مقالة منهجية

تقرير من أكسدة الأحماض الدهنية وتكون الدهون في خلايا الكبد الفأر الابتدائية

DOI:

10.3791/52982

⸱

أغسطس 27, 2015

 , 
1Division of Cardiovascular Medicine, Department of Medicine, University of Massachusetts Medical School

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دي نوفو تكون الدهون وحمض أكسدة β الدهنية تشكل المسارات الأيضية الأساسية في الكبدية، الممرات التي يتم مضطرب في العديد من الاضطرابات الأيضية، بما في ذلك مرض الكبد الدهني. نحن هنا لشرح عزل خلايا الكبد الأولية الماوس ووصف الكمي للأكسدة الأحماض الدهنية-β وتكون الدهون.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التمثيل الغذائي للدهون في الكبد معقد. بالإضافة إلى استيراد وتصدير الدهون عن طريق البروتينات الدهنية ، يمكن لخلايا الكبد أن تؤكسد الدهون عن طريق أكسدة الأحماض الدهنية ، أو بدلا من ذلك ، توليف دهون جديدة عن طريق تكوين الدهون من جديد. يتم تحديد المجموع الصافي لهذه المسارات من خلال عدد من العوامل ، والتي تؤدي في بعض الحالات المرضية إلى مرض الكبد الدهني. يرتبط تراكم الدهون الكبدية الزائدة بمقاومة الأنسولين في الجسم بالكامل وأمراض القلب التاجية. أدوات دراسة التمثيل الغذائي للدهون في خلايا الكبد مفيدة لفهم دور التمثيل الغذائي للدهون الكبدية في بعض اضطرابات التمثيل الغذائي.

في الكبد ، تنظم خلايا الكبد تكسير وتوليف الأحماض الدهنية عن طريق الأكسدة الدهنية β وتكوين الدهون من جديد ، على التوالي. يوفر القياس الكمي لعملية التمثيل الغذائي في هذه المسارات نظرة ثاقبة للتعامل مع الدهون الكبدية. على عكس القياس الكمي في المختبر ، باستخدام خلايا الكبد الأولية ، فإن إجراء القياسات في الجسم الحي يمثل تحديا تقنيا وكثيف الموارد. ومن ثم ، فإن القياس الكمي لأكسدة الأحماض الدهنية β وتكوين الدهون من جديد في خلايا الكبد المزروعة في الفئران يوفر طريقة مباشرة لتقييم التعامل مع دهون خلايا الكبد.

هنا نصف طريقة لعزل خلايا الكبد الأولية في الفئران ، ونوضح القياس الكمي لأكسدة الأحماض الدهنية β وتكوين الدهون من جديد ، باستخدام ركائز ذات علامات إشعاعية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض الكبد الدهني غير الكحولي هو أحد الأسباب الرئيسية لأمراض الكبد في الثقافات الغربية1،2. يرتبط تراكم الدهون داخل الكبد بموت الخلايا والتليف وفشل الكبد عبر آليات غير معروفةحتى الآن 3-6. في مرض الكبد الدهني ، تعد أكسدة الأحماض الدهنية β بوساطة خلايا الكبد وتكوين الدهون من جديد من المحددات المهمة لتراكم الدهونالصافي 7،8. لذلك ، ستركز هذه المقالة على عزل خلايا الكبد ، متبوعا بالقياس الكمي لأكسدة الأحماض الدهنية β وتكوين الدهون من جديد.

< p class = 'jove_content'>تم تطوير العديد من المنهجيات لاستجواب استقلاب الدهون في خلايا الكبد. على الرغم من أنه من الممكن قياس التمثيل الغذائي للدهون في الجسم الحي باستخدام نظائر مستقرة9،10 ، إلا أن هذه الطرق مكلفة وتتطلب أعدادا كبيرة من. بالإضافة إلى ذلك ، فإن القدرة على التحقيق في تأثير المواد الكيميائية الخارجية محدودة بسبب طبيعة التجارب في الجسم الحي. في المقابل ، فإن عزل خلايا الكبد الأولية عن كبد الفأر يوفر وسيلة ميسورة التكلفة لمتابعة11. علاوة على ذلك ، تسمح دراسة خلايا الكبد في الثقافة للباحثين بدراسة تأثيرات المواد الكيميائية المختلفة على معالجة الدهون مع التحايل على صعوبات التجارب في الجسم الحي. أخيرا ، تتجنب خلايا الكبد المعزولة أي ارتباك من علم الوراثة المتنوع لأنها مشتقة من كبد واحد.

هنا نقوم بعزل خلايا الكبد وزراعتها ، ونقيس أكسدة الأحماض الدهنية β وتكوين الدهون من جديد ، باستخدام البالميتات ذات العلامات الإشعاعية. البروتوكول المفصل أدناه مباشر وفعال وقابل للتكرار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وينبغي إجراء جميع التجارب على الحيوانات وفقا للوائح المحلية والاتحادية وبموافقة من إدارة IACUC والسلامة من الإشعاع المؤسسية.

1. إعداد

  1. عدة أيام قبل الفحص، ذوبان الجليد في زجاجة 500 مل من الكبد دايجست متوسط ​​(LDM) واعادة تجميد ~ 35 مل قسامات في أنابيب مخروطية 50 مل. تخزين في -20 درجة مئوية لحين الحاجة إليها.
  2. قبل يوم واحد للفحص، قبل تعقيم أدوات تشريح النظيفة الأوتوكلاف.
  3. في يوم الفحص، علاج المبلغ اللازم لوحات ثقافة 24-جيدا مع الكولاجين.
    1. مزيج 1 جزء من 3 ملغ / مل ذيل فأر الكولاجين مع 50 أجزاء من برنامج تلفزيوني. إضافة ما يقرب من 500 ميكرولتر لكل بئر من لوحة 24-جيدا واحتضان لمدة 3-5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT). إزالة الكولاجين والسماح لوحة في الهواء الجاف في غطاء محرك السيارة. كرر وقت إضافي واحد على الأقل.
      ملاحظة: لا يمكن أن يؤديها الكولاجين طلاء تصل إلى أسبوع واحد في الإعلانفانس ولوحات تخزين عند 4 درجات مئوية مختومة في غلاف بلاستيكي.
  4. إعداد LDM للفحص: ذوبان LDM ودافئة إلى 37 درجة مئوية، وضبط درجة الحموضة إلى 7.4 باستخدام 1 N KOH. تصفية باستخدام 0.2 ميكرون تصفية المحاقن والمكان في إعادة تدوير 42 ° C حمام الماء.
  5. الدافئة 25 مل من الكبد الإرواء متوسطة إلى 42 درجة مئوية في إعادة تدوير مياه الاستحمام.
  6. إعداد السيليكا الغروية 90٪ المغلفة مع حل بوفيدون: إضافة 1 مل من 10X DPBS إلى 9 مل من السيليكا الغروية المغلفة مع بوفيدون. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 باستخدام 0.1 N حمض الهيدروكلوريك. ابحث مع العقيمة 0.2 ميكرون تصفية المحاقن. تخزين في RT.
  7. دافئ تصفيح متوسطة إلى 37 ° C.

2. عزل الابتدائية ماوس خلايا الكبد

  1. انشاء مضخة تحوي، وأنابيب، وطاولة التشريح: تعقيم الأنابيب عن طريق تنظيف مع 5 مل 70٪ من الإيثانول في الماء المقطر، تليها 10 مل من الماء المعقم. وضع أنابيب في الكبد الإرواء المتوسطة ومضخة تشغيل لملءطول الأنبوب.
  2. التضحية الماوس عن طريق أسلوب افق مؤسسيا.
  3. تشريح فتح تجويف البطن: رش البطن الماوس تحرري مع الايثانول 70٪. باستخدام مقص حادة نهاية، وجعل شق خط الوسط من خلال الأدمة طول البطن وتعكس أفقيا. جعل شق مماثل في الصفاق لفضح الأحشاء.
    1. باستخدام أداة حادة، تهجير بلطف الأمعاء لفضح الأوعية الدموية في البطن حدد موقع البطن الوريد الأجوف السفلي (IVC) ووضع خياطة تحت الأوعية الدموية، البعيدة إلى الوريد الكلوي
  4. القاصي إلى خياطة، ضع إبرة والقسطرة في IVC، والنهوض إلى ما وراء مستوى خياطة. مع الإبرة لا تزال في مكانها، ربط الخيط حول القسطرة ليثبت في مكانه. إزالة الإبرة بعناية. إذا فعلت بشكل صحيح، والدم مع تدفق من خلال القسطرة.
  5. باستخدام الماصة، وملء المساحة المتبقية في القسطرة مع نضح المتوسطة، وضمانأن لا الهواء موجود. مع عناية كبيرة، ونعلق أنابيب إلى القسطرة.
  6. تشريح فتح تجويف الرئة: تعكس بلطف فصوص الكبد متفوقة على فضح الحجاب الحاجز. ثقب بعناية الحجاب الحاجز مع مقص حاد الحافة، ثم إجراء شق الجانبي لفضح تجويف الجنبي، مع الحرص على تجنب المرارة والأوعية الدموية الجنبي. وضع المشبك البلدغ حول الصدري الوريد الأجوف السفلي فقط الداني إلى الوريد الكبدي.
  7. قطع الوريد البابي وتشغيل المضخة في 3-4 مل / دقيقة. يروي الكبد مع الكبد الإرواء متوسطة لمدة 5 دقائق باستخدام ما يقرب من 20 مل من نضح المتوسطة.
    ملاحظة: الكبد يجب أن تتغير فورا من اللون الأحمر إلى اللون الرمادي / تان. إذا أجزاء من الكبد لا تزال حمراء، وهذا يدل على الأرجح ضعف التروية، وتقلص من احتمالات العزلة ناجحة إلى حد كبير. خلال التروية، وتوخي الحذر لضمان المتوسطة لا ينفد وأنه لا يوجد فقاعات إدخال الأنبوب.
  8. بعد الحضانة مدة 5 دقائق، ووقفضخ ونقل الأنابيب إلى الكبد دايجست المتوسطة. إعادة تشغيل المضخة ويروي الكبد عن 10 آخرين - 15 دقيقة (حتى المتوسط ​​هو استنفدت).
  9. في نهاية نضح، ووقف ضخ. وينبغي أن يكون الكبد على لون وردي وتظهر الموسع نوعا ما. استئصال الكبد عن طريق تشريح دقيق. إزالة المرارة ونقل الكبد لصحن 10 سم زراعة الأنسجة.
  10. في خزانة السلامة البيولوجية، إضافة 10 مل من الطلاء المتوسطة (الجدول 1) إلى الكبد. كشط بلطف الكبد باستخدام ملقط أو مشرط لإزالة خلايا الكبد. تصفية تعليق باستخدام مصفاة الخلية 100 ميكرون ونقل إلى 50 مل أنبوب مخروطي الشكل. غسل لوحة مع 10 مل إضافية من الطلاء المتوسطة وتجمع في 50 مل أنبوب مخروطي الشكل.
  11. بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 350 x ج، 4 ° C.
  12. نضح المتوسطة وبيليه resuspend في 10 مل من طلاء المتوسطة وإضافة 10 مل من 90٪ السيليكا الغروية المغلفة مع بوlyvinylpyrrolidone. المزيج بلطف وأجهزة الطرد المركزي كما في الخطوة 2.11. بعد الطرد المركزي، وطبقة من الخلايا الميتة وسوف تطفو على أعلى خليط، في حين أن الخلايا الحية سوف بيليه إلى أسفل.
  13. نضح الخلايا الميتة والمتوسطة. غسل 2 مرات مع 20 مل من طلاء المتوسطة، الطرد المركزي كما هو الحال في 2.11.
  14. خلايا resuspend في 10 مل من طلاء متوسط. عدد الخلايا مع عدادة الكريات ووضع 9 × 10 4 خلايا / جيد في أطباق ثقافة 24-جيدا تعامل الكولاجين. احتضان في 37 ° C الأنسجة ثقافة حاضنة لمدة 2 ساعة. كل لوحة يمكن أن تستخدم إما لفحص أكسدة الأحماض الدهنية أو مقايسة تكون الدهون.
  15. اختياريا، تغيير الآبار لصيانة المتوسطة (الجدول 1) والثقافة في 37 ° C. الخلايا يمكن تربيتها ل2-3 أيام دون التأثير على نتائج الفحص.

3. الأحماض الدهنية الأكسدة الفحص

تحذير: استخدام النشاط الإشعاعي يمكن أن تكون خطرة. جميع عمليات الشراء والتخزين والمناولة، وديوينبغي أن يتم sposal المواد المشعة وفقا المؤسسية، والدولة، واللوائح والمبادئ التوجيهية الاتحادية.

  1. 16-20 ساعة قبل الفحص، وغسل الخلايا 2 مرات مع PBS الدافئ. تغيير الخلايا لمصل تجويع متوسط ​​خالية من المصل (الجدول 1) مع 20 نانومتر الجلوكاجون واحتضان ليلا 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: نظرا لأن المصل البقري الجنين يحتوي على تركيز غير معروف من هرمونات التمثيل الغذائي (مثل الانسولين، والجلوكاجون)، مصل تجويع الخلايا لإزالة أي آثار الخلط قد تترتب على هذا الفحص. خلايا قابلة للبقاء في المصل تجويع المتوسطة ل> 24 ساعة. ويستخدم العلاج الجلوكاجون لتحفيز أكسدة الأحماض الدهنية داخل خلايا الكبد.
  2. في صباح يوم الفحص، وإعداد ما قبل الحضانة المتوسطة: و resuspend مبلغ مناسب من بالميتات الصوديوم في الماء عالى النقاء لجعل حل 100 ملم والحرارة إلى 70 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. في هذه الأثناء، تعد الكمية المطلوبة (0.5 مل لكل بئر من 24 لوحة جيدا)من DMEM مع 25 ملي HEPES، 1٪ BSA جزء V، و 20 نانومتر الجلوكاجون. الحرارة إلى 37 درجة مئوية.
    1. مرة واحدة solubilized، إضافة بالميتات إلى التركيز النهائي من 250 ميكرومتر إلى المتوسطة. تغيير خلايا الكبد إلى مرحلة ما قبل الحضانة المتوسطة واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة. حجز بعض ما قبل الحضانة المتوسطة في 37 ° C لاستخدامها لاحقا.
  3. أثناء الحضانة، وتجف مبلغ مناسب من 14 C-بالميتات (0.5 μCi / جيد) عن طريق التبخر تحت غاز النيتروجين.
    1. على سبيل المثال، لقياس 24 عينة في 24 لوحة جيدا، ونقل 120 ميكرولتر من 0.1 μCi / مل 14 C-بالميتات إلى أنبوب 1.5 مل. تتبخر ببطء الإيثانول المذيبات التي تهب غاز النيتروجين على حل من مسافة 3-5 سم في غطاء الدخان. المذيب أن تتبخر في حوالي 30-40 دقيقة، وترك الجافة 14 C-بالميتات في الجزء السفلي من الأنبوب.
  4. ما يقرب من 15 دقيقة قبل نهاية الحضانة، resuspend و14C-بالميتات في 0.1 N هيدروكسيد الصوديوم (12.5 ميكرولتر / μCi). احتضان عند 70 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. إضافة ثلاثة مجلدات باب الحارة ما قبل الحضانة المتوسطة ومزيج من قبل pipetting صعودا وهبوطا.
  5. ارتفاع كل جيدا مع 25 ميكرولتر من المخفف 14 C-بالميتات. مزيج من قبل هزاز بلطف لوحة واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة. هذا هو الفحص اللوحة.
  6. أثناء الحضانة، وإعداد لوحة فلتر ورقة (الشكل 1).
    1. إزالة الغطاء من معقمة 24 لوحة جيدا. مكان واحد 2 سم × 2 سم قطعة من ورق الترشيح في الجزء السفلي من كل من الآبار. تراكب لوحة مع قطعة 4 "× 7" parafilm.
    2. استخدام كائن مستطيل كبير، مثل مربع طرف micropipettor، وفرك parafilm على الآبار لخرم في parafilm في الفتحات جيدا وإنشاء ختم على ما تبقى من لوحة. إزالة دوائر مثقوبة من parafilm تغطي الآن الآبار. الآن يجب أن تكون مشمولة لوحة بإحكام مع parafilm في جميع المجالات باستثناء البئر سpenings.
  7. 10 دقيقة قبل نهاية الحضانة، إضافة 200 ميكرولتر من 3 N هيدروكسيد الصوديوم إلى كل بئر من مرشح ورقة لوحة، والتأكد تمتص ورقة الترشيح كل من السائل.
    1. اختياريا قبل التجميد، ونقل على المديين المتوسط ​​و24 لوحة جيدا جديدة. بعد غسل مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني، ليز الخلايا المتبقية في 0.1 N حمض الهيدروكلوريك وحساب محتوى البروتين BCA الفحص.
  8. في نهاية الحضانة، والأداة الإضافية تجميد لوحة فحص في النيتروجين السائل. كن حذرا لضمان كل بئر يتم تجميد تماما قبل المتابعة.
  9. إضافة 100 ميكرولتر من حمض البيركلوريك 70٪ على كل بئر من لوحة الفحص. تغطية مباشرة مع لوحة فلتر ورقة. وضع لوحات على شاكر المداري والصخور في السرعة المدارية من 80 دورة في الدقيقة في RT لمدة 2 ساعة.
  10. بعد الحضانة، ومعالجة العينات:
    1. لقياس نسبة CO 2، ونقل الساحات ورق الترشيح إلى 4 مل السائل السائل التلألؤ في التلألؤالقارورة وقياس 14 C الإشارة.
    2. لقياس المواد القابلة للذوبان الحمضية، ونقل 400 ميكرولتر من المتوسطة إلى أنبوب 1.5 مل microfuge. أجهزة الطرد المركزي في أقصى سرعة لمدة 10 دقيقة. إضافة 100 ميكرولتر من طاف الناتجة إلى 500 ميكرولتر من 2: 1 الكلوروفورم، الميثانول (ت / ت)، ودوامة لفترة وجيزة.
      1. إضافة 250 ميكرولتر من الماء إلى الخليط، ودوامة مرة أخرى. عينات الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 3000 ز س. نقل 200 ميكرولتر من المرحلة العليا إلى 4 مل السائل السائل التلألؤ في قارورة التلألؤ وقياس 14 C الإشارة.

4. تكون الدهون الفحص

  1. المساء قبل بداية الاختبار، وغسل الخلايا 2 مرات مع PBS الدافئ. تغيير خلايا الكبد لمصل تجويع المتوسطة مع 100 نيوتن متر الأنسولين. احتضان ليلا 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: نظرا لأن المصل البقري الجنين يحتوي على تركيز غير معروف من هرمونات التمثيل الغذائي (مثل الانسولين، والجلوكاجون)، مصل تجويع الخلايا لإزالة أي آثار الخلط قد تترتب على هذا الفحص. خلايا قابلة للبقاء في المصل تجويع المتوسطة ل> 24 ساعة. ويستخدم الأنسولين في هذا الاختبار لتحفيز تكون الدهون.
  2. جعل تكون الدهون المتوسطة: مصل تجويع المتوسطة مع 100 نيوتن متر الأنسولين، 10 ميكرومتر خلات الباردة و 0.5 μCi 3 H-خلات لكل بئر. تغيير الخلايا لتكون الدهون المتوسطة واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة. تتضمن أي مركبات من الاهتمام لفحصها.
  3. بعد فترة الحضانة، وغسل الخلايا 2 مرات مع برنامج تلفزيوني. الخلايا ليز عن طريق كشط في 120 ميكرولتر من 0.1 N حمض الهيدروكلوريك. الاحتياطي 10 ميكرولتر لفحص البروتين (تقييم من قبل BCA مقايسة)، ونقل 100 ميكرولتر إلى أنبوب 1.5 مل microfuge.
  4. الدهون استخراج بإضافة 500 ميكرولتر من 2: 1 كلوروفورم الميثانول (ت / ت). دوامة لفترة وجيزة واحتضان في RT لمدة 5 دقائق. إضافة 250 ميكرولتر من المياه، دوامة واحتضانها في RT لمدة 5 دقائق إضافية. الطرد المركزي عينات مدة 10 دقيقة في 3000 x ج، RT. بعنايةنقل المرحلة الدنيا إلى 4 مل السائل السائل التلألؤ في قارورة التلألؤ وقياس 3 H النشاط.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العزلة الكبدية عادة يؤدي إلى 1-3 × 10 7 مجموع الخلايا. بعد مرور فترة الحضانة بين عشية وضحاها، فإن الخلايا تظهر سداسية، وكثير منها سيتم binucleated (الشكل 2). يجب أن تكون الخلايا السليمة يخلو من التحبيب أو الفقاعات، والتي تدل على موت الخلايا.

بشكل عام، يتم تشغيل أكسدة الأحماض الدهنية فحص في 03:57 مكررات لكل اختبار المجمع. التهم لعينات CO 2 ما يقرب من خمس واحدة من تلك المستمدة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الوقت من التضحية لنضح ينبغي أن يكون أقل من 3 دقائق للنضح المثالي وكولاجيناز هضم الكبد. مرة واحدة يبدأ نضح مع الإرواء المتوسطة، ينبغي أن الكبد على الفور تغيير مظهر لمن اللون الأحمر إلى شاحب. بعد حوالي 10 دقيقة من الحضانة مع LDM، فإن الكبد تظهر منتفخة والوردي. في حال أن نضح غير كاف، والكبد قد لا تظهر هذه التغييرات، وهذا سوف يؤدي عادة إلى انخفاض العائد الكبدية.

باتباع الخطوات الغسيل، وخلايا الكبد معزولة يمكن تخزينها...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشير المؤلفون إلى عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نتوجه بخالص الشكر إلى سوزان جراي وأوماديفي شالاساني لمساعدتهما في الجوانب الفنية لبروتوكول عزل خلايا الكبد. تم دعم هذا العمل من خلال منحة NIDDK 5R01DK089185 (إلى MP Cooper) وبرنامج DERC التجريبي والجدوى في UMMS (إلى M.P. Cooper).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
تقنيات Liver Perfusion MediumLife17701038
تقنيات Liver Digest MediumLife17703034Aliquot وتخزينها عند -20 درجة ؛ سي
بي بي إسكورنينج21-040-CV
10X DPBSكورنينج46-013-سم
DMEMكورنينج10-017-CV
FBSLife Technologies26140079 
كولاجينلايف تكنولوجيزA1048301 
السيليكا الغروية المطلية بالبولي فينيل بيروليدونGE علوم الحياة17-0891-01
بيروفات الصوديومسيلجرو25-000-CI
البنسلين / الستربتومايسينسيلجرو30-001-CI
الأنسولينسيجماI0516-5ML
ديكساميثازونسيجماD2915-100MG
ألبومين (BSA) ، الكسر الخامسMP Biomedicals103703
24 بئر ثقافة طبقCorning Falcon353047 
Tygon S3 الأنابيب كول بارمر06460-34
ذكر Leur Lock إلى 200 موصلات شوكةCole Parmer45518-00
24 G × 3/4 "قسطرةSurFloSROX2419CA
خياطة الحرير اليدويةPerma-Hand Ethicon683G
مصفاة الخليةCorning Falcon08-771-2
IsoTemp 3013HD إعادة تدوير حمام الماءفيشر13-874-3
MasterFlex C / L مضخة تمعجيةMasterFlexHV-77122-24
MicroclampRobozRS-7438تعقيم مسبق في الأوتوكلاف
5 " مقص تشغيل مستقيم حادحاد RobozRS-6810تعقيم مسبق في الأوتوكلاف
24 مم شفرة مستقيمة ، مقص تشريح دقيق ذو نقطة حادةRobozRS-5912تعقيم مسبق في الأوتوكلاف
4 "0.8 مم طرف ملقط تشريح دقيقRobozRS-5130تعقيم مسبق في الأوتوكلاف
4 "0.8 مم طرف منحنى كامل ملقط التشريحالدقيق Roboz RobozRS-5137تعقيم مسبق في الأوتوكلاف
60 مل حقنةبيكتون ديكنسون309653
50 مل أنابيب مخروطيةكورنينج فالكون352070
BCA فحص البروتينالحراري العلمي23225
خزانة
الحيوية CO2 < / sub> حاضنة
مصلية البيتس
1,000 ، 200 ، 20 مو ؛ ل ماصة ونصائح
السلامة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Clark, J. M., Brancati, F. L., Diehl, A. M. The prevalence and etiology of elevated aminotransferase levels in the United States. The American journal of gastroenterology. 98, 960-967 (2003).
  2. Lazo, M., et al. Prevalence of nonalcoholic Fatty liver disease in the United States: the third national health and nutrition examination survey, 1988-1994. American journal of epidemiology. 178, 38-45 (2013).
  3. Angulo, P. Nonalcoholic fatty liver disease. The New England journal of medicine. 346, 1221-1231 (2002).
  4. Adams, L. A., et al. The natural history of nonalcoholic fatty liver disease: a population-based cohort study. Gastroenterology. 129, 113-121 (2005).
  5. Feldstein, A. E., et al. Hepatocyte apoptosis and fas expression are prominent features of human nonalcoholic steatohepatitis. Gastroenterology. 125, 437-443 (2003).
  6. Day, C. P., James, O. F. Steatohepatitis: a tale of two 'hits'. Gastroenterology. 114, 842-845 (1998).
  7. Donnelly, K. L., et al. Sources of fatty acids stored in liver and secreted via lipoproteins in patients with nonalcoholic fatty liver disease. The Journal of clinical investigation. 115, 1343-1351 (2005).
  8. Lambert, J. E., Ramos-Roman, M. A., Browning, J. D., Parks, E. J. Increased de novo lipogenesis is a distinct characteristic of individuals with nonalcoholic fatty liver disease. Gastroenterology. 146, 726-735 (2014).
  9. Parks, E. J., Hellerstein, M. K. Thematic review series: patient-oriented research. Recent advances in liver triacylglycerol and fatty acid metabolism using stable isotope labeling techniques. Journal of lipid research. 47, 1651-1660 (2006).
  10. Befroy, D. E., et al. Direct assessment of hepatic mitochondrial oxidative and anaplerotic fluxes in humans using dynamic 13C magnetic resonance spectroscopy. Nature medicine. 20, 98-102 (2014).
  11. Goncalves, L. A., Vigario, A. M., Penha-Goncalves, C. Improved isolation of murine hepatocytes for in vitro malaria liver stage studies. Malaria journal. 6, 169(2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة