مقالة منهجية

العزلة والثقافة وطويل الأجل صيانة الابتدائية الدماغ المتوسط ​​الدوبامين العصبية من المخ الجنينية القوارض

13.6K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52475

⸱

فبراير 19, 2015

 ,  ,  , 
1Division of Brain Sciences, Department of Medicine, Imperial College London, 2Department of Neurosurgery, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 3Department of Internal Medicine, Endocrinology, Yale University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

أسباب تنكس الخلايا العصبية الدوبامين في الدماغ الأوسط أثناء مرض باركنسون غير مفهومة تماما. توفر أنظمة الثقافة الخلوية أداة أساسية لدراسة الخصائص الفيزيولوجية العصبية لهذه الخلايا العصبية. نقدم هنا بروتوكولا محسنا ، والذي يمكن استخدامه للنمذجة المختبرية للتنكس العصبي.

الملخص

تنكس الخلايا العصبية الدوبامين المتوسطة (mesDA) هو السمة المميزة المرضية لمرض باركنسون. إن دراسة العمليات البيولوجية التي تنطوي عليها الوظائف الفسيولوجية وضعف هذه الخلايا العصبية وموتها أمر لا يقاوي لفهم الأسباب الكامنة وكشف علاج هذا الاضطراب التنكسي العصبي الشائع. توفر الثقافات الأولية للخلايا العصبية mesDA أداة للتحقيق في الخصائص الجزيئية والكيميائية الحيوية والفيزيولوجية الكهربية ، من أجل فهم تطور هذه الخلايا العصبية وبقائها على المدى الطويل وتنكس أثناء المرض. نقدم هنا طريقة مفصلة لعزل وزراعة وصيانة الخلايا العصبية الدوبامين في الدماغ المتوسط من أجنة الفأر E12.5 (أو الفئران E14.5). تؤدي ظروف زراعة الخلايا المحسنة في هذا البروتوكول إلى وجود إسقاطات محورية وتغصنية ووصلات متشابكة وخصائص مورفولوجية عصبية أخرى ، مما يجعل الثقافات مناسبة لدراسة الخصائص الفسيولوجية والبيولوجية والجزيئية للخلايا لهذه المجموعة العصبية.

المقدمة

فقدان الخلايا العصبية الدوبامين من المادة السوداء بارس المكتنزة يؤدي إلى أعراض الكاردينال السيارات من مرض باركنسون (PD)، والثاني اضطراب الاعصاب الأكثر انتشارا. السبب الكامن وراء زوال هذه الفئة من السكان الخلايا العصبية الدماغي المتوسط ​​غير معروف. لدراسة المسارات البيوكيميائية المسؤولة عن تطوير وتحوير الخصائص الفسيولوجية العصبية وبقاء الخلايا العصبية mesDA، عدة زراعة الخلايا والنظم نموذج حيواني استخدمت. خطوط الخلايا خلده، بما في ذلك الدوبامين الفئران خط الخلية 1RB 3 AN 27 (N27)، والدوبامين البشري خط الخلية العصبية SH-SY5Y، الماوس الدوبامين خط الخلية المختلطة MN9D والدماغ المتوسط ​​البشري LUHMES خلايا استخدمت لدراسات الآلية البيوكيميائية ومحدودة 1 -5. لدراسة فقدان محددة من الخلايا العصبية mesDA، والعديد عصبي القائم وتم تطوير نماذج وراثية 6-8. ثقافات الدماغ المتوسط ​​البطنية الأولية، وتوفير أداة لا غنى عنها لدراسة خصائص الخلايا العصبية ومتشابك من الخلايا العصبية الدوبامين ومسارات المتورطين في التسبب في هذا الاضطراب شائع.

هنا نقدم بروتوكول مفصلة لعزل الخلايا العصبية الدوبامين الدماغ المتوسط، والذي يحتوي على تعديلات مما أدى إلى ارتفاع البقاء على قيد الحياة وزيادة العائد من coverslips في الجنين. استخدام ما قبل ناضجة الدماغ المتوسط ​​E12.5 الماوس (E14.5 في الفئران) يعزز البقاء على قيد الحياة. والخلايا العصبية في هذه السن لم تتطور محاور عصبية بعد، الأمر الذي يترك خلايا سليمة أثناء تشريح ويقلل من الإجهاد وبالتالي زيادة كبيرة في قدرتها على البقاء. وبالإضافة إلى ذلك، تشريح دقيق من المخ الأوسط بطني، كما هو موضح في المادة 2 من هذا البروتوكول، وكذلك تعزز البقاء على قيد الحياة. لزيادة أعداد coverslips في الجنين، ويقدم طريقة الطلاء بديل في المادة 4 من هذا البروتوكول. وهذا يؤدي إلى إنتاجية تصل إلى 10 coverslips في الجنين بالمقارنة مع 4 coverslips تحتوبالتالي الظروف الطلاء القياسية تقليل كمية من الحيوانات في التجربة.

الخلايا العصبية في الثقافة المعرض ثمرة من المحاور وdentrites، تشكيل اتصالات متشابك وتكشف عن وجود علامات العصبية ومتشابك مما يجعل هذه الثقافات مناسبة لتصوير الخلايا الحية، immunocytochemical والدراسات الكهربية. وعلاوة على ذلك، فإن استخدام الثقافات العصبية يسهل التلاعب الجيني والصيدلانية. ثمرة neurites التي من يوم 2 في المختبر تتيح للدراسات التنموية. وعلاوة على ذلك، والبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل الثقافات (تصل إلى ستة أسابيع) يجعلها مناسبة لدراسة بطيئة، وانحطاط التدريجي لهذه الخلايا العصبية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تم الحفاظ على الحيوانات والتعامل معها وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية وجميع الإجراءات الحيوانية وافق عليها رعاية الحيوان في جامعة Imperial College والجسم المراجعة الأخلاقية (AWERB) وزارة الداخلية وجامعة هارفارد المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC)، في الامتثال للوائح الفيدرالية وحكومات الولايات.

1. الكاشف وإعداد المعدات

  1. ذوبان الجليد، قسامة وتخزين 1 ملغ / مل Laminin الحل في -80 درجة مئوية. حل 2 ميكرولتر في 1 مل DMEM / F12، مما أدى إلى تركيز طلاء من 1-2 ميكروغرام / سم 2.
    ملاحظة: ذوبان الجليد Laminin ببطء على الجليد وتذوب في البارد DMEM / F12 وعلى الفور إضافة إلى لوحات / coverslips.
  2. تمييع 75 مل من 0.01٪ بولي-L-الأورنيثين في 425 مل PBS وتخزينها في 4 درجة مئوية.
    ملاحظة: العمر الافتراضي للحل العاملة تصل إلى شهر واحد.
  3. حل 25٪ (وزن / المجلد) BSA في برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.4، وتخزينها في 4 درجة مئوية لمدة تصل الى أنتمع.
  4. تجهيز 50٪ FBS (في HBSS) وسائل الاعلام التعطيل.
  5. إعداد المتوسطة كاملة من خلال إضافة 50 U / البنسلين مل والستربتومايسين، 1X N2 ملحق، 5٪ (المجلد / المجلد) FBS، 0.36٪ D - (+) - الجلوكوز (وزن / المجلد)، 0.25٪ BSA (وزن / المجلد) ل DMEM / F12 وتخزينها في 4 درجة مئوية.
    ملاحظة: العمر الافتراضي هو ما يصل الى 10 يوما.
  6. مكان coverslips في 70٪ (المجلد / المجلد) الايثانول المغلي لمدة 30 دقيقة على الأقل لإزالة أي آثار للالشحوم والأوتوكلاف.
  7. مكان coverslips في 24 لوحات جيدا وإضافة 500 ميكرولتر حل بولي-L-الأورنيثين إلى كل بئر. احتضان 1 ساعة تحت غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة في RT ومن ثم، وغسل 3 مرات مع 500 ميكرولتر المياه. إضافة 500 ميكرولتر حل laminin إلى كل لوحة واحتضان O / N في ترطيب حاضنة زراعة الأنسجة في 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: في حين لا يغسل ضرورية بعد العلاج laminin، وغسل بولي-L-الأورنيثين أقل من ثلاث مرات النتائج في موت الخلايا بعد 24 ساعة زراعة.
  8. تلميع نصائح من الماصات الزجاجية على الغاز الطبيعي أو الشعلة وعرجاء.
    ملاحظة: بعد هذه الخطوة القطر من طرف يجب أن يكون حوالي نصف حجمه الطبيعي.
  9. قطع قبعات من 1.5 مل أنابيب microcentrifuge، وذلك باستخدام مقص تعقيمها وتعقيم.

2. تشريح المخ الأوسط بطني الجنينية

  1. خدر توقيت الحوامل (E12.5) السدود التي كتبها CO 2 الاستنشاق ومن ثم الموت ببطء خلع عنق الرحم.
  2. رش البطن مع الايثانول 70٪ وإجراء شق في البطن حتى تتعرض الحويصلات الرحم جميع. باستخدام ملقط قطع المرفق المهبل وإزالة الرحم. وضع الرحم في الجليد الباردة HBSS، في 100 مم طبق بتري.
  3. إزالة الأجنة من الرحم والكيس الذي يحيط بالجنين، وذلك باستخدام ملقط (الشكل 1C). مكان الأجنة في HBSS الجليد الباردة العذبة.
    ملاحظة: المستطيل في الشكل 1D يشير موقع المخ الأوسط بطني الجنينية.
  4. وضع الأجنة تحت المجهر تشريح (التكبير 10x) وتشريح الدماغ المتوسطالقوس عن طريق قطع الدماغ في البرزخ والمنطقة الحدودية الدماغ المتوسط-دماغية بينية، وذلك باستخدام bioscissor وملقط (الشكل 1E، يرجى الرجوع إلى الشكل 1A لخطوط شق).
  5. بعد اخراج المخ الأوسط بأكمله، اجراء خفض في المخ الأوسط ظهراني ناصفي (الشكل 1F).
  6. إزالة السحايا، وذلك باستخدام اثنين من ملقط (الشكل 1H).
    ملاحظة: خطوة حاسمة: هذه الخطوة ضرورية لالعائد الخلايا العصبية الأمثل والبقاء على قيد الحياة. منذ الشروط ثقافة هي الأمثل لخلايا الدماغ، فإن معظم الخلايا من الأنسجة المحيطة يموت بعد الطلاء وإشارة أفكارك من هذا النسيج قد يضر سلامة الثقافات.
  7. لشد الأنسجة المخ الأوسط على طبق بيتري لمراقبة شكل فراشة وقطع ما يقرب من نصف كل جناح، وذلك باستخدام شفرة الحلاقة المعقمة (الشكل 1H، I).
    ملاحظة: الشكل 1J يصور المخ الأوسط بطني معزولة.
  8. نقلقطعة من المخ الأوسط بطني في الجليد الباردة HBSS في أنبوب مخروطي 15 مل والمضي قدما في الجنين القادم.
    ملاحظة: خطوات 2،1-2،8 يجب أن لا يستغرق أكثر من 1 ساعة. حفظ الأجنة خارج هذا الإطار الزمني على الجليد يقلل بقاء الخلية بشكل كبير.

3. التفكك لخلايا المخ الأوسط بطني

  1. نقل قطع من المخ الأوسط بطني تحت غطاء تدفق الصفحي. إزالة HBSS وإضافة 1 مل قبل حرارة (37 درجة مئوية) 0.05٪ التربسين EDTA-في أنبوب مخروطي (كميات كافية لمدة تصل إلى 12 قطعة من المخ الأوسط بطني). احتضان الأنسجة عند 37 درجة مئوية لمدة 5-10 دقيقة.
  2. إزالة التربسين-EDTA تحت غطاء محرك السيارة وإضافة 1 مل المتوسطة دي تفعيل (لن المصل إلغاء تنشيط التربسين) إلى الأنسجة.
  3. إزالة المتوسطة التعطيل وغسل الأنسجة في 1 مل المتوسطة كاملة مرتين.
    ملاحظة: تجنب إزالة جميع متوسطة من الأنبوب وpipetting لالأنسجة، لمنع التخلص من خلايا فصلها.
  4. إضافة المتوسطة كاملة 1ML ويسحقراتي الأنسجة مع كوب ماصة مصقول النار. تجنب تشكيل فقاعات ومواصلة الطحن حتى يتحقق تعليق خلية واحدة.
    ملاحظة: عادة، 8-10 يمر عبر طرف مقيدة مطلوبة لتفارق كاملة.
  5. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 400 x ج لمدة 5 دقائق على RT وإزالة المتوسطة.
  6. اعادة تعليق بيليه في 1 مل المتوسطة كاملة من قبل pipetting ببطء صعودا وهبوطا لمدة تصل إلى أربع مرات.

4. خلايا المخ الأوسط بطني تصفيح

  1. مزيج 10 ميكرولتر من تعليق الخلية مع 90 ميكرولتر التريبان حل الأزرق وحساب عدد الخلايا مع عدادة الكريات.
    ملاحظة: يمكن أيضا فحص قابلية الخلايا في هذه المرحلة.
  2. وضع تعقيمها ميكروسنتريفوج قبعات أنبوب في 100 ملم أطباق بتري ونقل بولي-L-الأورنيثين / coverslips Laminin المغلفة، وذلك باستخدام ملقط، في وقت واحد على رأس مباراة دولية.
    ملاحظة: لا يغسل لل coverslips وتجنب تجفيف laminin، لأن هذا قد يسبب uneveن الثقافات وانخفاض في البقاء على قيد الحياة من الخلايا.
  3. ضبط مستوى الصوت إلى 1،500 خلية لكل ميكرولتر 1 بإضافة المتوسطة كاملة وإضافة 100 ميكرولتر (ما مجموعه 150،000 خلايا) من تعليق خلية على رأس كل ساترة (وحدة التخزين الأمثل لتغطية سطح ساترة دون انسكاب). إغلاق أطباق بتري واحتضان لهم لمدة 1 ساعة في ترطيب حاضنة زراعة الأنسجة (37 ° C، 5٪ CO 2).
    ملاحظة: خطوة حاسمة: مطلوب هذه الخطوة لتعزيز المرفق وقابلية الخلايا وزيادة عدد coverslips في الجنين. بدلا من ذلك، فإن الخلايا يمكن نقلها مباشرة إلى آبار (coverslips تحتوي على) ولكن ينبغي زيادة عدد الخلايا إلى 350،000 لكل بئر (بدلا من 150،000). وبعبارة أخرى، باستخدام هذه الطريقة، 8-10 coverslips يمكن الحصول عليها، في حين نقل مباشر ينتج حوالي 3-4 coverslips بسبب الخلايا، والتي نعلق على لوحات (بجانب أو تحت لل coverslips). متوسط ​​viabiliكان تاي من الثقافات، وذلك باستخدام هذه الطريقة حوالي 90٪.

5. النمو والصيانة الثقافة

  1. بعد 1 ساعة من الحضانة، ونقل بعناية لل coverslips بما في المتوسط ​​إلى 24 لوحات جيدا، والتي تحتوي على 400 ميكرولتر قبل تحسنت (إلى 37 درجة مئوية) المتوسطة كاملة (إجمالي حجم: 500 ميكرولتر). احتضان الخلايا O / N في 37 درجة مئوية.
  2. في غضون 24 ساعة بعد الحضانة من الآبار، إضافة بلطف 500 ميكرولتر المتوسطة الكامل في كل بئر.
    ملاحظة: الساعات القليلة الأولى هي المرحلة الأكثر أهمية لبقاء الخلايا العصبية الدوبامين وعدد من الخلايا على قيد الحياة لا يغير بشكل كبير بعد هذه النقطة.
  3. لا تقم بإضافة وسائل الإعلام إضافي للثقافات لأول أسبوعين أو حتى المتوسطة يصبح أصفر. إذا زرع لأكثر من أسبوعين أو يتغير لونها إلى اللون الأصفر المتوسطة، وتبادل نصف وسائل الإعلام (500 ميكرولتر) مع وسائل الاعلام قبل تحسنت كاملة جديدة (عادة كل أسبوعين).
    ملاحظة: الخلايا العصبية الدوبامين داخلأن الثقافات البقاء على قيد الحياة لأكثر من 6 أسابيع في ظل هذه الظروف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

المناعية ضد التيروسين هيدروكسيلاز (ث) تبين أن بين 0.5-1٪ من الخلايا في الثقافة هي الدوبامين. ويبدو أن التوقعات العصبية في غضون 2 ساعة بعد الطلاء وقبل اليوم الأول، ومحاور عصبية والتشعبات هي تمييزها (الشكل 2)، وذلك باستخدام هيدروكسيلاز التيروزين (TH) والبروتين (2 MAP2) الأجسام المضادة المرتبطة أنيبيب (الشكل 3). الخلايا العصبية البقاء على قيد الحياة لأكثر من ستة أسابيع وتظهر ثمرة واسعة النطاق. نسبة الخلايا العصبية، الدبقية في الثقافات ويرتبط مباشرة إ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الخلايا العصبية الدوبامين في المخ الأوسط هي المصدر الرئيسي الدوبامين في الجهاز العصبي المركزي. وهي تنقسم إلى ثلاث مجموعات، بارس المادة السوداء المكتنزة (SNpc)، المنطقة البطنية السقيفية (VTA) والميدان retrorubral (قوة الرد السريع) 10، 11. الخلايا العصبية في SNpc وVTA تؤدي إلى مسارات الدوبامين الرئيسية، mesocortical، mesolimbic وnigro-مخططي، والمشاركة في وظائف مثل السيطرة على المشاعر والدوافع والسلوك الحركي. زوال الخلايا العصبية في SNpc واضطراب وظيفي للنظام السوداوي المخط...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يتم الإعلان عن تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم تنفيذ هذا العمل باستخدام قسم علوم الدماغ ، قسم الطب ، أموال بدء التشغيل في إمبريال كوليدج لندن إلى KNA.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خليط المغذيات المتوسطة من Dulbecco المعدل F-12Invitrogen11330
محلول الملح المتوازن هانكس (HBSS) (1X) ، مصل سائلInvitrogen24020-117
، معطل بالحرارة (FBS) مكملInvitrogen16140
N2 (100X) ، سائلInvitrogen17502-048
D- (+) - جلوكوز محلول (45٪ (بالوزن / حجم) في الماءSigmaG8769
ألبومين مصل الأبقار BSASigmaA9430
Laminin من Engelbreth-Holm-Swarm غشاء القاعدي لساركوما الفئرانSigmaL2020
البنسلين / الستربتومايسينInvitrogen15070
التربسين (0.05٪ (بالوزن / الحجم)Invitrogen25300
مصل بقري تم اختبار ثقافة الخلايا الألبومين (BSA) Sigma A9418
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)سيجماP3813
الأجسام المضادة للتيروزين هيدروكسيلاز (Th)بيل فريز بيولوجيزP60101-0  ؛
بولي إل أورنيثين ، محلول 0.01٪سيجماP4957
Anti-Map2 (البروتين المرتبط بالأنابيب الدقيقة -2A و -2B) الجسم المضادMilliporeMAB3418
الأجسام المضادة للسينابسين -1MilliporeAB1543P
Alexa Fluor 488 الحمار المضاد للأرانب IgG & nbsp ؛   مجسات جزيئية للأجسام المضادةA-21206
Alexa Fluor 594 حمار مضاد للأرانب IgG & nbsp ؛   مجسات جزيئية للأجسام المضادةA-21207
Alexa Fluor 488 حمار مضاد للأغنام IgG & nbsp ؛   مجسات جزيئية للأجسام المضادةA-11015
Alexa Fluor 594 حمار مضاد للأغنام IgG & nbsp ؛   مجسات جزيئية للأجسام المضادةA-11016
Alexa Fluor 594 حمار مضاد للفأر IgG & nbsp ؛   مجسات جزيئية للأجسام المضادةA-21203
محلول تريبان الأزرق (0.4٪ (بالوزن / الحجم))Biowhittaker17-942E
مجهر ستيريوكارل زايسستيمي 2000-C
مجهر تباين الطور المقلوبكارل زايسأكسيفرت 40 C
ملقط دومونأدوات علمية دقيقةمايو -45
غطاء ملقط الانزلاق – DumoxelFine ScientificTools 11251-33
Two Dumont # 45 Fallps &ndash ؛ DumoxelFine ScientificTools 11245-30
حامل شفرة / قاطع قبضة مسطحة -أدوات علمية دقيقة11 سم 10052-11
مقص سوسن الطالب - مستقيم 11.5 سمأدوات علمية دقيقة91460-11
هالوجين من الألياف البصريةنيكونMKII
زجاج البورسليكات القابل للتصرف ماصاتFisherbrand13-678-20C
مقياس الدمProscitechSVZ2NIOU
0.2 & micro ؛ م وحدات تصفية معقمةNalgeneNL-CE-156-4020
100x20 مم أطباق بتريBD Biosciences351005
غطاء دائري زلة # 1 سمك زجاج ألماني 12 ممزجاج بيلكو1943-10012   ؛
إضاءة

