مقالة منهجية

جيل من الفئران القلب منظم ضربات القلب المجاميع خلية استنادا ES-الخلوي البرمجة في الجمع مع Myh6-المروج-اختيار

DOI:

10.3791/52465

⸱

فبراير 17, 2015

 ,  , 
1Reference and Translation Center for Cardiac Stem Cell Therapy, University of Rostock

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول كيفية إنتاج الوظيفية الجيوب الأنفية الأنسجة العقدية من الخلايا الجذعية المحفزة الفئران (PSC). T-Box3 (TBX3) overexpression بالإضافة إلى القلب-الميوسين الثقيلة سلسلة (Myh6) اختيار المضادات الحيوية المروج يؤدي إلى نقية للغاية المجاميع خلية تنظيم ضربات القلب. هذه "التي يسببها الجيبية الأذينية-الهيئات" ("iSABs") تحتوي على أكثر من 80٪ خلايا تنظيم ضربات القلب، وتظهر زيادة معدلات عالية الضرب وقادرة على عضلة القلب وتيرة فيفو السابقين.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويستند العلاج من "متلازمة الجيوب الأنفية المرضى" على أجهزة ضبط نبضات القلب الاصطناعي. هذه تحمل مخاطر مثل فشل البطارية والالتهابات. وعلاوة على ذلك، فإنها تفتقر الاستجابة الهرمونات والإجراء العام هو مكثفة من حيث التكلفة. "أجهزة ضبط نبضات القلب البيولوجية" ولدت من شركات الأمن الخاصة قد يصبح بديلا، إلا أن المحتوى نموذجية من خلايا تنظيم ضربات القلب في الهيئات مضغي الشكل (EBS) منخفضة للغاية. بروتوكول صفها يجمع بين "البرمجة إلى الأمام" الأمنية الخاصة من الفئران عبر العقدة الجيب محفز TBX3 مع اختيار المضادات الحيوية Myh6-المروج مقرها. هذا ينتج المجاميع cardiomyocyte متسقة من> 80٪ خلايا تنظيم ضربات القلب وظيفية من الناحية الفسيولوجية. هذه "التي يسببها الجيبية الأذينية-الهيئات" ("iSABs") والتعاقد بشكل عفوي على ترددات بعد لم يتم الوصول إليها (400-500 نبضة في الدقيقة) المقابلة لخلايا عقدية المعزولة من قلوب الماوس، وتمكن من وتيرة عضلة القلب الفئران خارج الحي. باستخدام بروتوكول وصف الجيوب الأنفية نقية للغايةيمكن توليد الخلايا واحد العقدي الذي مثل يمكن استخدامها لاختبار المخدرات في المختبر. وعلاوة على ذلك، قد تصبح iSABs ولدت وفقا لهذا البروتوكول خطوة حاسمة نحو هندسة الأنسجة القلبية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مصطلح "متلازمة الجيوب الأنفية المرضى" تلخص أمراض متعددة مما يؤدي إلى تدهور نظام تنظيم ضربات القلب القلب. وهي تتألف من المرضي، أعراض بطء القلب الجيبي، كتلة الجيبي الأذيني واعتقال الجيوب الأنفية وكذلك متلازمة عدم انتظام دقات القلب، بطء القلب. وبالتالي، غالبا ما يترافق من "متلازمة العقدة الجيبية المريضة" عن أمراض القلب التي العامة مثل مرض القلب الإقفاري، بعضلة القلب أو التهاب عضلة القلب. في الوقت الحاضر، وتعتمد الطرق العلاجية على زرع أجهزة ضبط نبضات القلب الكهربائية. ومع ذلك، وهذا يسير جنبا إلى جنب مع عدد من المخاطر مثل الالتهابات وفشل البطارية. وعموما، فإن نسبة حدوث مضاعفات لا يزال مرتفعا جدا في المرضى بعد زرع جهاز تنظيم ضربات القلب الاصطناعي و. وعلاوة على ذلك، خلافا لتنظيم ضربات القلب الذاتية، وهذه الأجهزة لا تستجيب لتحفيز الهرمون.

وثمة بديل في المستقبل قد تعتمد على توفر "أجهزة ضبط نبضات القلب البيولوجية" التي يمكن أن تكون الأمنية الخاصةكمصدر الخلوي مناسبة والتي من شأنها أيضا أن تكون ذات قيمة للغاية لفي المختبر اختبار المخدرات. ومع ذلك، ومشكلة كبيرة تكمن في ظهور نادر جدا من الخلايا العقدية الجيوب الأنفية داخل هيئات مضغي الشكل (EBS) - وهذا عادة لا تتجاوز 0.5٪ ~ 1.

سابقا، فقد تبين أن "البرمجة إلى الأمام" نحو فرعية cardiomyocyte محددة أمر ممكن التحقيق عبر overexpression من أوائل متميزة عوامل النسخ القلب والأوعية الدموية مثل عامل الأديم المتوسط ​​محددة-الخلفي 1 (MesP1) وNK2 النسخ ذات الصلة، موضع 5 (Nkx2.5) 2، 3. لالحجم العادي وظيفة العقدة الجيبية الأذينية (SAN)، وT-مربع عامل النسخ Tbx3 أمر بالغ الأهمية، وهو ما ثبت لبدء برنامج الجين تنظيم ضربات القلب والسيطرة على التفريق بين SAN 4. في حين أن هذا عزز ظهور خلايا تنظيم ضربات القلب وظيفية، والمحتوى لا يزال لم تتجاوز ~ 40٪ خلال كامل سكان الخلية cardiomyocytic.

لذلك، تم إدخال خطوة اختيار المضادات الحيوية إضافي Myh6-المروج استنادا 5 من قبلنا. هذا يؤدي في النهاية إلى المجاميع cardiomyocyte بعد غير ملحوظة ("الهيئات التي يسببها صينية الأذيني." iSABs ") والتي تظهر زيادة شديدة الترددات الضرب (> 400 نبضة في الدقيقة) في المختبر، للمرة الأولى تقارب تلك التي في القلب الفئران وقابلة للمقارنة لزراعتها في المختبر الجيوب الأنفية الخلايا العقدية معزولة من قلب الفئران 6. تحت الإدارة إيزوبرينالين تتحقق حتى الترددات الضرب من 550 نبضة في الدقيقة. والجدير بالذكر أن تتكون iSABs لأكثر من 80٪ خلايا عقدية وظيفية واضحة اعتبارا من الفسيولوجية واسعة يحلل 7. في الآونة الأخيرة، عدة نهج لتوليد الجيوب الأنفية الخلايا العقدية باستخدام برمجة المباشرة 19، السطح علامات 14 أو العلاج الدوائي مع جزيئات صغيرة وصفت 16،17. ومع ذلك، وأيا من هذه الطرق أدت إلى مثل هذه نقاء عالية من خلايا تنظيم ضربات القلب وينبض ترددات قريبة من الفئران انهالفن كما لوحظ في iSABs.

وعلاوة على ذلك، في نموذج المجراة سابقا من المزروعة شرائح البطين الماوس الكبار التي فقدت النشاط الضرب العفوي بهم، وiSABs هي قادرة على الاندماج في نسيج شريحة، وبالتالي تبقى نشطة بشكل عفوي وبقوة سرعة شرائح القلب لتقلصات 7. ووصف بروتوكول مفصلة لتوليد هذه iSABs في هذه الورقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. التوصيات قبل بدء

  1. لا تستخدم الأمنية الخاصة ملوثة الميكوبلازما لأنها لن تفرق بشكل صحيح إلى خلايا عقدة الجيوب الأنفية. اختبار لتلوث الميكوبلازما قبل البدء في البروتوكول. القيام بذلك باستخدام مجموعة PCR للالسريع، والكشف عن درجة عالية من الحساسية مسببة واتبع بروتوكول الشركة المصنعة.
  2. لكل طبق بتري (الخطوة 2.3.4)، ومعطف واحد 10 سم صحن الثقافة 2 زنزانة مع معقمة 7 مل 0.1٪ الجيلاتين من الجلد أسماك المياه الباردة لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. إزالة الجيلاتين والسماح للطبق الجافة تحت ظروف معقمة في مقعد العقيمة.
  3. قبل أن تتمكن من بدء تشغيل بروتوكول التمايز كنت في حاجة الى مضاعفة transfected الماوس مستقر ES خط الخلية استنساخ تحتوي على الميزات التالية: ط) التأسيسي الإفراط في التعبير عن TBX3 باستخدام ناقلات التعبير الثدييات. ب) إن الجينات المقاومة G418 تحت سيطرة Myh6-المروج 5.
  4. يجب ك-زراعة الخلايا غير متمايزة الأمنية الخاصةد مع الخلايا المغذية المشع في ظل ظروف قياسية كما هو موضح 1.

2. التمايز الداخلي

  1. قبل يومين من التمايز - إزالة الأمنية الخاصة من الخلايا المغذية.
    1. نضح المتوسطة، وغسل الخلايا مع 10 مل الفوسفات مخزنة المالحة PBS، إضافة 7 مل كولاجيناز الرابع حل واحتضان الخلايا لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية. وضع مرشح 40 ميكرون العقيمة في أنبوب 50 مل.
    2. شطف بعناية المستعمرات PSC (تجنب لإزالة الخلايا المغذية) من قبل pipetting الحل كولاجيناز صعودا وهبوطا 5 مرات.
    3. نقل تعليق خلية إلى تصفية 40 ميكرون، وشطف الفلتر ثلاث مرات مع 8 مل PBS. بدوره حولها مرشح ووضعه رأسا على عقب في طبق بتري. إزالة المستعمرات خلية PSC من قبل pipetting 10 مل PBS إلى الجزء السفلي من مرشح.
    4. نقل تعليق خلية إلى أنبوب 15 مل وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 × ز.
    5. إزالة PBS، تعليق الخلايا في 1 مل Accutase وأناncubate عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    6. إضافة 10 مل PBS، مزيج حل الخلية بواسطة pipetting انها صعودا وهبوطا 5 مرات وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 × ز.
    7. إزالة PBS، تعليق الخلايا في 10 مل زراعة المتوسطة وتحديد عدد الخلايا.
    8. البذور 15،000 خلية / سم 2 على 75 سم 2 فلتر القارورة وزراعتها لمدة 2 أيام عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO2. بعد 2 أيام ينبغي أن تكون قارورة 50-70٪ متموجة.
  2. يوم 0 - بدء التمايز
    1. إزالة المتوسطة وغسل الخلايا مع 10 مل PBS.
    2. نضح في برنامج تلفزيوني، إضافة 2 مل Accutase واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. وضع مرشح 40 ميكرون العقيمة في أنبوب 50 مل.
    3. إضافة 10 مل PBS، ونقل تعليق خلية إلى 40 ميكرون فلتر، وشطف التصفية عن طريق إضافة 10 مل PBS وأجهزة الطرد المركزي من خلال تدفق لمدة 5 دقائق في 300 × ز.
    4. تعليق الخلايا في 10 مل التمايز المتوسطة وتحديد عدد الخلايا.
    5. تمييع رانه الخلية تعليق مع التمايز المتوسط ​​إلى تركيز النهائي من 20،000 خلية / مل.
    6. ماصة 20 مل من الماء و 5 مل قطرة (HD) حل في طبق بيتري الدرجة الثانية لتجنب تجفيف التدريجي من ويي شنقا.
      ملاحظة: لكل 24 لوحة تحتوي أيضا iSABs (انظر القسم 2.8.6.4/2.8.7) تبدأ مع 16 أطباق بتري.
    7. ماصة ما يصل الى 50 مل تعليق خلية في علبة.
    8. بدوره حولها غطاء طبق بتري. وضع 180 ويي تحتوي كل منها على 20 ميكرولتر (400 خلية / HD) تعليق الخلية على الغطاء باستخدام ماصة 12 قناة.
    9. تحويل بعناية حول الغطاء وضعه على طبق بيتري.
      ملاحظة: سرعة الدوران في المكان غطاء مهم جدا. إذا تم تشغيل الغطاء حول بطيئة جدا أو سريع جدا، والتوتر السطحي للتعليق الخلية ليست عالية بما فيه الكفاية للاحتفاظ قطرات شنقا على الغطاء. قبل محاولة إنتاج ويي لممارسة مرة الأولى الدوران في المكان الغطاء مع 20 قطرات ميكرولتر من المتوسط.
    10. زراعة الخلايا لمدة 2 أيام في 37 ° C، 5٪ CO 2 إلى السماح لهم بتشكيل EBS.
      ملاحظة: مكان طبق بتري واحد مملوء بالماء في الجزء العلوي من كومة من 5 أطباق بتري. وإلا فإن HD في طبق بتري العلوي سوف تجف.
  3. يوم 2
    1. تحويل بعناية حول غطاء طبق بيتري من الدرجة الثانية ونقل EBS المستمدة من اثنين من أطباق بتري (360 EBS) إلى أنبوب 50 مل.
    2. انتظر 10 دقيقة للسماح للEBS تستقر في قاع الأنبوب (لا الطرد المركزي EBS).
    3. نضح مثل كثير المتوسطة وقت ممكن، تعليق EBS في 10 مل التمايز المتوسطة ونقل تعليق إلى 10 سم طبق بتري.
  4. يوم 2-6 تعليق الثقافة
    1. زراعة EBS في تعليق لمدة 4 أيام في 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2، وتغيير المتوسطة بعد 2 أيام.
      ملاحظة: حتى لو طبق بتري لا المغلفة (على العكس من طبق ثقافة الخلية) وEBS غالبا ما نعلق على السطح. السيطرة على أطباق بتري لEBS تعلق كل يوم، وإذا فصل ما يلزم من EBSمن على سطح الأرض من قبل pipetting لطيف. اختياري: يهز أطباق بتري بشكل مستمر خلال الفترة الثقافة تعليق. كن حذرا مع سرعة شاكر. ينبغي أن EBS لا تتراكم في منتصف ولا تطفو إلى حدود أطباق بتري.
  5. اليوم 6
    1. نقل EBS من واحدة طبق بيتري لالجيلاتين واحد المغلفة صحن 10 سم ثقافة 2 الخلية.
  6. يوم 7-12
    1. الخلايا ينبغي أن تبدأ للفوز على بعد 8-12 أيام. تحقق لضرب بؤر الخلايا يوميا تحت المجهر. تبدأ الخلايا لتشكيل طبقة.
    2. تغيير المتوسطة يوميا.
      ملاحظة: بعد تغيير المتوسطة، والخلايا تتطلب 3-4 ساعة لاستعادة والبدء في الضرب مرة أخرى.
  7. يوم 12-15 اختيار الخلايا العقدية الجيوب الأنفية.
    1. بعد ثلاثة أيام بدأت خلايا الضرب (حوالي 12-15 يوم)، نضح 10 المتوسطة وماصة مل من المتوسط ​​التمايز الطازجة التي تحتوي على 400 ميكروغرام / مل G418 إلى الخلايا.
    8. بعد أربعة أيام من بداية التحديد فصل طبقة الخلايا.
    ملاحظة: من الممكن أن طبقة الخلايا يتم فصل بالفعل من على سطح الأرض.
    1. إزالة المتوسطة بعناية دون الشفط طبقة الخلايا.
    2. إضافة 10 مل من برنامج تلفزيوني وإزالة PBS بعناية دون الشفط طبقة الخلايا.
    3. إضافة 10 مل من كولاجيناز IV حل، ونقل الخلايا إلى أنبوب 50 مل واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    4. مزيج بقوة تعليق من قبل pipetting صعودا وهبوطا 10 مرات واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. يجب أن يحدث تعليق مجموعات صغيرة. إذا لا تزال هناك أجزاء كبيرة من طبقة اليسار، ثم كرر الخطوة 2.8.4 مرتين أخريين.
    5. إضافة 20 مل من برنامج تلفزيوني وأجهزة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 300 ز س.
    6. نضح PBS بعناية.
      ملاحظة: إذا iSABs هي أن تتولد المضي قدما في خطوة 2.8.7. إذا iSAB الجيوب الأنفية المستمدة الخلايا واحد العقدي هي أن تتولد على المضي قدما مع خطوة 2.9.
    7. تعليق الخلايافي 12 مل التمايز متوسطة تحتوي على 400 ميكروغرام / مل G418 والبذور منها في 6 آبار من الجيلاتين المغلفة 24 بئرا (2 مل / جيد).
  8. جيل من الخلايا العقدية واحدة.
    1. تعليق الخلايا من الخطوة 2.8.6 في 5 مل Accutase واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    2. مزيج بقوة تعليق من قبل pipetting صعودا وهبوطا 10 مرات واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    3. إضافة 20 مل من برنامج تلفزيوني وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 × ز.
    4. تعليق الخلايا في 12 مل التمايز المتوسطة التي تحتوي على 400 ميكروغرام / مل G418 والبذور منها في 6 آبار من الجيلاتين المغلفة 24 بئرا (2 مل / جيد).
  9. يوم 2 بعد التفكك، نضح المتوسطة ويغسل خلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني. إضافة 1 مل التمايز المتوسطة / جيد.
  10. يوم 4-8 بعد التفكك، وتغيير المتوسطة كل الثانية يوم 2. في يوم 10 بعد iSABs استخدام التفكك أو iSAB الجيوب الأنفية المستمدة العقدي متاحة لمزيد من التحليل الخلايا واحد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول صفها يسمح جيل من iSABs مع تواتر الضرب من حوالي 450 نبضة في الدقيقة من شركات الأمن الخاصة (كما هو موضح في الفيلم) التي تقع بالقرب من وتيرة الضرب الماوس القلب. بعد تفكك iSABs (الخطوة 2.8.8) تظهر الخلايا واحد المرصودة شكل نموذجي للخلايا العقدة الجيب (خلايا المغزل والعنكبوت) كما هو مبين في الشكل (1). هذه الخلايا البروتينات صريحة للغاية والتي هي معروفة ليكون أساسيا لوظيفة من العقدة الجيب مثل تنشيط فرط الاستقطاب دوري بوابات النوكليوتيدات الموجبة قناة 4 (Hcn4)، ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

القدرة على إنتاج الخلايا الجذعية المستمدة خلايا تنظيم ضربات القلب القلب قد تسمح إعادة تشكيل إيقاع القلب السليم بمعنى "أجهزة ضبط نبضات القلب البيولوجية". وبالمثل، فإن اختبار المخدرات في المختبر تستفيد من توافرها. يمكن الأمنية الخاصة تؤدي إلى أي نوع من الخلايا في الجسم الثدييات بما في ذلك العضلية مع خصائص خلية تنظيم ضربات القلب 8،9،10،11،12،13. ومع ذلك، وعادة السكان خلية داخل "الهيئات مضغي الشكل" هي غير متجانسة للغاية، الأمر الذي يؤدي حتما لمتطلبات است...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
وسط سائل Iscove مع الجلوتامين المستقرBiochrom AGFG 0465
DMEM وسط سائل بدون Na-pyruvate ، مع الجلوتامين المستقرBiochrom AGFG 0435
CLS النوع الرابع ، CLS IVBiochrom AGC4-22
الأحماض الأمينية غير الأساسيةBiochrom AGK 0293
FBS SuperiorBiochrom AG S0615
بيروفات الصوديوم (100 ملم) سائلBiochrom AGL 0473
G 418-BC (محلول جاهز للاستخدام) ،كاشف معقم Biochrom AGA 2912
PP f.multichannel pip. 60 مل ،علامة تجارية703409
AccutaseeBioscience، Inc.00-4555-56
Eppendorf Xplorer / Xplorer plus ، ماصة إلكترونيةEppendorf4861000155
Falcon Cell Strainer 40 & micro ؛ مفالكون352340
البنسلين / الستربتومايسين   ؛GE HealthcareP11-010
أطباق بتريGreiner BioOne663102
DPBS بدون Ca و MgPAN-BiotechP04-36500
مصل الأبقار الجنينيPAN-BiotechP30-3302
عامل مثبط لسرطان الدمPhoenix Europe GmbHLIF-250
أطباق بتري تربيعيةRothPX67.1
الجيلاتين من جلد السمك في الماء الباردSigmaAldrichG7765
2-MercaptoethanolSigmaAldrichM3148 
1-ثيوجلسرينسيجماألدريتشM6145
أطباق زراعة الأنسجةTPP93100
قارورة زراعة الأنسجةTPP90076
لوحات اختبار زراعة الأنسجة (24 بئر)TPP92424
خزان معقمة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers. Differentiation. 48 (3), 173-182 (1991).
  2. David, R., et al. MesP1 drives vertebrate cardiovascular differentiation through Dkk-1-mediated blockade of Wnt-signalling. Nat Cell Biol. 10, 338-345 (2008).
  3. David, R., et al. Forward programming of pluripotent stem cells towards distinct cardiovascular cell types. Cardiovasc Res. 84 (2), 263-272 (2009).
  4. Hoogaars, W. M., et al. Tbx3 controls the sinoatrial node gene program and imposes pacemaker function on the atria. Genes Dev. 21 (9), 1098-1112 (2007).
  5. Klug, M. G., Soonpaa, M. H., Koh, G. Y., Field, L. J. Genetically selected cardiomyocytes from differentiating embronic stem cells form stable intracardiac grafts. J Clin Invest. 98 (1), 216-224 (1996).
  6. Marger, L., et al. Pacemaker activity and ionic currents in mouse atrioventricular node cells. Channels (Austin). 5 (3), 241-250 (2011).
  7. Jung, J. J., et al. Programming and isolation of highly pure physiologically and pharmacologically functional sinus-nodal bodies from pluripotent stem cells). Stem cell reports. 2 (5), 592-605 (2014).
  8. Maltsev, V. A., Wobus, A. M., Rohwedel, J., Bader, M., Hescheler, J. Cardiomyocytes differentiated in vitro from embryonic stem cells developmentally express cardiac-specific genes and ionic currents. Circulation research. 75 (2), 233-244 (1994).
  9. He, J. Q., Ma, Y., Lee, Y., Thomson, J. A., Kamp, T. J. Human embryonic stem cells develop into multiple types of cardiac myocytes: action potential characterization. Circ Res. 93 (1), 32-39 (2003).
  10. Yanagi, K., et al. Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels and T-type calcium channels confer automaticity of embryonic stem cell-derived cardiomyocytes. Stem cells. 25 (11), 2712-2719 (2007).
  11. Barbuti, A., et al. Molecular composition and functional properties of f-channels in murine embryonic stem cell-derived pacemaker cells. J Mol Cell Cardiol. 46 (3), 343-351 (2009).
  12. Ma, J., et al. High purity human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: electrophysiological properties of action potentials and ionic currents. American journal of physiology. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 301 (5), H2006-H2017 (2011).
  13. David, R., Franz, W. M. From pluripotency to distinct cardiomyocyte subtypes. Physiology (Bethesda). 27 (3), 119-129 (2012).
  14. Scavone, A., et al. Embryonic stem cell-derived CD166+ precursors develop into fully functional sinoatrial-like cells). Circ Res. 113 (4), 389-398 (2013).
  15. Morikawa, K., et al. Identification, isolation and characterization of HCN4-positive pacemaking cells derived from murine embryonic stem cells during cardiac differentiation. Pacing Clin Electrophysiol. 33 (33), 290-303 (2010).
  16. Wiese, C., et al. Formation of the sinus node head and differentiation of sinus node myocardium are independently regulated by Tbx18 and Tbx3. Circ Res. 104 (3), 388-397 (2009).
  17. Kleger, A., et al. Modulation of calcium-activated potassium channels induces cardiogenesis of pluripotent stem cells and enrichment of pacemaker-like cells. Circulation. 122 (18), 1823-1836 (2010).
  18. Bakker, M. L., et al. T-box transcription factor TBX3 reprogrammes mature cardiac myocytes into pacemaker-like cells. Cardiovasc Res. 94 (3), 439-449 (2012).
  19. Kapoor, N., Liang, W., Marban, E., Cho, H. C. Direct conversion of quiescent cardiomyocytes to pacemaker cells by expression of Tbx18. Nat Biotechnol. 31 (1), 54-62 (2013).
  20. Johns, D. C., et al. Adenovirus-mediated expression of a voltage-gated potassium channel in vitro (rat cardiac myocytes) and in vivo (rat liver). A novel strategy for modifying excitability. J Clin Invest. 96 (2), 1152-1158 (1995).
  21. Nuss, H. B., Marban, E., Johns, D. C. Overexpression of a human potassium channel suppresses cardiac hyperexcitability in rabbit ventricular myocytes. J Clin Invest. 103 (6), 889-896 (1999).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة