مقالة منهجية

ثلاثي الأبعاد نموذج المشارك الثقافة ل-ورم انسجة التفاعل

17K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52469

⸱

فبراير 2, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Respiratory Medicine, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo, 2Department of Clinical Laboratory, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo, 3Division for Health Service Promotion, The University of Tokyo, 4Department of Biochemistry, Nihon University School of Dentistry, 5Department of Biochemistry, Ohu University School of Pharmaceutical Sciences

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا بروتوكولا للزراعة المشتركة في ثلاثة أبعاد ، وهو أمر مفيد للتحقيق في التفاعلات متعددة الخلايا والتعديل المعتمد على المصفوفة خارج الخلية لسلوك الخلايا السرطانية. في هذا النموذج التجريبي ، يتم زراعة الخلايا السرطانية على مواد هلامية من الكولاجين مدمجة مع الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان البشري.

الملخص

يحدث تطور السرطان (البدء والنمو والغزو والورم الخبيث) من خلال التفاعلات بين الخلايا الخبيثة والخلايا اللحمية السرطانية المحيطة. تتكون البيئة المكروية للورم من مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا ، مثل الخلايا الليفية والخلايا المناعية والخلايا البطانية الوعائية والخلايا المحيطة والخلايا المشتقة من نخاع العظام ، المضمنة في المصفوفة خارج الخلية (ECM). تلعب الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) دورا مؤيدا للأورام من خلال إفراز العوامل القابلة للذوبان وتكوين الأوعية الدموية وإعادة تشكيل ECM. اعتمدت النماذج التجريبية لبقاء الخلايا السرطانية وانتشارها وهجرتها وغزوها في الغالب على مزارع الأنسجة أحادية الخلية وأحادية الطبقة ثنائية الأبعاد أو فحوصات غرفة بويدن. ومع ذلك ، فإن هذه التجارب لا تعكس بدقة الظروف الفسيولوجية أو المرضية في العضو المريض. لاكتساب فهم أفضل لتفاعلات لحمة الورم أو مصفوفة الورم ، توفر الثقافات متعددة الخلايا وثلاثية الأبعاد أدوات أكثر قوة للتحقيق في الاتصال بين الخلايا والتعديل المعتمد على ECM لسلوك الخلايا السرطانية. كمنصة لهذا النوع من الدراسة ، نقدم نموذجا تجريبيا يتم فيه زراعة الخلايا السرطانية على مواد هلامية الكولاجين المضمنة في الثقافات الأولية ل CAFs.

المقدمة

يمكن اعتبار الأنسجة السرطانية نوعا من الأعضاء ، والتي تتطور من خلال التفاعلات الوثيقة بين السرطان والبيئة المكروية اللحمية للورم ، والتي تتكون من الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) والخلايا المناعية والأوعية السرطانية والمصفوفة خارج الخلية (ECM). CAFs هي المصدر الرئيسي للعوامل القابلة للذوبان (السيتوكينات وعوامل النمو والكيموكينات) التي تمارس تأثيرات ميتوجينيك ومؤيدة للهجرة ومؤيدة للتوغل على الخلايا السرطانية. كما أنها تحفز تكوين الأوعية السرطانية وتجنيد الخلايا السليفة ، مثل الخلايا المشتقة من نخاع العظام (BMDC). تشارك CAFs المنشطة في إنتاج وإعادة تشكيل ECM ، وبالتالي تعزيز نمو وانتشار الخلاياالسرطانية 1. توفر CAFs أيضا مكانا مناسبا يسهل استعمار الخلايا السرطانية والورم الخبيث وقادرة على منح الأنماط الظاهرية للخلايا الجذعية للخلايا السرطانية المجاورة. تشير الملاحظات المرضية إلى أن التفاعلات اللحمية أو التغيرات الليفية في الأنسجة السرطانية تدل على سوء التشخيص. أظهرت الدراسات الحديثة أيضا أن السمات اللحمية للورم ، مثل التوقيع الجيني ، يمكن أن تتنبأ بتشخيص المريض. علاوة على ذلك ، يمكن للعوامل المشتقة من CAF تعديل الحساسية للعلاج الكيميائي ، مما يسلط الضوء على دور CAFs في تحديد حساسية الدواء ومقاومته2.

نظرا لأن CAFs تلعب دورا متعدد الأوجه في تعزيز تطور الورم من خلال مسارات الإشارات التي تتوسط التفاعلات بين CAFs وأنواع الخلايا المختلفة داخل البيئة المكروية للورم ، فقد جذبت اهتماما متزايدا كأهداف جديدة لعلاجات السرطان. يمثل عدم تجانس مجموعات الخلايا داخل البيئة المكروية للسرطان عقبة أمام استهداف CAFs. تم اقتراح العديد من علامات CAFs ، مثل أكتين العضلات الملساء α (α-SMA) ، وبروتين تنشيط الخلايا الليفية (FAP) ، وبروتين الخلايا الليفية النوعي -1 (FSP-1: وتسمى أيضا S100A4). ومع ذلك ، فإن هذه العلامات الجزيئية ليست خاصة بتمييز CAFs عن الخلايا الأخرى الموجودة في الأنسجة غير السرطانية3. لذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات للحصول على مزيد من المعرفة حول الخصائص المحددة ل CAFs. تحقيقا لهذه الغاية ، من المفيد توصيف CAFs الأولية المزروعة مقارنة بالخلايا الليفية الطبيعية المطابقة للمريض.

في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن تحليلات على CAFs المشتقة من المريض في العديد من أنواع السرطان ، مما يكشف عن أنماط تعبير جيني فريدة وسلوكيات خلوية مقارنة بالخلايا الليفية المشتقة من الأنسجة غير السرطانية. باستخدام CAFs المعزولة من أنسجة سرطان الرئة البشرية ، قمنا بتطوير طريقة زراعة مشتركة ثلاثية الأبعاد ، مما يمكننا من تقييم خصائص CAFs الرئة. في هذا النموذج ، قمنا بالتحقيق في تأثيرات CAFs على غزو الخلايا السرطانية للرئة وانتشارها وتقلص هلام الكولاجين ، والتي لخصت تجريبيا الأدوار المعززة للورم ل CAFs4 في الرئة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجان أخلاقيات المناسبة.

1. الثقافة الابتدائية من الخلايا الليفية الرئة الإنسان

  1. مجموعة من أنسجة الرئة:
    1. الحصول على عينات أنسجة الرئة البشرية من غرفة العمليات الجراحية مباشرة. جمع حوالي 1 سم 3 كتل من أنسجة الرئة السرطانية وغير السرطانية، مع عينة غير سرطانية جمعها بعيدة عن الورم ممكن.
    2. تعليق العينات في المتوسط ​​تعديل النسر Dulbecco لفي (DMEM) تستكمل مع 100 وحدة / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / الستربتومايسين مل و 0.25 ميكروغرام / مل الأمفوتريسين B (المصل خالية متوسطة). الحفاظ على عينات معلقة في العقيمة 50 مل الأنابيب ونقلها إلى المختبر.
      ملاحظة: الخلايا الليفية هي الارتحال والتكاثري مقارنة مع أنواع الخلايا الأخرى، مثل طلائي، البطانية وخلايا العضلات الملساء. طريقة ثمرة يستفيد من هذه الميزات من الخلايا الليفية، وoutgroخلايا الجناح من أقسام الأنسجة وفيرة في الخلايا الليفية. بعد العديد من المقاطع خلية، تفشل أنواع الخلايا الأخرى من أجل البقاء ونشر في DMEM مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، مما أدى إلى تنقية الثقافات الخلايا الليفية. ويمكن استخدام الخلايا 3-7 المقاطع التالية الثقافة الابتدائية.
  2. ثقافة يزدرع وتكييف للنمو الخلية:
    1. أداء ثقافة الأولية من الخلايا الليفية باستخدام بروتوكول ذكرت سابقا مع تعديلات 5.
    2. في المختبر، ضع عينة الأنسجة على طبق 10 سم زراعة الأنسجة دون مستنبت ومقطعة إلى أجزاء صغيرة ~ 2-3 ملم في حجم باستخدام ملقط معقم ومشرط. وخلال هذه العملية، تجنب الوقوع في قسم الجافة، وإلا قد انخفضت قيمتها كفاءة ثمرة الخلية.
  3. فصل طبقة الخلايا الظهارية والنسيج الضام:
    1. نقع الأقسام قطع الأنسجة في الثقافة المتوسطة التي تحتوي على 2،000 PU / مل dispase أنا والثقافة لمدة 16 ساعة في 4 درجات مئوية.
    2. نقل أقسام الأنسجة إلى الطبق، وفصل طبقة الخلايا الظهارية من النسيج الضام المجاورة. معالجة المقاطع في مقاعد البدلاء نظيفة لتجنب التلوث من الكائنات الحية الدقيقة.
      ملاحظة: إذا كانت هناك حاجة ثقافة الأولية من الخلايا الظهارية، تنفيذ الخطوة 1.3. إذا الليفية الوحيدة هي أن تكون معزولة، حذف خطوة 1.3 لأن ثقافة يزدرع وخلية المقاطع اللاحقة غير مواتية للخلايا الظهارية، والتي تسفر عن السكان الخلايا الليفية.
  4. الحجز على أقسام الأنسجة:
    1. تخطر على الأنسجة إلى 1 مم قطع باستخدام اثنين من المشارط. إذا كان القطع ليست صغيرة بما فيه الكفاية، وأنها فصل بسهولة أكثر من الطبق، والخلايا سوف تفشل لتتفوق على سطح الطبق.
    2. ضع أقسام أنسجة الرئة صغيرة بعيدا عن بعضها البعض للحفاظ على منطقة فارغة المحيطة كل قطعة. جعل خدوش على سطح الطبق زراعة الأنسجة باستخدام شفرة مشرط لتسهيل الحجز على أقسام الأنسجة.
      ملاحظة: الخدشيبدو أيضا لتسهيل نمو الخلايا، وتوفير المسارات على طول الخلايا التي يمكن أن يهاجر.
      1. بدلا من ذلك، ضع قطعة نسيج مفروم بشكل فردي في كل بئر من لوحة 6 جيدا، وغطاء لهم مع انزلاق الغطاء. إرفاق زلة غطاء على سطح لوحة باستخدام السيليكون الشحوم.
      2. وضع سيليكون الشحوم عند نقطتين 1.5 سم بعيدا في كل بئر باستخدام دبوس معقم. تغطية قطعة نسيج من شأنه أن يعزز فعالية ثمرة الخلايا وانتشار الخلايا بعد عدة فقرات.
  5. اللاحقة ثقافة يزدرع:
    1. بلطف إضافة مستنبت إلى الطبق قبل أقسام الأنسجة تجف، ويتم فقدان كفاءة ثمرة خلية بالنسبة للجزء الأكبر إذا كانت العينات تجف. لا صب المتوسط ​​بسرعة كبيرة كما المقاطع الأنسجة أن فصل.
    2. خلايا الثقافة في DMEM مع 10٪ FBS. استخدام ما يكفي لتغطية المتوسطة فقط الأنسجة، ولكن ليس كثيرا أن يسمح العائمة، كما الطفو إضافي يعزز مفرزة منالطبق.
  6. مرور الخلية:
    1. التعامل مع الثقافة المتوسطة مع الرعاية في جميع الأوقات كما الحركات المتكررة من الطبق الثقافة يمكن أن يؤدي إلى مفرزة من أقسام الأنسجة.
    2. ضع الأطباق الثقافة في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 5-7 أيام. تحديث المتوسطة كل يوم، والتعامل مع الأطباق ثقافة الحد الأدنى من خلال التغييرات المتوسطة. الليفية يتخلصون من حافة أقسام الأنسجة خلال الأسابيع القليلة المقبلة.
      ملاحظة: بعد ~ 2-3 أسابيع، الخلايا الليفية تعدى تصل إلى ما يقرب التقاء، وهذا يتوقف على مقدار مساحة السطح.
    3. غسل الخلايا مع 1X PBS، وإضافة 1 مل من التربسين أنا إلى اللوحة.
    4. بعد trypsinization، فصل الخلايا باستخدام 9 مل من DMEM تستكمل مع 10٪ FBS. جمع الخلايا العالقة في المتوسط ​​في أنبوب 10 مل، جنبا إلى جنب مع أقسام الأنسجة. بعد الطرد المركزي لتشكيل الكريات خلية، resuspend والكريات مما أدى إلى الوسيلة الجديدة.
    5. البذور الخلايا والأنسجة أقسام الصعود إلى طريق مسدود الجديدطبق تلح، وعند هذه النقطة تفشل الأنسجة لنعلق على الطبق في حين أن الخلايا تلتزم وتنمو. في اليوم التالي، وإزالة قطعة نسيج عائمة بواسطة الشفط، وتغيير المتوسطة. الليفية المرفقة تنتشر مع الثقافات اللاحقة.

2. ثلاثة الأبعاد المشارك ثقافة الخلايا الليفية الرئة الإنسان وخلايا سرطان

  1. إعداد الخلايا والكواشف:
    1. ما يقرب من استخدام 2 × 10 5 خلايا الظهارية و 2.5 × 10 5 الخلايا الليفية لكل بئر. إعداد نوع الكولاجين IA (3 ملغ / مل، ودرجة الحموضة 3)، FBS (100٪)، عازلة إعادة (50 ملي هيدروكسيد الصوديوم، 260 ملي NaHCO 3، 200 ملي HEPES)، 5X DMEM، DMEM تستكمل مع 10٪ FBS للثقافة الخلايا الليفية، والمتوسطة 3D شارك في ثقافة (1: 1 خليط من ثقافة الخلايا الليفية المتوسطة ومستنبت لخلايا السرطان).
    2. ثقافة A549 خلايا السرطان الرئوي، والخلايا الليفية وA549 3D شارك في ثقافة في DMEM تستكمل مع 10٪ FBS.
  2. الكولاجين جل وormation الوقود النووي:
    1. غسل الخلايا الليفية مثقف في 10 سم الطبق مع 1X PBS، وإضافة 1 مل من التربسين أنا إلى اللوحة. بعد trypsinization ل~ 5 دقائق عند 37 درجة مئوية، وفصل الخلايا باستخدام 9 مل DMEM تستكمل مع 10٪ FBS. جمع الخلايا العالقة في المتوسط ​​في أنبوب 10 مل، ولهم في أجهزة الطرد المركزي 200-300 x ج لتشكيل الكريات الخلية.
    2. Resuspend وكريات مما أدى إلى 100٪ FBS في كثافة 5 × 10 5 / مل.
    3. تحضير هلام الكولاجين على الجليد. تبريد الكواشف، الماصات وأنابيب في الثلاجة قبل الإجراء التالي. حتى على الجليد، وخليط يتصلب إلى حد ما، والحجم الإجمالي هو أقل من مجموع كل المكونات.
    4. في كل بئر، وإعداد جل الكولاجين عن طريق خلط 0.5 مل من تعليق الخلايا الليفية (2.5 × 10 5 خلايا) في FBS، 2.3 مل نوع IA الكولاجين، 670 ميكرولتر 5X DMEM، و 330 عازلة إعادة ميكرولتر. السماح المواد الهلامية لضبط بسهولة في درجة حرارة الغرفة.
      1. ماصة بقوة لضمان وجود ميل متجانسةxture. تجنب خلق فقاعات أثناء عملية pipetting ل.
    5. يضاف خليط (3 مل) إلى كل بئر من لوحة 6 جيدا والسماح ليهلم في الحاضنة عند 37 درجة مئوية دون اضطراب لمدة 30-60 دقيقة.
  3. ثقافة الخلايا السرطانية على هلام الكولاجين:
    1. أداء ثلاثية الأبعاد شارك في الثقافة باستخدام بروتوكول ذكرت سابقا مع تعديلات 6.
    2. الخلايا السرطانية resuspend في المتوسط ​​3D شارك في ثقافة (أو في DMEM مع 10٪ FBS في حالة الخلايا A549) في مناطق ذات كثافة من 1 × 10 5 / مل.
    3. صب 2 مل من محلول خلية معلق (2 × 10 5 خلايا) على سطح كل هلام. تعديل عدد الخلايا من الخلايا السرطانية أو الخلايا الليفية في ثقافة مشتركة اعتمادا على الظروف التجريبية.
  4. جل انكماش:
    1. احتضان المواد الهلامية بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية حتى الخلايا السرطانية يمكن أن تنضم إلى هلام الكولاجين. فصل كل هلام، وتوليد "ثقافة العائم 'في كل بئر سو لوحة 6 جيدا.
      ملاحظة: باستخدام ثقافة العائمة، وبفعل التغيرات المختلفة في الحجم جل من التوتر الميكانيكية وتدهور الكولاجين، والتي يتم بوساطة التفاعل الخلوي بين الخلايا السرطانية المشارك مثقف والخلايا الليفية.
    2. استخدام الزاوية 21 G إبرة أو ملعقة صغيرة لفصل كل هلام من على حافة البئر. كل 2-3 أيام، تحديث الآبار مع 2 مل من 3D شارك في ثقافة المتوسط. قياس حجم كل هلام كل يوم لمدة 5 أيام.
  5. تحليل المواد الهلامية الكولاجين:
    1. قياس محتوى الكولاجين من كل هلام باستخدام أساليب الكميات الكولاجين، مثل فحص Sircol. لتحليل transcriptomic أو الكمي RT-PCR RNA بعد جمع من المواد الهلامية 5.

