مقالة منهجية

جيل من الليمفاوي المجهرية الدقيقة وكشف لهم تأثير Proapoptotic على الخلايا الظهارية مجرى الهواء

DOI:

10.3791/52651

⸱

فبراير 20, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Departments of Pediatrics and Pharmacology, University of Montréal, 2Department of Pulmonology, Chongqing Southwest Hospital, Third Military Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلية المجهرية الدقيقة-تسليط غشاء (النواب) هي الحويصلات البيولوجية النشطة التي يمكن أن تكون معزولة وآثارها المرضية في جسم المريض التحقيق في نماذج مختلفة. نحن هنا تصف طريقة لتوليد النواب المستمدة من الخلايا الليمفاوية T (LMPS) ولإظهار تأثير proapoptotic على الخلايا الظهارية مجرى الهواء.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تزايد الاهتمام في الأدوار البيولوجية للخلية الحويصلات المشتقة من الغشاء في التواصل خلية خلية في السنوات الأخيرة. المجهرية الدقيقة (النواب) هي واحدة مثل هذا النوع من الحويصلات، والتي تتراوح قطرها من 0.1 ميكرومتر إلى 1 ميكرومتر، وتسلط عادة من غشاء البلازما من خلايا حقيقية النواة تمر تفعيل أو موت الخلايا المبرمج. نحن هنا وصف جيل من T-المستمدة اللمفاويات المجهرية الدقيقة (LMPS) من خلايا CEM T أفكارك حفز مع أكتينوميسين يتم عزل D. LMPS من خلال عملية الطرد المركزي التفاضلي متعددة الخطوات، وتميزت باستخدام التدفق الخلوي. ويعرض هذا البروتوكول أيضا في الموقع موت الخلايا طريقة الكشف لإثبات تأثير proapoptotic من LMPS على الخلايا الظهارية الشعب الهوائية المستمدة من الماوس الابتدائية الجهاز التنفسي إإكسبلنتس الأنسجة الشعب الهوائية. الطرق الموضحة في هذه الوثيقة توفر الإجراء استنساخه لعزل كميات وفيرة من LMPS من الخلايا الليمفاوية أفكارك في المختبر. المستمدة LMPSفي هذه الطريقة يمكن استخدامها لتقييم خصائص النماذج المرض المختلفة، والصيدلة وعلم السموم الاختبار. وبالنظر إلى أن ظهارة الهوائية تقدم حاجز مادي وعملي وقائي بين البيئة الخارجية والأنسجة الكامنة، واستخدام إإكسبلنتس الأنسجة الشعب الهوائية بدلا من خطوط الخلايا الظهارية خلد يوفر نموذج فعال للتحقيقات التي تتطلب الأنسجة المسالك الهوائية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Microparticles (MPs) هي حويصلات غشائية فرعية نشطة بيولوجيا يتم إطلاقها بعد تنشيط الخلية أو موت الخلايا المبرمج. يتم اشتقاق MPS من الخلايا السليمة والتالفة وتتورط في العديد من العمليات الفسيولوجية والمرضية. تم اكتشاف 1 MPS ليس فقط في البلازما البشرية ، ولكن أيضا في الأنسجة الالتهابية وموت الخلايا المبرمج. تم إثبات الفائدة البيولوجية ل MPS المشتق من غشاء الخلية في بيئات مختلفة ، بما في ذلك نماذج إشارات الخلية وكأدوات دوائية. 2،3 لقد أظهرنا سابقا أن LMPs المشتقة من الخلايا الليمفاوية التائية بعد تحفيز الأكتينومايسين D (للحث على موت الخلايا المبرمج) تثبط تكوين الأوعية الدموية وتمنع بقاء الخلايا البطانية وانتشارها. 4،5 قد تختلف التأثيرات المضادة لتولد الأوعية الدموية ل LMPs بشكل كبير اعتمادا على المحفزات المستخدمة لتنشيط الخلايا الليمفاوية التائية في المختبر. 6

