مقالة منهجية

جل الآلي الحجم التحديد لتحسين نوعية المكتبات تسلسل الجيل المقبل من إعداد من عينات المياه البيئة

10K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52685

⸱

أبريل 17, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Faculty of Medicine, The University of British Columbia, 2Coastal Genomics, 3British Columbia Public Health Microbiology and Reference Laboratory

في هذه المقالة

ملخص

تصف هذه المخطوطة نهجا آليا لاختيار حجم الهلام لتنقية شظايا الحمض النووي لتسلسل الجيل التالي. توفر تقنية رينجر أتمتة كاملة للعملية الكاملة لتحميل هلام الاغاروز ، والتحليل الكهربائي ، واستعادة شظايا الحمض النووي المستهدفة مما يسمح بمكتبات تسلسل عالية الإنتاجية وعالية الجودة من الجيل التالي.

الملخص

يمكن أن يكون تسلسل الجيل التالي للعينات البيئية أمرا صعبا بسبب كمية وجودة الحمض النووي المتغيرة في هذه العينات. هناك حاجة إلى مكتبات الحمض النووي عالية الجودة للحصول على أفضل النتائج من تسلسل الجيل التالي. قد تحتوي العينات البيئية مثل الماء على جودة وكميات منخفضة من الحمض النووي بالإضافة إلى الملوثات التي تترسب مع الحمض النووي. قد تؤدي العمليات الميكانيكية والأنزيمية التي ينطوي عليها الاستخراج وإعداد المكتبة إلى مزيد من الضرر للحمض النووي. يتيح اختيار حجم الجل تنقية واستعادة شظايا الحمض النووي ذات الحجم المحدد لتطبيقات التسلسل. ومع ذلك ، تعد هذه المهمة واحدة من أكثر الخطوات استهلاكا للوقت في سير عمل إعداد مكتبة الحمض النووي. يتيح البروتوكول الموصوف هنا الأتمتة الكاملة لتحميل هلام الاغاروز ، والتحليل الكهربائي ، واستعادة شظايا الحمض النووي المستهدفة.

في هذه الدراسة ، نصف نهجا عالي الإنتاجية لإعداد مكتبات الحمض النووي عالية الجودة من عينات المياه العذبة التي يمكن تطبيقها أيضا على عينات بيئية أخرى. استخدمنا نهجا غير مباشر لتركيز الخلايا البكتيرية من عينات المياه العذبة البيئية. تم استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعة أدوات استخراج الحمض النووي المتاحة تجاريا ، وتم إعداد مكتبات الحمض النووي باستخدام بروتوكول تجاري قائم على الينقولات. تم اختيار شظايا الحمض النووي من 500 إلى 800 نقطة أساس بحجم الهلام باستخدام تقنية Ranger ، وهي محطة عمل آلية للرحلان الكهربائي. أظهر تسلسل مكتبات الحمض النووي المختارة حسب الحجم تحسينات كبيرة في طول وجودة قراءات التسلسل.

المقدمة

يتضمن علم الميتاجينوم

تسلسل جميع المواد الوراثية في عينة لتوصيف المجتمعات الميكروبية الموجودة. إنها عملية معقدة ومكلفة تتضمن تحويل الأحماض النووية المستخرجة إلى مكتبات الحمض النووي متبوعة بتسلسل الجيل التالي. تعد المكتبات عالية الجودة ضرورية لتحقيق أقصى قدر من إخراج البيانات وتحليل الميتاجينوميات الدقيق. غالبا ما تشكل العينات البيئية ، مثل عينات المياه ، تحديات كبيرة لإنشاء مكتبات عالية الجودة ، بسبب انخفاض كميات الحمض النووي التي قد تتحللأيضا 1-3 ووجود مثبطات PCR4-6.

تتكون المكتبات عالية الجودة بشكل مثالي من أجزاء أطول من الحمض النووي ضمن نطاق ضيق من الأطوال. من أجل تعظيم كمية البيانات المفيدة التي تم إنشاؤها لكل تشغيل تسلسل ، يجب أن يكون طول الحمض النووي في المكتبة على الأقل بطول الحد الأقصى لطول القراءة لطريقة التسلسل المستخدمة. عند استخدام تقنية التسلسل عن طريق التوليف مثل Illumina MiSeq ، يؤثر حجم شظايا الحمض النووي على الكفاءة التي يتم بها إنشاء المجموعات على خلية التدفق. على سبيل المثال ، عندما تحتوي المكتبة على أجزاء من الحمض النووي الأقصر والأطول ، سيتم تمثيل الأقصر بشكل مفرط في بيانات التسلسل7،8. في المقابل ، سيتم تمثيل مكتبة بها أجزاء DNA متشابهة الحجم بشكل متناسب في بيانات التسلسل. تستخدم العديد من مجموعات إعداد المكتبة طرقا قائمة على الربط لإضافة محولات إلى شظايا الحمض النووي وتحديد الحجم ضروري لإزالة ثنائيات المحول التي لا تحتوي على إدراج9,10. هناك العديد من الطرق11،12 لتحقيق ذلك ، ولكن التقنية الوحيدة التي تعطي النتائج الأكثر اتساقا هي الفصل الكهربائي للحمض النووي متبوعا باستعادة الأطوال المطلوبة من الحمض النووي13،14. يمكن إجراء هذه العملية يدويا لعدد صغير من العينات ، ولكن عند مواجهة معالجة مئات العينات ، تكون الحلول الآلية مطلوبة. المنصات المتاحة حاليا للاختيار الآلي لحجم الهلام منخفضة الإنتاجية وهناك حاجة إلى منصات جديدة لمعالجة أعداد كبيرة من العينات للتسلسل. يمكن دمج تقنية Ranger مع محطات عمل معالجة السوائل الحالية لتمكين استخدام الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز لاختيار الحجم ولأغراض التحليل على مقياس يرضي بيئة الإنتاجية العالية اليوم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. جمع المياه والترشيح

  1. جمع عينات من المياه العذبة من مواقع مختلفة (الشكل 1). تمرير عينات من خلال سلسلة من الفلاتر: 1 ميكرون فلتر، 0.2 ميكرون التصفية، و 30 كيلو دالتون قطع مرشح تدفق عرضية إلى منهجية حقيقية النواة منفصلة، ​​والجسيمات البكتيرية والفيروسية الحجم، على التوالي.
    يوصف فقط تنقية وتحليل المواد المستردة على 0.2 ميكرومتر مرشحات (البكتيريا التي تعيش بحرية) في هذا التقرير، ولكن نهج مماثلة يمكن استخدامها للجسيمات أخرى تعافى من المرشحات: مذكرة.

2. تركيز الجرثومي، استخراج الحمض النووي وتنقية

  1. إزالة عامل التصفية غشاء 0.2 ميكرون (ق) من نظام تنقية المياه (الرسم التخطيطي، الشكل 2). أضعاف مرشح 0.2 ميكرون القرص في نصف ووضعه في أنبوب 50 مل مع الجانب تصل مفتوحة. إضافة 5 مل من محلول الفوسفات مخزنة 1X (PBS) و 0.01٪ توين، ودرجة الحموضة 7.4 إلىانبوب. إذا تم استخدام أكثر من مرشح واحد أثناء عملية توظيف أنبوب مختلفة لكل مرشح. متجر أنبوب (s) مع مرشح في 4 درجات مئوية حتى معالجتها. خلاف ذلك، انتقل إلى الخطوة 2.2.
  2. إزالة عامل التصفية 0.2 ميكرومتر غشاء من أنبوب 50 مل مع ملقط معقم. فلتر مكان (ق) على طبق بتري (ترك المخزن المؤقت PBS في أنبوب).
    1. مع ملقط معقم ومقص العقيمة، وقطع مرشح إلى شرائح صغيرة (1 سم × 1 سم). تطهير ملقط ومقص عن طريق نقع في 70٪ الأيزوبروبانول، ومحو مع المطهر سطح DNA والشطف بالماء عالى النقاء من نوع 1 بين عينات مختلفة.
  3. وضع مرشح مقطعة إلى شرائح مرة أخرى في نفس أنبوب 50 مل. إضافة 10 مل من برنامج تلفزيوني 1X و 0.01٪ توين، ودرجة الحموضة 7.4 إلى تصفية حتى لا يكون هناك ما مجموعه 15 مل من العازلة في أنبوب 50 مل.
  4. إضافة 6 حبات التنغستن نظيفة (3 مم) إلى كل أنبوب 50 مل، تغطية أنبوب مع بارافيلم، ودوامة بقوة لمدة 20 دقيقة (استخدام 50 مل أنابيب محول دوامة). إذا ... المزيد الصورةiple تتم معالجة مرشحات من عينة واحدة، ونقل وتجمع كل جناسة في نظيفة أنبوب 50 مل. أنابيب الطرد المركزي في 3،300 x ج لمدة 15 دقيقة على 4 درجات مئوية.
  5. Resuspend وبيليه وقسامة الخلايا البكتيرية (~ 1 مل مأخوذة) إلى 1.7 مل أنابيب microcentrifuge. لاحظ أنه سيكون هناك 5 أنابيب microcentrifuge لكل عينة.
  6. تدور باستمرار الأنابيب microcentrifuge في 10،000 x ج لمدة 10 دقيقة، وإزالة معظم طاف وصولا إلى ~ 200 علامة ميكرولتر.
  7. تخزين العينات في -80 ° C، أو الشروع في استخراج الحمض النووي البكتيري باستخدام المتاحة تجاريا عدة عزل الحمض النووي وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. خلال البكتيرية استخدام استخراج الحمض النووي إما PBS أو الماء كعنصر تحكم استخراج السلبية، وE. القولونية كعنصر تحكم استخراج إيجابية.
  8. لأن الحمض النووي من أنابيب متعددة استخراج، بركة موازية مأخوذة فرعية من نفس العينة إلى أنبوب واحد 2 مل. ثم إجراء O / N هطول الأمطار باستخدام حل تتألف من 0.1حجم 3 خلات الصوديوم M، 2 مجلدات من الإيثانول بنسبة 100٪، و 5 ميكرولتر من 5 ميكروغرام / ميكرولتر الأكريلاميد خطي. تخلط جيدا وتخزينها العينات في -80 ° C.
  9. الطرد المركزي في السرعة القصوى (17،000 x ج) لمدة 30 دقيقة على 4 درجات مئوية. غسل بيليه مع 1 مل من الايثانول 70٪ من الجليد البارد، والهواء الجاف في خزانة السلامة البيولوجية لمدة لا تتجاوز 5 دقائق و resuspend DNA بيليه في 34 ميكرولتر من 10 ملي تريس، الكلور، ودرجة الحموضة 8.5.
    ملاحظة: سوف الخطي الأكريلاميد تساعد على تصور بيليه DNA بعد O / N هطول الأمطار.
  10. تحديد كمية الحمض النووي والجودة باستخدام حساسية عالية الفلورسنت النووي الكميات حمض فحص ومعمل microvolume، على التوالي، في أعقاب تعليمات الصانعين (انظر الجدول من المواد).
    ملاحظة: إذا تم إعداد عينات متعددة في وقت و، وهو الفلورسنت فحص الحمض النووي الفائق لقياس dsDNA ومقرها لوحة-التألق / طيفي يمكن استخدامها بدلا من ذلك.

3. DNA إعداد المكتبة

  1. تطبيع الحمض النووي البكتيري الجيني المستخرج من عينات المياه لتركيز ~ 0.2 نانوغرام / ميكرولتر.
  2. جزء إنزيمي نانوغرام واحد من الحمض النووي البكتيري باستخدام طريقة القائم على ينقول (tagmentation). إضافة محول ومؤشر على تسلسل الحمض النووي مجزأة باتباع إرشادات الشركة المصنعة. موضوع tagmented عينات إلى 12 دورات PCR كما هو مبين في تعليمات الشركة الصانعة، وعند هذه النقطة يتم دمج المؤشرات التسلسل.

4. جل الآلي الحجم اختيار

  1. تخطي القياسية بعد PCR خطوة تنظيف وصفها في تعليمات الشركة الصانعة (انظر الجدول من المواد). حجم اختيار عينات بعد PCR مباشرة باستخدام منصة اختيار الحجم الآلي القائم على هلام.
    1. إضافة 3.5 ميكرولتر من العازلة تحميل لكل عينة.
    2. وبعد بروتوكول الشركة المصنعة، تحميل العينات على محطة العمل الكهربائي، وتحديد الهدف الحجم مختارة من 500-800 نقطة أساس، في استخراج 300 ميكرولترحجم أيون، وذلك باستخدام 1.5٪ كاسيت الاغاروز الجاهزة.
    3. تركيز المواد الناتج الخام (300 ميكرولتر) وصولا إلى 25 ميكرولتر من خلال الايثانول هطول الأمطار.
      ملاحظة: بدلا من ذلك، استخدم محطة الكهربائي لأتمتة تركيز لأعداد أكبر من العينات عن طريق لوحة تصفية وفراغ متعددة.
      1. ترسيب حجم شطف الخام باستخدام 0.1 كميات من 3 خلات الصوديوم M، 2 مجلدات من الإيثانول بنسبة 100٪ و 5 ميكرولتر من 5 ميكروغرام / ميكرولتر الأكريلاميد خطي. تخلط جيدا، وعينات مكان في -80 درجة CO / N. عينات الطرد المركزي في 17،000 x ج لمدة 30 دقيقة.
      2. تجاهل supernatants، والشروع في غسل بيليه الحمض النووي مع 1 مل من الجليد الباردة الايثانول 70٪.
      3. عينات الطرد المركزي مرة أخرى في 17،000 x ج لمدة 30 دقيقة، وتجاهل supernatants، والهواء الجاف، وأخيرا بيليه resuspend الحمض النووي في 25 ميكرولتر من 10 ملي تريس، الكلور، ودرجة الحموضة 8.5.
  2. (اختياري) استخدم 1 ميكرولتر من حجم المكتبات DNA المختارة مع منصة الآلي اختيار حجم هلام لتقديم خمسةتخفيف أضعاف باستخدام تريس، EDTA حل العازلة، ودرجة الحموضة 8.0. تحليل المكتبات باستخدام أداة الكهربائي الشعري يعتمد على الشرائح الالكترونية لتحليل dsDNA الجودة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.

5. مكتبة التطبيع وتسلسلها

  1. انتقل إلى تطبيع العينات باستخدام الخرز تطبيع مكتبة (المدرجة في إعداد مكتبة والقائم على ينقول) كما هو موضح في دليل إعداد الشركة المصنعة.
    1. بدلا من ذلك، وقياس مكتبات dsDNA باستخدام حساسية عالية الفلورسنت النووي فحص الكميات الحامض، تليها تجميع في نسب متساوي المولية للوصول إلى تركيز dsDNA النهائي من 2 نانومتر. انتقل إلى تفسد المكتبات باستخدام 10 ميكرولتر من المكتبات المجمعة و 10 ميكرولتر من 0.2 N هيدروكسيد الصوديوم، واحتضان لمدة 5 دقائق على RT. تمييع المكتبات التشويه والتحريف باستخدام العازلة التهجين (المدرجة في إعداد عدة القائم على ينقول) إلى الحجم النهائي من 1 مل وتركيز 11:05.
  2. عينة الحملالصورة في منصة تسلسل الجيل المقبل من خلال اتباع البروتوكولات القياسية التسلسل الشركة المصنعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تركيز الحمض النووي، وتقييم جودة

وتراوحت تركيزات DNA البكتيرية 0،01-0،11 نانوغرام / مل لكل عينة مياه من مواقع مختلفة مستجمعات المياه (الجدول 1). DNA معزولة عن جزء البكتيرية زيارتها A 260/280 و A 260/230 نسب 1،4-1،8 و0،3-1،6، على التوالي. في حين أن بعض من نسب A 260/230 كانت منخفضة نسبيا، لم يلاحظ أي تثبيط واضح في استعداد مكتبة والتطبيقات المصب الأخر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وجود dimers محول وتجميع أحجام صغيرة إدراج تفضيلي يجري التسلسل في المنصات الحالية تمثل انخفاضا في عائدات صالحة للاستخدام وعدم الاستفادة من قدرات المعدات و15. استخدام أساليب الضرب حبة جنبا إلى جنب مع النهج القائم على ينقول لإعداد المكتبات قد يؤدي إلى مزيد من القص DNA بالمقارنة مع غيرها من أساليب استخراج 4،5. ومع ذلك، فإن جميع طرق استخراج ومكتبة إعداد يحتمل أن أعرض التحيز لتوزيع تسلسل يقرأ 8،16. ، لا يبدو الملاحظات التجريبية باستخدام منصة استخلاص الحم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

جاريد R. سلوبودان وماثيو J. نسبيت كلا عقد أسهم الساحلية الجينوم، وهي شركة كولومبيا البريطانية المملوكة للقطاع الخاص التي تقدم التكنولوجيا الحارس.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا العمل من قبل Genome BC و Genome Canada و Coastal Genomics. يشكر المؤلفون كيربي كرونين ومايكل تشان على مساعدتهم في جمع العينات ومعالجتها. كما نود أن نتوجه بخالص الشكر إلى ثيا فان روسوم والدكتورة فيونا برينكمان للمساعدة في المعلوماتية الحيوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مضخة تمعجية Masterflex P / S 1400 SeriesThermo Scientific   ؛1400-1620
0.2 & م غشاء سوبورVWRCA28143-969شركة بال ، آن هاربور ، ميشيغان
حبات كربيد التنجستن 3 مم (200)Qiagen69997
كحول الأيزوبروبيل 70٪منتجات Jedmon825751Healthcare Plus
DNA بعيداVWR7010Molecular BioProducts، Inc. سان دييغو ، كاليفورنيا
نظام تنقية المياه Milli-Qفيشر ScientificZMQS6VF0Yميرك ميليبور. وقد توقف هذا النظام.
20x PBS درجة الحموضة 7.5VWRE703-1LAmresco، Inc.، Solon، OH
Tween 20Fisher ScientificBP337-100فيشر كيماويات
محول دوامة ل 2 (50   مل) أنابيبVWR13000-V1-50MoBio ، Carlsbad ، CA
Vortex-Genie 2 ، 120 & nbsp ؛ V (موديل G560)VWRSI-0236Scientific Industries، Inc.
بيكمان الطرد المركزيRaeyco مختبر إدارة أنظمة المحدودةنموذج J-6B
PowerLyzer Powersoil طقم عزل الحمض النوويVWR12855-100MoBio ، Carlsbad ، CA
محول Vortex ل 24 (1.5-2 مل) أنبوبVWR13000-V1-24MoBio ، Carlsbad ، CA
Microfuge 18 جهاز طرد مركزيBeckman Coulter367160
Nimbus حدد محطة العمل مع تقنية رينجرهاميلتون روبوتيكس92720-01تتضمن محطة عمل مناولة السوائل وتقنية رينجر المدمجة (أجهزة الرحلان الكهربائي)
مجموعة كاشف رينجرCoastal GenomicsCG-10600-150-12-21يتضمن عازلة التحميل والأشرطة
الكحول الإيثيلي (اللامائي )الكحوليات التجاريةP016EAANجرينفيلد إيثانول
أسيتات الصوديومسيجما ألدريتشS2889-250G
أكريلاميد خطي (5   ملغ / مل)لايف تكنولوجيزAM9520أمبيون
إيبندورف أجهزة الطرد المركزي المبردةRaeyco مختبر إدارة أنظمة المحدودة.5417R
Buffer EB (250 مل)Qiagen19086
NanoDrop 1000 مقياس الطيفالضوئي الحراري العلميND-1000
كيوبتالفلور LifeTechnologies Q32857Invitrogen. تم إيقاف هذا المنتج.
كيوبيت dsDNA HS مجموعة الفحصLife TechnologiesQ32854Invitrogen
كاشف الحمض النووي عالي الحساسيةAgilent Technologies5067-4626
رقائق الحمض النووي عالية الحساسيةAgilent Technologies5067-4626
Agilent 2011 BioanalyzerAgilent TechnologiesG2938B
Nextera XT DNA sample samplekit IlluminaFC-131-1024
مجموعة مؤشر Nextera XTمجموعة كاشف IlluminaFC-131-1001
MiSeq v2 (500 دورة)IlluminaMS-102-2003
MiseqIlluminaSY-410-1003
مقياس نظام

المراجع

  1. Siuda, W., Chrost, R. J. Concentration and susceptibility of dissolved DNA for enzyme degradation in lake water - some methodological remarks. Aquatic Microbial Ecology. 21, 195-201 (2000).
  2. Butler, J. M., Hill, C. R. Scientific Issues with Analysis of Low Amounts of DNA. , Available from: http://www.promega.ca/resources/profiles-in-dna/2010/scientific-issues-with-analysis-of-low-amounts-of-dna (2010).
  3. Ficetola, G. F., Miaud, C., Pompanon, F., Taberlet, P. Species detection using environmental DNA from water samples. Biology letters. 4, 423-425 (2008).
  4. Liles, M. R., et al. Recovery, purification, and cloning of high-molecular-weight DNA from soil microorganisms. Applied and environmental microbiology. 74, 3302-3305 (2008).
  5. Bey, B. S., Fichot, E. B., Dayama, G., Decho, A. W., Norman, R. S. Extraction of high molecular weight DNA from microbial mats. BioTechniques. 49, 631-640 (2010).
  6. Tebbe, C. C., Vahjen, W. Interference of humic acids and DNA extracted directly from soil in detection and transformation of recombinant DNA from bacteria and a yeast. Applied and environmental microbiology. 59, 2657-2665 (1993).
  7. Solonenko, S. A., et al. Sequencing platform and library preparation choices impact viral metagenomes. BMC genomics. 14, 320(2013).
  8. Aird, D., et al. Analyzing and minimizing PCR amplification bias in Illumina sequencing libraries. Genome biology. 12, R18(2011).
  9. Quail, M. A., Swerdlow, H., Turner, D. J., et al. Improved protocols for the illumina genome analyzer sequencing system. Current protocols in human genetics / editorial board, Jonathan L. Haines .. [et al.]. 18, 18(2009).
  10. Head, S. R., et al. Library construction for next-generation sequencing: overviews and challenges. BioTechniques. 56, 61-64, 66, 68 (2014).
  11. Dijk, E. L., Jaszczyszyn, Y., Thermes, C. Library preparation methods for next-generation sequencing: tone down the bias. Experimental cell research. 322, 12-20 (2014).
  12. Grunenwald, H., Baas, B., Caruccio, N., Syed, F. Rapid, high-throughput library preparation for next-generation sequencing. Nature Methods. 7, (2010).
  13. Sambrook, J., Russell, D. W. Molecular cloning : a laboratory manual. , 3rd edn, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring, NY. (2001).
  14. Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. Journal of visualized experiments. , (2012).
  15. Quail, M. A., et al. A large genome center's improvements to the Illumina sequencing system. Nature methods. 5, 1005-1010 (2008).
  16. Marine, R., et al. Evaluation of a transposase protocol for rapid generation of shotgun high-throughput sequencing libraries from nanogram quantities of DNA. Applied and environmental microbiology. 77, 8071-8079 (2011).
  17. Rohland, N., Reich, D. Cost-effective high-throughput DNA sequencing libraries for multiplexed target capture. Genome research. 22, 939-946 (2012).
  18. Lamble, S., et al. Improved workflows for high throughput library preparation using the transposome-based nextera system. Bmc Biotechnology. 13, (2013).
  19. Picelli, S., et al. Tn5 transposase and tagmentation procedures for massively scaled sequencing projects. Genome research. , (2014).
  20. Rhodes, J., Beale, M. A., Fisher, M. C. Illuminating Choices for Library Prep: A Comparison of Library Preparation Methods for Whole Genome Sequencing of Cryptococcus neoformans Using Illumina HiSeq. PloS One. 9, e113501(2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DNA Ranger DNA 500 800

مقالات ذات صلة