مقالة منهجية

إجراءات Decellularization من الجرذ الأكباد في تتأرجح ضغط الإرواء الأجهزة

DOI:

10.3791/53029

⸱

أغسطس 10, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1General, Visceral, and Transplantation Surgery, Charité – Universitätsmedizin Berlin

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتيح التقنيات المقدمة لحصاد الكبد والقنية والتروية باستخدام جهازنا الخاص إعدادات التروية المتطورة لتحسين تجارب إزالة الخلايا وإعادة الخلايا في كبد الفئران.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
قد يؤدي < p class = 'jove_content'> إزالة الخلايا وإعادة خلية الأعضاء المتني إلى تمكين توليد الأعضاء الوظيفية في المختبر ، وقد تم بالفعل نشر العديد من البروتوكولات لإزالة الخلايا من كبد القوارض. كنا نهدف إلى تحسين عملية إزالة الخلايا من خلال بناء جهاز تروية خاص يتيح التروية الانتقائية عبر الوريد البابي و / أو الشريان الكبدي. علاوة على ذلك ، سعينا إلى إجراء التروية في ظل ظروف الضغط المحيطة المتذبذبة لتحسين تجانس إزالة الخلايا. كان تجانس إزالة الخلايا بالتروية عاملا تم التقليل من شأنه حتى الآن. أثناء إزالة الخلايا ، قد لا تزال المناطق داخل العضو سيئة الانتشار تحتوي على خلايا ، في حين أن المصفوفة خارج الخلية (ECM) في المناطق جيدة الانتشار قد تتأثر بالفعل بالمنظفات القلوية. يمكن أن تحاكي تغيرات الضغط المتذبذبة تغيرات الضغط داخل البطن التي تحدث أثناء التنفس لتحسين التروية الدقيقة داخل الكبد. في الدراسة المعروضة هنا ، تم تحليل مصفوفات كبد الفئران منزوعة الخلايا عن طريق التلوين النسيجي وتحليل محتوى الحمض النووي وصب التآكل. أظهر التروية عبر الشريان الكبدي نتائج أكثر تجانسا من التروية الوريدية البابية. أدى تطبيق ظروف الضغط المتذبذب إلى تحسين فعالية إزالة الخلايا بالتروية. أظهرت الكبد التي تتغذى عبر الشريان الكبدي وتحت ظروف الضغط المتذبذب أفضل النتائج. تتيح التقنيات المقدمة لحصاد الكبد والقنية والتروية باستخدام جهازنا الخاص إعدادات التروية المتطورة لتحسين تجارب إزالة الخلايا وإعادة الخلية في كبد الفئران.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Decellularization وrecellularization قد تمكن من توليد وظيفية، وأجهزة للزرع في المختبر 1. عن طريق إزالة الخلايا والمواد المستضدات (على سبيل المثال، DNA، الحواتم ألفا غال) من الجهاز، المصفوفة خارج الخلية غير أو أقل مناعة (ECM) ويمكن الحصول على. هذه المصفوفة تحافظ عليه التشريح المجهري ثلاثي الأبعاد للجهاز ويمكن أن تكون بمثابة بايوماتريكس مثالية لإعادة تعمير مع خلايا مختلفة، والأصل ربما xenogeneic 2. وبالتالي، يمكن إسكانها على decellularized الفئران مصفوفة الكبد بخلايا الكبد الإنسان. هذا أنسنة الكبد الجزئي يمكن أن تكون بمثابة نموذج فيفو السابقين للبحث في الأمراض (على سبيل المثال، الأمراض الاستقلابية الخلقية والأمراض الفيروسية أو الأورام الخبيثة) أو لاختبار الأدوية قبل السريرية 3.

وقد تم بالفعل نشر عدة بروتوكولات مختلفة للكبد الفئران نضح decellularization 13/04. في جميع البروتوكولات، decellularوقد تحقق سعودة التي نضح من المنظفات الأيونية أو غير الأيونية القلوية عن طريق الوريد البابي مقنى. إلى حد علمنا، كنا المجموعة الأولى أن يقدم الفئران decellularization الكبد عن طريق نضح انتقائية عبر الوريد البابي و / أو الفئران الشريان الكبدي 14. تمكين نضح الانتقائي للأنظمة الأوعية الدموية المختلفة في الكبد قد تمكن النتائج decellularization أفضل وعلاوة على ذلك، يمكن أن تلعب دورا هاما في إعادة تعمير الخلوية.

في دراسة مفصلة هنا، تم perfused لكبد في جهاز نضح الملكية حسب الطلب، مما نضح تحت ظروف الضغط تتأرجح. هذه الشروط ضغط تحاكي نضح الجهاز التنفسي التي تعتمد فيزيولوجي الكبد: في الوضع الطبيعي، توقف الكبد تحت حباك من الحجاب الحاجز، الذي تنقل خلال التنفس لديها تأثير مباشر على نضح الكبد. إلهام يؤدي خصيصا لتخفيض الضغط على الحجاب الحاجز والكبد، وتحسينأمراض الكبد وريدي تدفق، في حين انقضاء يؤدي إلى ارتفاع في الكبد وخفض الضغط داخل البطن لتحسين تدفق بوابة الوريدي 15.

كان هدفنا لتقييم ما إذا كانت تتأرجح ظروف الضغط يكون لها تأثير على تجانس كبد الفئران نضح decellularization عن طريق محاكاة الظروف داخل البطن خارج الحي. تجانس عملية decellularization قد يكون عاملا في التقليل من نضح decellularization. جميع مواد معروفة تستخدم لdecellularization الكبد سبب تعديلات على ECM. تبقى الخلايا في المناطق ضعيفة perfused لداخل ECM، في حين أن مناطق أخرى هي بالفعل decellularized تماما. لإذابة الخلايا المتبقية، يجب أن تكون مرتفعة مدة نضح أو ضغط، مما تسبب في مزيد من التعديلات على المناطق perfused لجيدا. وبالتالي، منظفات للdecellularization ينبغي توزيع متجانس داخل الجهاز.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بقيت الحيوانات في مرفق للطب التجريبي (FEM، شاريتيه في برلين، ألمانيا)، وأعيد النظر في جميع البروتوكولات التجريبية والتي وافق عليها مكتب الدولة لشؤون الصحة والمحلية (LAGeSo، برلين، ألمانيا؛ ريج رقم O 0365 / 11).

حصاد 1. الكبد

  1. إعداد ما قبل العمليات الجراحية
    1. استخدام لوحة الفلين لتثبيت. وضع الستارة الطبية على لوحة. باستخدام أربعة الإبر، وإصلاح قناع استنشاق على لوحة الفلين لاستنشاق أثناء العملية الخدر.
  2. بترتيب مسبق من بوابة ريدي قنية
    1. توصيل القسطرة الوريدية الطرفية (G 20) إلى محبس ثلاثي. يجب أن تقطع القسطرة الوريدية بشكل غير مباشر، ويبلغ طوله تقريبا. 1.5 سم.
    2. دي الهواء النظام باستخدام حقنة 10 مل مليئة حل قارع الأجراس. من المهم جدا أن بعناية إزالة الهواء بسبب الانسداد الغاز قد يؤثر سلبا على decellularization الارواء.
  3. بترتيب مسبقلالشرياني قنية
    1. استخدام قنية فراشة وقطع إبرة يصل طولها إلى 5 ملم. تناسب 5 سم أنبوب (ID 0.58 مم؛ OD 0.96 مم) إلى 5 ملم إبرة واصلاحها مع superglue. ادخال انبوب 2 سم طويلة (ID 0.28 مم؛ OD 0.61 مم) في أنبوب أكبر واصلاحها مع superglue.
    2. تنزلق أنبوب آخر عبر هذا البناء باعتبارها الدعامة واصلاحها مع superglue. دي الهواء قنية الشرايين مع حقنة 5 مل مملوءة بمحلول قارع الأجراس.
  4. التخدير وتسكين
    1. حمل الخدر من الفئران في غرفة تحريض التخدير بنسبة 3.5٪ الأيزوفلورين في الأكسجين بمعدل تدفق 1.5 لتر / دقيقة.
    2. لضمان تسكين آمنة خلال العملية، وضخ metamizol (100 ملغ / كغ كتلة الجسم) وجرعة منخفضة من الكيتامين / medetomidine (10 ملغ / 0.1 ملغ لكل كيلوغرام كتلة الجسم) البريتونى.
    3. توريد 1.5٪ الأيزوفلورين في 1 لتر / دقيقة الأكسجين عبر قناع استنشاق للصيانة لاحقة من التخدير الجراحي.
  5. ترتيبات ما قبل التنفيذ <رأ>
  6. حلق البطن تحرري مع آلة القص الكهربائية. بلل موقع شق حلق على البطن مع الايثانول 70٪ لتعقيم.
  7. وضع الحيوان في موقف ضعيف على لوحة مستعدة، أدخل رأسه في قناع استنشاق وتحديد أطرافه بشريط طبي والدبابيس. إزالة الايثانول الزائدة والفراء مع ضغط الشاش.
  • تقييم التخدير
    1. تقييم عمق التخدير من خلال مشاهدة معدل التنفس. عندما يبدو أن التخدير العميق بما فيه الكفاية (40-60 الأنفاس / دقيقة)، وتحقق ما إذا كان تسكين كافية من خلال محاولة لتحريك منعكس قرصة أخمص قدميه باستخدام ملقط جراحي لقرصة الجلد بين أصابع كل من أطرافه الخلفية.
  • نهج البطن
    1. جعل شق متوسط ​​في جدار البطن الذيلية فوق المثانة. قطع من هذه النقطة إلى كل من الأقواس الجانبية الساحلية بطريقة شكل حرف V. الحرص على عدم قطع في الحجاب الحاجز. سحب جدار البطن قطع على صدره.
      2. إصلاح الخنجري مع المشبك overholt، تسحبه cranially واصلاحها مع الشريط المطاطي. استخدام قطعة قطن مبللة لإخلاء الأمعاء. التفاف الأمعاء في ضمادة الشاش المبللة. وعلاوة على ذلك، تغطي جميع هامش البطن مع ضمادات مبللة.
  • إعداد الكبد
    1. تشريح الرباط المنجلي. استخدام ضمادة الشاش المبللة لعقد فصوص الكبد وسطي وترك cranially تحت قبة الحجاب الحاجز. فضح الرباط الكبدي الإثناعشري والفص العلوي الكبد ثربية.
    2. استخدام اثنين من microforceps ومقص الربيع لتشريح بعناية في الرباط التي تعلق على الفص العلوي ثربية حتى الفص هو المحمول. تحريك الفص باستخدام قطعة قطن مبللة تحت ضغط الشاش، وعقد الفصوص وسطي وتترك في مكان.
    3. بعد تعبئة العلوي الفص الكبد ثربية، تحريك المعدة إلى اليسار. إصلاح المعدة مع المشبك وتشريح الثرب طفيفة مع microforceps ومقص الربيع.
    4. تعبئة أقل ثروبل الفص الكبد حتى يتم المحمول، وبعد ذلك نقل الفص الخلفي في تجويف لها. استخدام المشبك باكهاوس الإبقاء على الاثني عشر. نقل الاثني عشر إلى اليسار لتمتد وفضح الرباط الكبدي الإثناعشري. تطويق القناة الصفراوية المشتركة في الرباط الكبدي الإثناعشري تمدد.
    5. تشريح القناة الصفراوية من الدهنية والأنسجة البنكرياس. قطع القناة الصفراوية 1.5 سم من التشعب القناة الصفراوية. تشريح الوريد البابي من الأنسجة الدهنية المحيطة بها. فضح الوريد معدي.
    6. Ligate الوريد معدي مرتين مع الحرير 6-0 وتقسيم الوريد بين الحروف المركبة 2. تشريح الجذع الاضطرابات الهضمية والشريان الكبدي شيوعا من الأنسجة المحيطة بها حتى يتم الكشف عن رامي الشرايين.
    7. تحرير الشريان معدي من الأنسجة المحيطة بها. ربط الشريان معدي مرتين مع الحرير 6-0، مع علاقات بعيدة عن بعضها البعض. تشريح الشريان معدي بين الحروف المركبة 2.
    8. تحرير الشريان الطحالمن الأنسجة المحيطة بها. ربط الشريان الطحال مرتين مع الحرير 6-0، مع علاقات بعيدة عن بعضها البعض. تشريح الشريان الطحال بين الحروف المركبة 2.
    9. تحرير الشريان المعدي الأيسر من الأنسجة المحيطة بها. ربط الشريان المعدي الأيسر مرتين مع الحرير 6-0، مع علاقات بعيدة عن بعضها البعض. تشريح الشريان بين الحروف المركبة 2.
    10. تطويق الوريد الأجوف السفلي بين الكلية اليمنى واليسرى الفص الجانبي الكبد. تشريح الوريد من الفضاء خلف الصفاق. فضح الشريان الأورطي عن طريق اتباع الجذع الاضطرابات الهضمية.
    11. تشريح الأنسجة الدهنية خلف الصفاق. حقن الهيبارين 1000 IE في 1 مل المالحة في الوريد الأجوف السفلي. سحب قنية وإغلاق شق مع وسادة من القطن. الانتظار 1-2 دقائق للتأثير النظامية الهيبارين.
    12. تطويق الشريان الأورطي بالملقط. تشريح الشريان الأورطي ويستنزف الفئران. وعلاوة على ذلك، تشريح الوريد الأجوف السفلي بشكل أقصى من الكلى.
  • بوابة ريدي كيفية تركيب الكانيولا (استخدام قنية أعدت في القسم 1.2)
    1. جعل شق الأسماك الفم في الوريد البابي البعيدة. فتح شق مع ملقط ويقني؛ يدخل القنية الوريد البابي. مسح الكبد مع 20 مل قارع الأجراس حل حتى decolorizes الكبد وإصلاح قنية مع الحروف المركبة (الحرير 6-0).
  • الشرياني كيفية تركيب الكانيولا (استخدام قنية أعدت في القسم 1.3)
    1. تشريح الشريان الأبهر فوق الجذع الاضطرابات الهضمية. تحرير قطاع الشريان الأورطي من الفضاء خلف الصفاق. قطع الجزء الشريان الأورطي طوليا لتوليد التصحيح الأبهر. إدراج قنية يتم بناؤه ذاتيا إلى حامل ثابت.
    2. استخدام 2 ملقط لتنزلق التصحيح الأبهر خلال قنية. Ligate الشريان الكبدي مع الحرير 6-0 على قنية وإصلاح التصحيح في دعمة.
  • Explantation الكبد
    1. فتح الحجاب الحاجز، وجعل شق دائري وتشريح الكبد من الهياكل المحيطة بها.
  • تخزين
    1. ستوإعادة الكبد في العقيمة دبابة 500 مل مليئة 350 مل قارع الأجراس حل حتى الاستخدام.

    • 2. حلول منظفات

    1. 10٪ محلول تريتون X-100 الأوراق المالية
      1. ملء زجاجة 1000 مل مع 900 مل ماء مقطر. وإضافة 100 مل تريتون X-100 (99،9٪). استخدام النمام بحل تريتون X-100. ملء زجاجة مع ماء مقطر. حتى بلغ حجم التداول الإجمالي ل1000 مل يتم التوصل إليه.
    2. 1٪ تريتون X-100
      1. إضافة 100 مل من محلول المخزون (10٪) لزجاجة 1000 مل. إضافة 900 مل ماء مقطر. ويهز زجاجة مرتين. تصفية 1٪ تريتون X-100 حل من خلال تصفية العقيمة.
    3. 10٪ SDS محلول المخزون
      1. ملء زجاجة 1000 مل مع 900 مل ماء مقطر. وإضافة 66.99 ز SDS (99.9٪، والكثافة 0،67). استخدام النمام إلى حل SDS. ملء زجاجة مع ماء مقطر. حتى بلغ حجم التداول الإجمالي ل1000 مل يتم التوصل إليه.
    4. 1٪ SDS
      1. إضافة 100 مل من محلول المخزون (10٪) لبوت 1000 ملTLE. إضافة 900 مل ماء مقطر. ويهز زجاجة مرتين. تصفية 1٪ SDS الحل من خلال تصفية العقيمة.

    3. Decellularization

    1. انشاء التروية الأجهزة figure-protocol-1

    الشكل 1: مخطط الجهاز الإرواء عن الانتقائية الشرياني والوريدي بوابة الإرواء من أربعة الأكباد الجرذ تحت ظروف الضغط تتأرجح (. معدلة من Struecker وآخرون 14)

    1. ربط هجرة إلى محبس ثلاثي وتمديد هايدلبيرغر لتنظيم مستوى التعبئة والتعبئة المفاعل مع 500 مل 0،9٪ كلوريد الصوديوم.
      figure-protocol-2

    الشكل 2: مخطط نضح انشاء ربط غرفة التروية (1400 سم 3) (1) إلى نهاية البعيدة (4) من فخ فقاعة (5) عن طريق وصول الوريدي البابي (2) أو عن طريق تيار الدمسيس (3). يجب أن تكون مجهزة فخ فقاعة (5) مع سد (4) في نهاية القاصي وتنفيس (6). ربط فخ فقاعة (5) على تمديد هايدلبيرغر (7). ربط تمديد هايدلبيرغر إلى الجزء مضخة (8). وعلاوة على ذلك، ربط الجزء مضخة (8) لتمديد هايدلبيرغر آخر (9). إدراج تمديد هايدلبيرغر الماضي (9) في زجاجة محلول منظف (10). توصيل جهاز التنفس الصناعي (11) إلى غرفة نضح (أو إلى الموزع الضغط في حالة perfusions متعددة). لاستنزاف السوائل المفاعل، وربط التدفقات إلى زجاجة النفايات (12).

    1. إدراج شريحة مضخة إلى المضخة. بدء تشغيل المضخة لملء دورة مع PBS، إغلاق نهاية البعيدة للفخ فقاعة وفتح تنفيس. عندما يتم تغطية الجزء السفلي من فقاعة آمن مع PBS (2-3 سم)، وإغلاق تنفيس وفتح النهاية البعيدة من فخ فقاعة.
    2. تركيب الكبد
      1. ربط ثلاثي محبس للقنية الوريد البابي إلى الوصول مفاعل ذات الصلة. Connect قنية الشرياني إلى الوصول الشرايين. كن حذرا لضمان عدم وجود الهواء يدخل الأنظمة.
    3. تطبيق الشروط ضغط تتأرجح
      1. استخدام جهاز التنفس الصناعي مع تردد من 15 نبضة في الدقيقة وسعة 26 ملي بار (دقيقة. 4 م بار، كحد أقصى. 30 مليبار). توصيل جهاز التنفس الصناعي لغرفة توزيع الضغط وربط غرفة للمفاعل. بدء تطبيق الضغط.
    4. بروتوكول Decellularization
      1. تنفيذ الخطوات نضح بمعدل تدفق 5 مل / دقيقة. بدء decellularization مع نضح من الكبد مع 1٪ تريتون X-100 لمدة 90 دقيقة. السماح دفق النفايات عبر تدفق الجهاز نضح للحفاظ على مستوى السوائل داخل ثابتة غرفة نضح وفوق الكبد perfused ل. بعد 90 دقيقة، وتغيير المنظفات ل1٪ SDS.
        figure-protocol-3
        figure-protocol-4

    الشكل (3): بروتوكول الإرواء لجميع المجموعات التجريبية.

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    النتائج

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    تم تقييم تجانس وبالتالي فعالية بروتوكولات decellularization مختلفة عن طريق الملاحظة العيانية، التحليل النسيجي، وتحليل محتوى الحمض النووي المتبقية ضمن مصفوفات الكبد decellularized. وعلاوة على ذلك، تم إجراء التآكل الصب لتصور التشريح المجهري سليمة من كبد بعد decellularization.

    الفحص العياني

    خلال decellularization، كبد تصبح لوسنت، مما يدل على إزالة ...

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المناقشة

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    على الرغم من أن هذه التقنية المقدمة للحصاد كبد الفئران وdecellularization هي استنساخه بسهولة، وهناك بعض الخطوات الحاسمة للنظر:

    أثناء التحضير للحصاد الكبد، فمن المهم تجنب نزيف حاد لأنه سيتم تنشيط تجلط الدم ويمكن أن يؤدي إلى تشكل جلطة دموية داخل الكبد. في رأينا، فإنه من المفيد أن شق الشريان الأورطي البطني مباشرة قبل إقناء؛ إدخال القنية من الوريد البابي لتجنب تدفق الدم عبر الشريان الكبدي خلال نضح عبر الوريد البابي. ...

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    الإفصاحات

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

    شكر وتقدير

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    يود المؤلفون أن يشكروا بامتنان ستيفن ليبرت وخالد علييف وكورينا يوهرنز وكاثرينا ستروكر على مساعدتهم خلال هذا المشروع.

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المواد

    قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
    الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
    قنية شريانية ذاتية البناء
      أنابيب البولي إيثيلين غير المعقمةPortex SIMS PortexREF 800/110/1000.28 مم معرف 0.61 مم OD
    & nbsp ؛ أنابيب البولي إيثين غير المعقمة PortexSIMS PortexREF 800/110/2000.58 مم معرف 0.96 مم OD
    Venodrop قسطرة فراشة آمنةFresenius Kabi327585121 G
    قنية الوريد
    المحيطي القسطرة الوريديةBD393224BD Venflon Pro 20G
    حدادين محبس ثلاثي الاتجاهاتطبي888-101RE
    Hecht-Assistent4302
    وسادات قطنية   ؛Shaoxing Zhengde ضمادة جراحية13H118-03
    ضمادة شاشHubei Haige   ؛ الأدوات الطبية14388
      رينجر سولوشنفريسينيوس كابي13 HKP0221000 مل
    10 مل حقنةبراون4606108 فولت10 مل / لوير سولو
    5 مل حقنةبراون4606061 فولت5 مل /
    خياطة لور سولو (حرير 6/0)ريسورباH1FLOT 105001.81
    ثنى طبيشاوشينغ تشنغده ضمادة جراحيةD0613011
    surgical حامل
    إبرةGeuder17570
    ملقط صغيرInox-Electronic91150-20
    مقص صغيرMartin11-740-11
    ملقط صغيرS & T 112314
    المشبكAesculapBH111R
    مقصF S T & nbsp ؛14501-14
    ملقط جراحيAesculapدينار بحريني 557
    جهاز التنفس الصناعي لإزالة الخلايا
    Resmed14.24.11.0004جهاز التروية SmartAIR ST
    Charite ، مختبر الهندسة الطبيةجهازإزالة الخلايا حسب الطلب جهاز إزالة الخلايا
    مضخة التمعج ismatec reglo ICCIDEXISM4408 4 قنوات
    امتداد هايدلبرغر 75 سم  Fresenius Kabi287375 سم
    MS / CA مضخة قطعةIDEXIS 3510  MS / CA / click'n'go / POM-C
    CA 2-سدادة أنبوبPharmedBPT NSF-51
    فخ الفقاعات  المصنوع
    Neolabرقم 02-1887
    المنظفات
    كريات SDSCarl Roth & nbsp ؛CN30.4 2.5 كجم
    Triton X-100Carl Roth 3051.1 10 لتر
    PBS Gibco14190-094DPBS
    تلطيخ
    Eosin 1٪Morphisto10177
    Mayer hematoxylinAppliChemA4840
    gomori تلطيخMorphisto11104
    AlcainBlue-PAS تلطيخMorphisto11388
    Direct Red 80 & nbsp ؛سيجما ألدريتش365548
    <td colspan = "4" >العصي القطنية الجراحية الأدوات موصل خرطوم Luer Lock حسب الطلب

    المراجع

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Struecker, B., Raschzok, N., Sauer, I. M. Liver support strategies: cutting-edge technologies. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11, 166-176 (2014).
    2. Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 32, 3233-3243 (2011).
    3. Wang, X., et al. Decellularized liver scaffolds effectively support the proliferation and differentiation of mouse fetal hepatic progenitors. J Biomed Mater Res A. , (2013).
    4. Uygun, B. E., et al. Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nat Med. 16, 814-820 (2010).
    5. Shupe, T., Williams, M., Brown, A., Willenberg, B., Petersen, B. E. Method for the decellularization of intact rat liver. Organogenesis. 6, 134-136 (2010).
    6. Bao, J., et al. Construction of a portal implantable functional tissue-engineered liver using perfusion-decellularized matrix and hepatocytes in rats. Cell transplantation. 20, 753-766 (2011).
    7. Baptista, P. M., et al. The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid. Hepatology. 53, 604-617 (2011).
    8. Soto-Gutierrez, A., Wertheim, J. A., Ott, H. C., Gilbert, T. W. Perspectives on whole-organ assembly: moving toward transplantation on demand. J Clin Invest. 122, 3817-3823 (2012).
    9. Soto-Gutierrez, A., et al. A whole-organ regenerative medicine approach for liver replacement. Tissue engineering. Part C, Methods. 17, 677-686 (2011).
    10. De Kock, J., et al. Simple and quick method for whole-liver decellularization: a novel in vitro three-dimensional bioengineering tool. Archives of toxicology. 85, 607-612 (2011).
    11. Park, K. M., Woo, H. M. Systemic decellularization for multi-organ scaffolds in rats. Transplantation proceedings. 44, 1151-1154 (2012).
    12. Shirakigawa, N., Ijima, H., Takei, T. Decellularized liver as a practical scaffold with a vascular network template for liver tissue engineering. J Biosci Bioeng. , (2012).
    13. Ren, H., et al. Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold. Liver Int. 33, 448-458 (2013).
    14. Struecker, B., et al. Improved rat liver decellularization by arterial perfusion under oscillating pressure conditions. J Tissue Eng Regen Med. , (2014).
    15. Struecker, B., et al. Porcine Liver Decellularization Under Oscillating Pressure Conditions: A Technical Refinement to Improve the Homogeneity of the Decellularization Process. Tissue engineering. Part C, Methods. , (2014).

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    إعادة الطباعة والأذونات

    طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

    طلب إذن

    الوسوم

    Triton X 100 SDS DNA

    مقالات ذات صلة