يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

على الطريقة الأنزيمية لانقاذ الوسيطة الخلايا الجذعية من عينات متخدر نخاع العظم

9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52694

⸱

أبريل 12, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Swiss Paraplegic Research, 2Orthopaedics and Spinal Surgery, Swiss Paraplegic Centre, 3Department of Neurosurgery, Lucerne Cantonal Hospital (LUKS), 4Section of Small Animal Surgery/Neurology, Vetsuisse Faculty, University of Zurich

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

عادة ما يتم الحصول على الخلايا الجذعية الوسيطة < p class = 'jove_content '> من نخاع العظام وتتطلب ثقافة التوسع. عندما تتخثر العينات قبل المعالجة ، يمكن تطبيق بروتوكول باستخدام عقار حالل للتخثر (الأنزيمي) urokinase لتحلل الجلطة. وبالتالي ، يتم إطلاق الخلايا وإتاحتها للتوسع في الثقافة. يوفر هذا البروتوكول بديلا سريعا وغير مكلف لإعادة أخذ العينات.

الملخص

غالبا ما تتطلب الخلايا الجذعية الوسيطة < p class = 'jove_content'> - التي يتم الحصول عليها عادة من نخاع العظام - ثقافة التمدد. يستخدم بروتوكولنا اليوروكيناز السريري لتحلل الجلطات في نخاع العظام وإطلاق الخلايا الجذعية الجذعية لمزيد من الاستخدام. يوفر هذا البروتوكول بديلا سريعا وغير مكلف لإعادة أخذ عينات نخاع العظم. نخاع العظم هو مصدر رئيسي للخلايا الجذعية الجذعية ، والتي تعتبر مثيرة للاهتمام لهندسة الأنسجة وعلاجات الخلايا الجذعية الذاتية. عند الانسحاب ، قد يتجلط نخاع العظم ، لأنه يضم كل نظام المكونة للدم. تحتوي الجلطات الناتجة أيضا على الخلايا الجذعية الجذعية المفقودة لزراعة التوسع أو العلاج المباشر بالخلايا الجذعية. لقد شهدنا أن 74٪ من عينات نخاع عظم تحتوي على جلطات وأسفرت عن أقل من نصف عدد الخلايا الجذعية المتوقع من العينات غير المتخثرة. وهكذا ، قمنا بتطوير بروتوكول للهضم الأنزيمي لتلك الجلطات لتجنب إعادة أخذ عينات نخاع العظام كثيفة العمالة والمكلفة. يزيل Urokinase - وهو دواء حالل للتخثر معتمدا سريريا ومتاحا بسهولة - جلطات نخاع العظم بالكامل تقريبا. نتيجة لذلك ، ينتج عن نشفط نخاع العظم المعالج أعدادا مماثلة من الخلايا الجذعية الجذعية مثل العينات غير المتقوثرة. أيضا ، بعد علاج اليوروكيناز ، حافظت الخلايا على نشاطها الأيضي والقدرة على التمايز إلى سلالات غضروفية وعظمية وشحمية. ينقذ بروتوكولنا عينات الدم ونخاع العظام المتخثرة دون التأثير على جودة الخلايا. يؤدي هذا إلى إعادة أخذ العينات ، ويقلل بشكل كبير من تكاليف أخذ العينات ويتيح استخدام العينات المتخثرة للبحث أو العلاج.

المقدمة

الخلايا الجذعية الوسيطة (اللجان الدائمة) تلعب دورا رئيسيا في مجال الطب التجديدي وهندسة الأنسجة. يمكن أن تهاجر، تفرق في مختلف أنواع الخلايا 1 وتدبر، مما يجعلها مثالية للمرشحين لعلاجات ذاتي 2،3. في الآونة الأخيرة، والتجارب السريرية باستخدام اللجان الدائمة لإصلاح العظام والغضاريف، أطلقت الكسب غير المشروع مقابل المرض المضيف أو أمراض القلب 4. هذه اللجان الدائمة يمكن أن تحصد من أنسجة الحبل السري أو الدهنية ولكن تم الحصول على النتائج الواعدة من نخاع العظام الخلايا الجذعية المستمدة 5.

قمة الحرقفي تسمح لجمع كمية كبيرة من نخاع العظام وبالتالي بمثابة الموقع الرئيسي للطموح 6. ومع ذلك، فإن نوعية نضح تتناقص مع زيادة حجم النخاع العظمي سحبها. في حين أن 5 مل الأولى من نخاع العظام نضح تحتوي على اللجان الدائمة ذات جودة عالية، وسحب كميات أكبر يؤدي إلى التخفيف من نضح مع الطرفية و الدمROM العظام أوعية دموية غاية 7. بسبب السوية العرطلة والصفائح الدموية الحالية، شفاطات نخاع العظام عرضة للتخثر، ما لم يتم استخدام مضادات التخثر. ولكن حتى مع مضادات التخثر، قد تحدث الجلطات.

في نخاع العظام، واللجان الدائمة تمثل سوى نسبة صغيرة من تجمع الخلايا مجموع 8 ولها أن تتوسع في الثقافة بالنسبة لمعظم هندسة الأنسجة أو التطبيقات العلاجية 4. نوعية مثل هذه الثقافة يعتمد إلى حد كبير على بركة الخلية الأولي، أي.، والتنوع والانطلاق ارتفاع عدد 9. انخفاض أعداد اللجان الدائمة من السحب يمكن تفسيرها جزئيا تقلب المانحة. من ناحية أخرى، اللجان الدائمة من عينات جودة منخفضة تتطلب وقتا أطول في الثقافة والركض تمتد لتصل إلى العدد المطلوب من الخلايا. في كلتا الحالتين، الركض بمد هو مصدر الشيخوخة الخلية ويمكن أن يؤدي إلى فقدان التمايز المحتملين 10. لذلك، بروتوكولات والتى تزيد من خلية ذ الأمثلدرع ومنع من الآثار الضارة يجب أن تكون وضعت 11،12.

عندما بدأنا العمل مع اللجان الدائمة الكلاب، كنا مندهش لرؤية أن نحو ثلاثة من كل أربعة الكلاب عينات نخاع العظم الواردة الجلطات، في حين كانت العينات البشرية متخدر لحسن الحظ (واحد من كل عشرة) أقل تواترا. من ناحية أخرى كان ليس من المستغرب، أن لاحظنا انخفاض العوائد الكثير من اللجان الدائمة من عينات متخدر. لحل القضية المتكررة من عينات متخدر، قمنا بتطوير بروتوكول باستخدام يوروكيناز المخدرات التخثر بدلا من اختزال.

يمكن علاج التخثر تصدي تهدد الحياة حالات مثل انسداد الأوعية الدموية مما يسبب النوبات القلبية والسكتة الدماغية أو الانسدادات بسبب تخثر غير المرغوب فيه. وهي تعمل عن طريق تدهور الجلطات من خلال الانقسام الأنزيمية من الفيبرين من قبل بلازمين والأنزيمية منشط تفعيل. وعلى الرغم من استخدام واسع لعلاج المرضى، لا توجد إلا عدد قليل جدا من المطبوعات التي تستخدم الأنشطة التخثرلالتطبيقات المختبرية لانقاذ عينات متخدر، مع التركيز في الغالب على الخلايا الليمفاوية. في عام 1987، Niku وآخرون. وصف استخدام ستربتوكيناز لتذويب الجلطات الدموية مما أدى إلى الخلايا الليمفاوية وظيفية بعد 13 وأربع سنوات، دي فيس وآخرون. مدد استخدام ستربتوكيناز لعزل خلايا سرطان الدم من الدم ونخاع العظام لتطبيقات تدفق cytometric 14. ويشير المنشور أكثر حداثة استخدام Alteplase لتشخيص السرطان 15. أثناء استخدام نهج الأنزيمية نفسه، يركز بروتوكول لدينا في عزلة متعددة القدرات اللجان الدائمة نخاع العظم شكل توفير أداة للباحثين في مجال الخلايا الجذعية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: شفاطات نخاع العظام البشرية من العرف الحرقفي جمعت من توافق الجهات المانحة مع موافقة لجنة أخلاقيات كانتون لوسيرن. تم جمع الكلاب شفاطات نخاع العظم من العرف الحرقفي مع consent.Human مالك الكلب (حوالي 20 مل) والكلاب (حوالي 10 مل) شفاطات نخاع العظام كانت مكافحة متخثر بإضافة 15 مل من 3.8٪ سيترات الصوديوم مباشرة بعد الانسحاب في غرفة العمليات. تم نقل العينات إلى مختبر البيئة لمعالجة نفس يوم سحبها.

1. إعداد يوروكيناز (قبل 1 الحادي والاستخدام)

  1. إعادة يوروكيناز باستخدام الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (PBS) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة: إضافة 10 مل PBS إلى قارورة-الحاجز مدخل باستخدام حقنة 10 مل. حل المادة الجافة التي يحوم الحصول على 50،000 وحدة حقن (U) لكل مل.
  2. إعداد 500 مكل (25،000 U لكل منهما) في الصورةأنابيب terile. متجر مأخوذة -20 ° C واستخدامه عند الحاجة لمدة 6 أشهر على الأقل.

2. محضرة خطوات (وقبل كل علاج العظام نخاع)

  1. ذوبان الجليد قسامة واحدة من يوروكيناز (25،000 U) في متخدر نضح نخاع العظم (وحدات التخزين نضح تصل إلى 25 مل وقد تمت معالجة بنجاح باستخدام قسامة واحدة من 25،000 U).
  2. سخن حمام مائي أو تهز حاضنة إلى 37 درجة مئوية.

3. الأنزيمية دايجست من الجلطة

  1. أداء جميع الأعمال في الصفحي الوزراء للسلامة الأحيائية تدفق لتجنب التلوث الميكروبي للعينات نخاع العظم أثناء معالجة. عند العمل مع المواد البشرية التي قد تكون معدية، وينصح باستخدام القفازات الواقية وكذلك معالجة متأنية.
  2. وضع مصفاة 100 ميكرون خلية على رأس أنبوب معقم 50 مل. صب بعناية نضح نخاع العظام من خلال مصفاة الخلية، إمالة مصفاة أو تتحرك حول مادة تجلط. استخدام غيض الماصة العقيمة لتدفق أفضل من خلال شبكة التصفية.
    ملاحظة: تجنب أي تخفيف للتجلط، على سبيل المثال، عن طريق غسل الجلطة مع برنامج تلفزيوني. يوروكيناز تتصرف بشكل غير مباشر وتتطلب مكونات المصل (أي.، منشط) من خزعة لفعالية هضم. في الوقت الذي تواصل الإجراء مع المواد جلطة، يمكن أن تبقى الراشح في RT حتى استخدامها مرة أخرى في الخطوة 3.6.
  3. نقل المواد تجلط نخاع العظام إلى صحن الثقافة خلية فارغة باستخدام ملقط معقم. قطع الحطام إلى قطع صغيرة من حوالي 2 مم 3 باستخدام مشرط معقم.
  4. نقل قطع صغيرة من جلطة في أنبوب رد فعل 50 مل باستخدام ملقط معقم. تأكد من أن الجلطة مفروم لها مظهر الرطب. إذا كان يبدو إلى أن تكون جافة، واستخدام بعض من الراشح من الخطوة 3.1 لترطيب.
  5. يسحن الجلطة قبل pipetting صعودا وهبوطا لمدة 5 مرات باستخدام الماصة 5 مل عيار مكروي. إضافة 1 قسامة من يوروكيناز للعينة. احتضان لمدة 30 دقيقة عند 37 ° C إما في حمام مائي أو فيوالهز (بلطف) الحاضنة.
  6. يسحن من قبل pipetting صعودا وهبوطا لمدة 5 مرات باستخدام الماصة 5 مل. تنفيذ هذه الخطوة في خزانة السلامة البيولوجية. احتضان لمدة 30 دقيقة أخرى في 37 ° C. بعد الحضانة، ويسحن مرة أخرى 5 مرات باستخدام الماصة 5 مل. تمر في مصفاة جديدة خلية 100 ميكرون لتجميع مع الراشح من الخطوة 3.2.
  7. الطرد المركزي تعليق خلية في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة في 500 ز س. تجاهل طاف. اعادة تعليق بيليه خلية في وسائل الإعلام كما هو موضح أدناه أو وفقا لالإجراء العادي من المختبر الخاص بك للثقافة التوسع MSC.

4. البذر للثقافة التوسع خلية وCFU لوحات

  1. resuspend الخلايا (التي تتكون من كريات الدم الحمراء وخلايا وحيدات النوى) في 50 مل من المتوسط ​​القاعدية: ألفا MEM تستكمل مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، و 100 U / البنسلين مل، 100 ملغ / مل الستربتومايسين و 2.5 ملغ / مل الأمفوتريسين B . عدد الخلايا 01:10 مخففة في حل التريبان الأزرق باستخدام chambe نويباورص.
  2. لوحة الخلايا في قوارير زراعة الخلايا في كثافة 5 × 10 7 خلية / سم 2 واحتضان في حاضنة ترطيب عند 37 درجة مئوية. إذا كان متوفرا، استخدم ميتة (5٪ أكسجين) الظروف. لمراقبة فحص CFU، لوحة 10 9 خلايا في طبق ثقافة الخلية من 10 سم القطر.
  3. بعد 3 أيام من الثقافة، وترد الخلايا الجذعية الوسيطة إلى الطبق ثقافة الخلية بينما تبقى الخلايا الأخرى في تعليق. تغيير وسائل الإعلام مع المتوسطة القاعدية تستكمل مع 5 نانوغرام / مل عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (bFGF). لمراقبة فحص CFU، علاج الطبق الثقافة خلية بالمثل.
  4. مواصلة زراعة الخلايا ليصبح المجموع 2 أسابيع، وتبادل وسائل الإعلام ثلاث مرات في الأسبوع. إذا خلايا تتجاوز 80٪ confluency، وتقسيم من قبل trypsinization. لمراقبة فحص CFU، تبادل وسائل الإعلام أيضا، ولكن لا انقسام الخلايا للدورة من أسبوعين.

5. بالغيمزا صمة عار لفحص كفو

  1. إعداد 10 مل من بالغيمزا-حل لكل طبق: ديليوت الحل الأسهم (7.6 غرام / لتر بالغيمزا في الجلسرين: الميثانول) 01:10 في الماء المعقم (دائما بتحضير التخفيف عمل جديدة).
  2. إزالة وسائل الإعلام من الطبق الثقافة الخلية وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني. كن قائى جدا عند تطبيق السائل إلى طبق بتري وتجنب غسل قبالة الخلايا.
  3. إصلاح الخلايا في الميثانول النقي لمدة 5 دقائق على RT. تجاهل الميثانول. إضافة بالغيمزا-حل واحتضان لمدة 60 دقيقة في حاضنة ترطيب عند 37 درجة مئوية.
  4. يغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني. الهواء الجاف رئيس لوحة لأول مرة على منشفة ورقية. عدد المستعمرات يدويا. وأفضل طريقة لتحقيق ذلك باستخدام القلم علامة على الجزء الخلفي من لوحة.

6. MSC التمايز

  1. اللجان الدائمة الكلاب التمايز
    ملاحظة: تم التفريق بين اللجان الدائمة الكلاب إلى مكون للغضروف، المكونة للعظم والأنساب مكون الشحم من التحفيز مع وسائل الإعلام المناسبة لمدة أربعة أسابيع.
  2. إلى التمايز مكون الشحم، اللجان الدائمة الثقافة في أحادي الطبقة في 4 × 10 5 مLLS / سم 2 بالتناوب شرطين ثقافة مختلفة على النحو التالي؛
    1. الثقافة في وسائل الإعلام الصيانة تكون الشحم التي تحتوي على DMEM + GlutaMAX، 3٪ FBS، 100 وحدة / مل البنسلين، و 100 ملغ / مل الستربتومايسين، و 2.5 ميكروغرام / مل الأمفوتريسين B و 170 ملي الأنسولين.
    2. الثقافة في إحداث تكون الشحم وسائل الإعلام مع المتوسطة صيانة تستكمل مع 3٪ FBS، 5٪ مصل الأرنب، 1 ميكرومتر ديكساميثازون، 500 ميكرومتر 3-الايزوبروبيل ا-1-الميثيل، 33 ميكرومتر البيوتين، 5 ميكرومتر روزيجليتازون و 17 ميكرومتر بانتوثينات 16.
    3. استمتع قطرات الدهون التي تلطيخ مع النفط الأحمر-O. لفترة وجيزة، وتحديد الخلايا مع 10٪ الفورمالديهايد، ويغسل مع برنامج تلفزيوني وصمة عار مع يا أحمر 0.35٪ النفط في الأيزوبروبانول.
  3. للثقافة التمايز المكونة للعظم اللجان الدائمة في أحادي الطبقة في 7 × 10 3 خلية / سم 2 وتحفيز في ما يلي:
    1. المتقدم DMEM (GIBCO) + GlutaMAX، 5٪ FBS، 100 وحدة / مل البنسلين، و 100 ملغ / مل الستربتومايسين، و 2.5 ميكروغرام / مل الأمفوتريسين B، 501؛ M حمض الأسكوربيك L-2-الفوسفات، 10 ملي ß-سكرولي و 100 نانومتر ديكساميثازون.
    2. التعرف على الودائع تمعدن التي كتبها فون كوسا وصمة عار (5٪ AGNO 3). لفترة وجيزة، وتحديد الخلايا مع 10٪ الفورمالديهايد، ويغسل مع برنامج تلفزيوني وصمة عار مع 5٪ AGNO 3 في الماء المقطر.
  4. التمايز مكون للغضروف
    1. مكعبات قطع (3 ملم لكل جانب) من الجهاز الطبي اسفنجة على شكل، شكل من مجفف بالتجميد نوع الكولاجين الأول، ويستخدم كمادة سقالة لدعم الخلايا 17.
    2. اللجان الدائمة البذور على الجزء العلوي من مكعبات في تركيز 4 × 10 6 خلية / مل (~ 70،000 خلية / مكعب).
    3. قبل إضافة وسائل الإعلام، والسماح للخلايا على الانضمام إلى مكعبات لمدة 30 دقيقة.
    4. الحفاظ على ثوابت-MSC الكولاجين في وسائل الإعلام مكون للغضروف تتألف من DMEM / F12 + GlutaMAX، 2.5٪ FBS، 100 وحدة / مل البنسلين، و 100 ملغ / مل الستربتومايسين، و 2.5 ميكروغرام / مل الأمفوتريسين B، 40 نانوغرام / مل ديكساميثازون، 50 ميكروغرام / مل الاسكوربيك حمض 2-الفوسفات،50 ميكروغرام / مل L-البرولين، 1X الانسولين ترانسفيرين السيلينيوم-X، و 10 نانوغرام / مل عامل النمو المحول-β1.
    5. استخدام تلطيخ الأزرق الألسيان لتصور تراكم البروتيوغليكان في أقسام يبني. لفترة وجيزة، وصمة عار على أقسام O / N مع الأزرق الألسيان 0.4٪ المذاب في 0.01٪ H 2 SO 4 و0.5M غوانيدين هيدروكلوريد. وبعد ذلك، تم غسلها غسل أقسام لمدة 30 دقيقة في 40٪ DMSO و0.05M MgCl 2. تم counterstained الخلايا مع الأحمر سريع النووي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الحقائق أن 74٪ من الكلاب عينات نخاع العظم (ن = 54) الواردة جلطات عندما وصلوا في مختبرنا (الشكل 1A) جنبا إلى جنب مع انخفاض عائدات MSC من هذه العينات، جعلنا نعتقد أن كان محاصرا عدد كبير من اللجان الدائمة داخل الجلطات . في الواقع، بسيطة دابي وصمة عار المواد تجلط مقطوع تؤكد وجود خلايا الأنوية في عالية الكثافة (الشكل 1B). هذا يؤدي في النهاية إلى انخفاض أعداد اللجان الدائمة المتاحة للثقافة التوسع، والتي تسببت لنا لتطوير بروتوكول باستخدام يوروكيناز. يتخث...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

عادة نحن عينة نخاع العظام في حين أن المريض يخضع لعملية جراحية (في حالتنا جراحة العمود الفقري في المقام الأول)، مع ميزة أن ليس لديها سوى عمل إضافي قليلا إلى أن تتم من قبل أفراد في غرفة العمليات. على الرغم من أن عينات مختلطة مع سترات الصوديوم مباشرة بعد الانسحاب، كان العديد من عينات متخدر جزئيا عندما وصلوا في المختبر للمعالجة. في هذه المرحلة، فإن اختزال لاستبدال العينات متخدر يكون تدخل إضافي منفصل استلزم مرة أخرى التخدير الموضعي أو العام 6. وهذا يتطلب استعداد كل من الكادر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل منحة المؤسسة الوطنية السويسرية CR3I3_140717/1 والمؤسسة السويسرية للشلل النصفي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
القاعدية المتوسطة
PenStrep 100XGibco15140122
الإنسان FGF-basicPeprotech100-18B
MEM Alpha ث / نيوكليوزيد ، ث / الجلوتامين المستقرAmimed1-23S50-I
FBS الحرارة المعطلةAmimed2-01F36-I
Amphotericin BApplichemA1907
المتوسطة الشحمية
DMEM-HAM F12 + GlutaMAXAmimed1-26F09-I
الأنسولين  سيجماI5500
مصل الأرنب جيبكو16120099
ديكساميثازونApplichemD4902
3-Isobutyl-1-methylxanthineSigmaI5879
Biotin   ؛سيجماB4639
Rosiglitazone سيجماR2408
بانتوثينات سيجماP5155
النفط أحمر-O & nbsp ؛سيجماO0625
متوسطة من العظم
حمض الأسكوربيك L-Ascorbic 2-فوسفاتSigmaA8960
ß-glycerophosphateSigmaG9422
نترات الفضة (AgNO3< / sub>)SigmaS6506
المتوسطة الغضرورية
Biopad - جهاز طبي على شكل إسفنجة  Euroresearch
L-proline سيجماP5607
الأنسولين ترانسفيرين السيلينيوم Xجيبكو51500056
عامل النمو البشري المحول - بيتا ؛ 1 Peprotech100-21
Alcian Blue 8GXSigmaA3157
أحمر نووي سريعSigmaN8002
عام
ثلاثي الصوديوم سترات ثنائي الهيدراتApplichemA3901
PBSApplichem964.9100
UrokinaseMedac1976826
0.5٪ Trypsin-EDTAGibco15400054
Giemsa stainApplichemA0885
الفورمالديهايدApplichemA0877
حمض الكبريتيك (H2SO4)ApplichemA0655
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)ApplichemA1584
كلوريد المغنيسيوم (MgCl2)ApplichemA3618
Guanidine هيدروكلوريدApplichemA1499
مستهلكات
50 مل أنبوب تفاعلAxygenSCT-50ML-25-S
حقنة 10 ملبراون4606108V
إبرة ستريكان (22 جرام)براون4657624
1.7 مل أنابيب دقيقةBrunschwigMCT-175-C
100 مو ؛ مصفاة الخلايا mFalcon6.05935
ملقط معقمBastos Viegas ، SA489-001
مشرط معقمBraun5518059
خلية بريمارياFalcon353803
C-Chip Neubauer قارورةBioswisstech505050
المحسنة - قارورة T300TPP90301
المعدات
خزانة السلامة الحيوية الميكروبيولوجية من الفئة الثانيةSkan82011500
حمام مائيMemmert1305.0377
Stripettes ماصة مصلية 5 ملCorning4487-200ea
مجهرأوليمبوسCKX41
حاضنة مرطب Heracells 240Thermo 51026331
Heraeus Multifuge 1S-RThermo Scientific75004331
المكونات المكونات مكونات المكونات طبق زراعة الخلايا العلمي

المراجع

  1. Jiang, Y., et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature. 418 (6893), 41-49 (2002).
  2. Uccelli, A., Moretta, L., Pistoia, V. Mesenchymal stem cells in health and disease. Nat Rev Immunol. 8 (9), 726-736 (2008).
  3. Bartholomew, A., et al. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo. Exp Hematol. 30 (1), 42-48 (2002).
  4. Wang, S., Qu, X., Zhao, R. C. Clinical applications of mesenchymal stem cells. J Hematol Oncol. 5, 19(2012).
  5. Baksh, D., Song, L., Tuan, R. S. Adult mesenchymal stem cells: characterization, differentiation, and application in cell and gene therapy. J Cell Mol Med. 8 (3), 301-316 (2004).
  6. Malempati, S., Joshi, S., Lai, S., Braner, D. A., Tegtmeyer, K. Videos in clinical medicine. Bone marrow aspiration and biopsy. N Engl J Med. 361 (15), e28(2009).
  7. Cuthbert, R., et al. Single-platform quality control assay to quantify multipotential stromal cells in bone marrow aspirates prior to bulk manufacture or direct therapeutic use. Cytotherapy. 14 (4), 431-440 (2012).
  8. Veyrat-Masson, R., et al. Mesenchymal content of fresh bone marrow: a proposed quality control method for cell therapy. Br J Haematol. 139 (2), 312-320 (2007).
  9. Lazarus, H. M., Haynesworth, S. E., Gerson, S. L., Rosenthal, N. S., Caplan, A. I. Ex vivo expansion and subsequent infusion of human bone marrow-derived stromal progenitor cells (mesenchymal progenitor cells): implications for therapeutic use. Bone Marrow Transplant. 16 (4), 557-564 (1995).
  10. Bertolo, A., et al. An in vitro expansion score for tissue-engineering applications with human bone marrow-derived mesenchymal stem cells. J Tissue Eng Regen Med. , (2013).
  11. Casiraghi, F., Remuzzi, G., Abbate, M., Perico, N. Multipotent mesenchymal stromal cell therapy and risk of malignancies. Stem Cell Rev. 9 (1), 65-79 (2013).
  12. Bonab, M. M., et al. Aging of mesenchymal stem cell in vitro. BMC Cell Biol. 7, 14(2006).
  13. Niku, S. D., Hoon, D. S., Cochran, A. J., Morton, D. L. Isolation of lymphocytes from clotted blood. J Immunol Methods. 105 (1), 9-14 (1987).
  14. De Vis, J., Renmans, W., Segers, E., Jochmans, K., De Waele, M. Flow cytometric immunophenotyping of leukemia cells in clotted blood and bone marrow. J Immunol Methods. 137 (2), 193-197 (1991).
  15. St Antoine, A., et al. Application of thrombolytic drugs on clotted blood and bone marrow specimens to generate usable cells for cytogenetic analyses. Arch Pathol Lab Med. 135 (7), 915-919 (2011).
  16. Kisiel, A. H., et al. Isolation, characterization, and in vitro proliferation of canine mesenchymal stem cells derived from bone marrow, adipose tissue, muscle, and periosteum. Am J Vet Res. 73 (8), 1305-1317 (2012).
  17. Bertolo, A., et al. Influence of different commercial scaffolds on the in vitro differentiation of human mesenchymal stem cells to nucleus pulposus-like cells. Eur Spine J. 21, Suppl 6. S826-S838 (2012).
  18. Makridakis, M., Roubelakis, M. G., Vlahou, A. Stem cells: insights into the secretome. Biochim Biophys Acta. 1834 (11), 2380-2384 (2013).
  19. Benvenuti, S., et al. Rosiglitazone stimulates adipogenesis and decreases osteoblastogenesis in human mesenchymal stem cells. J Endocrinol Invest. 30 (9), RC26-RC30 (2007).
  20. Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro. J Cell Biochem. 64 (2), 295-312 (1997).
  21. Patel, A. Tissue banking for research--bench to bedside and back--myth, reality or fast fading reality at the dawn of a personalised healthcare era. Cell Tissue Bank. 12 (1), 19-21 (2011).
  22. Smith, H. W., Marshall, C. J. Regulation of cell signalling by uPAR. Nat Rev Mol Cell Biol. 11 (1), 23-36 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

على الطريقة الأنزيمية لانقاذ الوسيطة الخلايا الجذعية من عينات متخدر نخاع العظم
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.