكية37532
الأمريكية تقنيات

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rabinowits, G., Gerçel-Taylor, C., Day, J. M., Taylor, D. D., Kloecker, G. H. Exosomal MicroRNA: A Diagnostic Marker for Lung Cancer. Clinical Lung Cancer. 10 (1), 42-46 (2009).
  2. Thakur, B. K., et al. Double-stranded DNA in exosomes: a novel biomarker in cancer detection. Cell Research. 24 (6), 766-769 (2014).
  3. Lau, C. S., Wong, D. T. W. Breast Cancer Exosome-like Microvesicles and Salivary Gland Cells Interplay Alters Salivary Gland Cell-Derived Exosome-like Microvesicles In. Vitro. PLoS ONE. 7 (3), e33037(2012).
  4. Bala, S., et al. Circulating microRNAs in exosomes indicate hepatocyte injury and inflammation in alcoholic, drug-induced, and inflammatory liver diseases. Hepatolog. 56 (5), 1946-1957 (2012).
  5. Dear, J. W., Street, J. M., Bailey, M. A. Urinary exosomes: A reservoir for biomarker discovery and potential mediators of intrarenal signalling. Proteomics. 13 (10-11), 1572-1580 (2013).
  6. Lässer, C., et al. Human saliva, plasma and breast milk exosomes contain RNA: uptake by macrophages. Journal of Translational Medicine. 9 (1), 9(2011).
  7. Palanisamy, V., et al. Nanostructural and Transcriptomic Analyses of Human Saliva Derived Exosomes. PLoS ONE. 5 (1), e8577(2010).
  8. Camussi, G., et al. Exosomes/microvesicles as a mechanism of cell-to-cell communication. Kidney International. 78 (9), 838-848 (2010).
  9. Lau, C., et al. Role of pancreatic cancer-derived exosomes in salivary biomarker development. The Journal of Biological Chemistry. 288 (37), 26888-26897 (2013).
  10. Théry, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids. Current Protocols in Cell Biology. 3 (22), (2001).
  11. Park, N. J., Li, Y., Yu, T., Brinkman, B. M. N., Wong, D. T. Characterization of RNA in Saliva. Clinical Chemistry. 52 (6), 988-994 (2006).
  12. Wei, F., et al. Bio/Abiotic Interface Constructed from Nanoscale DNA Dendrimer and Conducting Polymer for Ultrasensitive Biomolecular Diagnosis. Small. 5 (15), 1784-1790 (2009).
  13. Wei, F., et al. Electrochemical Sensor for Multiplex Biomarkers Detection. Clinical Cancer Research. 15 (13), 4446-4452 (2009).
  14. Wei, F., Yang, J., Wong, D. T. W. Detection of exosomal biomarker by electric field-induced release and measurement (EFIRM). Biosensors and Bioelectronics. 44, 115-121 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

تصحيح

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Errata: Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

An erratum was issued for Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM). The disclosures were updated.

الوسوم

CD63 Human CD63 GFP

مقالات ذات صلة