يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إنشاء طعم أجنبي نموذج المايلوما المتعددة الإنسان في الدجاج لدراسة نمو الورم والغزو والأوعية الدموية

12.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

مايو 1, 2015

 ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, 2Oncotyrol GmbH, 3Tyrolean Cancer Research Institute, 4Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

المايلوما المتعددة (MM) الخلايا البشرية تتطلب المكروية داعمة للخلايا اللحمة المتوسطة ومكونات المصفوفة خارج الخلية من أجل البقاء والانتشار. أنشأنا في الجسم الحي الدجاج نموذج جنين مع خلايا الورم النقوي والوسيطة الإنسان المغروسة لدراسة آثار عقاقير مضادة للسرطان على نمو الورم والغزو والأوعية الدموية.

الملخص

المايلوما المتعددة (MM)، وهو مرض الخلية البلازما خبيث، لا يزال غير قابل للشفاء ويطلب أدوية جديدة لتحسين تشخيص المرضى. ونظرا لعدم وجود المكروية العظام وعوامل النمو لصناعة السيارات / نظير الصماوي الخلايا MM الإنسان يصعب زراعتها. ولذلك، هناك حاجة ملحة لإنشاء السليم في التجارب المختبرية ونظم الاستزراع الجسم الحي لدراسة عمل علاجات جديدة على الخلايا MM الإنسان. هنا نقدم نموذجا لزراعة خلايا المايلوما المتعددة الإنسان في بيئة 3D المعقدة في المختبر والمجراة. و transfected خطوط الخلايا MM OPM-2 وRPMI-8226 للتعبير عن GFP التحوير وزرعها في وجود خلايا اللحمة المتوسطة الإنسان والكولاجين النوع الأول المصفوفة كما الكروية ثلاثية الأبعاد. بالإضافة إلى ذلك، والمطعمة الكروية على غشاء مشيمائي (CAM) من أجنة الدجاج ومراقبة نمو الورم عن طريق مضان ستيريو المجهر. كلا النموذجين تسمح دراسة درو علاجية جديدةع في بيئة 3D المعقدة وتقدير من كتلة الخلايا السرطانية بعد التجانس الطعوم في التحوير محددة GFP-ELISA. وعلاوة على ذلك، يمكن رصد ردود عائية المضيف وغزو الخلايا السرطانية في الأنسجة المضيف تحتاني يوميا المجهر ستيريو وتحليلها بواسطة تلطيخ المناعى ضد الخلايا البشرية الورم (كي-67، CD138، Vimentin) أو الخلايا الجدارية المضيفة التي تغطي الأوعية الدموية (desmin / ASMA).

في الختام، ونظام onplant يسمح دراسة MM نمو الخلايا والأوعية الدموية في بيئة 3D معقدة ويمكن الكشف عن مركبات علاجية جديدة تستهدف بقاء وتكاثر الخلايا MM.

المقدمة

تتميز فئة

بالورم النقوي المتعدد (MM) بتكاثر خلايا البلازما الخبيثة في نخاع العظام وآفات العظام ونقص المناعة 1. على الرغم من توفر خيارات علاجية جديدة مثل مثبطات البروتيازوم (بورتيزوميب) والأدوية المعدلة للمناعة (بوماليدوميد وليناليدوميد) ، إلا أن MM لا يزال ورما خبيثا غير قابل للشفاء مع تشخيص قاتم 2. يمكن تفسير التشخيص السيئ من خلال عدم التجانس غير العادي لاستنساخ خلايا MM التي تساهم في استجابات متغيرة للعلاج ، لا سيما في ظل العلاج لفترة طويلة وضغط الاختيار لاستنساخ MM 3.

يعد الاختبار قبل السريري للأدوية الجديدة وتركيباتها في المختبر وفي الجسم الحي خطوة حاسمة وتستغرق وقتا طويلا لتطوير الأدوية في المستقبل. وبالتالي ، فإن النماذج المفيدة في الجسم الحي ل MM مطلوبة لاكتساب فهم أفضل لبيولوجيا المرض وتمكين اكتشاف أدوية جديدة. في الواقع ، أفضل نماذج زرع الأعضاء للأورام الخبيثة الدموية والعلاجات هي الفئران التي تعاني من نقص المناعة ، مثل الفئران التي تعاني من نقص المناعة الشديد (SCID) 4-7 ، أو الفئران غير البدنة السكري / SCID (NOD / SCID) 8،9 أو الفئران NOD / SCID التي β ميكروجلوبولين بالضربة القاضية 10،11.

على الرغم من أن نماذج الفئران للمرض البشري يمكن أن تشبه في بعض الجوانب النمط الظاهري للمرض البشري ، إلا أن الفئران التي تعاني من نقص المناعة فطرية ، وبالتالي تحاكي استجابة فردية واحدة فقط للدواء والتكاليف مرتفعة للغاية. بسبب تثبيط المناعة ، تتطلب ظروف صيانة خاصة ويتطلب نقش MM البشري في الفئران 6 أسابيع إلى شهرين 9،12 ، ما لم يتم تطعيم الخلايا مباشرة بنخاع العظام باستخدام إجراء يتطلب تقنيا مع معدلات أقل من بقاء 7،13. لذلك ، تم إنشاء طرق جديدة باستخدام النماذج العضوية القائمة على الخلايا الجذعية 14 أو هندسة الأنسجة 15 أو نماذج زراعة الخلايا ثلاثية الأبعاد المتطورة 16. سوف يتنافسون في المستقبل القريب مع التجارب الحيوانية الكلاسيكية لاختبار الأدوية قبل السريرية ، لكن لا يمكنهم استبدال اختبارات السمية الجهازية في الكائنات الحية.

لقد ثبت من قبل أن جنين الدجاج كائن حي مناسب لزرع الخلايا والأنسجة البشرية بسبب نقص الاستجابة المناعية التكيفية حتى الفقس 17-19. علاوة على ذلك ، يعكس كل جنين دجاج تفاعلا فرديا للأدوية المطبقة أو الخلايا السرطانية بسبب التنوع الجيني داخل مجموعات الدجاج. الغشاء المشيمي (CAM) هو نظام راسخ لدراسة تكوين الأوعية المعتمدة على الورم 20-22. عندما يتم تطعيم الأورام الصلبة ب CAM ، فإنها تظهر العديد من خصائص السرطانات في الجسم الحي ، بما في ذلك الانتشار والغزو وتكوين الأوعية الدموية والورم الخبيث 23-27.

بناء على التجربة السابقة لمجموعتنا مع نماذج CAM xenograft20،26،27 ، تم إنشاء نموذج MM بشري يجمع بين ميزة نظام الثقافة ثلاثية الأبعاد البشرية ونموذج أجنة الدجاج النامية السابقة. يسمح نظام نموذج MM هذا بالمراقبة في الوقت الفعلي لتطور نمو MM ، والقياس الكمي لكتلة الخلية واختبار الأدوية قبل السريرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وفقا للقانون النمساوي، ومكتب مختبر رعاية الحيوان في خدمة الصحة العامة أجنة الطيور الولايات المتحدة لا تعتبر الحيوانات الفقارية الحية حتى قدم مكتب NIH hatching.The مختبر رعاية الحيوان الإرشادات المكتوبة في هذا المجال (HTTP: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm وNIH النشر رقم: 06-4515).

