مقالة منهجية

علاج منتجات صفائح الدم مع فيتامين بي وضوء الأشعة فوق البنفسجية: فعالية ضد ارتفاع العيار الحجمي البكتيرية تلوث

17.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52820

⸱

أغسطس 24, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Terumo BCT, Scientific Affairs

في هذه المقالة

ملخص

تخلق ظروف تخزين منتجات الصفائح الدموية بيئة مثالية لتكاثر الملوثات البكتيرية إلى مستويات خطيرة. كان الهدف من هذه الدراسة هو استخدام اختبار تشكيل مستعمرة لتقييم عملية الحد من مسببات الأمراض القائمة على الريبوفلافين ضد التلوث البكتيري عالي العيار في منتجات الصفائح الدموية البشرية.

الملخص

منذ فترة طويلة واعترف تلوث حدات الصفائح الدموية عن طريق البكتيريا باعتباره خطرا نقل كبير بسبب ظروف التخزين بعد التبرع الخاصة بهم. يتم تخزين المنتجات بشكل روتيني عند 22 درجة مئوية على شاكر تهييج، وهي حالة يمكن أن تعزز نمو البكتيريا. على الرغم من أن العدد الكلي للبكتيريا يعتقد أن قدم إلى منتج الصفائح الدموية منخفضة للغاية، ويمكن لهذه البكتيريا تتكاثر إلى عيار عالية جدا قبل نقل الدم، ما قد يؤدي في أحداث سلبية خطيرة. وكان الهدف من هذه الدراسة لتقييم عملية الحد من العوامل المسببة للأمراض الريبوفلافين استنادا ضد فريق من البكتيريا التي تم تحديدها على أنها ملوثات المشتركة للمنتجات الصفائح الدموية. وشملت هذه اللوحة الكائنات التالية: S. البشروية، S. المذهبة، S. هين، المقيحة S.، S. marcescens، Y. القولون، B. neotomae، B. الشمعية، كولاي، P. الزنجارية وK. الرئوية. تم تلقيح كل وحدة صفائح مع الحمولة الجرثومية عالية وأزيلت عينات بأوراسكوم تليكوم القابضة قبل وبعد العلاج. مستعمرة تشكيل الفحص، باستخدام نظام نقطة التخفيف نهاية، وكان يستخدم لتحديد ما قبل العلاج وبعد العلاج التتر البكتيرية. تم احتساب الحد سجل عن طريق طرح عيار بعد العلاج من عيار ما قبل المعالجة. وقد لوحظت التخفيضات السجل التالي: S. البشروية 4.7 سجل (99.998٪)، المكورات العنقودية الذهبية 4.8 سجل (99.998٪)، S. هين 3.7 سجل (99.98٪)، S. المقيحة 2.6 سجل (99.7٪)، S. marcescens 4.0 سجل (99.99٪)، Y. القولون 3،3 سجل (99.95٪)، B. neotomae 5.4 سجل (99.9996٪)، B. الشمعية 2.6 سجل (99.7٪)، E. القولونية ≥5.4 سجل (99.9996٪)، P. الزنجارية 4.7 سجل (99.998٪) وK . الرئوية 2.8 سجل (99.8٪). نتائج هذه الدراسة تشير إلى أن العملية يمكن أن تساعد على خفض خطر نقل الأحداث السلبية الحادة المرتبطة التلوث الجرثومي.

المقدمة

نقل الصفائح الدموية والبلازما وكرات الدم الحمراء معبأة ومنتجات الدم كلها تلعب دورا رئيسيا في الطب الحديث، ويمكن استخدامها لعلاج الحالات الطبية المختلفة، واستبدال السوائل الحيوية، وفي نهاية المطاف إنقاذ الأرواح. الصفائح الدموية هي نتاج الخلوية التي يتم عزلها إما من الدم الكامل والمجمعة إلى جرعة transfusable أو جمعها من خلال عملية فصل مكونات الدم الصفائح الدموية. الدور الرئيسي الصفائح الدموية في الجسم لوقف النزيف في مواقع الجرح وللمساعدة في الحفاظ الارقاء. المرضى الذين يعانون من انخفاض عدد خلايا الصفائح الدموية (الصفيحات) عرضة لأحداث نزيف عفوية ويتم نقل الصفائح الدموية مع لجلب خلايا الصفائح الدموية على عد مرة أخرى إلى المعدل الطبيعي. يتم تخزين الصفائح الدموية التي تم جمعها لمدة أقصاها 5-7 أيام ويتم تخزينها في 22 ± 2 ° C بينما في إطار التحريض المستمر.

وعلى الرغم من توفير خصائص نقل الصفائح الدموية الحياة لا يزال هناك خطر طفيف للمستفيدين نقل بسبب التعاونntamination من هذه المنتجات من قبل الطفيليات والبكتيريا والفيروسات 11. تنفيذ الفيروسي اختبار الحمض النووي (NAT) قد انخفض بشكل كبير من خطر انتقال الفيروس من وكلاء المنقولة بالدم كبير، مثل فيروس التهاب الكبد الوبائي (سي)، وفيروس التهاب الكبد B (HBV) وفيروس نقص المناعة البشري (HIV) 5. ونشر مؤخرا من خدمات الدم الكندية يقدر المخاطر المتبقية لهذه العوامل أن تكون 1 في 8 ملايين التبرعات لفيروس نقص المناعة البشرية، 1 في 6.7 مليون التبرعات لHCV و 1 في 1700000 التبرعات لHBV 15.

على الرغم من أن البكتيريا حشد عادة أقل من الاهتمام في الرأي العام، وقد قدرت وتيرة التلوث الجرثومي في منتجات الصفائح الدموية أن يكون مرتفعا كما 1: 1000 (7) ولأن يتم نقل الملايين من المنتجات الصفائح الدموية في كل عام يتعرض العديد من المستلمين من المحتمل أن تكون مهددة للحياة مضاعفات مثل الإنتان 6. وتشير البحوث إلى أن الحمل البكتيري في الوقتتلوث منخفضة، <100 مستعمرة (كفو) / المنتج 2،16، إلا أن المواد الغذائية الغنية البيئة ودرجة حرارة الغرفة تخزين يسمح تلويث البكتيريا على التكاثر إلى التتر عالية بشكل خطير قبل نقل الدم. حاليا، الطرق المعتمدة فقط المتاحة لمنع المنتجات الملوثة البكتريا من الوصول إلى المتلقي الصفائح الدموية هي من خلال استخدام نظم ثقافة قائمة ونقطة السريع للاختبارات الرعاية. لفترة وجيزة، لأنظمة الثقافة القائمة يتم تخزين المنتجات الصفائح الدموية على المحرض على 22 درجة مئوية لمدة 12-24 ساعة للسماح للبكتيريا تتكاثر في المنتج الذي يتم فيه إزالة عينة 4-8 مل من المنتج الصفائح الدموية وتلقيح في زجاجة تحتوي وسائل الإعلام المغذيات. يتم وضع الزجاجة إلى أداة التي تراقب الزجاجة لنمو البكتيريا. إذا كانت أداة بالكشف عن نمو البكتيريا في زجاجة وترفع علم ذلك ويتم تجاهل وحدة الصفائح الدموية المقابلة. ومع أن هذه العملية ناجحة بشكل معقول في الكشف عن غرو سريعالكائنات الجناح، العديد من الأنواع بطيئة المتنامية التي لا تنمو إلى عيار مرتفع بما فيه الكفاية ليتم الكشف عن، وبالتالي خلق إمكانية للوحدات سلبية كاذبة ان يفرج عنها لنقل 7،12،14،16،22. على عكس أنظمة الكشف عن ثقافة قائمة، وعادة ما يقوم نقطة السريع للاختبارات الرعاية في وقت لاحق في فترة التخزين الصفائح الدموية عند زيادة الحمولة الجرثومية بشكل كبير. يطلب من التتر أعلى نقطة منذ اختبارات الرعاية أقل حساسية من نظم ثقافة قائمة، وإلا موثوق كشف البكتيريا بمجرد وصولها إلى عيار ≥1 × 10 3 خلية / مل 17. ولكن مثل هذه الاختبارات يمكن أن توفر النتائج في غضون 1 ساعة من أخذ العينات. وقد أدى التباين في أداء هذه الاختبارات إلى الإفراج عن منتج سلبي كاذبة، مما تسبب في رد فعل للصرف الصحي فادح في المتلقي 9.

وسيلة بديلة لمكافحة قضية التلوث الجرثومي للمنتجات الصفائح الدموية هي من خلال الاستخدام الروتيني لبروك للحد من مسببات المرضوفاق سطيف التي يمكن تعطيل البكتيريا الملوثة بدلا من محاولة كشفها. باستخدام الريبوفلافين باعتبارها الضيائي، بالاشتراك مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية، وقد تبين للحد من العدوى من مجموعة واسعة من الملوثات المسببة للأمراض التي تنتقل عن طريق الدم، بما في ذلك البكتيريا 3،4،8،10،19-21. استخدام لريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء للحد من مسببات المرض غير سامة وغير مطفرة، وقد أظهرت مكونات المعالجة ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية أن تكون آمنة للمتلقي نقل فضلا عن تلك التعامل مع منتجات الدم 18. باختصار، يمكن جزيئات الريبوفلافين المنتسبين مع الأحماض النووية (DNA و RNA) من البكتيريا، والطفيليات والفيروسات وأية خلية الأنوية (مثل خلايا الدم البيضاء). التعرض للأشعة فوق البنفسجية ينشط الريبوفلافين، مما تسبب في تغيير كيميائي لمجموعات وظيفية من الأحماض النووية (في المقام الأول قواعد جوانين)، وبالتالي منع تكرار و / أو نسخ من الأحماض النووية ومغادرة الحي المعطل 13. خلايا منزوع النواة مثل لوحةيتيح ولا تتأثر خلايا الدم الحمراء التي كتبها الكيمياء الريبوفلافين نظرا لعدم وجود الحمض النووي.

العمل السابق مع التكنولوجيا ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء تقييم مجموعة مختارة من البكتيريا باستخدام التصميم التجريبي يهدف إلى تقليد المنتج الصفائح الدموية الملوثة مع الحمولة الجرثومية ذات الصلة سريريا (<20 CFU / المنتج) 8. وكان الهدف من هذه الدراسة هو تقييم عملية ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضد عيار عالية التلوث الجرثومي (> 1.0 × 10 5 خلية / مل) في منتجات الصفائح الدموية العلاج في البلازما من أجل قياس قدرة الحد البكتيرية الكلية للنظام. واستنادا إلى البيانات التي تم جمعها من الدراسات hemovigilance 1، وقد تم اختيار لجنة من تحدث عادة الكائنات الإيجابية السلبية وغرام غرام للتقييم في هذه الدراسة، وشملت الأنواع التالية: المكورات العنقودية البشروية، المكورات العنقودية الذهبية، العقدية هين، العقدية المقيحة، السراتية الذابلة، يرسينيا القولون ،neotomae البروسيلا، الشمعية العصوية (شكل الخضري)، Esherichia القولونية، الزائفة الزنجارية والكلبسيلة الرئوية. جميع الكائنات الحية، باستثناء B. الشمعية، تم الحصول عليها من ATCC ووضع أولوية الحصول على السلالات البكتيرية التي تم تحديدها على أنها معزولة عن مكونات الدم. وB. اختبار الشمعية في هذه الدراسة هو سلالة السريرية معزولة داخليا من منتج الصفائح الدموية الملوثة.

البروتوكول

1. البكتيريا تعليق التحضير:

  1. من لوحة الثقافة مجزع، تطعيم جو معقم و مطهر مستعمرة واحدة في 250 مل زجاجة معقمة تحتوي على 100 ​​مل من وسائط النمو المناسب (الجدول 1) عن طريق عقيمة بتلقيح الحلقة.
  2. ضع زجاجة في حاضنة تهتز المدارية في ظروف مناسبة (الجدول 1) لمدة 1-2 أيام، والتحقق من النمو بشكل دوري. ضبط سرعة شاكر إلى 140 دورة في الدقيقة.
  3. جو معقم و مطهر نقل تعليق البكتيرية إلى قسمين العقيمة 50 مل أنابيب مخروطية وأنابيب الطرد المركزي في 3000 x ج لمدة 20 دقيقة في 23 ° C.
  4. نضح في وطاف resuspend كل بيليه الجرثومي مع 15 مل من الماء ببتون العقيمة. دوامة الضرورة. الجمع بين الثقافة البكتيريا علقت في أنبوب واحد / حاوية.
  5. عيار الثقافة الأسهم في ثلاث نسخ في القسم 4 لتحديد عيار الثقافة الأسهم.
  6. الثلاجة لمدة تصل إلى 2 أسابيع في 477؛ 2 ° C لحين الحاجة إليها. إعادة عيار الثقافة في وقت الاستخدام، راجع الخطوة 4.8.

2. صفائح الدم إعداد المنتج:

  1. جمع فصادة معيار المنتج الصفائح الدموية البشرية في بنك الدم المعتمدين. المنتج الصفائح الدموية يجب أن تستوفي المواصفات جمع التالية: 90-360 حجم مل و 0.8 -3.8 × 10 6 الصفائح / تركيز ميكرولتر.
    1. تأكد من أن المنتج الصفائح الدموية وقد استراح مدة لا تقل عن 2 ساعة قبل تجهيزها للحد من العوامل المسببة للأمراض. تخزين المنتجات في 22 ± 2 درجة مئوية في حاضنة الصفائح الدموية دون التحريض على هذه ساعة 2. بعد ساعتين ضمان تحريكها المنتج الصفائح الدموية في 22 ± 2 درجة مئوية في حاضنة الصفائح الدموية. استخدام المنتج لمدة تصل إلى 22 ساعة جمع آخر.
  2. باستخدام حقنة 3 مل إزالة عينة 2 مل لقياس 22C درجة الحموضة في المنتج الصفائح الدموية. استخدام محلل غازات الدم للتأكد من المنتج لديها درجة الحموضة> 6.6. استخدام نفس العينة لقياس تركيز الصفائح الدموية من الناتج الصفائح الدموية باستخدام محلل الدموية. التأكد من هذا المنتج يلبي ،80-3،8 × 10 6 الصفائح / ميكرولتر شرط تركيز المجموعة.
  3. تقييم بصريا دوامة من الناتج الصفائح الدموية. إذا كان المنتج لديه "0" دوامة سيتم تجاهل المنتج.
  4. عقد حقيبة الصفائح الدموية تحت مصدر البيضاء الضوء المباشر والضغط على كيس الصفائح الدموية لفترة وجيزة. نلاحظ بصريا نمط دوامات من العينة الصفائح الدموية. تسجيل المنتج باستخدام المقياس التالي.
    ملاحظة: 2 - إيجابي الدوامة: يحوم التجانس واضحة في جميع أنحاء كيس كامل مع تباين قوي. 1 - متوسط ​​الدوامة: بعض التجانس وضوحا، ولكن فقط في عدد قليل من الأماكن ومع تباين الفقراء. 0 - الدوامة السلبية: التجانس عكر المتبقية قبل وبعد الضغط على كيس الصفائح الدموية

3. فيتامين بي وضوء الأشعة فوق البنفسجية العملية:

  1. ترانSFER المنتج الصفائح الدموية إلى ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء الإضاءة وتخزين حقيبة باستخدام جهاز أنابيب لرسو السفن العقيمة. بعد نقل إزالة فارغة حدة الصفائح الدموية كيس جمع باستخدام سداده أنابيب والتخلص من الحقيبة فارغة كنفايات biohazardous.
  2. إزالة كيس 35 مل من 500 ميكرومتر الريبوفلافين حل سهم من ضوء التفاف لها الخارجي واقية. قفص الاتهام العقيمة عدة الريبوفلافين على خط مدخل من الحقيبة المعالجة والتخزين. السماح للمحتويات لتصب في وحدة الصفائح الدموية.
  3. شنق الريبوفلافين الحقيبة / المعالجة والتخزين حقيبة مجموعة من الحقيبة الريبوفلافين والتعبير بلطف الهواء المتبقية للخروج من الحقيبة المعالجة والتخزين وداخل كيس الريبوفلافين. ضمان كمية صغيرة من المنتج الصفائح الدموية وأعرب أيضا في الحقيبة الريبوفلافين لشطف أي الريبوفلافين المتبقية في المنتج الصفائح الدموية. السماح للحل الريبوفلافين والصفائح الدموية استنزاف مرة أخرى في كيس المعالجة والتخزين وثم المشبك خط مدخل. إزالة كيس الريبوفلافين فارغة لناجي السداده أنابيب والتخلص من الحقيبة فارغة كنفايات biohazardous.
  4. قفص الاتهام معقم 6 "خط أنابيب مع موصل حقنة الإناث على خط مدخل من الإضاءة وتخزين حقيبة. نعلق حقنة برميل 10 مل (إزالة المكبس) على الرابط حقنة الإناث.
  5. جو معقم و مطهر إضافة 5 مل من البكتيريا الأسهم في برميل حقنة عن طريق ماصة. فتح المشبك على خط مدخل والسماح للبكتيريا لتصب المنتج الصفائح الدموية. شطف برميل حقنة عن طريق السماح للبعض المنتجات الصفائح الدموية في التدفق الى 10 مل حقنة برميل. إزالة 10 مل حقنة برميل.
  6. جو معقم و مطهر إرفاق حقنة 30 مل وتدفق مدخل الميناء ما لا يقل عن مرتين للتأكد من البكتيريا السهم مختلطة في منتج الصفائح الدموية. بعد أن المنتج هو تمتزج جيدا، استخدم نظيفة 5-10 مل حقنة وإزالة 2 مل عينة ما قبل المعالجة. باستخدام حقنة جديدة ضمان أي هواء عرض من الخطوة التلقيح أو أخذ العينات خطوة إزالة.
    1. عيار العينة قبل المعالجة في قسم 4.
  7. إزالة السطر مدخل من الكيس المعالجة والتخزين ووزن المنتج.
  8. وضع المنتج في إضاءة واتبع الأوامر التي تظهر على الشاشة لبدء العلاج الصفائح الدموية القياسية.
    1. أدخل في ID المشغل.
    2. تأمين وتركيب كيس إلى الصوانى المنور.
    3. أدخل معرف عينة في المنور باستخدام إما قارئ الباركود أو لوحة المفاتيح الإدخال اليدوي.
    4. مسح نوع المنتج.
    5. إغلاق المشبك الكوارتز.
    6. سيقوم الجهاز تلقائيا الإضاءة تسليم 6.24 J / مل من الطاقة. الوقت المعتاد للعلاج يأخذ 5-10 دقيقة.
  9. بعد العلاج قفص الاتهام معقم 6 "خط أنابيب مع موصل حقنة الإناث على خط مبة عينة من العلاج وحقيبة التخزين. ضمان المنتج هو تمتزج جيدا ثم نعلق حقنة 5 مل وإزالة عينة بعد العلاج 2 مل.
    1. عيار ما بعد العلاج سامالتنوير القائل في قسم 4.

4. البكتيرية العيار الحجمي

  1. تقدير عيار من عينات ما قبل العلاج وبعد العلاج وإعداد العدد المناسب من 5 مل أنابيب التخفيف اللازمة لإجراء التخفيف المتسلسل نقطة نهاية كل عينة. جو معقم و مطهر ملء الأنابيب المطلوبة مع 1.8 مل من البيبتون.
  2. عيار كل عينة باستخدام نظام التخفيف المتسلسل 10 أضعاف. جو معقم و مطهر نقل 0.2 مل من العينة غير مخفف لأنبوب تخفيف الأول (10 -1). دوامة هذا الأنبوب التخفيف ونقل 0.2 مل إلى أنبوب تخفيف المقبل. مواصلة التخفيف المتسلسل من خلال العدد المطلوب من التخفيفات.
    1. نقل جو معقم و مطهر 100 ميكرولتر من كل تخفيف لتكون مطلية على لوحة أجار المناسبة (الجدول 1).
  3. باستخدام رش خلية العقيمة، توزيعها بالتساوي العينة على كل لوحة أجار.
  4. عكس واحتضان لوحات في ظروف مناسبة ( الجدول 1) لمدة 1-2 أيام التحقق من النمو بشكل دوري.
  5. عد لوحات مع 30-300 المستعمرات. تعتبر لوحات تحتوي على أكثر من 300 المستعمرات أكثر من أن تحصى (TNTC). تعتبر لوحات تحتوي على أقل من 30 المستعمرات لتكون أقل من الحد من الكمي (LOQ).
  6. حساب عيار من كل عينة الاختبار وتسجيل النتائج على النحو كفو / مل.
    1. استخدام المعادلة التالية لحساب كفو / مل:
      figure-protocol-1
    2. إذا لم تكن هناك مستعمرات على أدنى وحة التخفيف، واستخدام المعادلة التالية لحساب الحد كشفها (اللد):
      figure-protocol-2
      و
      figure-protocol-3
      الى اين:
      N = أقل عدد من الجسيمات (كفو) في صroduct التي يمكن أن يتم الكشف عن بثقة.
      P = احتمال أن الكائنات الحية الدقيقة سيكون التي لم يتم كشفها. لالثقة 95٪ من الكشف عن الكائنات الحية الدقيقة، P = 0.05.
      V = إجمالي حجم المنتج في مل
      ت = حجم مطلي (مل) س مستوى التخفيف من لوحة
  7. للسيطرة سلبية، لوحة 0.5 مل من البيبتون التي يتم استخدامها لالتخفيفات المسلسل على كل من اثنين من لوحات أجار. استخدام نفس نوع اللوحة كما العينات لفحصها. عكس واحتضان لوحة في الظروف المناسبة لمدة 1-2 أيام فحص للنمو بشكل دوري.
    1. إذا لوحظ نمو على أي لوحة أجار، لا بد من التخلص منها زجاجة من البيبتون المستخدمة؛ وتبطل أيضا نتائج الدراسة.
  8. لمكافحة إيجابي، وإعادة عيار الثقافة الأسهم من البكتيريا الذي تم استخدامه. عكس واحتضان لوحات في الظروف المناسبة لمدة 1-2 أيام فحص للنمو بشكل دوري. يجب عيار يكون ± 1.0 تسجيل كفو / مل من السجلإد عيار الأوراق المالية (انظر القسم 1.5) للدراسة أن تعتبر صالحة.

النتائج

تم تقييم الحد من أحد عشر الأنواع البكتيرية المختلفة باستخدام عملية PRT ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية ضوء القائمة. هذه العوامل تمثل بعض الملوثات أكثر شيوعا من منتجات الصفائح الدموية وتشمل خمسة موجبة الجرام وستة الكائنات السلبية الغرام. تم تقييم لا يقل عن ستة منتجات الصفائح الدموية في الكائن الحي وذلك بحقن كل منتج مع ما يكفي من البكتيريا لانتاج> 1.0 × 10 5 خلية / مل عيار النهائي من البكتيريا في المنتجات الصفائح الدموية. قبل العلاج وإزالة عينة لتحديد عيار قبل المعالجة، وبعد ذلك كان يعامل المنتج الصفائح الدموية على الفور مع الريبوفلافين وعملية للأشعة فوق البنفسجية. بعد العلاج من المنتجات الصفائح الدموية لوحظت تخفيضات السجل التالي: S. البشروية 4.7 سجل (99.998٪)، المكورات العنقودية الذهبية 4.8 سجل (99.998٪)، S. هين 3.7 سجل (99.98٪)، S. المقيحة 2.6 سجل (99.7٪)، S. marcescens 4.0 سجل (99.99٪)، Y. القولون 3،3 سجل (99.95٪)، B.neotomae 5.4 سجل (99.9996٪)، B. الشمعية 2.6 سجل (99.7٪)، E. القولونية ≥ 5.4 سجل (99.9996٪)، P. الزنجارية 4.7 سجل (99.998٪) وK. الرئوية 2.8 سجل (99.8٪) (الشكل 2). اجتمع جميع وحدات مواصفات النظام كما سبق للالريبوفلافين وعملية للأشعة فوق البنفسجية. تم إجراء اختبار تخفيض إضافي مع S. المقيحة باستخدام معطف الشهباء الصفائح الدموية المشتقة. لم يلاحظ وجود اختلاف كبير في الحد من S. المقيحة في معطف الشهباء الصفائح الدموية المشتقة مقابل الصفائح الدموية فصادة (لا تظهر البيانات).

figure-results-1
الجدول 1: شروط النمو الأنواع البكتيرية تقييمها باستخدام ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية. وقد تم اختيار لجنة من كل من سلبية الغرام والغرام البكتيريا الإيجابية التي ثبت تلوث منتجات الصفائح الدموية لهذه الدراسة. شروط النمو (درجة الحرارة ونوع الوسائط) تستخدم لنشر وتيتيص يتم عرض الكائنات الحية.

figure-results-2
الشكل 1: ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية عملية تخفيض ضوء العوامل المسببة للأمراض. تم حله الريبوفلافين في المياه المالحة 0.9٪ عند تركيز الاسمي 500 ميكرومتر. وكان محلول معقم اتصال واستنزفت في كل منتج الصفائح الدموية. تمت إضافة البكتيريا جو معقم و مطهر لكل وحدة الصفائح الدموية ومن ثم تعامل مع 6.2 J / مل من الطاقة للأشعة فوق البنفسجية (حوالي 6-10 دقائق). في هذا المختبر في دراسة تم أخذ عينات وحدة صفائح الدم بعد المعالجة لتحديد عيار البكتيرية النهائي.

figure-results-3
الشكل 2: الحد من الأنواع البكتيرية المختلفة عندما تعامل مع الريبوفلافين وفيتامين بي ضوء الأشعة فوق البنفسجية، وكان يستخدم الأشعة فوق البنفسجية للحد من الحمل البكتيري من الملوثات البكتيرية الشائعة لمنتجات الصفائح الدموية. الحد سجل 10 هو الفرقبين متوسط ​​عيار قبل المعالجة ومتوسط ​​عيار بعد العلاج. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

المناقشة

الفحص الجرثومي أصبح ممارسة شائعة في المؤسسات المصرفية الدم والعديد من المواقع التي تخدم كوسيلة أساسية لمنع نقل الصفائح الدموية ملوثة جرثوميا. على الرغم من أن الفحص البكتيري المحجور عادة غالبية سريعة النمو البكتيريا سالبة الجرام مثل S. marcescens، E. القولونية E. و المذرقية، وهو يناضل من أجل كشف بطيئة النمو البكتيريا موجبة الجرام مثل S. الذهبية، العقدية النيابة. وS. البشروية 8. للأسف، وتورط هذه البكتيريا إيجابية الجرام ثلاثة في ما يزيد عن 50٪ من جميع وحدات الصفيحات الملوثة ونقل الصفائح الدموية من المنتجات التي تحتوي على هذه الكائنات الثلاث قد يؤدي إلى وفيات المرضى 1.

ويعتمد الفحص البكتيري على عيار البكتيرية في منتج الصفائح الدموية لتكون عالية بما فيه الكفاية بما فيه الكفاية بحيث يرد كائن واحد على الأقل داخل النموذجية 4-8 مل عينة الفحص. إذا كان عيار البكتيرية ليست عالية بما فيه الكفاية للبكتيريا ليتم القبض في حجم العينة 4-8 مل، يتم وضع وحدة بشكل غير صحيح بأنها سلبية ويتم تحريرها لنقل الدم. قد يكون نهجا بديلا للفحص الجرثومي لتوظيف عملية استباقية التي يمكن القيام بها على جميع وحدات الصفائح الدموية والتي يمكن أن تجعل الكائنات تلويث غير عملي.

في هذه الدراسة، تم إضافة التتر عالية من البكتيريا عمدا لوحدات الصفائح الدموية لاختبار قدرتها على الحد الإجمالية للعملية الحد من العوامل المسببة للأمراض ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية. على الرغم من أن الحمل البكتيري اختبارها في هذه الدراسة تتجاوز بكثير تلك التي توجد عادة في منتجات الدم في وقت التبرع، تساعد هذه الدراسة إلى إثبات أن عملية ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية قادرة على الحد بشكل كبير من عيار البكتيريا قادرة على البقاء في وحدة صفائح الدم الملوثة 2،6-5،4 سجل (الحد 99،7-99،9996٪ من تلويث البكتيريا) (الشكل 2). للحصول على ACCURAالشركة المصرية للاتصالات تخفيض قيمة السجل، فمن الأهمية بمكان أن المشغل لها تقنية العقيم جيدة جنبا إلى جنب مع مهارات pipetting لدقيقة عند تنفيذ الخطوات عيار البكتيرية. pipetting لغير دقيقة عند إجراء التخفيفات المسلسل يمكن أن يؤدي إلى تراكم الأخطاء، وبالتالي لقياس عيار دقيق.

البيانات التي تم جمعها في هذه الدراسة تدعم العمل السابق مع الريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية، التي تحدت النظام ضد انخفاض مستوى، تجرثم ذات الصلة سريريا (<20 CFU / وحدة). وقد تم تصميم الدراسة السابقة لتقليد حدث تلوث السريري الفعلي وأظهرت النتائج الريبوفلافين وكان ضوء الأشعة فوق البنفسجية فعالة في منع نمو البكتيريا خلال فترة التخزين الصفائح الدموية لمدة 7 أيام. النمذجة استنادا إلى بيانات من دراسة سابقة تشير إلى أن تقديرات المخاطر الحالية من التلوث الجرثومي للمنتجات الصفائح الدموية يمكن أن تخفض بنسبة تصل إلى 98٪ من المستويات الحالية 8. عملية ضوء ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية تقل عن مثيلاتها في الشاشة البكتيريةجي، والتي أظهرت فعالية 66٪ للكشف عن الملوثات البكتيرية في وحدات الصفيحات عندما تحدى مع الحمولة الجرثومية ذات الصلة سريريا 8 فقط.

كما هو الحال مع كل التقنيات والعلاج PRT منتجات الصفائح الدموية لمنع المضاعفات المرتبطة مع وحدات الصفيحات ملوثة جرثوميا لها حدودها. نظم PRT ليست فعالة ضد الجراثيم البكتيرية وليس تعطيل الذيفان الداخلي، وبالتالي حتى لو كان نظام PRT قادر على تعطيل التتر عالية من البكتيريا سالبة الجرام من الذيفان الداخلي المتبقي لا يزال يسبب صدمة إنتانية في المتلقي. وأفضل أداء PRT في وقت مبكر أثناء التخزين قبل البكتيريا يمكن أن تنتشر إلى التتر عالية.

في الختام، كما يتضح من مزيج من هاتين الدراستين، فإن عملية ريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية هي فعالة في تخفيض الأحمال البكتيرية كل الكائنات إيجابية سلبية الغرام والغرام ويمكن أن تقدم بديلا صالحا للفحص الجرثومي. حافة صورة بشكل روتينيمنتجات ز الصفائح الدموية مع الريبوفلافين والأشعة فوق البنفسجية أيضا لديه فائدة إضافية تتمثل في الحد من انتقال محتمل من العوامل الأخرى التي تنتقل عن طريق الدم مثل الفيروسات والطفيليات.

الإفصاحات

ويعمل كل مؤلفي هذه الورقة حاليا من قبل شركة Terumo البنك المركزي التونسي، المطور والشركة المصنعة لنظام Mirasol PRT. رسوم النشر لهذا المقالة الفيديو تم دفعها من قبل شركة Terumo فريق اللواء القتالي.

شكر وتقدير

المؤلفون ليس لديهم أي اعترافات.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Mirasol IlluminatorTerumo BCTN / A
Mirasol العلاج / حقيبة التخزينTerumo BCTN / A
محلل أمراض الدمBeckman-CoulterAC & bull ؛ T diff 
محلل غازات الدمسيمنزRapidLab 1265   ؛
جهاز الإرساء المعقمTerumo BCTTSCD
حاضنة الصفائح الدمويةهيلمرPC2200
حاضنة مدارية شاكرلاب4628
حاضنة جافةفيشرIso-temp
الفئة الثانية A / B3 خزانة السلامة الحيويةالحرارية1286
أنابيب السدادةسيبراسمارت سيلر II
جهاز طرد مركزي على الطاولةIECCentra GP8R
10 مل حقنةBD309604
30 مل حقنةBD309650
5 مل أنبوب تخفيفVWR211-0058
50 مل أنبوب مخروطيكورنينج430290
ماصة دقيقةجيلسونP-200
ماصة دقيقةRaininR-200
ماصة متكررةEppendorf4780
1-200 & micro; ل طرف مرشحكوستار4810
25 مل ماصة سرية يمكن التخلص منهاكوستار4489
5 مل ماصة سرية يمكن التخلص منهاكوستار4487
35 مل 500 وميكرو ؛ إم ريبوفلافينتيرومو بي سي تي35 مل 500 & ميكرو; M 
Brucella Agar مع 5٪ دمالحصان BBL221547
ضخ القلب للدماغTeknovaB9993
ماء الببتونBD257087
مرق الصويا TrypticaseBD299113
Trypticase Soy AgarRemelR01917
مصل الحصان المعطل بالحرارةGibco26050

المراجع

  1. Brecher, M. E., Hay, S. N. Bacterial contamination of blood components. Clin. Microbiol. Rev. 18 (1), 195-204 (2005).
  2. Brecher, M. E., Holland, P. V., Pineda, A. A., Tegtmeier, G. E., Yomtovian, R. Growth of bacteria in inoculated platelets: implications for bacteria detection and the extension of platelet storage. Transfusion. 40 (11), 1308-1312 (2000).
  3. Cardo, L. J., et al. Pathogen inactivation of Leishmania donovani infantum in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light. Vox Sang. 90 (2), 85-91 (2006).
  4. Cardo, L. J., Salata, J., Mendez, J., Reddy, H., Goodrich, R. Pathogen inactivation of Trypanosoma cruzi in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light. Transfus. Apher. Sci. 37 (2), 131-137 (2007).
  5. Dodd, R. Y. Current viral risks of blood and blood products. Ann. Med. 32 (7), 469-474 (2000).
  6. Dodd, R. Y. Bacterial contamination and transfusion safety: experience in the United States. Transfus. Clin. Biol. 10 (1), 6-9 (2003).
  7. Dumont, L. J., et al. Screening of single-donor apheresis platelets for bacterial contamination: the PASSPORT study results. Transfusion. 50 (3), 589-599 (2010).
  8. Goodrich, R. P., Gilmour, D., Hovenga, N., Keil, S. D. A laboratory comparison of pathogen reduction technology treatment and culture of platelet products for addressing bacterial contamination concerns. Transfusion. 49 (6), 1205-1216 (2009).
  9. Greco-Stewart, V. S., et al. Serratia marcescens strains implicated in adverse transfusion reactions form biofilms in platelet concentrates and demonstrate reduced detection by automated culture. Vox Sang. 102 (3), 212-220 (2012).
  10. Keil, S. D., et al. Inactivation of Plasmodium spp. in plasma and platelet concentrates using riboflavin and ultraviolet light. Transfusion. 53 (10), 2278-2286 (2013).
  11. Kleinman, S., Chan, P., Robillard, P. Risks associated with transfusion of cellular blood components in Canada. Transfus. Med Rev. 17 (2), 120-162 (2003).
  12. Larsen, C. P., Ezligini, F., Hermansen, N. O., Kjeldsen-Kragh, J. Six years' experience of using the BacT/ALERT system to screen all platelet concentrates, and additional testing of outdated platelet concentrates to estimate the frequency of false-negative results. Vox Sang. 88 (2), 93-97 (2005).
  13. Mundt, J. M., Rouse, L., Van den Bossche, J., Goodrich, R. P. Chemical and Biological Mechanisms of Pathogen Reduction Technologies. Photochem. Photobiol. , (2014).
  14. Murphy, W. G., et al. Screening platelet concentrates for bacterial contamination: low numbers of bacteria and slow growth in contaminated units mandate an alternative approach to product safety. Vox Sang. 95 (1), 13-19 (2008).
  15. Brien, S. F., et al. Current incidence and residual risk of HIV, HBV and HCV at Canadian Blood Services. Vox Sang. 103 (1), 83-86 (2012).
  16. Pearce, S., Rowe, G. P., Field, S. P. Screening of platelets for bacterial contamination at the Welsh Blood Service. Transfus. Med. 21 (1), 25-32 (2011).
  17. Ramirez-Arcos, S., Kou, Y., Perkins, H. Evaluation of a universal point-of-issue assay for bacterial detection in buffy coat platelet components. Vox Sang. 107 (2), 192-195 (2014).
  18. Reddy, H. L., et al. Toxicity testing of a novel riboflavin-based technology for pathogen reduction and white blood cell inactivation. Transfus. Med. Rev. 22 (2), 133-153 (2008).
  19. Ruane, P. H., et al. Photochemical inactivation of selected viruses and bacteria in platelet concentrates using riboflavin and light. Transfusion. 44 (6), 877-885 (2004).
  20. Tonnetti, L., Proctor, M. C., Reddy, H. L., Goodrich, R. P., Leiby, D. A. Evaluation of the Mirasol pathogen reduction technology system against Babesia microti in apheresis platelets and plasma. Transfusion. 50 (5), 1019-1027 (2010).
  21. Vanlandingham, D. L., et al. Photochemical inactivation of chikungunya virus in plasma and platelets using the Mirasol pathogen reduction technology system. Transfusion. 53 (2), 284-290 (2013).
  22. Walther-Wenke, G., et al. Monitoring bacterial contamination of blood components in Germany: effect of contamination reduction measures. Vox Sang. 100 (4), 359-366 (2011).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

المعالجة بالأشعة فوق البنفسجية بالريبوفلافينمنتج صفائح دمويةتقليل المسببات المرضيةمقايسة خفض اللوغاريتمالتخفيف النهائيالتعرض للأشعة فوق البنفسجيةتخزين الصفائح الدمويةتثبيط البكتيرياسلامة نقل الدم
علاج منتجات صفائح الدم مع فيتامين بي وضوء الأشعة فوق البنفسجية: فعالية ضد ارتفاع العيار الحجمي البكتيرية تلوث
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.