تقييم الزرد وظائف الكلى باستخدام التخليص الفحص الفلورسنت

Summary

الزرد هو أداة شعبية لنموذج مرض الكلى المزمن (CKD). ومع ذلك، حجمها صغير يجعل من المستحيل لتقييم وظائف الكلى باستخدام الطرق التقليدية. نحن تصف الفلورسنت الكلى صبغ إزالة الفحص ¹ التي تسمح التحليل الكمي وظائف الكلى الزرد في CKD.

Abstract

يقدم الجنين الزرد نموذج لين العريكة لدراسة توالد ونموذج مرض وراثي البشري. وعلى الرغم من بساطتها النسبية، والكلى الزرد يتطور وظائف في تقريبا بنفس طريقة البشر. وهناك فرق كبير في بناء الكلى البشرية هو وجود الملايين من النيفرون مقارنة الزرد التي لديها اثنين فقط. ومع ذلك، وتبسيط مثل هذا النظام المعقد إلى وحدات وظيفية أساسية ساعدت فهمنا لكيفية تطور الكلى ويعمل. في الزرد، خط الوسط تقع الكبيبة هو المسؤول عن ترشيح الدم الأولي إلى قسمين الأنابيب سليفة الكلوة أن تتباعد لتشغيل ثنائيا أسفل محور الجنينية قبل التفجير لبعضها البعض في مجرور. يتم ملؤها الأنابيب سليفة الكلوة بشدة من أهداب متحركة تسهل حركة الترشيح على طول أنبوب صغير مجزأة، والسماح للتبادل مختلف المواد المذابة قبل أن تخرج في النهاية عن طريق مجرور ^2-4. العديد من الجينات المسؤولة عن CKD، المؤتمر الوطني العراقيluding تلك المتعلقة تكون الأهداب، وقد درس في الزرد ^5. ومع ذلك، تجذب أعدادا كبيرة وقد ظهر صعوبة في تقييم وظائف الكلى الزرد بعد التلاعب الجيني. المقايسات التقليدية لقياس خلل في الكلى في أثبتت البشر غير متعدية إلى الزرد، ويرجع ذلك أساسا إلى بيئتها المائية وحجم صغير. على سبيل المثال، فإنه من غير الممكن جسديا لاستخراج الدم من الجنينية نظمت الأسماك لتحليل اليوريا والكرياتينين المحتوى، كما أنها صغيرة للغاية. وبالإضافة إلى ذلك، الزرد لا تنتج ما يكفي من البول لاختبار على بروتينية بسيطة "مقياس"، والتي غالبا ما يتم تنفيذ أثناء الفحوص الأولية المريض. نحن تصف فحص الفلورسنت التي تستخدم الشفافية البصرية من الزرد لمراقبة كميا إزالة صبغة الفلورسنت، مع مرور الوقت، من الأوعية الدموية والخروج من خلال الكلى، لإعطاء قراءة من وظيفة الكلى ^1،6-9.

Introduction

الكلى البشري يلعب دورا حاسما في تصفية النفايات الأيضية من الدم واستعادة المواد المذابة اللازمة للحفاظ على التوازن الخلوي. وهناك عدد من الأمراض الوراثية البشرية التي تسبب خلل في الكلى. المرض الكلوي ورثت الأكثر شيوعا هو مرض وراثي جسمي الكلى المتعدد الكيسات (ADPKD) التي تتميز تطوير السوائل تملأ الأكياس داخل الأنابيب الكلوية. الأضرار الناجمة عن تكون الكيسة يضر ظائف الكلى ^10. ADPKD لديه قوع 1: 800-1: 1،000 والحسابات لمدة 8 - 10٪ من مرضى الفشل الكلوي في المرحلة النهائية (ESRF) ^11. قد تورطت عدة جينات أن تسبب ADPKD بما في ذلك polycystin-1 (PKD1) و-2 (PKD2)، وهو ما يمثل حوالي 85٪ و 15٪ من الحالات على التوالي ^1....

Protocol

بيان الأخلاق: يتم تعريف الحيوان الصيانة، وتربية، والإجراءات والتي تسيطر عليها الحيوانات (إجراءات علمية) لعام 1986. وقد تم تنفيذ جميع التجارب على الحيوانات تحت الرخص التي تمنحها وزير الداخلية (PIL رقم 70/7892) في الامتثال البيولوجية المجموعة خدمات الإدارة واللجنة الأخلاقية الخدمات البيولوجية، SGUL، لندن، المملكة المتحدة. تم بذل كافة الجهود لتقليل عدد الحيوانات المستخدمة وتحسين كل الإجراءات وتربية من أجل تقليل المعاناة وتعزيز الرفاه.

1. إعداد الآلات، مخدر، ونيون صبغ

1. باستخد....

Results

متلازمة بارديه-بيدل (BBS) هي ciliopathy غير متجانسة نادر يصيب حوالي 1: 160،000 شخص في العالم ^16. المرضى الحالي مع عدد من المشاكل المرتبطة بما الكلى المتعدد الكيسات، في وقت لاحق المرضى في كثير من الأحيان يتطلب الغسيل الكلوي أو زرع ^24. ESRF هو السبب الأكثر شيوعا للوفاة في BBS، مع حوالي 30٪ من المرضى تطوير CKD ^16. حاليا، قد تورطت 20 جينات غير ذات الصلة في BBS مع أي ارتباط الوراثي، النمط الظاهري المنشورة. البروتينات BBS تشترك المجالات البروتين توطين ال.......

Discussion

الزرد تقدم أداة قيمة لنموذج مرض وراثي البشري، فإن استخدامها كأداة العلمي لفي الجسم الحي الأبحاث مكنت الدراسات التفصيلية للانهيار الجيني للكثير من النظم البيولوجية، بما فيها الكلى. ومن المفهوم كثيرا الآن عن كيفية تطور الكلى الزرد ووظائفها. أوجه الشبه اللافتة لتكون الكلية الإنسان والتماثل مع المرض الجينات المسببة ^لل21 وقد بينت كيف الزرد أصبحت أساسية في فهم كيفية العيوب في الجينات وظيفة تؤدي إلى أمراض من أمراض الكلى. في الواقع، والتلاعب الجيني يمكن أن يتحقق جهد في.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER مشتعل / نوع براون مجتذب ماصة	دقيقة Intracel	P-97
الشعيرات الدموية القياسية للجدار البورسليكات	هارفارد	جهاز 30-0017
شرائح المجهر الزجاجي	VWR International	631-0109
راتنجات الايبوكسي الغراء	Evo-Stik
Rhodamine B 10،000 ميجاوات المسمى Dextrann	Life Technologies ؛	D-1824
N-Phenylthiourea	سيجما ألدريتش	P7629
الميثيلين الأزرق   ؛	Sigma-Aldrich	M9140
Ethyl 3-aminobenzoate ملح ميثان سولفونات	Sigma-Aldrich	A5040
ضاغط هواء ميثيل السليلوز	Sigma-Aldrich	M0512
	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III & nbsp ؛	باركر إنسترومنتس	051-0500-900
مدمجة 3 محاور التحكم micromanipulator	Marzhauser	MM33
تشريح مجهر ستيريو	نيكون	SMZ1000
نصائح اللودر الدقيق	Eppendorf	5242956003
Dumont # 5 ملقط	Sigma-Aldrich	F6521
المرحلة ميكرومتر	بايزر- SGI	02A00404