1. خلية الثقافة وLentiviral ترنسفكأيشن

  1. خطوط ثقافة الخلية MM OPM-2، RPMI-8226 والخلايا الجذعية الوسيطة من النخاع العظمي في RPMI1640 المتوسطة، على أن تستكمل مع 10٪ الأبقار مصل الجنين العجل و 100 وحدة دولية / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / الستربتومايسين مل و 2 ملي الجلوتامين في وجود من 5٪ CO 2 عند 37 درجة مئوية.
  2. Transfect 5 × 10 6 خلايا كلوة 293FT مع مزيج الفيروسي التعبئة والتغليف (9 ميكروغرام) DNA و 3 ميكروغرام pLenti6 / V5 دست EGFP ناقلات عن طريق استخدام 30 ميكرولتر liposomal كاشف ترنسفكأيشن وترنسفكأيشن المتوسطة (10 مل). إزالة ترنسفكأيشن المتوسطة بعد 12 ساعة وإضافة 10 مل DMEM المتوسطة مع 10٪ مصل بقري العجل و1٪ الأحماض الأمينية غير الأساسية (NEAA).
  3. بعد 5 أيام، وجمع supernatants من الخلايا HEK293FT بعد الطرد المركزي الخلايا السباحة (1000 x ج، 5min). تحديد عيار الفيروسية التي كتبها في الوقت الحقيقي PCR كما هو موضح في مكان آخر (28).
  4. Transfect 1 × 10 6 خلايا MM مع EGFP الجسيمات lentiviral (1 × 10 5 الجزيئات) في 24 لوحة جيدا في كامل متوسطة النمو. بعد 3 أيام، تبدأ عملية الاختيار من خلال إضافة 2 ميكروغرام / مل blasticidin إلى مستنبت. للالمتاحة تجاريا EGFP الفيروسة البطيئة، استخدم 500 ميكروغرام / مل النيومايسين.
  5. بعد 2 أسابيع من الاختيار، ومجموعات من EGFP معربا عن الخلايا MM تظهر. جمع الخلايا بواسطة الطرد المركزي (1000 x ج، 5 دقائق) وتوسيعها كما OPM-2 EGFP وRPMI-8226 sublines EGFP للتجارب (القسم 2 و 3).

2. 3D-المايلوما المتعددة كروي نموذج

  1. النوع الأول البرد الكولاجين حل و10 × DMEM سن الجليد.
  2. مزيج 10/01 حجم 10 × DMEM المتوسطة في مادة الكولاجين. إضافة هيدروكسيد الصوديوم (0.2 N) لتحييد حل الكولاجين الحمضية إلى قيمة الرقم الهيدروجيني من 7.4. مخزن الكولاجين / حل متوسطة على الجليد.
  3. مزيج خطوط الخلايا MM المعدلة وراثيا (OPM-2 EGFP أو RPMI-8226 EGFP؛ 250000 في كروي،) مع الخلايا البشرية الوسيطة (50000 خلية / كروي، أي انخفاض 30 ميكرولتر).
  4. خليط الخلية الطرد المركزي في 15 مل أنابيب (1000 x ج، 5min)، إضافة الباردة مزيج الكولاجين أعد (من 1mL) إلى الخلية بيليه وتخلط جيدا (مع 1000 ميكرولتر طرف).
  5. ماصة على الفور 30 ميكرولتر من الخليط الكولاجين / خلية (مع 100 ميكرولتر طرف) في لوحة 24 جيدا على الفيلم البارافين العقيمة والسماح خليط الخلية / الكولاجين لتتبلمر لمدة 30 دقيقة عند 37 ° C (انظر الشكل 1A).
  6. الكروية MM تراكب مع من 1mL الثقافة المتوسطة التي تحتوي على 1 و 10 و 100 نانومتر bortezomib (انظر الشكل 1B).
  7. بعد 72 ساعة من الحضانة عند 37 درجة مئوية، الكروية الوثيقةstereomicroscopy مضان (انظر الشكل 1C).
  8. نقل كل كروي باستخدام ملقط مع فكي مسطحة واسعة في أنبوب رد فعل لقياس GFP (انظر الشكل 1D).

3. 3D المايلوما المتعددة طعم أجنبي النموذجي في CAM

  1. احتضان بيض الدجاج في حاضنة خاصة للبيض الطيور في 37 ° C و 70٪ الرطوبة لمدة ثلاثة أيام.
  2. بعد ذلك، والبيض مفتوحة ونقل الأجنة إلى تعقيم مع الايثانول، مربع، 10 سم من البلاستيك وزنها القوارب مع زراعة الخلايا لوحة الغطاء واحتضان "البيضة السابقين" لمزيد من ستة أيام، بحيث CAM غير قادرة على تطوير (انظر الشكل 2A).
  3. النوع الأول البرد الكولاجين حل و10 × DMEM على الجليد، مزيج 10/01 حجم 10 × DMEM المتوسطة في مادة الكولاجين، إضافة هيدروكسيد الصوديوم (0.2 N) لتحييد حل الكولاجين الحمضية إلى قيمة الرقم الهيدروجيني من 7.4. مخزن الكولاجين / حل متوسطة على الجليد.
  4. مزيج خطوط الخلايا MM المعدلة وراثيا (OPM-2 EGFP أوRPMI-8226 EGFP؛ 250000 في كروي،) مع خلايا اللحمة المتوسطة الإنسان (50000 خلية / كروي).
  5. خلايا الطرد المركزي في 15 مل أنابيب (1000 x ج، 5min؛ لكل مركب اختبار 1 قنينة)، إضافة البارد من 1mL أعد الخليط الكولاجين مع المخدرات (على المطلوب تركيز العمل) إلى الخلية بيليه وتخلط جيدا (مع 1000 ميكرولتر طرف).
  6. وضع قطرات الكولاجين (30 ميكرولتر لكل منهما) على parafilm في 6 بات جيدا لمدة 30 دقيقة للسماح البلمرة من المصفوفة خارج الخلية عند 37 درجة مئوية.
  7. نقل "onplants" من الخطوة 3.6 مع استخدام ملقط لسطح غير المعالجة من CAM (2 سم بعيدا عن الجنين) من أجنة الدجاج القديمة 9 أيام (4 onplants لكل جنين الدجاج، انظر الشكل 2B)
  8. بعد 5 أيام من النمو في الجسم الحي في حاضنة البيض عند 37 درجة مئوية والرطوبة 70٪، xenografts الوثيقة التي مضان stereomicroscopy (انظر الشكل 2C). الموت ببطء أجنة الدجاج انخفاض حرارة الجسم عند 4 درجات مئوية في الثلاجة لمدة 5H.
  9. إزالة xenografts مع الأنسجة CAM تحتاني من قبل مقص العيون وملقط مع فكي مسطحة واسعة. استخدامها لقياس GFP (الباب 4، انظر الشكل 2D) أو للتحليل المناعى الأوعية الدموية و / أو غزو الخلايا السرطانية (القسم 5).

4. الكمي لEGFP البروتين بواسطة ELISA

  1. نقل كل كروي MM أو طعم أجنبي رفعه إلى 0.5 مل RIPA العازلة التي تحتوي على 200 ميكروغرام / مل مثبطات الأنزيم البروتيني.
  2. التجانس كروي / طعم أجنبي مع الخالط الأنسجة على الجليد.
  3. تنفيذ ثلاث تجميد / الذوبان دورات في النيتروجين السائل و37 ° C حمام الماء.
  4. الطرد المركزي جناسة في 4 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة (12000 ز) ومتجر supernatants.
  5. تمييع عينات 01:20 العازلة في الفحص (200 ميكرولتر) من عدة ELISA. قياس مستويات GFP من قبل GFP التجاري ELISA كيت باستخدام المعقدة البيروكسيديز أضداد GFP، وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.

5. Immunohiتحليل stochemical الأوعية الدموية وغزو الخلايا السرطانية

  1. إصلاح xenografts رفعه مع منطقة CAM في 4٪ امتصاص العرق O / N عند 4 درجات مئوية.
  2. وضع xenografts الثابتة إلى أشرطة التضمين ونقلها إلى محطة التضمين الأنسجة مع زيادة سلسلة الكحول متدرج (50٪، 70٪، 80٪، 95٪ من الإيثانول، زايلول والبارافين؛ كل خطوة 60 دقيقة).
  3. xenografts القسم (5 ميكرون) من خلال استخدام مشراح دوار الفوق. خبز أقسام البارافين على الشرائح الزجاجية O / N عند 56 ° C.
  4. Deparaffinize أقسام من خفض متدرج سلسلة الكحول لضعف المياه المقطرة (زايلول، 95٪، 80٪، 70٪، 50٪ من الإيثانول، وضعف المياه المقطرة، كل خطوة 10 دقيقة).
  5. أداء استرجاع مستضد في حمام مائي (95 ° C، 20 دقيقة) مع محلول استرجاع مستضد (العازلة citrate-؛ 7.0 درجة الحموضة، حجم 100 ميكرولتر).
  6. منع النشاط البيروكسيداز الذاتية مع 100 ميكرولتر 3٪ H 2 O 2 / الميثانول لمدة 30 دقيقة.
  7. أقسام كتلة في PBS تحتوي على10٪ مصل العجل الجنين لمدة 45 دقيقة (حجم 100 ميكرولتر).
  8. وصمة عار لمدة 1 ساعة مع 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية (1μg / مل) المخفف في برنامج تلفزيوني يحتوي على 1٪ مصل العجل الجنين في RT.
  9. بعد غسل 3 مرات في برنامج تلفزيوني، واحتضان ل1H مع الأجسام المضادة الثانوية المعقدة البيروكسيديز (0.1 ميكروغرام / مل) في برنامج تلفزيوني يحتوي على 1٪ مصل العجل الجنين في RT.
  10. بعد غسل 3 مرات في برنامج تلفزيوني أداء رد فعل اللون عن طريق حل أفيدين / البيوتين المعقدة (ABC) وdiaminobenzidine (DAB) الركيزة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  11. 5.11. وقف رد فعل عن طريق نقل المقاطع لضعف المياه المقطرة، مباين مع الهيماتوكسيلين وجبل المقاطع مع وسيلة الاصطناعية في تصاعد مستمر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في تحليل المختبر من المركبات المستهدفة في 3D المايلوما المتعددة المقايسات كروي

يرجع ذلك إلى الحد من زراعة الخلايا MM الإنسان الأساسية في المختبر أنشأنا نماذج جديدة 3D الثقافة في المختبر لخطوط الخلايا MM الإنسان الاستفادة من مصفوفة النمو خارج الخلية وخلايا اللحمة المتوسطة الإنسان الأساسية الداعمة من نخاع العظام (الشكل 1A، B). خطوط الخلايا المعدل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تطوير عوامل علاجية جديدة لصهر MM تتطلب أقل استهلاكا للوقت ومكلفة نظم في الجسم الحي لتقييم حساسية الخلايا MM الإنسان للمخدرات. حتى الآن، تتوفر لتقييم ما قبل السريرية من العلاجات المضادة للالمايلوما الجديدة سوى عدد قليل من النظم في الجسم الحي. كل منهم حدودها لفحص نطاق واسع من المكتبات مجمع 29.

أفضل النماذج الحالية للخلايا MM الإنسان هي الفئران المناعة ناقصة للغاية 7،13،30 والأجنة تركيا 29. كل من الماوس SCID والطيور نماذج طعم أجنبي الجنين...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة

شكر وتقدير

يريد المؤلفون أن يشكروا السيدة كورنيليا هيس على مساعدتها الفنية الممتازة في الكيمياء المناعية وإعداد أجنة الدجاج. تم دعم هذا العمل من قبل الصندوق النمساوي للعلوم (منحة FWF رقم P19552) والاتحاد الأوروبي (مشروع الاتحاد الأوروبي FP7 Optatio No: 278570).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
RPMI-8226 خلاياDSMZACC 9STR لمحة
خلايا OPM-2DSMZACC 50STR لمحة
عن الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية   ؛PromoCellPC-C-12974
خلايا HEK293FT InvitrogenR700-07
RPMI1640سيجما ألدريتشR0883
مصل الأبقار الجنيني   ؛ HyCloneThermoScientificSH30070.03
L-Glut- Pen- Strep solutionSigmaG6784
DMEM MediumGibco31966
NEAASigma Life SciencesM7145
Transfection Medium / Opti-MEM  Gibco51985
eGFP جسيمات الفيروسات العدسيةGeneCopoeiaLPP-EGFP-LV105جاهز للاستخدام الجسيمات الفيروسية
pLenti6 / V5Dest6 eGFP ناقلاتInvitrogenPN 35-1271من المؤلفين
ViralpowerTM مزيج التعبئة والتغليف  InvitrogenP / N 35-1275
كاشف التعداء / Lipofectamin 2000Invitrogen11668-027
BlasticidinInvitrogenR210-01
NeomycinBiochromA2912
Collagen-Type1   ؛ Rat TailBD Biosciences354236
مسحوق DMEMLife TechnologiesArt.Nr. 10338582
plitidepsinPharmamar
bortezomibLKT Lab.، Inc.B5871
SPF-بيض الدجاجة البيضاءتشارلزريفر مخصب   أبيض Leghorn   بيض الدجاج
قوارب وزن بلاستيكيةneoLabArt.Nr. 1-1125لثقافة البيضا السابقة
بتريدش (أغطية)SimportD210-16لثقافة البيضا
السابقة RIPA Buffer (10x)إشارات الخلية# 9806
البروتياز أقراص مثبطةRoche11 836 170 001
كاملة صغيرة خالية
EDTA GFP ELISACell Biolabs، Inc.AKR-121
Histocette IISimportM493-6
PFA  37٪Roth7398.1
DPBSLonzaBE17-512F
الإيثانول المطلقنورمابور20،821،321
Roti-HistolRothArt.Nr.6640.4
ParaplastSigmaA6330
SuperFrost Microscope SlidesR. Langenbrinck المادة - رقم
Labor- u. Medizintechnik03-0060
DakoCytomation Wash Buffer 10xDakoCytomationCode-Nr.
S 3006
حل استرجاع الهدف (10x)  درجة الحموضة 6,1DAKOCode-Nr.
S 1699
H2O2Merck
m-a-hu استنساخ ASMA 1A4DAKOM0851
m-a-hu CD138 استنساخ MI15DAKOM7228
m-a-hu Vimentin استنساخ V9DAKOM0725
m-a-hu استنساخ Desmin D33DAKO  M0760
m-a-hu Ki67  استنساخ MIB-1   DAKO  M7240
الماعز البيوتينيل- مضاد للفأر IgGVector Laboratories Inc.BA-9200
Vectastain Elite ABC KitVector Laboratories Inc.# PK-6100
FAST DAB مجموعة الأجهزة اللوحية.سيجما بيوكيمالز# D4293
ماير s haemalaun solutionMerck1،092،490،500
Roti HistokittRothArt.Nr.6638.2
مقعد أعلى دوارة ميكروتومThermo Electron ، Shandon Finesse ME +
محطة تضمين الأنسجةLeica ، TP1020
حاضنة البيضGrumbach   ؛BSS160
مجهر مضان ستيريو مجهز بكاميرا رقمية متصلة (أوليمبوس E410) وضوء بارد مرن   ؛أوليمبوس ، SZX10
Ultra Turrax   ؛IKA T10
عن مربع من الخالط

المراجع

  1. Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
  2. Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
  3. Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
  4. Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
  5. Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
  6. Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
  7. Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
  8. Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
  9. Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
  10. Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
  11. Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
  12. Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
  13. Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
  14. Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
  15. Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
  16. Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
  17. Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
  18. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
  19. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
  20. Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
  21. Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
  22. Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
  23. Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
  24. Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
  25. Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
  26. Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
  27. Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
  28. Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
  29. Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
  30. Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
  31. Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
  32. Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
  33. Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
  34. Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
  35. Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

GFP GFP GFP ELISA
إنشاء طعم أجنبي نموذج المايلوما المتعددة الإنسان في الدجاج لدراسة نمو الورم والغزو والأوعية الدموية
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.