< p class = 'jove_content'> تعمل ظهارة مجرى الهواء كحاجز مادي ووظيفي وقائي. يمكن أن تساهم زيادة أعداد الخلايا الليمفاوية التائية في مجرى الهواء في تلف الخلايا والتهاب مجرى الهواء. 7 لقد أظهرنا أن LMPs تحفز موت الخلايا المبرمج للخلايا الظهارية للقصبات الهوائية البشرية ، 8 مما يشير إلى أن LMPs قد تغير وظيفة الحاجز لظهارة الشعب الهوائية في الجسم الحي. يمكن التعرف على الخلايا المبرمجة باستخدام طريقة TUNEL ، التي تكتشف تجزئة الحمض النووي في الموقع.

الهدف العام من هذا البروتوكول هو توضيح الإنتاج المختبري ل LMPs من خط الخلايا الليمفاوية التائية ، وإثبات تأثيرها المبرمج على الخلايا الظهارية في مجرى الهواء. أظهر الكشف عن موت الخلايا في الموقع أن LMPs تحفز بقوة موت الخلايا الظهارية في الشعب الهوائية ، مما يشير إلى أن الإصابة بوساطة LMPs لظهارة مجرى الهواء قد تؤثر على وظيفة الحاجز للظهارة التالفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: ذكر C57BL / 6 الفئران (5-7 أسابيع من العمر) هي من نهر تشارلز مختبرات الدولية، وشركة (سانت المستمر، كيبيك، كندا.) والتلاعب بها وفقا لبروتوكولات التي وافق عليها سانت جوستين جنة رعاية الحيوان CHU. توفر الماوس إإكسبلنتس الأنسجة الشعب الهوائية مصدر جيد للخلايا الظهارية القصبية الأولية للتحقيق في الآثار proapoptotic من LMPS على الخلايا الظهارية. يصف هذا البروتوكول الجيل في المختبر من LMPS، وكذلك وسيلة للكشف عن الخلايا الظهارية أفكارك على LMPS المعاملة إإكسبلنتس الأنسجة الشعب الهوائية. ويتكون هذا البروتوكول من 3 أقسام.

1. LMPS الإنتاج وتوصيف

ملاحظة: لمنع التلوث، وضمان أن جميع المواد المستخدمة في هذه التجربة هي معقمة أو تعقيمها. تنفيذ جميع الخطوات في RT في خزانة السلامة البيولوجية تحت ظروف معقمة، ما لم يذكر خلاف ذلك.

1.1) تحفيز ومجموعة من النواب9

  1. ذوبان الجليد قسامة من 10 مليون خلية CEM T في 37 ° C حمام الماء. تمييع في 10 مل قبل حرارة متوسطة للدم مثل X-VIVO، في 15 مل أنبوب معقم والطرد المركزي في 200 GX 5 دقائق خالية من المصل. نضح خلايا وطاف resuspend في 5 مل المتوسطة قبل تحسنت.
  2. نقل الخلايا إلى ثقافة قارورة الأنسجة T75 (للخلايا تعليق) مع 15 مل المتوسطة المكونة للدم قبل تحسنت مثل X-VIVO واحتضان لمدة 4 أيام في حاضنة ترطيب عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2.
  3. بعد 4 أيام، ونقل جميع مستنبت والخلايا في قارورة الثقافة الأنسجة T175 تحتوي على 100 مل متوسطة جديدة. مواصلة احتضان الخلايا لمدة 72 ساعة في ظل نفس الظروف حتى أنها قد نمت لكثافة من 2 مليون خلية / مل.
  4. تقسيم بالتساوي بين خلايا أربعة قوارير T175 تحتوي كل منها على 150 مل متوسطة جديدة ومواصلة زراعة الخلايا حتى نمت الخلايا (ما يقرب من 48 ساعة حضانة) إلى كثافة من 2 مليون / مل.
  5. 6 خلايا في قارورة T175 جديدة تحتوي على 150 مل متوسطة جديدة، للحفاظ على / كثافة الخلية مل من 2 مليون.
  6. إضافة أكتينوميسين D (الذائبة في DMSO في 2 ملغ / مل) إلى متوسطة في تركيز النهائي من 0.5 ميكروغرام / مل واحتضان لمدة 24 ساعة.
  7. نقل جميع مستنبت إلى 50 مل أنابيب مخروطية وتدور أسفل الخلايا في 750 x ج لمدة 5 دقائق. نقل طاف في أنابيب مخروطية 50 مل وأجهزة الطرد المركزي في 1،500 x ج لمدة 15 دقيقة لإزالة شظايا خلية كبيرة.
  8. نقل طاف في زجاجة 250 مل ونابذة فائقة السرعة في 12،000 x ج لمدة 50 دقيقة. تجاهل طاف وجمع الكريات.
  9. غسل الكريات LMPS المخصب مع PBS 40 مل العقيمة في أنبوب 50 مل بواسطة الطرد المركزي عند 12،000 x ج لمدة 50 دقيقة. كرر هذه الخطوة مرتين.
  10. جمع غسل الماضي طاف. سيتم استخدامها كما السيطرة على السيارة. تعليق الكريات LMPS في 1مل من برنامج تلفزيوني ونقل إلى 1.5 مل microtube العقيمة. قسامة وتخزين LMPS معزولة في -80 ° C (لتجنب متعددة دورات خالية من ذوبان الجليد).

1.2) توصيف النواب عن طريق تحليل FACS 4

  1. إعداد 2 عينات من العازلة annexin (1)، مع وأخرى دون CaCl 2: HEPES 10 ملي، كلوريد الصوديوم 140 ملم، زائد أو ناقص 5 ملي CaCl 2.
  2. تصفية عازلة annexin وFACS السائل غمد تدفق باستخدام فلتر 0.22 ميكرون لإزالة الجسيمات.
  3. تمييع 1 ميكرولتر من LMPS في 44 ميكرولتر من العازلة annexin مع 5 ملي CaCl 2 في أنبوب FACS. إعداد أنبوب آخر مع 1 ميكرولتر من LMPS في 44 ميكرولتر من العازلة annexin دون CaCl 2 (المراقبة السلبية).
  4. إضافة 5 ميكرولتر من annexinV-Cy5 في كل أنبوب وتخلط جيدا. احتضان لمدة 15 دقيقة في RT في الظلام. وقف رد فعل عن طريق تمييع المزيج مع 400 ميكرولتر من FACS السائل غمد التدفق في كل أنبوب.
  5. إضافة 10 ميكرولتر (200،000 الخرز) من 7 ميكرون العد BEAتعليق DS كمعيار داخلي في كل أنبوب للحصول على عدد المطلق.
  6. إنشاء بوابات الحجم النسبي (FSC-H، PMT E00، تسجيل النطاق) وتحبب النسبي (SSC-H، PMT 325، تسجيل نطاق و) مؤامرة نقطة على تدفق عداد الكريات باستخدام معايرة حجم حبات الفلورسنت من 1 ميكرون (بوابة 1) و عد حبات البوابة في 7 ميكرون (بوابة 2).
  7. تحليل عينة LMPS على FSC-H / SSC-H مؤامرة باستخدام البوابات التي أقامتها وFL-4 قناة لannexin (PMT 765، تسجيل نطاق و) مؤامرة نقطة، من خلال الحصول على إشارة حتى يتم التوصل إلى 20،000 الخرز العد والفرز في بوابة 2.
  8. تحديد الأحداث annexinV الإيجابية للLMPS في المخزن annexin تحتوي على CaCl 2، ومن ثم طرح أحداث LMPS في المخزن annexin دون CaCl 2 (المراقبة السلبية).
  9. حساب العدد المطلق للنواب على أساس المعادلة التالية:
    figure-protocol-1

1.3) تحديد النائب Protein التركيز (برادفورد الفحص)

  1. إعداد 5 التخفيفات المسلسل من مستوى البروتين 1،25-20 ميكروغرام / مل. ماصة 800 ميكرولتر من كل حل معيار وعينة في أنبوب اختبار نظيف في مكررة. إضافة 200 ميكرولتر من برادفورد صبغ كاشف لكل أنبوب. تخلط جيدا، ثم يحضن في RT لمدة 5 دقائق.
  2. قياس الامتصاصية في 595 نانومتر. تحديد تركيز البروتين من LMPS باستخدام الانحدار الخطي للمنحنى القياسية.

2. إإكسبلنتس الأنسجة الشعب الهوائية وعلاج LMPS

ملاحظة: إيلاء اهتمام خاص لبيئة العمل معقمة، وجو معقم و مطهر إعداد الحلول والوسيلة المستخدمة في التجارب التالية. لإعداد الشفاء التام المتوسطة، إضافة 1 مل من الأنسجة شفاء ملاحق المتوسطة مع المصل (إذابة على الجليد) إلى 100 مل الأنسجة شفاء متوسطة وتخلط جيدا.

2.1) إعداد الشعبي إإكسبلنتس الأنسجة

  1. قبل زراعة، خدش 6 مجالات 1 سم 2كل على حافة سطح كل 100 ملم الأنسجة صحن الثقافة بشفرة المشرط. معطف كل خدش 100 ملم الأنسجة صحن الثقافة مع 2 مل من محلول طلاء صحن الثقافة، واحتضان الطبق في ترطيب CO 2 حاضنة O / N عند 37 درجة مئوية. فراغ نضح الحل الفائض وملء الطبق مع 15 مل من الأنسجة غسل المتوسطة.
  2. الموت ببطء C57BL / 6 الفئران (5 إلى 7 أسابيع من العمر) من خلال CO 2 الاستنشاق وفقا لبروتوكولات المعتمدة من قبل لجنة الأخلاق رعاية الحيوان.
  3. جو معقم و مطهر تشريح أنسجة الرئة مع مشرط، دومون منتاش السوبر غرامة، ومقص جراحي. إزالة حمة والأوعية الدموية بعناية. وضع أنسجة الرئة في الجليد الباردة الأنسجة غسل المتوسطة لنقلها إلى المختبر، إن وجدت.
  4. وعلاوة على ذلك تشريح القصبات الهوائية غارقة في الأنسجة غسل المتوسطة وفصل القصبات الهوائية التي يبلغ قطرها بين 1 و 2.5 ملم من أنسجة الرئة الطرفية. أنسجة الشعب الهوائية شريحة إلى ~ 5 ملم حلقات الشعب الهوائية سميكة مع مشرط.
    5. تستخدم حركة شفط مع ملقط معقم microdissecting منحنية لالتقاط شظايا الشعب الهوائية ووضعها على المناطق خدش من الأطباق.
  5. إزالة الأنسجة غسل المتوسطة، واحتضان شظايا في RT ل~ 5 دقائق للسماح لهم الانضمام إلى الأطباق.
  6. إضافة 10 مل من الشفاء التام من متوسطة إلى كل طبق ووضعها في جو يسيطر غرفة الحاضنة وحدات. مسح الغرفة مع ارتفاع خليط الغاز O 2 (70٪ O 2، 25٪ N 2 و 5٪ CO 2،). وضع الغرفة في حاضنة المدارية الفوق والتخلص منه في 37 ° C. يهز الغرفة لمدة 24 ساعة على 10 دورة في الدقيقة للسماح المتوسط ​​وتتدفق بشكل متقطع على مدى شظايا.
  7. بعد 24 ساعة الحضانة، ومراقبة إإكسبلنتس الأنسجة تحت المجهر الضوء على النقيض من المرحلة مقلوب. حدد إإكسبلنتس الشعب الهوائية مع كاملة، حركة الشعر الجميلة وظهارة الشعب الهوائية حية للعلاج LMPS اللاحقة.

2.2) LMPS العلاج

  1. إعداد الكامل المتوسطة النمو على النحو التالي: المكملات المتوسطة النمو ذوبان الجليد مع المصل والخلايا الليفية المانع على الجليد. إضافة 1 مل من مكملات النمو المتوسطة مع المصل و 200 ميكرولتر المانع الخلايا الليفية إلى 100 مل من النمو المتوسطة. تخلط جيدا. تدفئة متوسطة النمو الكامل عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة قبل استخدامها.
  2. تمييع LMPS المعزولة في أنبوب إيبندورف العقيمة جديد مع PBS لإعداد الأوراق المالية LMPS بتركيز 800 ميكروغرام / مل.
  3. إضافة 0.5 مل من النمو الكامل متوسطة إلى كل بئر من 12-جيدا لوحة زراعة الأنسجة.
  4. نقل إإكسبلنتس الشعب الهوائية المختارة مع ملقط microdissecting المنحنية من البروتوكول السابق (القسم 2.1) إلى كل بئر من لوحة زراعة الأنسجة.
  5. تسمية لوحة الثقافة بشكل مناسب لتحديد الآبار العلاج LMPS وآبار المراقبة. إضافة 25 ميكرولتر الأسهم LMPS في كل معاملة LMPS جيدا (لتركيز النهائي من 40 ميكروغرام / مل) و 25 مركبة سيطرة ميكرولتر (انظر LMP الصورة الإنتاج) إلى آبار المراقبة.
  6. تستمر الحضانة في جو يسيطر غرفة الحاضنة وحدات عند 37 درجة مئوية مع الهز لطيف.
  7. بعد 24 ساعة، ويغسل إإكسبلنتس 3 مرات مع برنامج تلفزيوني، والشروع في الخطوة التالية (4٪ بارافورمالدهيد [PFA] تثبيت).

3. المرضية فحص

3.1) إعداد الحلول التالية قبل الشروع في خطوات التالي

  1. إعداد 1X العازلة في برنامج تلفزيوني عن طريق خلط 137 مم كلوريد الصوديوم، و 2.7 ملي بوكل، 10 ملي نا 2 هبو 4، 1.76 ملي KH 2 PO 4، ودرجة الحموضة 7.4.
  2. لإعداد 4٪ PFA، حل 20 غراما من PFA في 400 مل من الماء، يسخن في 60 درجة مئوية مع التحريك. إضافة بضع قطرات من 10 M هيدروكسيد الصوديوم لمسح الحل. التالي إضافة 1X PBS عازلة وضبط مستوى الصوت إلى 500 مل ودرجة الحموضة إلى 7.4. تصفية وقسامة. تخزين في -20 ° C.
  3. إعداد الكواشف الجفاف أو الإماهة التالية: 100٪، 90٪، 70٪، 50٪ من الإيثانول والزيلين.
e_step "> 3.2) يزدرع التثبيت والأنسجة القسم Deparaffinization
  1. وضع كل يزدرع في أنبوب microcentrifuge المسمى مع 1.5 مل من 4٪ PFA واحتضان O / N عند 4 درجات مئوية. شطف إإكسبلنتس مرتين مع 1X PBS.
  2. يذوى إإكسبلنتس من خلال سلسلة الكحول (70٪ من الإيثانول: 3 مرات كل 30 دقيقة، 90٪ من الإيثانول: 2 مرات 30 دقيقة لكل منهما؛ 100٪ من الإيثانول: 3 مرات كل 30 دقيقة، ثم زيلين: 3 مرات 20 دقيقة لكل منهما). تنفيذ جميع الخطوات في RT في غطاء الدخان.
  3. إطمر إإكسبلنتس الأنسجة في البارافين في 58 ° C في الفرن. إعداد 5 ميكرومتر أقسام الأنسجة السميكة باستخدام مشراح الدوارة.
  4. تعويم المقاطع في 56 ° C حمام الماء، ومن ثم تحميل المقاطع على الشرائح النسيجية المسمى. ضع الشرائح في رفوف تلطيخ اليدوية وجافة عند 65 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. السماح للشرائح لتبرد في RT.
  5. تراجع الرفوف في 4 أطباق وصمة عار على التوالي التي تحتوي على الزيلين لمدة 10 دقيقة كل لإزالة البارافين. تراجع الرفوف في سلسلة الإيثانول لإزالة زيلين: 100٪، ثم 95٪، الEN 80٪، ثم 70٪ ثم 50٪ من الإيثانول (5 دقائق لكل خطوة). شطف الرفوف مع ماء الصنبور لمدة 5 دقائق لإزالة الايثانول.

3.3) الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) تلطيخ

  1. مواصلة العمل مع أقسام الأنسجة الثابتة. وضع رف في طبق تلطيخ مليئة الهيماتوكسيلين ماير لمدة 15 دقيقة. شطف رف مع ماء الصنبور لإزالة الهيماتوكسيلين لمدة 20 دقيقة.
  2. وضع في الماء المقطر لمدة 30 sec.Place في 95٪ من الإيثانول لمدة 30 ثانية. ضع في يوزين Y طبق الحل تلطيخ لمدة 1 دقيقة. يذوى الى 2 التغييرات من الايثانول 95٪، و 100٪ من الإيثانول، والزيلين لمدة 2 دقيقة لكل منهما.
  3. إجراء فحص سريع تحت المجهر للتأكد من أن تتم إزالة يوزين الزائد. ضع 2 إلى 3 قطرات من تصاعد المتوسطة (فيشر SP15-100) على كل شريحة، ثم تغطية مع غطاء زجاجي.

3.4) في الموقع خلية كشف الإعدام: الفحص TUNEL

  1. قبل بداية، وإعداد بروتين K الحل العمل: 20 ميكروغرام / مل في10 ملي تريس / حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 7.4.
  2. كرر الخطوات من 1 إلى 5 من القسم 3.2 (تثبيت النباتى والأنسجة قسم deparaffinization). شطف الشرائح مع منزوع الأيونات H 2 O.
  3. تزج الشرائح مع برنامج تلفزيوني 1X لمدة 10 دقيقة. استنزاف PBS الزائد. احتضان أقسام الأنسجة لمدة 30 دقيقة في RT مع بروتين K الحل العمل. شطف الشرائح مرتين مع برنامج تلفزيوني 1X.
  4. إجراء فحص TUNEL كما هو موضح في دليل التعليمات من موت الخلايا كشف عدة. جبل باستخدام تصاعد المتوسطة، وساترة يدويا مع coverslips الزجاج.
  5. تحليل العينات تحت المجهر الضوئي. استخدام صورة برو 4.5 لتحليل الخلايا أفكارك في اللون البني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

واتسمت LMPS مع annexin V تلطيخ 10 بواسطة خلية مضان تنشيط الفرز (FACS) تحليل وبوابات باستخدام 1 ميكرومتر الخرز التي كانت 97٪ من النواب (≤1 ميكرون) annexin-V-Cy5 الإيجابي (الشكل 1A و 1B). عادة، تم الحصول على حوالي 2.5 ملغ من LMPS بعد هذا البروتوكول. إإكسبلنتس الأنسجة الشعب الهوائية من C57BL / 6 تعرض الفئران لسيارة والعلاج LMPS. وكشف تحليل الأنسجة من أقسام الشعب الهوائية تأثير LMPS على السلامة الهيكلية للظهارة الشعب الهوائية. في إإكسبلنتس السيطرة، كانت ظها...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النواب هي سطاء نشطة من عبر الحديث بين الخلايا ودراستهم واعد في العديد من مجالات العلم. وقدمت هذه الدراسة 11 بروتوكول مفصلة لفي المختبر جيل واسع النطاق للLMPS المستمدة من خط الخلية T أفكارك. هؤلاء النواب تعبر عن ذخيرة كبيرة من الجزيئات اللمفاويات وتورط بيولوجيا في تنظيم التوازن الخلوية والأنسجة. ومع ذلك، قد LMPS المستمدة من مصادر مختلفة تكون مختلفة بيولوجيا. 4،9،12،13

عرض LMPS خصائص ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويؤيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (178918)، فون دي بحوث أون سانتيه كيبيك - الرؤية شبكة بحوث الصحية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
إنتاج وتوصيف
الخلايا التائية CEM  ATCC CCL-119
X-VIVO 15 متوسط Cambrex ، Walkersville04-744Q
قارورة T75Sarstedt83.1813.502
قارورة T175Sarstedt83.1812.502
Actinomycin  D شركة سيجما للكيماوياتA9415-2mg
PBSLifetechnologies14190-144
0.22 & micro ؛ م مرشحSarstedt83.1826.001
Annexin-VCy5BD Pharmagen 559933
حل تدفق FACSBD Bio-Sciences342003
الميكروبيدات الفلورية (1 & micro; م)المجسات الجزيئية T8880
حبات عد البوليسترين (7 & micro; م)مختبرات الانفجاراتPS06N / 6994
أنابيب البولي بروبيلين FACSفالكون352058
1 مل ماصةفيشر13-678-11B
5 مل ماصةفالكون357543
25 مل ماصةUltidentDL-357551
1.5 مل أنبوب دقيق مخروطي البولي بروبيلينSarstedt72.690
15 مل أنبوب بولي بروبلين مخروطيالشكل Sarstedt62.554.205
50 مل أنبوب بولي بروبلين مخروطيSarstedt62.547.205
50 مل أنبوب بولي بروبلين عالي السرعةNalgene3119-0050
250 مل زجاجة بولي بروبلين عالية السرعةمقايسةبروتين 356011
بيكمان (مقايسة برادفورد)مختبرات Bio-Rad500-0006
معيار فحص البروتين IIBio-Rad Laboratories500-0007
أنبوب الاختبار 16 × 100VWR47729-576
أنبوب الاختبار 12 × 75Ultident170-14100005B
  ؛MandelHeracell 150
جهاز طرد مركزي منخفض السرعةIECCentra8R
جهاز طرد مركزي عالي السرعةBeckmanAvanti J8
دوار عالي السرعة لزجاجة 250 ملBeckmanJLA16.250
دوار عالي السرعة لأنبوب 50 ملBeckmanJA30.50
Fow القياس الخلوي BD Bio-sciencesFACS Calibur
Spectrophotometerسلسلة بيكمان600
نباتات وأقسام أنسجة الشعب الهوائية 
C57BL / 6 فئران (5-7 أسابيع)    مختبرات نهر تشارلز ، شركة   ؛
مجرى الهواء الماوس PrimaCell & التجارة ؛ النظام:CHI Scientific، Inc.2-82001
  شفرات مشرط من الصلب الكربوني الضلعBecton Dickinson AcuteCare371310# 10
مقبض مشرطأدوات العلوم الدقيقة Inc. 10003-12# 7
مجهر مقلوب على النقيض من الطورأوليمبوس البصرية المحدودة   ؛    CK2
عالية O2< / فرعية> خليط الغاز  شركة VitalAire Canada Inc.
غرفة الحاضنة المعياريةBillups-Rothenberg Inc.MIC-101
MaxQ 4000 شاكر مداري محتضنBarnstead Lab-Line ،   ؛SHKA4000-7
لوحة زراعة الأنسجة ذات 12 بئرBecton Dickinson and Company353043
أطباق زراعة الأنسجة البلاستيكية (100 مم)Sarstedt، Inc.83.1802
مقص جراحيشركة أدوات العلوم الجميلة  14060-09مستقيم ، حاد ، بطول 9 سم
ملقط Graefe نصف منحنيFine Science Tools Inc.   ؛11052-10
حاضنة ثاني أكسيد الكربون المرطبةماندل العلمية Inc. SVH-51023421
  الفحص النسيجي المرضي 
الفورمالين الفورمالديهايدسيجما-ألدريتش ، Inc. HT5011
البارافينفيشر العلمية  الدولية ، Inc.T555
الكحول الإيثيليMerck KGaA, دارمشتاتEX0278-1
  الجلوتارالديهايد Sigma-Aldrich, Inc. G6403
CacodylateSigma-Aldrich, Inc. 31533
شرائح المجهر VWRScientific Inc. 48300-02525x75 مم
زيلينفيشر علمي  الدولية ، Inc.X5-4
هيماتوكسيلين مايرسيجما ألدريتش ، Inc.   ؛قمع MHS16مع ورق الترشيح    
حمض الهيدروكلوريك  فيشر العلمي  الدولية, Inc.   A144s-500
eosin Sigma-Aldrich, Inc. HT110116قمع مع ورق الترشيح   
Permount&Trade; تركيب متوسطثيرمو فيشر العلمي Inc. SP15-100
غطاء زجاجيللصناعات الطبية الجراحية ، Inc.8450324 مرة; 24 #1 
مجموعة الكشف عن TUNELللكشف عن موت الخلايا في الموقع ، POD11 684 817 910
فرنDespatch Industries Inc.LEB-1-20
الدوارة MicrotomeLeica Microsystems Inc.RM2145
ورقة الترشيحWhatman International Ltd.1003150# 3
مجهرنيكون التصوير الياباني ، Inc.E800
كاملWheaton Industries، Inc.900200بما في ذلك الطبق ، الرف ، الغطاء
1.5 مل أنبوب eppendorfSarstedt Inc.   ؛72.6939 × 10 مم
حمام مائي مداري وتردديExpotechUSAORS200
ملحي مخزن فوسفات   ؛  جيبكو14190-144
شفاطالدخان Nicram RD Service3707E
LMPs حاضنة الخلية شركة طبق تلطيخ محلول

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tushuizen, M. E., Diamant, M., Sturk, A., Nieuwland, R. Cell-derived microparticles in the pathogenesis of cardiovascular disease: friend or foe. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (1), 4-9 (2011).
  2. Martinez, M. C., Tual-Chalot, S., Leonetti, D., Andriantsitohaina, R. Microparticles: targets and tools in cardiovascular disease. Trends Pharmacol Sci. 32 (11), 659-665 (2011).
  3. Benameur, T., Andriantsitohaina, R., Martinez, M. C. Therapeutic potential of plasma membrane-derived microparticles. Pharmacol Rep. 61 (1), 49-57 (2009).
  4. Yang, C., et al. Lymphocytic microparticles inhibit angiogenesis by stimulating oxidative stress and negatively regulating VEGF-induced pathways. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 294 (2), 467-476 (2008).
  5. Yang, C., Gagnon, C., Hou, X., Hardy, P. Low density lipoprotein receptor mediates anti-VEGF effect of lymphocyte T-derived microparticles in Lewis lung carcinoma cells. Cancer Biol Ther. 10 (5), 448-456 (2010).
  6. Angelillo-Scherrer, A. Leukocyte-derived microparticles in vascular homeostasis. Circ Res. 110 (2), 356-369 (2012).
  7. Maeno, T., et al. CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice. J Immunol. 178 (12), 8090-8096 (2007).
  8. Qiu, Q., Xiong, W., Yang, C., Gagnon, C., Hardy, P. Lymphocyte-derived microparticles induce bronchial epithelial cells' pro-inflammatory cytokine production and apoptosis. Mol Immunol. 55 (3-4), 220-230 (2013).
  9. Martin, S., et al. Shed membrane particles from T lymphocytes impair endothelial function and regulate endothelial protein expression. Circulation. 109 (13), 1653-1659 (2004).
  10. Shet, A. S., et al. Sickle blood contains tissue factor-positive microparticles derived from endothelial cells and monocytes. Blood. 102 (7), 2678-2683 (2003).
  11. Mause, S. F., Weber, C. Microparticles: protagonists of a novel communication network for intercellular information exchange. Circ Res. 107 (9), 1047-1057 (2010).
  12. Yang, C., et al. Anti-proliferative and anti-tumour effects of lymphocyte-derived microparticles are neither species- nor tumour-type specific. J Extracell Vesicles. 3, (2014).
  13. Soleti, R., et al. Microparticles harboring Sonic Hedgehog promote angiogenesis through the upregulation of adhesion proteins and proangiogenic factors. Carcinogenesis. 30 (4), 580-588 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

V T

مقالات ذات صلة