نصف مقايسة حساسية الدواء عالية الإنتاجية لخلايا الورم النقوي المتعدد الأولية. وهو يتألف من إعادة بناء البيئة المكروية لنخاع العظم (بما في ذلك المصفوفة خارج الخلية والسدى) في ألواح متعددة الآبار ، وطريقة غير جراحية للقياس الكمي الطولي لصلاحية الخلية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نظام عضوي إنتاجية عالية لتوصيف الدواء حساسية خلايا المايلوما المتعددة الابتدائية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في هذا العمل وصفنا نهج الرواية التي تجمع بين خارج الجسم الحي المقايسات حساسية العقاقير وتحليل الصور الرقمية لتقدير chemosensitivity وتجانس المايلوما المتعددة (MM) الخلايا المشتقة من المريض. هذا النهج يتمثل في بذر خلايا MM الأولية المستخرجة حديثا من شفاطات نخاع العظم في غرف ميكروفلويديك تنفيذها في لوحات متعددة جيدا، يتألف كل منها من إعادة بناء المكروية نخاع العظم، بما في ذلك المصفوفة خارج الخلية (الكولاجين أو الغشاء القاعدي المصفوفة) وسدى (patient- الخلايا المشتقة الجذعية الوسيطة) أو الخلايا البطانية المستمدة البشرية (HUVECs). يتم تخديره غرف مع وكلاء وتركيزات مختلفة، ويتم تصوير متتالي لمدة 96 ساعة من خلال مشرق المجهري الميدان، في المجهر الآلية مزودة بكاميرا رقمية. الرقمي صورة برامج التحليل بالكشف عن الخلايا الحية والميتة من وجود أو عدم وجود حركة الغشاء، ويولد منحنيات التغير في جدوى بوصفها وظيفة سو تركيز الدواء ومدة التعرض. نستخدم النموذج الحسابي لتحديد معالم chemosensitivity من السكان الورم إلى كل دواء، فضلا عن عدد من السكان الفرعي الحالي كمقياس للورم عدم التجانس. ويمكن بعد هذه النماذج مصممة خصيصا المريض استخدامها لمحاكاة الأنظمة العلاجية وتقدير الاستجابة السريرية.
المقدمة
والهدف من هذه الطريقة هو أن تميز حساسية العقاقير من المايلوما المتعددة (MM) الخلايا الأولية إلى لجنة من وكلاء خارج الحي، في أقرب وقت ممكن إلى الظروف الفسيولوجية، وبدقة كافية أن هذه النتائج يمكن استخدامها لتحديد chemoresistant الفرعية السكان داخل عبء الورم و، في نهاية المطاف، إلى بالحدود نماذج حسابية تهدف إلى تقدير استجابة سريرية.
النماذج الحسابية هي أدوات قوية لتحليل النظم المعقدة، مثل التفاعلات السرطان في استضافة العلاج. ومع ذلك، ليست سوى نماذج جيدة مثل البيانات المستخدمة لبالحدود لهم. لسوء الحظ، فإن معظم البيانات المتاحة في الأدب لا يمكن استخدامها ف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
استخدام الخلايا البشرية المستمدة من الخزعات كما هو موضح أدناه والتي وافق عليها مجلس موفيت في المراجعة المؤسسية والتي أجريت تحت التجربة السريرية MCC # 14745 أجريت في مركز السرطان لي موفيت H. ومعهد بحوث.
1. فرز الخلايا MM من نخاع العظم شفاطات
- جمع شفاطات نخاع العظم (20 مل) من المرضى في هيبارين الصوديوم حقنة.
- عزل الخلايا وحيدات النوى بواسطة الطرد المركزي نخاع المخفف (1: 1 مع برنامج تلفزيوني العقيمة) على العقيمة مائي المتوسطة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوصف تدفق التجربة لفترة وجيزة في الشكل 1 إذا تم الانتهاء من جميع الخطوات بنجاح، يجب أن الصور التي حصلت عليها المجهر معادلا إلى الشكل 2: يعيش خلايا MM ينبغي النظر بوضوح الأقراص كما مشرق وBMSCs أو HUVECs ينبغي أن يكون بالكاد مرئية وتوزع بشكل جيد في الخلفية. كما رأينا في الشكل 2A، خلايا MM تتراوح في حجمها من مريض إلى آخر، ولكن بشكل عام هم أصغر من خطوط الخلايا. لأنها عمليا لا تكرار السابقين فيفو خلال فترة التجربة (96 ساعة) ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
باختصار، هذا هو وسيلة قوية وعالية الإنتاجية لتحديد chemosensitivity الخلايا MM الابتدائية وخارج الحي الدوائية للأدوية في إعادة بناء نخاع العظم. الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول هي بذر السليم للآبار وتركز كافية (انظر الشكل 2 للنتائج المتوقعة): تأكد من أن الخلايا MM وانسجة تتوزع بشكل موحد، أن الخلايا اللحمية هي ملتصقة إلى قاع البئر، أن جميع MM الخلايا في نفس المستوى البؤري، وأن الخلايا MM لديها جانب من جوانب القرص مشرق تحيط بها حلقة مظلمة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذا البحث من قبل دولة بانكهد-كولي الفريق العلمي منحة ولاية فلوريدا (2BT03)، والمعاهد الوطنية لل/ المعهد الوطني للسرطان الصحة (1R21CA164322-01) ومركز موفيت للسرطان علوم فريق غرانت. وقد تم دعم هذا العمل في جزء من مرفق بالحركة البحوث الأساسية في لي موفيت للسرطان ومعهد بحوث H.، وهو مركز السرطان الشامل NCI المعينة (P30-CA076292). تم الحصول على الخلايا الأولية ممكن من خلال بروتوكول رعاية مرضى السرطان إجمالي في مركز موفيت للسرطان.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجهر رقمي EVOS FL AUTO | AMG | + AMC1000 | مزود بحاضنة مسرح آلية ومقاعد البدلاء. |
| 384-بئر لوحة CellBind | CORNING | CLS3683 SIGMA | Corning CellBIND 384 ألواح بئر 384 لوحة بئر ، بوليسترين ، سطح CellBIND ، معقم ، قاع مسطح شفاف ، أسود ، مع غطاء |
| 1،536 لوحة بئر CellBind | CORNING | CLS3832 ALDRICH | Corning 1،536 ألواح بئر ، قاعدة منخفضة ، معالجة سطحية CellBIND ، معقمة |
| Ficoll-Paque Plus ؛ | GE Healthcare | GE17-1440-02 SIGMA | ل in vitro< / em> عزل الخلايا الليمفاوية عن الدم المحيطي للإنسان. |
| CD138 الخرز المغناطيسي | Miltenyi | 130-051-301 | حبات مغناطيسية مترافقة بالأجسام المضادة لاختيار خلايا CD138 +. |
| أعمدة LS | Miltenyi | 130-042-401 | عمود لفصل الخلايا. |
| فاصل MidiMACS | Miltenyi | 130-042-302 | مغناطيس لعمود الفصل. |
| Matrigel | Sigma-Aldrich | E6909 SIGMA | ECM Gel من Engelbreth-Holm-Swarm ساركوما الفئران |
| Getrex | Life Technologies | A1413201 | مصفوفة غشاء أساسي خالية من LDEV |
| HUVEC | Life Technologies | C-003-25P-B | الخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVEC |
| RPMI-1640 media | GIBCO | 11875-093 | RPMI 1640 متوسطة + L-Glutamine + Phenol Red |
| FBS | GIBCO | 10082-147 | مصل الأبقار الجنيني المعطل بالحرارة ، معتمد ، معطل بالحرارة ، أمريكي |
| الأصل 3.1 مجم / مل كولاجين بقري من النوع الأول | Advanced Biomatrix | 5005-B | الكولاجين البقري ، النوع الأول ، 3 مجم / مل ، 100 مل |
| الماصات الروبوتي | Precision XS | BIOTEK | PRC3841 |
المراجع
- Salmon, S. E., et al. Quantitation of differential sensitivity of human-tumor stem cells to anticancer drugs. N Engl J Med. 298, 1321-1327 (1978).
- Suggitt, M., Bibby, M. C. 50 years of preclinical anticancer drug screening: empir....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
