وغالبا ما تتضمن هندسة الأنسجة في التوسع في المختبر من أجل خلق طعم ذاتي لتجديد الأنسجة. في هذه الدراسة تم تطوير طريقة لتوسيع الأنسجة، وتجديد، وإعادة البناء في الجسم الحي من أجل تقليل تجهيز الخلايا والمواد البيولوجية خارج الجسم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الأنسجة المفروم في المضغوط الكولاجين: وBiotransplant التي تحتوي على خلية لإصلاح الترميمية نظموا وحيد
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن أن تتم التقنيات التقليدية لتوسيع الخلايا وزرع الخلايا الذاتية لأغراض هندسة الأنسجة في مرافق زراعة الخلايا البشرية المجهزة بشكل خاص. تشمل هذه الطرق عزل الخلايا في معلق خلية واحدة والعديد من الأحداث الشاقة والمستهلكة للوقت قبل إعادة الزرع إلى المريض. تشير الدراسات السابقة إلى أنه يمكن استخدام الجسم نفسه كمفاعل حيوي لتوسيع الخلايا وتجديد الأنسجة من أجل تقليل التلاعب خارج الجسم الحي بالأنسجة والخلايا قبل الزرع للمريض. كان الهدف من هذه الدراسة هو إظهار طريقة لحصاد الأنسجة ، وعزل الظهارة المستمرة ، وفرم الظهارة إلى قطع صغيرة ودمجها في مادة حيوية ثلاثية الطبقات. ثم عملت المادة الحيوية ثلاثية الطبقات كوسيلة توصيل ، للسماح بالمناولة الجراحية ، وتبادل التغذية عبر عملية الزرع ، والتدهور الخاضع للرسائر. تتكون المادة الحيوية من طبقتين خارجيتين من الكولاجين ونواة بوليمر مستقر ميكانيكيا وقابل للتحلل ببطء. تم دمج الظهارة المفرومة في إحدى طبقات الكولاجين قبل الزرع. عن طريق فرم الأنسجة الظهارية إلى قطع صغيرة ، يمكن أن تنتشر القطع وبالتالي يتم تحفيز انتشار الخلايا. بعد الأخذ الأولي لعمليات الزرع ، سيحدث توسيع الخلايا وإعادة تنظيمها وتنضج المصفوفة خارج الخلية للسماح بنمو الشعيرات الدموية والأعصاب ومزيد من نضوج المصفوفة خارج الخلية. تقلل هذه التقنية من التلاعب خارج الجسم الحي وتسمح بحصاد الخلايا وإعداد الطعم الذاتي والزرع للمريض كتدخل بسيط من مرحلة واحدة. في المستقبل ، يمكن البدء في توسيع الأنسجة حول قالب ثلاثي الأبعاد داخل الجسم نفسه ، وفقا للاحتياجات المحددة للمريض. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إجراء هذه التقنية في بيئة جراحية عادية دون الحاجة إلى مرافق زراعة خلايا متطورة.
المقدمة
وتشمل معظم الدراسات هندسة الأنسجة على زرع على الجلد والجهاز البولي التناسلي المحاصيل خلية ذاتي من الأنسجة السليمة وتوسيع الخلية في مرافق زراعة الخلايا مجهزة خصيصا 1،2.
بعد توسيع الخلية، وعادة ما تكون مخزنة الخلايا لاستخدامها لاحقا عندما يتم تحضير المريض لتلقي الطعم الذاتي. المجمدات النيتروجين تسمح التخزين على المدى الطويل في درجات حرارة منخفضة من -150 درجة مئوية أو أقل. ويجب أن تكون عملية تجميد دقيق والتحكم حتى لا تفقد الخلايا. خطر واحد من موت الخلايا وتبلور الماء داخل الخلايا أثناء عملية ذوبان الجليد، والتي يمكن أن تؤدي إلى تمزق أغشية الخلايا. عادة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقبل الموافقة على جميع البروتوكولات الحيوان من قبل لجنة مقاطعة ستوكهولم على الحيوانات ويتفق جميع الإجراءات لوائح للاستخدام الحيواني، وكذلك القوانين الاتحادية ذات الصلة.
1. إجراءات الحيوان
- إعداد الحيوان للجراحة
- إعداد طاولة الجراحة مع جميع المواد والأدوات اللازمة لتشغيل تحت ظروف معقمة. إجراء عملية جراحية على وجه الحصر تحت ظروف معقمة للحد من خطر العدوى وتحسين الأوضاع في جراحة بقاء.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تقدم هذه الدراسة طريقة يوضح كيفية إنتاج مادة بيولوجية للزرع باستخدام ضغط البلاستيك الكولاجين والأنسجة المفروم.
مخاطية المثانة والجلد ويمكن أن تحصد ثم مفروم ميكانيكيا الى جزيئات صغيرة (الشكل 3). بواسطة ضغط من البلاستيك، وتدرج الجسيمات المفروم داخل سقالة مركبة تتألف من البوليمر قابلة للتحلل وضعها مركزيا الذي هو قوي ميكانيكيا في الطبقات الخارجية من هلام الكولاجين (الشكل 4). جزيئات ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تقدم هذه الدراسة مقاربة الاستخدام السهل أن تنتج بقع جدار المثانة مع الأنسجة ذاتي للزرع على طاولة العمليات الجراحية. تتشكل بقع من قبل مجموعة من الحياكة بوليمر قابلة للتحلل في الوسط والكولاجين مع وبدون الأنسجة المفروم في الأسطح الخارجية في تركيبة مع ضغط من البلاستيك. ضغط البلاستيك هو الطريقة الموصوفة سابقا من قبل مؤلفين آخرين، ويمكن تعريفها بأنها الطرد السريع من السوائل من المواد الهلامية الكولاجين 12،13. والمصنف الأنسجة المفروم من الغشاء المخاطي المثانة أو الجلد في هذه ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون الجمعية السويدية للبحوث الطبية ، ومؤسسة بروموبيليا ، ومؤسسة ولي العهد الأميرة لوفيزا ، ومؤسسة الماسونية لرعاية الأطفال ، والجمعية السويدية للطب ، ومؤسسة سولستيكان ، ومعهد كارولينسكا ، ومجلس مدينة ستوكهولم على الدعم المالي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| قسطرة سيليكون 10-فرنسي | تحضير للجراحة ، القسم 1 | ||
| DMEM 10x | Gibco | 31885-023 | قسم ضغط البلاستيك 4 |
| 24 ألواح البئر Falcon | 08-772-1 | قسم ضغط البلاستيك 4 | |
| 3 '، 3 '، 5-Triiodothyronine | Sigma-Aldrich | IRMM469 | In vitro < / em > ثقافة ؛ القسم 5 |
| 4٪ PFA | Labmed Solutions | 200-001-8 | الكيمياء المناعية. القسم 6 |
| 70٪ الإيثانول | Histolab | الكيمياء المناعية ؛ القسم 6 | |
| مجموعة ABC Elite: مجموعة الكشف عن البيوتين والستربتافيدين | Vector | PK6102 | Immunocytocytochemistry ؛ القسم 6 |
| الإيثانول المطلق | Histolab | 1399.01 | الكيمياء المناعية. القسم 6 |
| Adenine | Sigma-Aldrich | A8626 | in vitro< / em> ثقافة. القسم 5 |
| الأتروبين 25 & جم / كجم | Temgesic ، RB Pharmaceuticals ، بريطانيا | العظمى إعداد للجراحة ، القسم 1 | |
| Azaperone 2 & thinsp ؛ ملغ / كجم | Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, النمسا | تحضير للجراحة, القسم 1 | |
| السلامة الحيوية المستوى 2 غطاء محرك السيارة | ضغط البلاستيك القسم 4 | ||
| الحظر: تم إنشاء مصل طبيعي من نفس النوع مثل الجسم المضاد الثانوي الثانوي. | ناقلات | يعتمد حل الحجب على أصل الجسم المضاد الأول | للكيمياء المناعية. القسم 6 |
| بوبرينورفين 45 & mu; جم / كجم | أتروبين ، شركة ميلان ، كانونسبورغ ، بنسلفانيا | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| كاربروفين 3 & thinsp ؛ ملغ / كجم | Rimadyl ، Orion Pharma ، السويد | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| غلوكونات الكلورهيكسيدين ؛ | كركديه 40 & thinsp ؛ ملغ / مل ، ريجنت الطبية ، إنجلترا | إعداد للجراحة ، القسم 1 | |
| الكوليرا | سيجما ألدريتش | C8052 | في المختبر < / م > ثقافة. القسم 5 |
| جرة كوبلين: جرة تلطيخ لغلي | Histolab | 6150 | الكيمياء المناعية. القسم 6 |
| غير قابل للصدأ (33 مم × 22 مم × 10 مم) | ؛ القسم 4 | ||
| DMEM | Gibco | 3188-5023 | البلاستيك القسم 4. ابق على الجليد عند استخدامه في ضغط البلاستيك |
| عامل نمو البشرة | سيجما ألدريتش | E9644 | في المختبر < / م > ثقافة; القسم 5 |
| Ethilon (الشعيرات الأحادية غير القابلة للامتصاص لخيوط الجلد)جراحة | الإيثيكون | ، القسم 1 | |
| مصل الأبقار الجنينية (FBS) | Gibco | 10437-036 | البلاستيك القسم 4 |
| ملقط (أديسون مع الأسنان) تحضير | للجراحة ، القسم 1 | ||
| شاش (Gazin Mullkompresse) | تحضير للجراحة ، القسم 1 | ||
| Ham's F12 | Gibco | 31765-027 | قسم ضغط البلاستيك 4 |
| Hematoxylin | Histolab | 1820 | Immunocytochemistry ؛ القسم 6 |
| غرفة الرطوبة | DALAB | الكيمياء المناعية. القسم 6 | |
| هيدروكورتيزون | سيجما ألدريتش | H0888 | في المختبر < / م > ثقافة; القسم 5 |
| محلول بيروكسيد الهيدروجين 30٪ | سيجما ألدريتش | H1009 | الكيمياء المناعية ؛ القسم 6 |
| الأنسولين | سيجما ألدريتش | I3536 | في المختبر< / em> ثقافة; القسم 5 |
| Isoflurane | Isoflurane ، باكستر ، ديرفيلد ، إلينوي | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| ليدوكائين 5 مجم / مل | زيلوكايين ، أسترازينيكا ، السويد | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| Lucose 25 & thinsp ؛ ملغ / مل | باكستر ، ديرفيلد ، إلينوي | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| قلم | قلم Sigma-Aldrich | Z377821-1EA | Immunocytochemistry ؛ القسم 6 |
| Medetomidine 25 & mu; جم / كجم | Domitor ، Orion Pharma ، السويد | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| جهاز الفرم | Applied Tissue Technologies LLC | تحضير الأنسجة المفرومة ، القسم 2 | |
| Monocryl (الشعيرات الأحادية القابلة للامتصاص) | جراحة الإيثيكون | ، القسم 1 | |
| كلوريد الصوديوم | سيجما-ألدريتش | S7653 | الكيمياء المناعية ؛ القسم 6 |
| هيدروكسيد الصوديوم 1 N | Merck Millipore | 106462 | قسم ضغط البلاستيك 4 وشبكة نايلون ثقافة |
| الخلية ، 110 & mu ؛ M حجم المسام السميكة 0.04 ضغط البلاستيك sqmm | . القسم 4 | ||
| Oculentum simplex APL: مرهم لحماية العين | جراحة 336164 APL | Vnr | ، القسم 1 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | قسم ضغط البلاستيك 4 |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | قسم ضغط البلاستيك 4 |
| Phenobarbiturate 15 & nbsp ؛ ملغ / كجم | Pentobarbital ، APL ، السويد | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| PCL محبوك النسيج | ضغط البلاستيك ؛ القسم 4 | ||
| ذيل الفئران الكولاجين | First LINK، Ltd ، المملكة المتحدة | 60-30-810 | قسم ضغط البلاستيك 4 ، حافظ على شفرة مشرط الثلج |
| - 15 | تحضير للجراحة ، القسم 1 | ||
| مقصات | تحضير للجراحة ، القسم 1 | ||
| شبكة الفولاذ المقاوم للصدأ ، 400 & nbsp ؛ مو M حجم | السميكة ضغط البلاستيك. القسم 4 | ||
| قفازات | تحضير للجراحة ، القسم 1 | ||
| العباءات | تحضير للجراحة ، القسم 1 | ||
| الستائر | |||
| Sterilium | Bode Chemie HAMBURG | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| خياطة خيط Ethilon | تحضير للجراحة الجراحة ، القسم 1 | ||
| محلول TE (محلول كشف القناع بالمستضد) يتكون من 10 ملي تريس و 1 ملي EDTA ، درجة الحموضة 9.0 | 10 ملي تريس / 1 ملي مولار EDTA ، ؛ ضبط درجة الحموضة على 9.0 | ||
| تيليتامين هيبوكلوريد 2.5 ملغ / كغ | إعداد للجراحة ، القسم 1 | ||
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158< | em>in vitro < / em > ثقافة ؛ القسم 5 |
| قاعدة تريزما ، H2NC | سيجما ألدريتش | T6066 | الكيمياء المناعية. القسم 6 |
| مجموعة ناقلات VIP: إنزيم مجموعة ركيزة بيروكسيداز | Vector | SK4600 | Immunocytochemistry ؛ القسم 6 |
| فيكريل (مخطط قابل للامتصاص) | جراحة الإيثيكون | ، القسم 1 | |
| تريس عازلة درجة الحموضة 7.6 (محلول الغسيل) | محلول TE: اصنع 10x (0.5 م تريس ، 1.5 م كلوريد الصوديوم) عن طريق الخلط: 60.6 جم تريس (قاعدة تريزما ، H2< / sub>NC (CH2< / sub>OH) 3< / sub> ، م = 121.14 جم / مول) ، أضف 800 مل من الماء المقطر ، واضبط الرقم الهيدروجيني حتى 7.6 ، أضف 87.7 جم كلوريد الصوديوم واملأه حتى 1,000 مل بالماء المقطر. خفف إلى 1x بالماء المقطر. | ||
| X-tra solv (مذيب) DALAB | 41-5213-810 | الكيمياء المناعية ؛ القسم 6. استخدم تحت غطاء الدخان | |
| زولازيبام هيبوكلوريد | زوليتيل ، فيرباك ، فرنسا | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| شرائط الشمع لإزالة الشعر | Veet | تحضير للجراحة ، القسم 1 | |
| الصوديوم Pentobarbital | Lundbeck | ، القسم 3 |
المراجع
- Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
- Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered uri....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
