يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من

8.5K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52681

⸱

أبريل 9, 2015

 ,  ,  , 
1Department of Pharmacology and Toxicology, Virginia Commonwealth University, 2VCU Alcohol Research Center, Virginia Commonwealth University

في هذه المقالة

ملخص

C. elegans هو نموذج مفيد لدراسة تأثيرات الإيثانول على السلوك. نقدم اختبارًا سلوكيًا يقيس تأثيرات الإيثانول على سرعة الحركة من الديدان الزاحفة؛ يمكن قياس كل من الحساسية الأولية وتطور التسامح الوظيفي الحاد للإيثانول مع هذا الاختبار.

الملخص

اضطرابات تعاطي الكحول تشكل مصدر قلق كبير للصحة العامة، حيث توجد استراتيجيات قليلة فعالة لعلاجها. إحدى الصعوبات التي أدت إلى تأخير تطوير علاجات أكثر فعالية هي الفهم النسبي للأسس الجزيئية لتأثيرات الإيثانول على السلوك. تقدم الديدان الخيطية، Caenorhabditis elegans (C. elegans)، نموذجًا مفيدًا لتكوين واختبار الفرضيات حول التأثيرات الجزيئية للإيثانول. هنا، نصف اختبارًا تم تطويره واستخدامه لفحص أدوار جينات معينة وعوامل بيئية في الاستجابات السلوكية للإيثانول، حيث يكون التنقل هو المخرج السلوكي. يتسبب الإيثانول في انخفاض حاد في الزحف على سطح الأجار بشكل يعتمد على الجرعة. تكون التأثيرات ديناميكية؛ الحيوانات المعرضة لتركيز عالٍ تظهر انخفاضًا حادًا في البداية في الزحف، يشار إليه هنا بالإحساس الأولي، ثم تستعيد جزئيًا سرعة التنقل على الرغم من استمرار وجود الدواء. يشار إلى هذه اللدونة السلوكية الناجمة عن الإيثانول هنا باسم تطوير التسامح الوظيفي الحاد. تم استخدام هذا الاختبار لإثبات أن هذين النمطين الفينولوجيين منفصلان وقابلان للفصل وراثيًا. اختبار التنقل البسيط الموصوف هنا مناسب لفحص تأثيرات كل من التلاعبات الوراثية والبيئية على هذه الاستجابات السلوكية الحادة للإيثانول في C. elegans.

المقدمة

اضطرابات تعاطي الكحول (AUD) منتشرة وتنتج مشاكل صحية واجتماعية واقتصادية خطيرة. في البشر، فإن القابلية لتطوير اضطراب تعاطي الكحول تتأثر بشكل كبير بكل من الجينات والبيئة1,2. من العوامل الفسيولوجية القوية للتنبؤ بإمكانية إساءة الاستخدام هو المستوى الأولي من الاستجابة (LR) للكحول (الإيثانول) الذي يظهره الأشخاص الجدد3-5. يتأثر نمط الاستجابة هذا بالمكونات الوراثية وغير الوراثية6. يُعتبر تحديد الآليات الجزيئية التي تؤثر على الاستجابة للإيثانول هدفاً هاماً لدراسة سلوكيات الاستجابة للإيثانول.

يُستخدم الدود الدائري، Caenorhabditis elegans، بشكل متزايد كنموذج لدراسة تأثيرات الإيثانول على السلوك7-9. هناك حفظ جزيئي قوي في آلية عمل الجهاز العصبي بين الديدان والثدييات، والعديد من الجينات التي تبين أنها تؤثر على الاستجابة للإيثانول في الديدان قد أظهرت أنها تؤثر أيضاً على الاستجابة للإيثانول في الثدييات10-16، وقد اشُتبه في أنها تؤثر على إمكانية إساءة الاستخدام في البشر17-19.

الإيثانول يسمم الديدان، وهو ما ينعكس في انخفاض سرعة حركتها. قامت عدة مختبرات مختلفة بتطوير اختبارات سلوكية تختلف بطرق عدة، على سبيل المثال، سلوك الحركة الذي يدرسونه (الزحف مقابل السباحة11,12,14,20,21) أو تركيب المحاليل التي تُجرى فيها الاختبارات (وسط نمو الديدان مقابل محلول Dent’s المائي20,22). من المثير للاهتمام أن هذه الاختبارات المتنوعة قد أسفرت عن أنماط استجابة جرعة مختلفة إلى حد ما لتأثيرات الإيثانول. أشارت هذه النتائج إلى اختلافات مهمة في السلوكيات الأساسية للزحف والسباحة9,23، بالإضافة إلى دور المتغير البيئي لضغط الأسمولية في استجابات الإيثانول20، وقد أشارت أيضاً إلى أهمية وصف التفاصيل التجريبية للاختبارات المختلفة.

يتم هنا عرض اختبار لقياس التأثيرات الحادة للإيثانول على سلوك الزحف. تم استخدام هذا الاختبار بشكل واسع لدراسة التأثيرات الوراثية والبيئية على الاستجابة للإيثانول8,10,20,24,25. يُعتبر نمط الاستجابة لدى الثدييات مركبًا من على الأقل مكونين، وهما الحساسية الأولية للإيثانول والتسامح الوظيفي الحاد للإيثانول26,27. في الديدان، تم إثبات أن نمط الاستجابة هذا يمكن فصله إلى هذين المكونين باستخدام هذا الاختبار السلوكي. يمكن دراسة تأثيرات التلاعبات الوراثية والبيئية على هذين النمطين باستخدام هذا الاختبار الواحد. من المهم أن نذكر أن هذين النمطين قابلة للفصل وراثياً.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. خطوات لتنفيذ يوم قبل الفحص

  1. اختيار L4 مرحلة الديدان إلى الطازجة المتوسطة النمو الخيطية (NGM) لوحات مع المصنف حشيش OP50 E. القولونية، والثقافة لهم في 20 CO / N. كل شرط الفحص يتطلب 10 الديدان. اختيار وجود فائض من الديدان للسماح O / N فقدان الديدان.
    1. الحيوانات الفحص فقط التي هي البالغين اليوم الأول؛ العديد من المسوخ تنمو بسرعة أبطأ من النوع البري. ضبط توقيت التقاط لسلالات التي لديها تأخر في النمو حتى يتسنى لجميع الحيوانات المختبرة هم من البالغين اليوم الأول.

2. خطوات إلى تنفيذ يوم من الفحص

  1. التحضير للفحص:
    1. أداء المقايسات على القياسية غير المصنف 60 × 15 ملم لوحات NGM. تجف كل من لوحات لاستخدامها في 37 مئوية لمدة 2 ساعة، مع أغطية قبالة. لكل محاكمة التجريبية، استخدم أربع لوحات NGM المجففة. هذه ستكون ملي و 400 ملي 0 لوحات الإيثانول فحص والمرافق لوحات التأقلم الخاصة بهم.
      ملاحظة:استخدام لوحات NGM مهم هنا. الاختلافات في تكوين لوحات، وبخاصة الأسمولية، ويمكن أن تؤثر بقوة على الاستجابة للجرعة من الايثانول على السلوك، وهذا هو الواجب، جزئيا على الأقل، إلى تغيرات في كمية الإيثانول التي تراكمت لدى الحيوانات 20. NGM أجار 160 الميلي أسمول.
    2. بعد التجفيف، وتزن كل واحدة من لوحات NGM غير المصنف لاستخدامها في مقايسة ولاحظ الوزن. تحديد حجم وسائل الإعلام في لوحات على أساس الوزن من لوحة فارغة. لتقريب تحويل الوزن من أجار للحجم، افترض أن وسائل الإعلام يزن نفس حجم مساو من الماء.
      ملاحظة: تم العثور على نتائجنا أكثر اتساقا مع وسائل الإعلام NGM التي المجففة بما فيه الكفاية أن حجم الأصلي 10 مل لديه حجم ما بعد التجفيف بين 8،3-8،9 مل. بديلا للفي الوقت الجافة 2 ساعة هو لتجف حتى تصل لوحات هذا النطاق حجم لحساب الفروق في حاضنات.
    3. تذوب 4 حلقات النحاس (القطر الداخلي من 1.6 سم) في سطح كل من لوحات ليكون بمثابة حظائر للتراكيب وراثية مختلفة أو مجموعات العلاج من worms.Grasp كل حلقة مع ملقط، والحرارة في لهب (لهب قوي من موقد بنسن يعمل بشكل جيد) لحوالي 3 ثانية. وضع على الفور الطوق على طبق من ذهب وهو لا يزال يشغل الحلبة مع ملقط لمنعه من "تخطي".
      1. تأكد من أن عصابة تقع شقة ضد سطح أجار عن طريق الضغط برفق مع ملقط في عدة نقاط على الحلبة. عند وضع الحلبة، وتوخي الحذر من ترك مساحة لثلاث حلقات إضافية.
      2. إذابة النحاس حلقات إضافية ثلاثة إلى السطح من لوحة، مع الحرص على وضعها باعتبارها قريبة من بعضها البعض ممكن حتى يتسنى لجميع أربعة سوف تكون في مجال الرؤية من الكاميرا.
        ملاحظة: جعل ختم جيدة مع آغار ضروري للحفاظ على الديدان في الحلقات خلال الفحص. من غير المرجح أن جعل ختم الصحيح مع أجار الحلقات التي تخطي حول على لوحة وقد ندبة آغار، والذي يسمح لتحفر الديدان وتتعارض مع الرؤية والديدان.
      3. لكل لوحة الفحص إعداد المرفقة لوحة "التأقلم"، والتي ينبغي أن تجفف وغير المصنف ولن تحصل على أي الإيثانول. وضع أربع حلقات من النحاس على هذه اللوحات.
    4. تسمية الجزء السفلي من لوحات بجوار كل حلقة مع سلالة دودة لاستخدامها في الحلقة، مع الحرص على عدم الكتابة في مجال الرؤية من الحلبة نفسها. تطابق العلامات على لوحة فحص مع المرافقين لوحة التأقلم لها.
    5. حساب كمية الإيثانول بنسبة 100٪ لتضيف إلى كل لوحة الفحص بحيث التركيز النهائي هو 0 ملم أو 400 ملم الإيثانول (الوزن للحجم). لكل تجربة (ن = 1)، سوف يكون هناك واحد 0 ملي واحد 400 ملي لوحة الإيثانول. لوحات التأقلم لا يحصلون الايثانول. إضافة الإيثانول، pipetting لفي جميع أنحاء سطح اللوحة. استخدام فيلم مختبر لختم لوحة والسماح لها لكي تتوازن على أعلى مقاعد البدلاء لمدة 2 ساعة.
    6. عندما انقضت 1.5 ساعة، تبدأ الخطوة التأقلم للمقايسة، خطوة 2.2.
  2. أداء تنقل الفحص: لوحات الفحص
    1. نقل بعناية 10 الديدان من كل مجموعة التجريبية لمركز خاتم من النحاس على لوحة التأقلم. إزالة أي طعام غير مرئية على أجار في هذه المرحلة عن طريق كشط بلطف مع اختيار دودة. تختلف الترتيب الذي يتم وضع المجموعات التجريبية على لوحات عبر التجارب التجريبية بحيث لا يتم وضع نفس الضغوط على لوحات في نفس الترتيب عبر المحاكمات.
      ملاحظة: إن الهدف هو نقل الحيوانات إلى لوحة مع كميات ضئيلة من الطعام، لأنه إذا كان يتم نقل الطعام على لوحة التأقلم على لوحة فحص والديدان تجميع حول الغذاء وتأثير المخدرات على تنقل سيتم حجبه.
    2. يجب الحرص على عدم كسر سطح أجار مع اختيار، وهذا سوف يسمح الديدان إلى الجحر وسوف تعطيل الفحص. احتضان الديدان في RT لمدة 30 دقيقة.
    3. ضمان وجود فاصل زمني مناسب بين المبدئية من كل لوحة. مجرب ذوي الخبرة يمكن ان تتحرك الحيوانات 40، 10 / حلقة لمدة 4 حلقات في <1.5 دقيقة، ولكن أي فترة تصل إلى 2 دقيقة غير مقبول. الفحص القياسية ديه الأفلام تسجيل في 10-12 دقيقة و30-32 دقيقة من التعرض لكلا 0 ملي و 400 ملي الايثانول.
    4. بدء لوحة التأقلم لالتعرض 0 مم والتأقلم لوحة لتعرض 400 ملي حوالي 2 دقيقة و 30 ثانية بعيدا للسماح لانقاذ من ملف الفيلم الأول قبل يجب أن يبدأ الفيلم الثاني.
    5. بعد فترة التأقلم 30 دقيقة، ونقل الديدان من لوحات التأقلم لوحات الفحص. نقل الديدان لوحات الفحص (0 ملم أو 400 ملم الإيثانول) في نفس الترتيب الذي تمت إضافتها إلى لوحة التأقلم، تتبع توقيت بين الاكمال من كل لوحة. ختم لوحة مع فيلم مختبر لتقليل الخسائر في الإيثانول لتبخير.
    6. Uحد ذاتها حركة شفط مع اختيار دودة بالارض فوز رقيقة لجمع الديدان على رأس المعول بالارض. أداء نقل الديدان من لوحة التأقلم غير المصنف على لوحة الفحص دون استخدام البكتيريا، والذي يستخدم عادة في نقل الديدان لأنها تساعد على الغراء الدودة لبيك.
      ملاحظة: السرعة التي يتم نقل الحيوانات في هذه الخطوة مهمة جدا لأنه سيتم يتعرض الأولى الديدان على لوحة لالإيثانول أطول من الديدان مشاركة تضاف الى لوحة، ويمكن أن تظهر نقطة زمنية سابقة بعض الآثار التي تعتمد على الوقت. هذا هو السبب الرئيسي لالدورية التي توضع سلالات على طبق من ذهب لأول مرة عبر مكررات التجريبية.
  3. أداء تنقل الفحص: التصوير
    1. استخدام مزيج المجهر / الكاميرا التي تسمح للتصوير المتزامن لجميع الحلقات الأربع في مجال الرؤية (حوالي 42x42 مم 2 مربع)، مثل الهدف المجهر 0.5X، 0.8x التكبير وكاميرا مع 2048x2048 7.481؛ م بكسل CCD.
    2. استخدام الإضاءة حتى عبر مجال الرؤية، والذي يساعد في التعرف على الكائن في الخطوة عتبة شدة (انظر أدناه). A 3 "X3" الخلفية يعمل بشكل جيد.
    3. صورة الديدان على طبق من ذهب وضعه من جانب وسائل الإعلام حتى (غطاء أسفل)، والذي يولد المقابل أن يتم فقدان عند استخدام الإضاءة الخلفية مقارنة مع المجهر التقليدية التي تنتقل عن طريق مصدر الضوء.
    4. تحضير صورة برامج التحليل لالتقاط الأفلام الوقت الفاصل بين الديدان تتحرك. تعيين البرنامج لالتقاط 12 بت الصور الرمادية النطاق كل 1 ثانية، كفيلم 2-مين (120 الإطار). للحد من حجم ملف الإخراج، في حين لا يزال الإبقاء على دقة وضوح الصورة كافيا، استخدم وضع binning 2X2 إلى التقاط الصور 1024x1024 بكسل.
    5. تسجيل الأفلام. بدء تسجيل فيلم 120 إطار لوحة الأولى (0 ملي الإيثانول) وضعت 10 دقيقة بعد الديدان الأخيرة على أن اللوحة. حفظ ملف الفيلم.
    6. تسجيل لوحة الثانية (400 ملي الإيثانول). كرر هذه العملية لوضعت كل من لوحات ابتداء 30 دقيقة بعد الديدان الأخيرة على لوحة الأولى (0 ملي الإيثانول) لالتقاط 30-32 نقطة زمنية دقيقة لكل التعرض.
      ملاحظة: السماح الوقت الكافي لحفظ ملفات الصور بعد كل دورة التقاط قبل البدء في تسجيل لوحة القادمة ليتم تحليلها.
    7. من أجل مستقبل التدقيق من الأفلام المحفوظة وللسماح لهذه الأفلام ليتم فتحه وتحليلها من قبل برامج أخرى المجال العام البرمجيات المفتوحة المصدر والتصوير، مثل يماغيج 28، وتحويل نسخة من كل فيلم إلى 256 ملفات TIFF مقياس الرمادية 8 بت.
      ملاحظة: البرنامج تحليل الصور الموصوفة هنا يستخدم تنسيق ملف الملكية.
  4. تحليل الأفلام باستخدام برنامج ImagePro.
    1. مرة واحدة القبض، وتحليل الأفلام باستخدام صورة-برو بلس البرامج أو ما يعادلها.
      ملاحظة: مجموعة متنوعة من البرامج الأخرى تتبع الكائن يتوفر التي تم استخدامها لتعقب متعددة C. بنجاح ايليجانس في وقت واحد 29 و مثلالبرنامج يمكن أن تكون بديلا معقول لذلك توصف هنا تستند الخطوات تحديد الكائن على مبادئ مماثلة. الطريقة الموصوفة يتصل-صورة برو بلس إصدارات البرامج 6،0-6،3 و 7.0 إصدارات أحدث من صورة برو بلس البرامج قد يكون الاختلافات الطفيفة.
    2. تحليل الأفلام في 2 دقيقة (120 الإطار) قطاعات. أولا، تطبيق عامل تصفية الصور لشد الخلفية وتعزيز النقيض من الكائنات دودة. حدد مرشح على النحو التالي: القائمة> عملية> مرشحات> تعزيز> تسطيح: المعلمات: الخلفية = الظلام. ميزة العرض = 20 بيكسل.
    3. إعادة حفظ الأفلام بعد خطوة الترشيح ولكن الاحتفاظ دائما الفيلم الأصلي في شكله فلتر.
      1. تحليل تنقل الحيوانات في كل حلقة على حدة مع منطقة دائرية ذات الاهتمام (ROI) التي يتم وضعها والحجم لتتداخل مع خاتم من النحاس. تحديد وتتبع الديدان مع القائمة> قياس> المسار كائنات ... القيادة؛ هذا إحضار تتبع Dآتا نافذة الجدول. الزر خيارات تتبع يسمح مسارات محددة لاستبعاد وتحد من أي التحف التجريبية.
    4. ضمن علامة التبويب تتبع السيارات، استخدم المعلمات التالية: المسار المعلمات: الحد السرعة (دائرة نصف قطرها البحث) = 400 ميكرون / الإطار، الحد تسريع = السيارات، الحد الأدنى للمجموع طول المسار = 400 ميكرون، سائدة نوع الحركة = الفوضى. الكائنات في المسارات المعلمات: السماح مسارات جزئية = نعم، مين طول = 21 الإطارات، وتتبع عمق التنبؤ = 1 الإطار.
    5. لبدء عملية تتبع، انقر فوق البحث عن جميع المسارات تلقائيا زر وظيفة لإظهار مربع الحوار عدد / خيارات الحجم ومربع الحوار تتبع. حدد الخيار يدوي لاختيار المدى كثافة في مربع الحوار عدد / الحجم، والذي يوفر خطوة عتبة مهمة يستخدم كثافة مقياس الرمادية للبكسل دودة لتسليط الضوء على وجوه دودة للتحليل وتجاهل أخف بكسل الخلفية.
      1. ضبط سلي عتبة كثافةDERS (واحد لضبط الحد الأعلى، واحدة لتعيين الحد الأدنى) لإنشاء مجموعة شاملة تسلط الضوء على كافة الكائنات المظلمة. وهناك مجموعة من 0-1،500 على مقياس من 0-4،095 هو نقطة انطلاق جيدة لضبط الدقيقة.
      2. تطبيق عامل تصفية حجم استبعاد الأشياء التي هي أكبر وأصغر من كائن دودة واحد، مثل خاتم من النحاس وأي حطام على لوحات. تعيين معلمتين حجم للقيام بذلك التي تغطي الأحجام للديدان الفردية في مجموعة متنوعة من المواقف مع قياس> تحديد قياسات عنصر القائمة في مربع الحوار خيارات الكونت / الحجم. (المدى المساحة: 28،000-120،000 ميكرون 2 ومجموعة محيط: 600-2،500 ميكرون).
      3. إذا سلالة متحولة هو أصغر بكثير أو أكبر من غيرها من الحيوانات على لوحة ليتم تحليلها، وتوسيع نطاق إعدادات التصفية للاعتراف الكائن لاستيعاب أحجام مختلفة من سلالات أولا قبل تتبع الحيوانات بحيث الإعدادات لا تحتاج إلى تغيير منتصف التحليل.
    6. إتمام عملية تتبع عن طريق النقر متابعة في مربع الحوار تتبع. مقارنة بصريا المسارات الإخراج مع التقدم المحرز في كل دودة في الفيلم لضمان أن كل دودة ويمثل ما لم يكن هناك سبب وجيه لاستبعاده بناء على إعدادات التصفية التلقائية. حذف المسارات التي تم إنتاجها من خلال وجود أكدت الأجسام غير الدودة التي التقى معايير التصفية حجم يدويا.
    7. استخدام البرنامج لحساب سرعة كل دودة بين كل إطار (المسافة المقطوعة للالنقطه الوسطى من كائن في 1 ثانية بين الإطارات) وعرض متوسط ​​السرعة لكل مسار ومتوسط ​​السرعة في جميع المسارات للسكان من الديدان في خاتم من النحاس. النظر في هذا المعدل النهائي ليكون ن = 1 من حيث التجارب التجريبية. تصدير البيانات إلى برنامج جدول بيانات للالتحليلات الإحصائية وحفظ البيانات.
    8. مرة واحدة وقد تم تسجيل البيانات للحلقة الأولى على لوحة، ونقل ROI إلى الحلبة القادمة وتكرار عملية تتبع، من دون تغيير أي من المعلمات.
    9. حساب السرعة النسبية للتنقل من خلال:
    10. السرعة النسبية (٪) = المعالجة (400 ملم) سرعة / غير المعالجة (0 مم) سرعة × 100.
      ملاحظة: التلاعب الجيني مختلفة غالبا ما يغير معدل تنقل القاعدية من الحيوانات. من أجل تحديد تأثير الايثانول على سرعة تنقل الحيوانات وأن تكون قادرة على مقارنة هذه الآثار عبر المورثات أو ظروف مختلفة، وحساب السرعة النسبية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وتعرض بيانات تمثيلية (الشكل 1) من عدة تراكيب وراثية مختلفة، وضوابطها يقترن 8،24. تم اختيار البيانات على وجه التحديد أن الاختلافات تسليط الضوء في الحيوانات يعاير. وتعتبر درجة من التأثير في 10 دقيقة من التعرض لحساسية الأولية للسلالة، والذي يظهر على المحاور اليسار في الشكل 1B-G. تعتبر سلالات متحولة مع السرعة النسبية أكبر من السيطرة على 10 دقيقة لتكون مقاومة لل(الشكل 1F، G) الإيثانول، في حين سلالات متحولة مع السرعة النسبية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في بيولوجيا الأعصاب بسيطة والأدوات الوراثية متاحة في C. ايليجانس جعل دودة نموذجا ممتازا للدراسة الأسس الجزيئية لتأثير الايثانول على السلوك. هنا، نحن تصف مقايسة التي استخدمت لتحديد عدة وسطاء الجزيئية والبيئية للاستجابة سلوكية حادة لالإيثانول 8،10،20،24،25. هذا الأسلوب يسمح للتمايز والفحص في وقت واحد من اثنين من مختلف الظواهر السلوك استجابة الإيثانول، والحساسية الأولية وتطوير التسامح وظيفي حاد، وهذا نموذج معا النمط الظاهري مركب من مستوى الاستجابة في الثدييات. نفس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي شيء للإفصاح عنه.

شكر وتقدير

وتم دعم هذه الدراسات من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للإدمان الكحول وتعاطي الكحول: R01AA016837 (JCB) وP20AA017828 (AGD وJCB).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
سلالات C. elegansCaenorhabditis Genetics Center
ألواح بيتري مقاس 60 × 15 ملم، بثلاث فتحات تهويةGreiner Bio-One628161ستكون ماركات الألواح الأخرى كافية.
أجار NGMمختلفNaCl (3 غ/لتر)، أجار (17 غ/لتر)، بيبتون (2.5 غ/لتر)، 1 مل كولسترول (5 مغ/مل في الإيثانول)، 1 مل (1 م) MgSO4، 1 مل (1 م) CaCl2، 25 مل (1 م) KPO4، pH=6، 975 مل H2O
ملقطمختلفعلى سبيل المثال، Fisher Scientific #10300
حاضنة 37 درجة مئويةمختلفلتجفيف الأجار
ميزان رقميمختلفلتحديد أوزان الألواح وحجم الأجار
حلقات نحاسيةPlumbmasterSTK#35583 (48 غطاء خيط حشي)قطرها الداخلي 1.6 سم، قطرها الخارجي 1.8 سم حلقات نحاسية
إيثانول 100٪مختلف
Parafilm MBemisPM996
كاميرا CCDQImagingRET-4000R-F-M-12تتمتع هذه الكاميرا بمجال رؤية واسع.
مجهر ستيريوكوبي مزود بمقبس C وهدف 0.5XLeicaMZ6تم إيقاف هذا الموديل، M60 هو المكافئ الحالي.
مصدر ضوءSchottA08923إضاءة خلفية 3 بوصة × 3 بوصة لتوزيع الإضاءة بالتساوي عبر مجال الرؤية
برنامج التصوير والتتبعMedia CyberneticsImagePro-Plus v6.0-6.3تحتوي الإصدارات الأحدث من البرنامج على وظائف التتبع.

المراجع

  1. Prescott, C. A., Kendler, K. S. Genetic and environmental contributions to alcohol abuse and dependence in a population-based sample of male twins. Am. J. Psychiatry. 156, 34-40 (1999).
  2. Schuckit, M. A. Genetics of the risk for alcoholism. Am. J. Addict. Article Review. 9, 103-112 (2000).
  3. Heath, A. C., et al. Genetic differences in alcohol sensitivity and the inheritance of alcoholism risk. Psychol. Med. 29, 1069-1081 (1999).
  4. Rodriguez, L. A., Wilson, J. R., Nagoshi, C. T. Does psychomotor sensitivity to alcohol predict subsequent alcohol use. Alcohol. Clin. Exp. Res. 17, 155-161 (1993).
  5. Schuckit, M. A., Smith, T. L. An 8-year follow-up of 450 sons of alcoholic and control subjects. Arch. Gen. Psychiatry. 53, 202-210 (1996).
  6. Kalu, N., et al. Heritability of level of response and association with recent drinking history in nonalcohol-dependent drinkers. Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 522-529 (2012).
  7. Davis, S. J., Scott, L. L., Hu, K., Pierce-Shimomura, J. T. Conserved single residue in the BK potassium channel required for activation by alcohol and intoxication in. C. elegans. J. Neurosci. 34, 9562-9573 (2014).
  8. Raabe, R. C., Mathies, L. D., Davies, A. G., Bettinger, J. C. The Omega-3 Fatty Acid Eicosapentaenoic Acid Is Required for Normal Alcohol Response Behaviors in C. elegans. PLoS ONE. 9, e105999(2014).
  9. Topper, S. M., Aguilar, S. C., Topper, V. Y., Elbel, E., Pierce-Shimomura, J. T. Alcohol disinhibition of behaviors in C. elegans. PLoS ONE. 9, e92965(2014).
  10. Bhandari, P., et al. Chloride intracellular channels modulate acute ethanol behaviors Drosophila,Caenorhabditis elegans and mice. Genes Brain Behav. 11, 387-397 (2012).
  11. Davies, A. G., et al. A central role of the BK potassium channel in behavioral responses to ethanol in C. elegans. Cell. 115, 655-666 (2003).
  12. Davies, A. G., Bettinger, J. C., Thiele, T. R., Judy, M. E., McIntire, S. L. Natural variation in the npr-1 gene modifies ethanol responses of wild strains of C. elegans. Neuron. 42, 731-743 (2004).
  13. Kapfhamer, D., et al. Loss of RAB-3/A in Caenorhabditis elegans and the mouse affects behavioral response to ethanol. Genes Brain Behav. 7, 669-676 (2008).
  14. Speca, D. J., et al. Conserved role of unc-79 in ethanol responses in lightweight mutant mice. PLoS Genet. 6, e1001057(2010).
  15. Thiele, T. E., Badia-Elder, N. E. A role for neuropeptide Y in alcohol intake control: evidence from human and animal research. Physiol. Behav. 79, 95-101 (2003).
  16. Treistman, S. N., Martin, G. E. BK Channels: mediators and models for alcohol tolerance. Trends Neurosci. 32, 629-637 (2009).
  17. Han, S., et al. Integrating GWASs and human protein interaction networks identifies a gene subnetwork underlying alcohol dependence. Am. J. Hum. Genet. 93, 1027-1034 (2013).
  18. Kendler, K. S., et al. Genomewide association analysis of symptoms of alcohol dependence in the molecular genetics of schizophrenia (MGS2) control sample. Alcohol. Clin. Exp. Res. 35, 963-975 (2011).
  19. Schuckit, M. A., et al. Autosomal linkage analysis for the level of response to alcohol. Alcohol. Clin. Exp. Res. 29, 1976-1982 (2005).
  20. Alaimo, J. T., et al. Ethanol metabolism and osmolarity modify behavioral responses to ethanol in C. elegans. Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 1840-1850 (2012).
  21. Morgan, P. G., Sedensky, M. M. Mutations affecting sensitivity to ethanol in the nematode, Caenorhabditis elegans. Alcohol. Clin. Exp. Res. 19, 1423-1429 (1995).
  22. Mitchell, P. H., et al. The concentration-dependent effects of ethanol on Caenorhabditis elegans behaviour. Pharmacogenomics J. 7, 411-417 (2007).
  23. Vidal-Gadea, A., et al. Caenorhabditis elegans selects distinct crawling and swimming gaits via dopamine and serotonin. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108, 17504-17509 (2011).
  24. Bettinger, J. C., Leung, K., Bolling, M. H., Goldsmith, A. D., Davies, A. G. Lipid environment modulates the development of acute tolerance to ethanol in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7, e35129(2012).
  25. Davies, A. G., et al. Different genes influence toluene- and ethanol-induced locomotor impairment in C. elegans. Drug Alcohol Depend. 122, 47-54 (2012).
  26. Newlin, D., Thomson, J. Alcohol challenge with sons of alcoholics: a critical review and analysis. Psychol. Bull. 108, 383-402 (1990).
  27. Ponomarev, I., Crabbe, J. C. A novel method to assess initial sensitivity and acute functional tolerance to hypnotic effects of ethanol. J. Pharmacol. Exp. Ther. 302, 257-263 (2002).
  28. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9, 671-675 (2012).
  29. Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. Keeping track of worm trackers. WormBook. , The C. elegans Research Community. (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

C elegans NGM
على الفحص لقياس آثار الإيثانول على سرعة تحرك من
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.