المراجع

  1. Prasad, K. N., et al. Establishment and characterization of immortalized clonal cell lines from fetal rat mesencephalic tissue. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 30A, 596-603 (1994).
  2. Fall, C. P., Bennett, J. P. Characterization and time course of MPP+ -induced apoptosis in human SH-SY5Y neuroblastoma cells. J Neurosci Res. 55, 620-628 (1999).
  3. Choi, H. K., Won, L., Roback, J. D., Wainer, B. H., Heller, A. Specific modulation of dopamine expression in neuronal hybrid cells by primary cells from different brain regions. Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 8943-8947 (1992).
  4. Alavian, K. N., Sgado, P., Alberi, L., Subramaniam, S., Simon, H. H. Elevated P75NTR expression causes death of engrailed-deficient midbrain dopaminergic neurons by Erk1/2 suppression. Neural Dev. 4, 11(2009).
  5. Chung, C. Y., et al. The transcription factor orthodenticle homeobox 2 influences axonal projections and vulnerability of midbrain dopaminergic neurons. Brain. 133, 2022-2031 (2010).
  6. Betarbet, R., Sherer, T. B., Greenamyre, J. T. Animal models of Parkinson's disease. Bioessays. 24, 308-318 (2002).
  7. Schober, A. Classic toxin-induced animal models of Parkinson's disease: 6-OHDA and MPTP. Cell Tissue Res. 318, 215-224 (2004).
  8. Chesselet, M. F., Richter, F. Modelling of Parkinson's disease in mice. Lancet neurology. 10, 1108-1118 (2011).
  9. Takeshima, T., Johnston, J. M., Commissiong, J. W. Mesencephalic type 1 astrocytes rescue dopaminergic neurons from death induced by serum deprivation. J Neurosci. 14, 4769-4779 (1994).
  10. Sgado, P., et al. Slow progressive degeneration of nigral dopaminergic neurons in postnatal Engrailed mutant mice. PNAS. 103, 15242-15247 (2006).
  11. Alavian, K. N., et al. The lifelong maintenance of mesencephalic dopaminergic neurons by Nurr1 and engrailed. J Biomed Sci. 21, 27(2014).
  12. Simon, H. H., Bhatt, L., Gherbassi, D., Sgado, P., Alberi, L. Midbrain dopaminergic neurons: determination of their developmental fate by transcription factors. Ann N Y Acad Sci. 991, 36-47 (2003).
  13. Bjorklund, A., Dunnett, S. B. Dopamine neuron systems in the brain: an update. Trends Neurosci. 30, 194-202 (2007).
  14. Dauer, W., Przedborski, S. Parkinson's disease: mechanisms and models. Neuron. 39, 889-909 (2003).
  15. Dexter, D. T., Jenner, P. Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms. Free Radic Biol Med. 62, 132-144 (2013).
  16. Schapira, A. H. Aetiopathogenesis of Parkinson's disease. J Neurology. 258, S307-S310 (2011).
  17. Chung, C. Y., et al. Cell type-specific gene expression of midbrain dopaminergic neurons reveals molecules involved in their vulnerability and protection. Hum Mol Gen. 14, 1709-1725 (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة