يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

Th17 التهاب نموذج من الفم والبلعوم المبيضات في الفئران العوز المناعي

9.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52538

⸱

فبراير 18, 2015

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, School of Dental Medicine, Case Western Reserve University

في هذه المقالة

ملخص

على الرغم من توفر نماذج عدوى المبيضات لدراسة المقاومة المناعية للمضيف ، إلا أن نموذجا لدراسة علم الأمراض المناعي بوساطة الخلايا التائية في سياق عدوى المبيضات غائب. نصف هنا طريقة لتأسيس علم الأمراض المناعي Th17 المرتبط بعدوى المبيضات الفموية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة.

الملخص

يحدث مرض داء المبيضات الفموي البلعومي (OPC) ليس فقط بسبب نقص المقاومة المناعية للمضيف ، ولكن أيضا بسبب عدم وجود تنظيم مناسب لعلم الأمراض المناعية الناجم عن العدوى. على الرغم من أن خلايا Th17 متورطة في الدفاع المضاد للفطريات ، إلا أن دورها في علم الأمراض المناعية غير واضح. تقدم هذه الدراسة طريقة لإنشاء علم الأمراض المناعية Th17 عن طريق الفم المرتبط بعدوى المبيضات الفموية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة. تعتمد الطريقة على إعادة تكوين الفئران اللمفاوية بخلايا Th17 المزروعة في المختبر ، تليها عدوى فموية بالمبيضات البيضاء (C. albicans). تظهر النتائج أن خلايا Th17 غير المقيدة تؤدي إلى التهاب وأمراض ، وترتبط بالعديد من القراءات القابلة للقياس بما في ذلك فقدان الوزن ، وإنتاج السيتوكين المؤيد للالتهابات ، وعلم الأنسجة المرضية في اللسان والوفيات ، مما يدل على أن هذا النموذج قد يكون ذا قيمة في دراسة علم الأمراض المناعية OPC. يتحكم النقل بالتبني للخلايا التنظيمية (Tregs) في الاستجابة الالتهابية ويقلل منها ، مما يدل على أنه يمكن استخدام هذا النموذج لاختبار استراتيجيات جديدة لمواجهة التهاب الفم. قد يكون هذا النموذج قابلا للتطبيق أيضا في دراسة علم الأمراض المناعية عن طريق الفم Th17 بشكل عام في سياق أمراض الفم الأخرى.

المقدمة

ترتبط التهابات الفم والالتهابات بالسرطان وأمراض القلب والأوعية الدموية ، ولها تأثير كبير على صحة الإنسان بشكل عام2،3. ترتبط الالتهابات الانتهازية والالتهابات التي تسببها المطثية البيضاء بنقص المناعة الأولي (PID) 4،5 ، والاضطرابات الالتهابية مثل التهاب دواعم السن 6،7 ، ومتلازمة شوغرن ، ومرض الغدد اللعابية8،9 ، بالإضافة إلى سرطان الخلايا الحرشفية الفموية 10-12. المطثية البيضاء هي فطر تعايش ثنائي الشكل يستعمر أفواه 60٪ من البشر الأصحاء بدون أعراض ، ومع ذلك فهو العامل الممرض الفطري الأكثر شيوعا الذي يسبب العدوى عندما يضعف دفاع المضيف13-15. يسبب التهابات والتهابات متكررة ومزمنة لدى مرضى الإيدز و PID ، وكذلك في الأفراد الآخرين الذين يعانون من نقص المناعة. كتوافق ، يرتبط حمل الاستعمار بالتغيير في تنوع الميكروبيوم الفمويالكلي 16. كممرض ، فإنه يسبب عدة أشكال من داء المبيضات الفموي البلعومي مثل الغشائية الكاذبة الحادة ، الضمور الحاد ، الضمور المزمن ، الضخامي المزمن / فرط التنسج ، والتهاب الشفة الزاوي.

الحماية ضد المطثية البيضاء لا يتم تحديدها فقط من خلال المقاومة المناعية للمضيف ، ولكن أيضا من خلال القدرة على التحكم بشكل مناسب في علم الأمراض المناعية الناجم عن المبيضات. على الرغم من أن التعافي مثل المطثية البيضاء تساهم في تعديل وتفاقم الحالات الالتهابية الفموية الأخرى ، إلا أن الآليات التي يحدث بها dysbiosis أثناء العدوى الانتهازية غير واضحة. إلى جانب الدور المعروف لخلايا Th17 التكيفية في استجابة الذاكرة ل C. albicans17 ، لا يزال دورها في بدء وإدامة أمراض الالتهاب أثناء الالتهابات المزمنة غير واضح. علاوة على ذلك ، ترتبط الأمراض الالتهابية الفموية مثل متلازمة شوغرن والتهاب دواعم السن بأمراض Th17. ومن المثير للاهتمام أن هذه الأمراض ترتبط ارتباطا وثيقا ب OPC المتكرر. ومع ذلك ، فإن التفاعلات بين خلايا Th17 وعلم المناعة عن طريق الفم ل OPC وأمراض التهاب الفم الأخرى غير مدروسة.

على الرغم من توفر نماذج الفئران للعدوى الأولية والثانوية لداء المبيضات الفموي ، إلا أن نموذج الفأر لدراسة عدوى المبيضات المرتبط بالتهاب Th17 ، خاصة في سياق نقص المناعة غير متوفر. تقدم هذه الدراسة طريقة لتأسيس التهاب Th17 الفموي المرتبط بعدوى المبيضات الفموية في الفئران. تتميز عدوى المبيضات في الفئران بآفات فطرية والتهاب في اللسان وانخفاض تناول الطعام وفقدان الوزن وفي النهاية حالة محتضرة. يشبه علم أمراض الفم آفات العدوى المبيضة المزمنة ، وكذلك خلل التنسج الظهاري في نماذج سرطان الفم في الفئران12،18.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: وأجريت التجارب باستخدام الفئران وفقا للجنة الرفق بالحيوان المؤسسي (IACUC) المبادئ التوجيهية.

1. إعادة تشكيل خرقة-1 - / - الفئران بخلايا أنا ن المختبر مثقف Th17 (ثلاثة أيام قبل العدوى)

  1. لإنشاء خلايا Th17، ثقافة CD4 + CD44low CD62Lhigh CD25- خلايا T السذاجة (3 × 104) في أسفل U-96 لوحات جيدة وحدها، أو شارك في ثقافة لهم على طول مع 3 × 104 CD4 + CD25 + Foxp3 + Tregs في وجود قابل للذوبان α-CD3 (1 ميكروغرام / مل)، α-CD28 (2 ميكروغرام / مل) الأجسام المضادة وخلايا مستضد تقديم، في ظل ظروف Th17 (الاستقطاب باستخدام IL-6 (25 نانوغرام / مل)، β TGF- (2 نانوغرام / مل) ، α-IFN-γ (2 ميكروغرام / مل)، وα -IL-4 (2 ميكروغرام / مل)) لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام.
    ملاحظة: تم فرز خلايا ساذجة وT البندان باستخدام مضان خلية تنشيط الفرز (FACS) لد إجراءات عزل الخلايا المغناطيسية ومثقف كما هو موضح سابقا 19-22.
  2. في يوم 4، وبعد إعادة التعليق الخلايا Th17 باستخدام ماصة، وجمع لهم من الثقافات، وأجهزة الطرد المركزي منهم تحت ظروف معقمة.
    1. اتخاذ قسامة صغيرة من هذه الخلايا لدراسة الجدوى وللphenotyping. و resuspend لهم في 500 ميكرولتر من RPMI المتوسطة، إضافة يوديد propidium (200 نانوغرام / مل)، وتقييم قدرتها على الاستمرار على الفور من قبل التدفق الخلوي. أداء phenotyping بواسطة التدفق الخلوي تقييم إنتاج IL-17A بعد restimulation (انظر القسم 6.3).
  3. الطرد المركزي وغسل الجزء الأكبر من الخلايا في برنامج تلفزيوني العقيمة في 480 x ج لمدة 6 دقائق في 4 درجات مئوية في جميع الخطوات ما لم ينص على خلاف ذلك.
  4. استخدام هذه الخلايا لنقل بالتبني في CD45.2 Rag1 6-8 أسبوع من العمر - / - الفئران العوز المناعي.
    1. Resuspend الخلايا في 1 × 10 7 خلية / مل كثافة الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني العقيمة البارد.
    2. ضخ 100 ميكرولتر من الخلايا عن طريق intrapحقن eritoneal، وذلك باستخدام الإبر 25 G في 1 مل الحقن السلين، مثل أن الماوس واحد يتلقى 1 × 10 6 خلايا. فإن بعض الفئران يتلقى خلايا PBS أو Th17 فقط، وسوف الفئران الأخرى الحصول على خلايا Th17 التي كانت شاركت في تربيتها مع الخلايا Treg.
      ملاحظة: تنفيذ كافة الخطوات جو معقم و مطهر.