3. الهواء السائل واجهة الثقافة والغزو الفحص

  1. بعد زراعة المواد الهلامية الكولاجين عند 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام، وتعريض المواد الهلامية تعاقدت على الهواء عن طريق وضعها على شبكة (70 ميكرون حجم المسام) في نيو 6-لوحات جيدة. جعل شبكة من مصافى خلية المتاحة تجاريا المستخدمة في التدفق الخلوي.
  2. بلطف ملء كل جيدا مع 11 مل من 3D شارك في ثقافة المتوسط.
  3. ضع المواد الهلامية على شبكة باستخدام ملعقة العقيمة، وإزالة أي وسيط المتبقية من المواد الهلامية. على هذا الشرط، غمر المواد الهلامية في المتوسط ​​في حين فضح السطح العلوي من هلام للهواء. تحديد هذا الشرط الثقافة باعتبارها واجهة الهواء السائل.
    ملاحظة: بعد 5-7 أيام من الحفاظ على ثقافة واجهة الهواء السائل عند 37 درجة مئوية في الحاضنة، وسرطان الخلايا الغازية تهاجر إلى هلام. اعتمادا على نوع من الخلايا ونتيجة التفاعلات الخلوية، وبفعل درجات متفاوتة من الخلايا التغيير الصرفي في خلايا السرطان عن طريق ثقافة واجهة الهواء السائل.
  4. لتقييم النسيجي، إصلاح هلام في حل الفورمالين بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة وتضمين في البارافين. وصمة عار أقسام العمودية (4 ميكرومتر) مع الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E). لتحليل المناعى سن القسمين 4.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هذه الطريقة المشارك الثقافة، ومحاكاة المكروية الورم، هو أداة مفيدة لتحقيق التفاعل بين الخلايا السرطانية والخلايا الليفية جزءا لا يتجزأ من المواد الهلامية الكولاجين. في دراسة سابقة، تم تقييم ثلاثة المعلمات في هذا النموذج التجريبي: انكماش الكولاجين هلام، غزو الخلايا السرطانية والتغيير الصرفي. ويقدر انتشار الخلايا السرطانية أيضا باستخدام Ki67 المناعية 4. تم جمع عينات أنسجة الرئة من أقسام السرطانية وغير السرطانية من الفص الرئة مقطوعة (الشكل 1A). كانت مفروم ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تشكيل مقاهي عنصرا رئيسيا من ECM المحيطة الخلايا السرطانية وليس فقط توفير سقالة للورم، ولكن أيضا المشاركة بنشاط في تطوير ورم 7. تراكم الأدلة في كشف النقاب عن تأثير CAFS أو الجزيئات المرتبطة بها على أحوال الطقس في نهاية المطاف، وتسليط الضوء على الأدوار الحاسمة من CAF بوساطة تطور الورم 8.

في الدراسة السابقة، قمنا بتوظيف طريقة ثمرة لعزل سي أي إف إس 4 الرئة. في هذه التجربة، والحفاظ على...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (26461185 و 25460137).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
DMEMSigma-AldrichD5796
FBSGIBCO10437
نوع الكولاجين IANitta الجيلاتين Inc.CELL-1A
إعادة التشكيل عازلةنيتا جيلاتين Inc.
غطاء زلةNUNC174934
شحم سيليكونDow Corning Torayشحم
Dispase IWAKO386-02271
6 آبار صفيحةBDFalcon 353046
مصفاة خلية (70 & mu ؛ م)دينار بحريني فالكون352350
عالي الفراغ

المراجع

  1. Strell, C., Rundqvist, H., Ostman, A. Fibroblasts-a key host cell type in tumor initiation, progression, and metastasis. Ups. J. Med. Sci. 117 (2), 187-195 (2012).
  2. Augsten, M., Hägglöf, C., Peña, C., Ostman, A. A digest on the role of the tumor microenvironment in gastrointestinal cancers. Cancer Microenviron. 3 (1), 167-176 (2010).
  3. Augsten, M. Cancer-Associated Fibroblasts as Another Polarized Cell Type of the Tumor Microenvironment. Front. Oncol. 4, 62(2014).
  4. Horie, M., et al. Characterization of human lung cancer-associated fibroblasts in three-dimensional in vitro co-culture model. Biochem. Biophys. Res. Commun. 423 (1), 158-163 (2012).
  5. Ohshima, M., et al. TGF-β signaling in gingival fibroblast-epithelial interaction. J. Dent. Res. 89 (11), 1315-1321 (2010).
  6. Ikebe, D., Wang, B., Suzuki, H., Kato, M. Suppression of keratinocyte stratification by a dominant negative JunB mutant without blocking cell proliferation. Genes Cells. 12 (2), 197-207 (2007).
  7. Orimo, A., Weinberg, R. A. Stromal fibroblasts in cancer: a novel tumor-promoting cell type. Cell Cycle. 5 (15), 1597-1601 (2006).
  8. Paulsson, J., Micke, P. Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer. Semin. Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).
  9. Navab, R., et al. Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108 (17), 7160-7165 (2011).
  10. Herrera, M., et al. Functional heterogeneity of cancer-associated fibroblasts from human colon tumors shows specific prognostic gene expression signature. Clin. Cancer Res. 19 (21), 5914-5926 (2013).
  11. Hägglöf, C., et al. Stromal PDGFRbeta expression in prostate tumors and non-malignant prostate tissue predicts prostate cancer survival. PLoS One. 5 (5), e10747(2010).
  12. Saito, R. A., et al. Forkhead box F1 regulates tumor-promoting properties of cancer-associated fibroblasts in lung cancer. Cancer Res. 70 (7), 2644-2654 (2010).
  13. Kalluri, R., Zeisberg, M. Fibroblasts in cancer. Nat. Rev. Cancer. 6 (5), 392-401 (2006).
  14. Calvo, F., et al. Mechanotransduction and YAP-dependent matrix remodelling is required for the generation and maintenance of cancer-associated fibroblasts. Nat. Cell Biol. 15 (6), 637-646 (2013).
  15. Horie, M., et al. Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor. Exp. Lung Res. 40 (5), 222-236 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة