يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل الفئران البريتوني الضامة لتنفيذ جين تحليل التعبير عند تول مثل مستقبلات تحفيز

37.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52749

⸱

أبريل 29, 2015

 ,  , 
1Centre de recherche du Centre hospitalier de l'Université de Montréal, Institut du cancer de Montréal, 2Département de Médecine, Université de Montréal

في هذه المقالة

ملخص

نصف هنا بروتوكولا بسيطا لعزل البلاعم البريتونية في الفئران. يتبع هذا الإجراء استخراج الحمض النووي الريبي لإجراء تحليل التعبير الجيني على تحفيز المستقبلات الشبيهة بالحصان.

الملخص

خلال العدوى والالتهابات، وحيدات تعميم مغادرة مجرى الدم وتنتقل إلى أنسجة، حيث تفرق في الضامة. الضامة تعبر عن سطح مستقبلات تول مثل (TLRs)، والتي تعترف أنماط الجزيئية الحفظ من خلال التطور في مجموعة واسعة من الكائنات الحية الدقيقة. TLRs تلعب دورا محوريا في تنشيط البلاعم التي عادة ما يرتبط التعبير الجيني التغيير. الضامة حاسمة في كثير من الأمراض، وقد ظهرت كما أهدافا جذابة للعلاج. في بروتوكول التالية، وصفنا إجراء لعزل الضامة البريتوني في الفئران باستخدام المتوسطة thioglycollate بيرة. وهذا الأخير سوف تعزز الهجرة الوحيدات في الصفاق، وفقا لهذا سيرفع العائد بلعم بنسبة 10 أضعاف. وقد أجريت العديد من الدراسات باستخدام نخاع العظم والطحال أو البريتوني المستمدة الضامة. ومع ذلك، فقد أظهرت الضامة البريتوني لتكون أكثر نضجا على العزلة وأكثر استقرارا في الوظيفيةإيتي والنمط الظاهري. وبالتالي، الضامة معزولة عن التجويف البريتوني الفئران تعرض السكان خلية الهام الذي يمكن أن تخدم في مختلف الدراسات المناعية والتمثيل الغذائي. مرة واحدة معزولة، وحفز الضامة مع يغاندس TLR مختلفة، وبالتالي تم تقييم التعبير الجيني.

المقدمة

ويتكون النظام أكلة شبكية من الخلايا في الأنسجة والأعضاء المختلفة مثل نخاع العظام والدم والكبد والطحال. يتم توزيع الضامة على نطاق واسع في جميع أنحاء الجسم، حيث يشارك خصوصا في فطرية وقابلة للتكيف الاستجابات المناعية للسيطرة على العدوى واضحة. بالإضافة إلى دورها في الدفاع المضيف، الضامة أيضا أن تلعب دورا هاما في شفاء الجروح والحفاظ على النسيج التوازن 1،2. وعلاوة على ذلك، الضامة ليست مهمة فقط لعمل جهاز المناعة ولكن أيضا تشارك بنشاط في الحديد التوازن 3. في الجسم، ما يقرب من 80٪ من الحديد موجودة في الهيموجلوبين في كريات الدم الحمراء، والتي عندما يتم هضم هرمة الضامة 4. يوميا، هذه الضامة إعادة تدوير 25 ملغ من الحديد المشتق من كرات الدم الحمراء وتوفير وسائل النقل لفي البلازما 5. وعلاوة على ذلك، خلال العدوى والالتهابات، الضامة الموالية للالتهابات تصادر الحديد في الدم للحد من availabili الحديدتي واي لمسببات الأمراض، على الصعيدين النظامية والمحلية 6-8. كذلك، فقد أظهرت الدراسات أن الضامة وأساسا خلايا الكبد تنتج الببتيد مضادات الميكروبات اسمه hepcidin الذي يعتبر المنظم الرئيسي لاستقلاب الحديد 9، 10. يتم زيادة Hepcidin أساسا من محفزات للالتهابات ويكون مسؤولا جزئيا عن عزل الحديد في بلعم على التهاب مزمن 11-13. كما لم يتم فهم التعبير hepcidin في الضامة بشكل جيد للغاية، درسنا الدور المحتمل للمستقبلات تول مثل (TLRs) في هذه اللائحة. تم العثور على TLRs في المقام الأول على الضامة، وتلعب دورا محوريا في تفعيلها. بالإضافة إلى ذلك، LPS hepcidin الناجم عن التعبير في الكبد يعتمد على TLR4 13. لذلك، لتنفيذ دراستنا، استخدمنا طريقة تقوم على عزل الضامة البريتوني في الفئران.

وتستخدم خطوط الخلايا البلعمية على نطاق واسع في استيلاد بلعمالمنشأ. مع ذلك يمكن أن ثقافة ممتدة يثير فقدان الجينات وانخفضت وظائف المناعة في هذه خطوط الخلايا. وبالتالي، عزل الضامة من التجويف البريتوني أمر بالغ الأهمية.

يعرض التجويف البريتوني الماوس موقع مثالي لحصاد الضامة 13-15. المعزولة الضامة البريتوني الفئران هي مريحة لعدة دراسات حول وظيفتها المناعية. ومع ذلك، فإن عدد الضامة في الصفاق غير كاف لدراسات مستفيضة ويقدر حوالي 1 × 10 6 الضامة في الماوس. وهكذا، لزيادة الانتاج بلعم، تم حقن عامل انتزاع معقمة مثل thioglycollate في التجويف البريتوني التي تسبق الحصاد الخلية. بعد حقن thioglycollate، تم زيادة العائد من الضامة في الماوس بنسبة 10 أضعاف. على الرغم من الزيادة في العائد الضامة، أعمال متوسطة thioglycollate بيرة كما مصدرا للإزعاج الذي يسبب استجابة التهابية، مما أدى إلى توظيف الضامة، والتي أماهذ لكن ليس من الضروري تؤثر على التعبير الجيني. وبالتالي، يجب أن تدرج مجموعة مراقبة تتكون من الضامة غير المعالجة في كل تجربة. في أيدينا، لم يتم الكشف عن التعبير hepcidin التي يتم تحفيز كبير من قبل التهاب في thioglycollate غير المعالجة أثارت الضامة البريتوني. وعلاوة على ذلك، فقد أظهرت الدراسات أن thioglycollate بيرة تجند العديد من الضامة، ولكن لا تفجيرها 16. من جهة أخرى، أثارت thioglycollate بيرة أظهرت الضامة زيادة في انزيم الليزوزومية لكن انخفاضا في قتل الكائنات الحية الدقيقة بلعها 17. ومع ذلك، لم تتأثر القدرة أكلة بالمقارنة مع الضامة غير استخلاصها 16.

مرة واحدة مثقف في أطباق، الضامة البريتوني تصبح ملتصقة، وبالتالي السماح فصلهم عن نوع آخر من الخلايا المعزولة من التجويف البريتوني. وفي وقت لاحق، وقد تم الطعن الضامة معزولة مع منبهات TLRs مختلفة.وأخيرا، تم استخراج مرنا من الخلايا المستزرعة وتم تحليل التعبير الجيني باستخدام كمية عكس سلسلة الناسخ-تفاعل البلمرة (QRT-PCR).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمجلس الكندي للمبادئ التوجيهية رعاية الحيوان بعد موافقة اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان في مركز البحوث دو مركز HOSPITALIER DE L'جامعة مونتريال (CRCHUM).

1. عزل، تحديد الهوية، والثقافة الفئران البريتوني الضامة

  1. إعداد 3.8٪ البيرة المتوسطة thioglycollate. للقيام بذلك، تعليق 38 غرام من thioglycollate المتوسطة في 1000 مل من الماء المقطر. جلب حل لتغلي بحل المتوسطة تماما. تعقيم بواسطة التعقيم على درجة حرارة 121 مئوية لمدة 15 دقيقة. تخزين ما يصل إلى 3 أشهر في الظلام، في RT 18.
    ملاحظة: تجاهل إذا تعكر يتطور وهو ما يشير إلى وجود تلوث جرثومي. يمكن أن تظل الحل لسنة واحدة في الظلام إذا ما واصلت عقيمة.
  2. باستخدام 1 مل الحقن المرفقة إلى 23 الإبر G، حقن 1 مل من 3.8٪ بروير thioglycollate المتوسطة في التجويف البريتوني كل مذكرة التفاهمحد ذاتها، والانتظار لمدة 3 أيام. استخدام حقنة جديدة وإبرة لكل الماوس.
  3. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال الصوديوم (100 ملغ / كلغ) والموت ببطء الفئران عن طريق التفكك عنق الرحم. تأكيد التخدير المناسبة عن طريق التحقق من معدل التنفس. عادة التنفس السريع تشير إلى أن الماوس لا إفقاد إحساس عميق.
  4. يغسل البطن من كل الفأر مع الايثانول 70٪. باستخدام مقص، وإجراء شق الوحشي على طول خط الوسط السفلي من الغشاء البريتوني.
  5. باستخدام ملقط، والتراجع جلد البطن لفضح الجلد البريتوني شفافة. باستخدام 5 مل الحقن تعلق على 20 الإبر G، حقن 5 مل من DPBS الباردة في التجويف البريتوني من كل فأر.
  6. إجراء تدليك لطيف على التجويف البريتوني ثم نضح السوائل بعناية دون ثقب أي جهاز. إزالة الإبرة والاستغناء السائل البريتوني إلى 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية.
  7. أجهزة الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 400 x ج في أجهزة الطرد المركزي المبردة.الخلايا يجب أن تبقى باردة أثناء الإجراء بأكمله. تجاهل طاف و resuspend الخلية بيليه في RPMI المتوسطة 1640.
  8. باستخدام عدادة الكريات، عد الخلايا وضبط لكثافة الخلايا إلى 1 × 10 6 خلية / مل.
  9. تميز النمط الظاهري للخلايا منعزلة عن طريق التدفق الخلوي باستخدام 1 × 10 6 خلايا في الماوس وantibodie ضد F4 / 80 (أ المستضد السطحي أعرب عن الضامة).

2. العلاج بالخلايا

  1. مباشرة بعد العزلة، إضافة 1 × 10 6 خلايا في كل بئر. ترك الضامة البريتوني الفئران على الانضمام إلى 6 لوحات جيدا من قبل زراعة لهم ل1-2 ساعة عند 37 ° C. إزالة الخلايا غير ملتصقة عن طريق غسل بلطف 3 مرات مع PBS الدافئ.
  2. وفي وقت لاحق، والخلايا الثقافة في 900 ميكرولتر المصل خالية DMEM لمدة 24 ساعة في وجود بروابط TLR التالية: (Pam3CSK4-TLR1 / 2 (0.5 ملغ / مل)؛ بولي (I: C) -TLR3 (10 ملغ / مل) ؛ LPS-TLR4 (100 نانوغرام / مل)؛ فلاجيلين-TLR5 (100 نانوغرام / مل)؛ FSL1-TLR6 / 2 (100 نانوغرام / مل)؛ ssRNA40-TLR7 (1 ميكروغرام / مل)؛ ODN1826-TLR9 (1 ميكرومتر).
    ملاحظة: إعداد لكل يجند حل 10X الأسهم. إضافة 100 ميكرولتر من هذه الأخيرة إلى كل بئر، وبالتالي إجراء التخفيف 10 أضعاف.

3. عزل الحمض النووي الريبي

  1. إزالة جميع الخلايا المتوسطة وليز مباشرة في لوحات ستة جيدا عن طريق إضافة 1 مل TRIzol إلى كل بئر واجتياز المحللة الخلية عدة مرات من خلال ماصة. احتضان عينات متجانسة لمدة 5 إلى 10 دقيقة في RT، للسماح التفكك الكامل للمجمعات البروتين النووي.
  2. نقل المحللة إلى 1.5 مل RNase- وأنابيب microcentrifuge خالية من الدناز. إضافة 0.2 مل كلوروفورم في 1ML TRIzol. هزة بقوة أنابيب باليد لمدة 15 ثانية، واحتضان لهم في RT لمدة 5 إلى 10 دقيقة. الطرد المركزي في 12000 x ج لمدة 15 دقيقة على 4 درجات مئوية. مراقبة الخليط يفصل في أقل المرحلة الحمراء (الفينول كلوروفورم)، والبيني والمرحلة المائية العليا عديم اللون. RNA يبقى حصرا في المرحلة المائية.
  3. ترانSFER بعناية المرحلة المائية العليا لأنبوب جديد دون إزعاج البيني. ترسيب الحمض النووي الريبي من ذلك عن طريق خلط مع 0.5 مل من الكحول الآيزوبروبيل. احتضان العينات في RT لمدة 10 دقيقة، وأجهزة الطرد المركزي في 12000 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية. الحمض النووي الريبي رواسب تشكيل بيليه الأبيض على الجانب السفلي من الأنبوب.
  4. إزالة طاف. غسل RNA بيليه مرة واحدة مع 1 مل من الايثانول 75٪. مزج العينات من قبل vortexing وأجهزة الطرد المركزي في 7500 x ج لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. لفترة وجيزة تجفيف RNA (الهواء الجاف لمدة 10 دقيقة). حل RNA في 0.1 مل DEPC (ريبونوكلياز المياه مجانا)، واحتضان لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة 55 مئوية.
  5. تحديد RNA باستخدام مقياس الطيف الضوئي. للقيام بذلك، وتمييع عينات 100 مرة في المياه DEPC وقراءة في موجات من 260 نانومتر. فإن تركيز الحمض النووي الريبي ثم يكون: OD 260 × 40 نانوغرام / UL س عامل التخفيف.
  6. التعادل تركيزات RNA وتوليف [كدنا حسب تعليمات الشركة المصنعة باستخدام نظام RT-PCR لالإسعافات ستراند التجميعي [كدنا]. كمافي تعليمات الشركة الصانعة، وقياس مستويات مرنا الجينات التي في الوقت الحقيقي PCR (45 دورات) في نظام الكشف عن الحمض النووي في الوقت الحقيقي. تطبيع مستويات التعبير الجيني مع اثنين من الجينات التدبير المنزلي على سبيل المثال β-الأكتين وGAPDH.
    ملاحظة: تطبيع تركيز الحمض النووي الريبي إلى 500 ميكروغرام / مل واستخدام 0.5 ميكروغرام لتخليق [كدنا].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

نحن يتميز أولا الضامة البريتوني في الفئران المعزولة التي التدفق الخلوي. للقيام بذلك، استخدمنا (F4 / 80) الأجسام المضادة التي تعترف تحديدا علامات أعرب إلا عن طريق الضامة. مطلوب هذا التوصيف لتحديد النسبة المئوية للبلعم معزولة والتمييز بينها وبين الخلايا التي تم الحصول عليها خلال عملية العزل. كما هو موضح في (الشكل 1)، والنسبة المئوية للخلايا معربا عن مستضد تم العثور على F4 / 80 على الدوام أن تكون فوق 95٪. المقبل، لدراسة التعبير الجيني في الضامة، وعولج الخلايا المعزول...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الضامة هي الحاسمة من أجل البقاء وتوفر هدفا مغريا للتلاعب المضيف لتحقيق أهداف المناعية. وقد أجرى اكتشاف TLRs والجزيئات الأخرى الاعتراف الضامة لمحور النقاش المناعية. الضامة تستجيب لمجموعة متنوعة من المحفزات، بما في ذلك السيتوكينات، الجزيئات المرتبطة الضرر الجزيئية نمط (DAMPs) 20 والجزيئات المرتبطة بجماعات من مسببات الأمراض (PAMPs) 21. هذه الردود محفزات مختلفة تمثل مسار تفعيل الضامة، وترتبط عادة مع بعض التعديلات المفاجئة في التعبير الجيني 22.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس للمؤلفين مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من خلال منحة من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC، منح أي 298515-2011). AL وهو حاصل على درجة الدكتوراه وأيد منحة دراسية من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC)، وMS من منحة مقدمة من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR، منح رقم MOP123246).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
C57BL / 6 الفئرانCharles River Laboratories، Inc. (ويلمنجتون ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية)475
ثيوغليكولايتسيجما ألدريتش ، (سانت لويس ، ميزوري)19032-500 جم
70٪ إيثانول
10٪ بنتوباربيتال الصوديوم (يستخدم لتخدير الفئران (80 مجم / كجم ، IP))
دولبيكو s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS) ، يوضع على الجليد وسيعمل على حصاد البلاعمWISENT INC Canada (QC)311-425-CL
RPMI medium 1640 (مكمل مع البنسلين ، الستربتومايسين ، L-glutamine ، و 10٪ مصل عجل الجنين).WISENT INC كندا (QC)350-000-CL
1 و 5 مل محاقنBD الولايات المتحدة الأمريكية (نيوجيرسي)
لوحات 6 آبارCorning Incorporated (نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية)MCT-150-C
البروتين الدهني البكتيري Pam3CSK4 (0.5 مجم / مل)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)TLRL-pm25
بولييونوزين &ndash ؛ حمض البولي سيتيديليك (بولي (I: C)) (10 مجم / مل)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)TLRL-PIC
LPS من الإشريكية القولونية 055: B5 (100 نانوغرام / مل)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)L2880
سوط منقى من السالمونيلا التيفيموريوم (100 نانوغرام / مل)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)TLR-FLIC-10
البروتين الدهني الاصطناعي FSL1 (100 نانوغرام / مل)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)TLR-FSL
ssRNA المشتق من فيروس نقص المناعة البشرية-1 التكرار الطرفي الطويل ssRNA40 (1 & mu; جم / مل)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)TLR-LRNA-40
النوع B CpG قليل النوكليوتيد ODN1826 (1 & mu ؛ M)InvivoGen (سان دييغو ، الولايات المتحدة الأمريكية)11B16-MM
TRIzolInvitrogen ، (برلنغتون ، أونتاريو ، كندا)15596-026
20 جم و 23 جم إبرBD الولايات المتحدة الأمريكية (نيوجيرسي)
ملقط
مقص
50 مل أنابيب مخروطية موضوعة على الجليدSarstedt (نيوتن ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية)62.547.205
عازلة تحلل خلايا الدم الحمراءسيجما ألدريتش ، (سانت لويس ، ميزوري)R7757-100ML
جهاز
لمقياس
F4 / 80 الجسم المضادBIO-RAD (CA ، USA)
الأجسام المضادة CD16 / CD32Pharmingen ، {Mississauga ، ON ، CA)553141
التدفق الخلويكولتر إبيكس إيليت كونتر ، كولتر ، (هياليه ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية)
1.5 مل أنابيب إيبندورفأكسيجن العلوم (كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية)3516
كلوروفورمفيشر العلمي (أونتاريو ، كندا)UN1888
كحول الأيزوبروبيلJT بيكر (بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية)70566
75٪ إيثانول (في المياه المعالجة DEPC)الكوهول التجاري (QC ، كندا)17394
0.01٪ مياه معالجة ثنائي إيثيل بيروكربونات (DEPC) (دعها تقف طوال الليل والأوتوكلاف)سيجما ألدريتش ، (سانت لويس ، ميزوري)216.542.8
نظام RT-PCR متعدد الكتابةQiagen ، (ميسيسوجا ، أونتاريو ، كندا)205113
Rotor Gene 3000Montreal Biotech ، (كيركلاند ، كيو سي ، كندا)
QuantiTect SYBR Green I PCRQiagen ، (ميسيسوجا ، أونتاريو ، كندا)204141
309659 305175 طرد مركزي مبردالدم MCA497APC مقياس مجموعات

المراجع

  1. Pollard, J. W. Trophic macrophages in development and disease. Nat Rev Immunol. 9 (4), 259-270 (2009).
  2. Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat Rev Immunol. 3 (1), 23-35 (2003).
  3. Koury, M. J., Ponka, P. New insights into erythropoiesis: the roles of folate, vitamin B12, and iron. Annu Rev Nutr. 24, 105-131 (2004).
  4. Sheftel, A. D., Kim, S. F., Ponka, P. Non-heme induction of heme oxygenase-1 does not alter cellular iron metabolism. J Biol Chem. 282 (14), 10480-10486 (2007).
  5. Hershko, C. Storage iron regulation. Prog Hematol. 10, 105-148 (1977).
  6. Collins, H. L. Withholding iron as a cellular defence mechanism--friend or foe. Eur J Immunol. 38 (7), 1803-1806 (2008).
  7. Noyes, W. D., Bothwell, T. H., Finch, C. A. The role of the reticulo-endothelial cell in iron metabolism. Br J Haematol. 6, 43-55 (1960).
  8. Layoun, A., Huang, H., Calve, A., Santos, M. M. Toll-like receptor signal adaptor protein MyD88 is required for sustained endotoxin-induced acute hypoferremic response in mice. Am J Pathol. 180 (6), 2340-2350 (2012).
  9. Zumerle, S., et al. Targeted disruption of hepcidin in the liver recapitulates the hemochromatotic phenotype. Blood. 123 (23), 3646-3650 (2014).
  10. Nguyen, N. B., Callaghan, K. D., Ghio, A. J., Haile, D. J., Yang, F. Hepcidin expression and iron transport in alveolar macrophages. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291 (3), L417-L425 (2006).
  11. Nemeth, E., et al. Hepcidin, a putative mediator of anemia of inflammation, is a type II acute-phase protein. Blood. 101 (7), 2461-2463 (2003).
  12. Nemeth, E., et al. Hepcidin regulates cellular iron efflux by binding to ferroportin and inducing its internalization. Science. 306 (5704), 2090-2093 (2004).
  13. Constante, M., et al. Distinct requirements for Hfe in basal and induced hepcidin levels in iron overload and inflammation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 291 (2), G229-G237 (2006).
  14. Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M. The isolation and characterization of murine macrophages. Curr Protoc Immunol. Chapter 14 (Unit 14 11), (2008).
  15. Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. J Vis Exp. (35), (2010).
  16. Leijh, P. C., van Zwet, T. L., ter Kuile, M. N., van Furth, R. Effect of thioglycolate on phagocytic and microbicidal activities of peritoneal macrophages. Infect Immun. 46 (2), 448-452 (1984).
  17. Dy, M., Debray-Sachs, M., Kamoun, P., Hamburger, J. Effect of thioglycollate on macrophage lysosomal enzymes. Biomedicine. 29 (5), 167-170 (1978).
  18. Li, Y. M., Baviello, G., Vlassara, H., Mitsuhashi, T. Glycation products in aged thioglycollate medium enhance the elicitation of peritoneal macrophages. J Immunol Methods. 201 (2), 183-188 (1997).
  19. Layoun, A., Santos, M. M. Bacterial cell wall constituents induce hepcidin expression in macrophages through MyD88 signaling. Inflammation. 35 (4), 1500-1506 (2012).
  20. Oppenheim, J. J., Yang, D. Alarmins: chemotactic activators of immune responses. Curr Opin Immunol. 17 (4), 359-365 (2005).
  21. Akira, S., Uematsu, S., Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell. 124 (4), 783-801 (2006).
  22. Lang, R., Patel, D., Morris, J. J., Rutschman, R. L., Murray, P. J. Shaping gene expression in activated and resting primary macrophages by IL-10. J Immunol. 169 (5), 2253-2263 (2002).
  23. Wang, C., et al. Characterization of murine macrophages from bone marrow, spleen and peritoneum. BMC Immunol. 14 (6), (2013).
  24. Austin, P. E., McCulloch, E. A., Till, J. E. Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture. J Cell Physiol. 77 (2), 121-134 (1971).
  25. Cannon, G. J., Swanson, J. A. The macrophage capacity for phagocytosis. J Cell Sci. 101 (Pt 4), 907-913 (1992).
  26. Wang, Y., Harris, D. C. Macrophages in renal disease. J Am Soc Nephrol. 22 (1), 21-27 (2011).
  27. Edwards, J. P., Zhang, X., Frauwirth, K. A., Mosser, D. M. Biochemical and functional characterization of three activated macrophage populations. J Leukoc Biol. 80 (6), 1298-1307 (2006).
  28. Hoover, D. L., Nacy, C. A. Macrophage activation to kill Leishmania tropica: defective intracellular killing of amastigotes by macrophages elicited with sterile inflammatory agents. J Immunol. 132 (3), 1487-1493 (1984).
  29. Schleicher, U., Bogdan, C. Generation culture and flow-cytometric characterization of primary mouse macrophages. Methods Mol Biol. 531, 203-224 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

RNA RT PCR TLR
عزل الفئران البريتوني الضامة لتنفيذ جين تحليل التعبير عند تول مثل مستقبلات تحفيز
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.