2. تزايد C. البيض للعدوى (يوم واحد قبل العدوى)

  1. قبل التلقيح، وتفريق خمسة مستعمرات CAF2-1 C. سلالة البيض مختبر في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني العقيمة تعليق وإضافة تعليق إلى مرق العقيمة.
  2. تطعيم 5 مستعمرات C. البيض في 50 مل من قاعدة النيتروجين الخميرة (YNB دون الأحماض الأمينية) / ببتون / سكر العنب المتوسطة مرق واحتضان في حاضنة شاكر في 30 درجة مئوية لمدة 15-18 ساعة عند 130 دورة في الدقيقة.
  3. مراقبة مرق لالغيوم، لأن ذلك يعد مؤشرا لنمو الفطريات.

3. المبيضاتالحصاد وإجراء العد (في يوم العدوى)

  1. جمع 10 مل من مرق المبيضات في 15 مل أنابيب. لكميات أكبر، وجمع المبيضات في 50 مل أنابيب.
  2. الطرد المركزي blastospores الساعة 1900 x ج لمدة 5 دقائق على RT في جميع الخطوات ما لم ينص على خلاف ذلك. بيليه blastospores بواسطة الطرد المركزي، تليها إزالة طاف.
  3. إذا كان هناك أنبوب أكثر من واحد، تجميع blastospores المبيضات من أنابيب متعددة، مضيفا PBS العقيمة إلى الكريات و resuspend لهم في 10 مل من برنامج تلفزيوني لمدة العد.
  4. يستغرق 20 ميكرولتر من blastospores في 1.5 مل أنابيب microcentrifuge، إضافة 20 ميكرولتر من بارافورمالدهيد 2X واحتضان في RT لمدة 15-20 دقيقة. عد blastospores الثابتة باستخدام عدادة الكريات تحت المجهر.
    ملاحظة: لامتصاص العرق هو مادة مسرطنة. فتح الحل غير مخفف فقط في غطاء الدخان.
  5. في هذه الأثناء، كرر غسل blastospores مرتين على الأقل، بواسطة الطرد المركزي رتنحنح في برنامج تلفزيوني، والتكوير وblastospores. الحفاظ الكريات في 15 مل أنابيب في RT، في غطاء محرك السيارة ABSL1، وعلى استعداد للعدوى.
  6. ترك بعض PBS العقيمة في RT لإعادة التعليق على blastospores للعدوى.
  7. بعد العد، إضافة PBS العقيمة لبيليه بوغ برعمي لضبط أعداد الخلايا الخميرة بوغ برعمي إلى 2 X10 8 من الخميرة خلية / مل. هذا هو تعليق بوغ برعمي التي سيتم استخدامها لتصيب الفئران.
    ملاحظة: تنفيذ كافة الخطوات جو معقم و مطهر.

4. الفئران العدوى (3-5 أيام بعد نقل خلية)

ملاحظة: يتم تنفيذ الإجراء العدوى الأساسي كما هو موضح سابقا 19،23-25.

  1. تزن خرقة-1 - / - الفئران التي تلقت PBS أو الخلايا قبل ثلاثة أيام.
  2. حساب جرعة من وكلاء مخدر باستخدام وزن الجسم. تخدير الفئران عن طريق إدارة الكيتامين / زيلازين خليط (16.1 ملغ / مل و 1.6 ملغ / مل)، وذلك باستخدام الإبر 25 G في 1 مل الحقن السلين، من خلال INTRحقن aperitoneal.
    1. إدارة 50 ميكرولتر لكل 10 غراما من وزن الجسم. (أي 0.8 ملغ من الكيتامين و 0.08 ملغ من زيلازين / 10 غرام من وزن الجسم أو 80 ملغ من الكيتامين و 8 ملغ من زيلازين لكل كيلوغرام من وزن الجسم على التوالي). مراقبة للاستجابة قرصة أخمص قدميه كل 15 دقيقة بعد التخدير.
      ملاحظة: هذا الدواء يحفز 60-90 دقيقة من التخدير، وهو ما يكفي لإجراء العدوى.
    2. تطبيق مرهم التشحيم العيون في أعين الفئران لمنع القرنيات من الجفاف. كما زيوت التشحيم العين قد تجف، كرر تزييت العيون كل 45 دقيقة.
  3. حقن 1 مل من المياه المالحة (0.9٪ كلوريد الصوديوم) تحت الجلد على ظهر المتاخمة للforelimb، للمساعدة في معالجة الجفاف من الفئران أثناء التخدير.
  4. الحصول على، قفص نظيفة الجديد. اتبع العدوى إجراء واحد الماوس في كل مرة، وضع كل الماوس في قفص جديد مرة واحدة مصابة. أداء PBS / العدوى الشام أولا، ثم انتقل إلى غرو عدوى المبيضاتيو بي إس.
  5. التقاط الماوس تخدير وفتح الفم واسعة للكشف عن قاعدة اللسان.
    1. وضع 3 مم الكرة قطر القطن مشبعة 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني أو بوغ برعمي تعليق، تحت اللسان في تجويف الفم لمدة 90 دقيقة. الوجه الفئران كل 15 دقيقة أمام والخلف لمنع الازدحام الرئة، وضمان أن كرات القطن لا تتحرك.
  6. إعداد الموقت لكل الماوس لضمان 90 دقيقة من الشام أو المبيضات التلقيح في تجويف الفم.
  7. إبقائهم في قفص تحت مصباح الحرارة (4 أمتار)، ولكل الماوس على منصات هلام الحرارة.
  8. تأكد من أن يتم سحب اللسان داخل وبعيدا عن الأسنان، لتجنب الأسنان يمزق اللسان.
  9. في نهاية 90 دقيقة، وإزالة القطن الكرة من فم الفأر. مشاهدة اي الماوس التي قد تعافي من التخدير في وقت أقرب مما 75 دقيقة. في مثل هذه الحالة، تخدير لهم مرة أخرى مع الكيتامين (40 ملغ / كلغ) فقط.

5. المشاركة الاجراءالبريد رصد (خلال التخدير 90 دقيقة)

  1. استخدام منصات هلام الحرارة خلال التخدير 90 دقيقة.
    1. للحفاظ على درجة حرارة الجسم ومنع الاختناق، لا تسمح الفئران لاسترداد على قطعة خبز الذرة والفراش الماوس العادية.
  2. بعد التعافي من التخدير، وإدارة و1 مل إضافية من معقم 0.9٪ كلوريد الصوديوم تحت الجلد في موقعين على ظهره.
  3. إبقاء ما يصل إلى خمسة PBS (صورية) الفئران الملقحة في القفص. البيت فقط 1-2 الفئران المصابة في القفص.
  4. ملء بطاقة الإجراء مع بالاحرف الاولى كل يوم بعد العملية ليدون التغييرات في وزن الجسم، والاستمالة عادات والصحة العامة.

6. تقييم التهاب

6.1) فقدان الوزن

  1. وزن الفئران كل يوم خلال العدوى، ابتداء من اليوم السابق لإجراء العدوى.
    ملاحظة: عادة، والفئران العوز المناعي حقنها بخلايا Th17 وبدون البندان T تستسلم إلى 20-30٪ وفقدان الوزن بسبب زيادة عبء الفطرية 19 وتفاقم الالتهاب.

6.2) التهديف الأنسجة من اللسان

  1. التضحية الفئران عن طريق CO 2 الاختناق تليها خلع عنق الرحم.
  2. فتح الفكين وتشريح خارج اللسان مع مقص وملقط. استخدام ملقط حادة لعقد اللسان، وباستخدام مقص وصول إلى الجزء الخلفي من الفم إلى شق نهاية الجزء الخلفي من اللسان.
  3. لالهيماتوكسيلين immunocytochemical ويوزين (H & E) تلطيخ من الأنسجة اللسان، وشطف الأنسجة اللسان مع الجليد الباردة PBS. إضافة 5 مل من 10٪ من الفورمالين لمدة 2-3 الألسنة واصلاحها O / N في 15 مل أنابيب.
    1. في اليوم التالي، وإزالة الفورمالين وتزج الأنسجة في 5 مل من الايثانول 70٪ لمنع فرط التثبيت. إرسالهم إلى الخدمة التجارية لمواصلة البارافين التضمين، باجتزاء وتلطيخ أقسام البارافين.
      ويستخدم خدمة الأنسجة التجارية لتنفيذ هذه الخطوات التالية: ملاحظة.
  4. مرة واحدة الشرائح تعود من الخدمة الأنسجة التجارية، الصف الالتهاب من خلال مراقبة أقسام الأنسجة تحت المجهر الضوئي.
    1. يسجل 0-5، مع 0 كونها لا الالتهاب، و 5 كونها التهاب أشد. يسجل التهاب باستخدام الجدول 1.

6.3) إنتاج السيتوكينات من قبل خلايا Th17

ملاحظة: الإفراط في إنتاج TNF-α هي واحدة من قراءات لالباثولوجيا المناعية المفرطة. عندما يتم نقل الفئران adoptively مع خلايا Th17 فقط، فإنه يتسبب الباثولوجيا المناعية مقترن المفرط إنتاج TNF-α في خلايا Th17.

  1. جمع تعليق خلية واحدة من الطحال والغدد الليمفاوية العنقية، lymphnodes الإبطية، واللسان، وذلك باستخدام الأساليب المذكورة سابقا 19،26.
  2. Restimulate الخلايا مع خلات phorbol ميريستات (PMA) (50 نانوغرام / مل)، وIonomycin (500 نانوغرام / مل) لمدة 4 ساعة مع Brefeldin ألف (10 ميكروغرام / مل) المضافة في لترAST 2 ساعة. غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني واصلاحها باستخدام طقم التثبيت / permeabilization التجارية وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  3. أداء داخل خلوى الخلوي تلطيخ باستخدام تألقي مترافق مكافحة TNF-α، ومكافحة IL-17A والأجسام المضادة ROR-γt كما هو موضح سابقا (19).
  4. لفترة وجيزة، resuspend الخلايا في permeabilization العازلة 1X مع مزيج من مكافحة TNF-α، ومكافحة IL-17A والأجسام المضادة ROR-γt، كل الأجسام المضادة في 2-3 ميكروغرام / مل تركيز النهائي.
  5. احتضان الخلايا لمدة 1 ساعة على RT.
  6. بعد الحضانة، وغسل الخلايا مع 1X العازلة permeabilization.
  7. resuspend الكرية خلية في 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني مع 0.5٪ ألبومين المصل البقري لتحليل التدفق الخلوي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في هذا النموذج، فإن كلا من الفئران -infected المبيضات والفئران غير المصابة في خرقة-1 - / - خلفية العوز المناعي نقلوا adoptively مع خلايا Th17 3-5 أيام السابقة للعدوى. واستخدمت ما مجموعه 10-12 الفئران للتجارب، مع 2 الفئران في كل الشام المصابين المجموعات، و4-5 في كل مجموعة من المجموعات المصابة المبيضات. وقد استمدت خلايا ساذجة من مسانج Thy1.1 أو CD45.1 الفئران، بحيث تم تتبع خلايا Th17 حقن في الجسم الحي باستخدام Thy1.1 أو CD45.1 تلطيخ على التوالي ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويستند هذا النموذج على حمل عن طريق الفم C. عدوى البيض يعتمد Th17 الالتهاب. بسبب غياب T البندان، التهابات الخلايا التي يسببها Th17 هو غير المقيد ويؤدي إلى الباثولوجيا المناعية ضعيفة حلها. في المختبر المستمدة خلايا CD4 ساذجة الاستقطاب كما استخدمت خلايا Th17 لنقل بالتبني. 40 - 50٪ من CD4 + الخلايا مثقف تظهر IL-17A كشفها التعبير حول يوم 3 (خلايا Th17)، وبالتالي كانت تستخدم للحقن في الفئران. والميزة الرئيسية لهذا النموذج هو أن خلايا Th17 تسبب الباث...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

نشكر الدكتورة هيلين بيرنشتاين على تزويدنا بإمكانية الوصول إلى مقياس التدفق الخلوي الخاص بها. نشكر أيضا مرفق قياس التدفق الخلوي CFAR على خدمات قياس التدفق الخلوي. تم دعم هذا المشروع جزئيا من خلال تمويل الاستخدام الأساسي ل CTSC ومؤسسة STERIS / المستشفيات الجامعية - منحة قسم الأمراض المعدية إلى PP.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
CAF-2جامعة بيتسبرغ (سارة جافن)-ثقافة المبيضات
U قاع 96 ألواح بئر   ؛فيشر055588تستخدم لزراعة الخلايا
a-CD3 & nbsp ؛eBiosciences16-0031-85استقطاب الخلايا إلى ظروف Th17
a-CD28  eBiosciences16-0281-85استقطاب الخلايا إلى ظروف Th17
m-IL-6Bio BasicRC232استقطاب الخلايا إلى ظروف Th17
h-TGF-b & nbsp ؛R & D240-Bاستقطاب الخلايا إلى شروط Th17
a-IFN-g & nbsp ؛eBiosciences16-7311-85استقطاب الخلايا إلى ظروف Th17
a-IL-4   ؛eBiosciences16-7041-85استقطاب الخلايا إلى ظروف Th17
&alpha ؛ -IL17A ef660eBiosciences50-7177-82تستخدم لزراعة الخلايا - 1: 50
& alpha ؛ -TNFa-PE-Cy7eBiosciences25-7423-41تستخدم لزراعة الخلايا - 1: 100
& alpha ؛ -RORgt PE   ؛eBiosciences12-6981-82تستخدم لزراعة الخلايا - 1:50
YNB بدون الأحماض الأمينية) / Peptone / Dextrose مرق متوسطة   ؛بيو بيسكS507. SIZEMediium لنمو المبيضات
حاضنة شاكر نيو برونزويك ScientificInnova 4300نمو الحضانة لأنابيب المبيضات
15 مل BioBasicBT888-SYتستخدم لزراعة الخلايا ونمو المبيضات
50 مل أنابيبBio BasicCT 788-YSتستخدم لزراعة الخلايا ونمو المبيضات
طرد مركزي على سطح الطاولةVWR International LLC82017-654لتكوير المبيضات -900 جم
طردمركزي Allegraبيكمان كولتر392302زراعة الخلايا - 480 جم
1.5 مل أنابيب إيبندورفبيو بيسكBT620-NSتحضير التركيز النهائي للمبيضات
2x بارافورمالديهايدعلوم المجهر الإلكتروني15710تثبيت المبيضات لمقياس الدم للعد
VWR International LLC15170-172عد الخلايا
PBS - الفوسفات المخزنة الملحيةBio BasicPD8117تحضير المخازن المؤقتة
الكيتامين / الزيلازين   ؛جامعة كيس ويسترن ريزيرف - مركز الموارد الحيوانية-تم الحصول عليها من بروتوكول ARC المعتمد لتخدير
مرهم زيوت التشحيم للعيون   ؛Allergan-Eyeللحيوانات لمنع الجفاف
محلول ملحي (0.9٪ كلوريد الصوديوم) GBiosciences786-561يعطى للحيوانات لمنع الجفاف
كرة الصوف القطني بقطر 3 مم   ؛VWR International LLCBP7603كرات 3 مم لعدوى المبيضات
وسادات هلام حراريةكيس جامعة ويسترن ريزيرف - مركز موارد-للحفاظ على مزاج الجسم والتعافي السريع
تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسينHistoserv - MD-أنسجة الأنسجة
10٪ فورمالين   ؛علوم المجهر الإلكترونيJC1111 / MCأنسجة
الأنسجة 70٪ الإيثانول  VWR International LLC97064-490الغرض من التعقيم
PMA - Phorbol 12-myristate 13-acetateSigma-AldrichP1585-1MGإعادة تحفيز الخلايا
IonomycinLife Technologies124222 1 مجمإعادة تحفيز الخلايا
مجموعة نفاذية التثبيتeBiosciencesE16913-106الخلايا لقياس التدفق الخلوي
محاقن السلBD Biosciences309659حقن الفئران
25 جم × 3/8 إبرBD Biosciences309626حقن الفئران
Rag1 -/- الفئرانمختبرات جاكسونرقم المخزون: 002216الفئران المتلقية
CD45.1 الفئران المنشأةمختبرات جاكسونرقم المخزون: 002014 خلايا Th17 المانحة
CB17-SCID الفئرانمختبرات جاكسونرقم المخزون: 001303الفئران المتلقية
Balb / c الفئرانمختبرات جاكسونرقم المخزون: 000651خلايا Th17 المانحة
جهاز جهاز مرهم تثبيت

المراجع

  1. Allam, J. P., et al. IL-23-producing CD68(+) macrophage-like cells predominate within an IL-17-polarized infiltrate in chronic periodontitis lesions. Journal of Clinical Periodontology. 38 (10), 879-886 (2011).
  2. Loesche, W. J. Periodontal disease: link to cardiovascular disease. Compendium Of Continuing Education In Dentistry. 21 (6), 463-466 (2000).
  3. Sfyroeras, G. S., Roussas, N., Saleptsis, V. G., Argyriou, C., Giannoukas, A. D. Association between periodontal disease and stroke. Journal Of Vascular Surgery. 55 (4), 1178-1184 (2012).
  4. Huppler, A. R., Bishu, S., Gaffen, S. L. Mucocutaneous candidiasis: the IL-17 pathway and implications for targeted immunotherapy. Arthritis Research & Therapy. 14 (4), 217(2012).
  5. Sitheeque, M. A., Samaranayake, L. P. Chronic hyperplastic candidosis/candidiasis (candidal leukoplakia). Critical Reviews In. Oral Biology And Medicine : An Official Publication Of The American Association Of Oral Biologists. 14 (4), 253-267 (2003).
  6. Canabarro, A., et al. Association of subgingival colonization of Candida albicans and other yeasts with severity of chronic periodontitis. Journal Of Periodontal Research. 48 (4), 428-432 (2013).
  7. Urzua, B., et al. Yeast diversity in the oral microbiota of subjects with periodontitis: Candida albicans and Candida dubliniensis colonize the periodontal pockets. Medical Mycology. 46 (8), 783-793 (2008).
  8. Ergun, S., et al. Oral status and Candida colonization in patients with Sjogren's Syndrome. Medicina Oral, Patologia Oral Y Cirugia Bucal. 15 (2), e310-e315 (2010).
  9. Hernandez, Y. L., Daniels, T. E. Oral candidiasis in Sjogren's syndrome: prevalence, clinical correlations, and treatment. Oral Surgery, Oral Medicine, And Oral Pathology. 68 (3), 324-329 (1989).
  10. Gall, F., et al. Candida spp. in oral cancer and oral precancerous lesions. The New Microbiologica. 36 (3), 283-288 (2013).
  11. Grady, J. F., Reade, P. C. Candida albicans as a promoter of oral mucosal neoplasia. Carcinogenesis. 13 (5), 783-786 (1992).
  12. Dwivedi, P. P., Mallya, S., Dongari-Bagtzoglou, A. A novel immunocompetent murine model for Candida albicans-promoted oral epithelial dysplasia. Medical Mycology. 47 (2), 157-167 (2009).
  13. Cheng, S. C., Joosten, L. A., Kullberg, B. J., Netea, M. G. Interplay between Candida albicans and the mammalian innate host defense. Infection and Immunity. 80 (4), 1304-1313 (2012).
  14. Marodi, L., Johnston, R. B. Invasive Candida species disease in infants and children: occurrence, risk factors, management, and innate host defense mechanisms. Current Opinion In Pediatrics. 19 (6), 693-697 (2007).
  15. Kumamoto, C. A. Inflammation and gastrointestinal Candida colonization. Current Opinion In. Microbiology. 14 (4), 386-391 (2011).
  16. Kraneveld, E. A., et al. The relation between oral Candida load and bacterial microbiome profiles in Dutch older adults. PloS One. 7 (8), e42770(2012).
  17. Hernandez-Santos, N., et al. Th17 cells confer long-term adaptive immunity to oral mucosal Candida albicans infections. Mucosal Immunology. 6 (5), 900-910 (2013).
  18. Hasina, R., et al. ABT-510 is an effective chemopreventive agent in the mouse 4-nitroquinoline 1-oxide model of oral carcinogenesis. Cancer Prevention Research. 2 (4), 385-393 (2009).
  19. Pandiyan, P., et al. CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells promote Th17 cells in vitro and enhance host resistance in mouse Candida albicans Th17 cell infection model. Immunity. 34 (3), 422-434 (2011).
  20. Pandiyan, P., et al. The role of IL-15 in activating STAT5 and fine-tuning IL-17A production in CD4 T lymphocytes. J Immunol. 189 (9), 4237-4246 (2012).
  21. Pandiyan, P., Lenardo, M. J. The control of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cell survival. Biology Direct. 3 (6), (2008).
  22. Pandiyan, P., Zheng, L., Ishihara, S., Reed, J., Lenardo, M. J. CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells induce cytokine deprivation-mediated apoptosis of effector CD4(+) T cells. Nat Immunol. 8 (12), 1353-1362 (2007).
  23. Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L., et al. Animal models for candidiasis. Current Protocols In Immunology. Coligan, J. E., et al. 105, 11-19 (2014).
  24. Conti, H. R., et al. Th17 cells and IL-17 receptor signaling are essential for mucosal host defense against oral candidiasis. J Exp Med. 206 (2), 299-311 (2009).
  25. Kamai, Y., et al. New model of oropharyngeal candidiasis in mice. Antimicrobial Agents And Chemotherapy. 45 (11), 3195-3197 (2001).
  26. Pandiyan, P., Bhaskaran, N., Zhang, Y., Weinberg, A. Isolation of T cells from mouse oral tissues. Biological Procedures Online. 16 (1), 4(2014).
  27. Gladiator, A., Wangler, N., Trautwein-Weidner, K., LeibundGut-Landmann, S. Cutting edge: IL-17-secreting innate lymphoid cells are essential for host defense against fungal infection. J Immunol. 190 (2), 521-525 (2013).
  28. Leppkes, M., Roulis, M., Neurath, M. F., Kollias, G., Becker, C. Pleiotropic functions of TNF-alpha in the regulation of the intestinal epithelial response to inflammation. International Immunology. 26 (9), 509-515 (2014).
  29. Bishu, S., et al. The adaptor CARD9 is required for adaptive but not innate immunity to oral mucosal Candida albicans infections. Infection and Immunity. 82 (3), 1173-1180 (2014).
  30. Quintin, J., et al. Differential role of NK cells against Candida albicans infection in immunocompetent or immunocompromised mice. Eur J Immunol. 44 (8), 2405-2414 (2014).
  31. Ramirez-Garcia, A., et al. Candida albicans and cancer: Can this yeast induce cancer development or progression. Critical Reviews In Microbiology. , 1-13 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Candida Albicans Treg
Th17 التهاب نموذج من الفم والبلعوم المبيضات في الفئران العوز المناعي
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.