إصابة سفينة الميكانيكية في الزرد الأجنة

ملخص

توضح هذه المقالة طريقة لإحداث إصابة ميكانيكية في الأجنة في أسماك الزرد. يوفر نموذج الإصابة هذا منصة لدراسة الإرقاء والالتهابات المرتبطة بالإصابة والتئام الجروح في كائن حي مناسب بشكل مثالي للفحص المجهري في الوقت الفعلي.

الملخص

أثبتت أجنة

Zebrafish (Danio rerio) أنها نموذج قوي لدراسة مجموعة متنوعة من عمليات النمو والمرض. يجعل التطور الخارجي والشفافية البصرية هذه الأجنة قابلة بشكل خاص للفحص المجهري ، وتتوفر العديد من الخطوط المعدلة وراثيا التي تصنف أنواعا معينة من الخلايا ببروتينات الفلورسنت ، مما يجعل جنين الزرد نظاما مثاليا لتصور تفاعل الأوعية الدموية ومكونات الدم وأنواع الخلايا الأخرى أثناء الإصابة والإصلاح في الجسم الحي. تم تطوير علم الوراثة الأمامي والعكسي في أسماك الزرد بشكل جيد ، ويمكن التلاعب الدوائي بذلك. نصف نموذج إصابات الأوعية الدموية الميكانيكية باستخدام تقنيات المعالجة الدقيقة التي تستغل العديد من هذه الميزات لدراسة الاستجابات لإصابة الأوعية الدموية بما في ذلك الإرقاء وإصلاح الأوعية الدموية. باستخدام مزيج من الفحص المجهري بالفيديو والفواصل الزمني ، نوضح أن هذه الطريقة لإصابة الأوعية الدموية تؤدي إلى استجابات قابلة للقياس وقابلة للتكرار أثناء الإرقاء وإصلاح الجروح. توفر هذه الطريقة نظاما لدراسة إصابة الأوعية الدموية وإصلاحها بالتفصيل في نموذج حيواني كامل.

المقدمة

تم استخدام أسماك الزرد على نطاق واسع لدراسة مجموعة متنوعة من الموضوعات في بيولوجيا الأوعية الدموية ، بما في ذلك تطور الأوعية الدموية ، وتكوين الأوعية الدموية ، وتطور المكونة للدم وعلم الأمراض^1-3. تطور الأجنة دورة وظيفية بالإضافة إلى الكريات البيض والمكونات الأخرى للجهاز المناعي الفطري بيوم واحد بعد الإخصاب (dpf) ^1،4،5. إن الحفاظ على الاستجابة الالتهابية والكريات البيض للإصابة جعل جنين الزرد نموذجا إعلاميا لعمليات التهابية متنوعة مثل عدوى السل والتهاب الأمعاء والقولون وتجديد الأنسجة^6-9. تم استخدام أجنة أسماك الزرد لدراسة الالتهاب المرتبط بالإصابة خاصة في سياق الجرح الظهاري واستجابة العدلات^10،11. تؤدي إصابة الجنين إلى استجا....

البروتوكول

وتمت الموافقة على إجراءات باستخدام الزرد التي كتبها المؤسسي رعاية الحيوان UCSF واللجنة الاستخدام: ملاحظة.

1. إعداد أدوات

1. إدراج التفاصيل التافهة دبوس إلى حامل دبوس المشبك ودبوس.
2. باستخدام ملقط غيض غرامة، وثني بعناية غيض من دبوس لخلق هوك طفيف.
3. للتلاعب واستقرار الجنين أثناء الإصابة، ثني نهاية 28 GUAGE ½ بوصة إبرة شنت على حقنة الأنسولين باستخدام كماشة الإبر الأنف.

النتائج

تم تنفيذ إصابة سفينة الميكانيكية في 2 DPF الأجنة (الشكل 2A - C). النتائج إصابة في استجابة سريعة وموثوق بها تخثر مقاسا الوقت لوقف النزيف (الشكل 2D). لتحديد ما إذا كان الاختلاف في الاستجابة التخثر يمكن قياسها، كانت تدار من هيرودين تخثر إلى الأجنة عن طريق الحقن في القناة كوفييه على الفور قبل اصابة (5-10 NL من 1 وحدة لكل ميكرولتر هيرودين المذاب في الماء) (لل مظاهرة من الحقن في القناة كوفييه، انظر المادة السابقة إن الرب ^{23) 24.}

المناقشة

وقد استخدمت بنجاح الزرد كنموذج لأنواع مختلفة من الجروح بما في ذلك الضرر الليزر ^13-15، التي يسببها الليزر تخثر ^16، والظهارية اصابة ^10. نحن التقرير وسيلة لإصابة الميكانيكية التي هي بسيطة لتنفيذ وتنتج الإصابة التي تسيطر عليها في نموذج في الجسم الحي التي هي قابلة للغاية لفي الوقت الحقيقي المجهري. النتائج إصابة في رد مرقئ سريعة وقابلة للقياس وبرنامج إصلاح الجرح استنساخه التي يمكن رصدها باستخدام الفيديو وtimelapse المجهري.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
دبابيس دقيقة	أدوات العلوم الدقيقة	26002-10	قطر الطرف 0.0125 مم ، قطر القضيب 0.1 مم
حامل الدبوس	أدوات العلوم الدقيقة	26016-12
Dumont # 5 ملقط طرف ناعم	أدوات العلوم	الدقيقة 11254-20
شريحة الاكتئاب الزجاجي	البيئية المائية	M30
ذوبان منخفض Agarose	Lonza   ؛	50081	مسخن مسبقا إلى 42 & ordm; C
N-Phenylthiourea (PTU)	Sigma Aldrich	P7629
3-aminobenzoic acid (Tricaine)	Sigma Aldrich	E10521
Hirudin	Sigma Aldrich	H7016
أطباق التصوير ذات القاع الزجاجي	Mattek	P35G-1.5-14-C
المجهر	أوليمبوس	SZH10
المجهر الفلوري	Zeiss	Axio Observer
أملاح حوض السمك	حقنة الأنسولين المحيطية
الفورية مع إبرة 28.5 جرام	Becton Dickinson	329461

الأنظمة تشريح