يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

باستخدام كاتشو-2 خلايا لدراسة نقل الدهون من الأمعاء

19.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/53086

⸱

أغسطس 20, 2015

 , 
1Department of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, College of Pharmacy, California Northstate University, 2Department of Biomedical Sciences, James H. Quillen College of Medicine, East Tennessee State University

في هذه المقالة

ملخص

يمكن أن تعمل خلايا Caco-2 < p class = 'jove_content'> كنموذج في المختبر لدراسة نقل الخلايا المعوية للدهون والأدوية / الفيتامينات القابلة للذوبان في الدهون. يفصل نظام الغشاء القابل للاختراق القمي عن الحيز القاعدي الجانبي ، بينما يوفر نظام التعبير عن الفيروس العدسي طريقة فعالة للتعبير الجيني المفرط. يتم تأكيد عزل البروتينات الدهنية بواسطة TEM.

الملخص

يتم إجراء دراسات امتصاص الدهون الغذائية بشكل عام باستخدام نموذج حيواني مجهز بقنية ليمفاوية. على الرغم من أن هذا النموذج الحيواني مقبول على نطاق واسع باعتباره نموذجا في الجسم الحي لامتصاص الدهون الغذائية ، إلا أن التقنيات الجراحية المتضمنة صعبة ومكلفة. كما أن التلاعب الجيني بالنموذج الحيواني مكلف ويستغرق وقتا طويلا. يمكن القول إن النموذج البديل في المختبر ميسور التكلفة وموفر للوقت وأقل تحديا. الأهم من ذلك ، أن النموذج المختبري يسمح للمحققين بفحص الخلايا المعوية كنظام معزول ، مما يقلل من التعقيد المتأصل في نموذج الكائن الحي بأكمله. تصف هذه الورقة كيف يمكن لخلايا سرطان القولون البشري (Caco-2) أن تكون بمثابة نموذج في المختبر لدراسة نقل الخلايا المعوية للدهون والأدوية والفيتامينات القابلة للذوبان في الدهون. يشرح الصيانة المناسبة لخلايا Caco-2 وإعداد خليط الدهون الخاص بها. ويناقش كذلك الخيار القيم لاستخدام نظام الغشاء النفاذ. نظرا لأن خلايا Caco-2 المتمايزة مستقطبة ، فإن الميزة الرئيسية لاستخدام نظام الغشاء القابل للاختراق هي أنه يفصل القمي عن المقصورة القاعدية الجانبية. وبالتالي ، يمكن إضافة خليط الدهون إلى الحيز القمي بينما يمكن جمع البروتينات الدهنية من الحيز القاعدي. بالإضافة إلى ذلك ، تمت مناقشة فعالية نظام تعبير الفيروس في تنظيم التعبير الجيني في خلايا Caco-2. أخيرا ، تصف هذه الورقة كيفية تأكيد العزل الناجح للبروتينات الدهنية المعوية عن طريق المجهر الإلكتروني (TEM).

المقدمة

ويمكن إجراء دراسات من امتصاص الأمعاء للدهون الغذائية، وعقاقير الدهون القابلة للذوبان والفيتامينات في الجسم الحي باستخدام نموذج ناسور اللمف 1-4. ومع ذلك، فإن التقنيات الجراحية المعنية ليست صعبة فقط، ولكن مكلفة أيضا. على الرغم من أن في الجسم الحي النهج القائمة على يمكن استخدام تحليل البراز، وأنها تستخدم أساسا لتحديد امتصاص المئة بحلول الجهاز الهضمي 2،5. نموذج في المختبر وصفها في هذه الورقة هو أكثر فعالية من حيث التكلفة، والتقنيات المستخدمة ويمكن القول أقل تحديا. الدراسات تعديل الوراثية هي أيضا أكثر اقتصادا وأقل عندما يتم إجراؤها باستخدام هذا النموذج في المختبر تستغرق وقتا طويلا.

منذ يتم تعبئتها المواد الدهنية القابلة للذوبان التي يتم تناولها من قبل المعوية إلى البروتينات الدهنية 6،7، فإن فعالية هذا النموذج في المختبر لإنتاج البروتينات الدهنية هي الحاسمة. وintestina الرئيسيينالبروتينات الدهنية هي ل كيلومكرونات وجدا البروتينات الدهنية منخفضة الكثافة (VLDL). كيلومكرونات، الذي يعرف بأنه البروتينات الدهنية مع 80 نانومتر أو أكثر في القطر، ويتم إنتاجها بدقة من قبل الأمعاء الدقيقة عند وجود بوفرة في التجويف المعدي المعوي الدهون. لأنها هي أكبر البروتينات الدهنية، كيلومكرونات هي تصور لنقل الدهون الأكثر فعالية. هذا النموذج في المختبر، والتي هي قادرة على انتاج كيلومكرونات 8، ويمكن استخدامها لدراسة امتصاص الدهون الغذائية، الدهون القابلة للذوبان، فيتامين امتصاص الأمعاء، والفم للدهون التوافر البيولوجي المخدرات. وجود الدهون القابلة للذوبان، الجزيئات، والفيتامينات، أو المخدرات في جزء البروتين الدهني هو مؤشر على استيعابهم من قبل الأمعاء الدقيقة. كما نوقش سابقا، يمكن استخدام هذا النموذج لتحسين الشفوي للدهون التوافر البيولوجي المخدرات 6.

توضح هذه الورقة كيف ينبغي الحفاظ كاتشو-2 الخلايا في نفاذية الغشاء أو أطباق زراعة الأنسجة العادية، وكيفية ميل الدهونيجب أن تكون على استعداد xture لتحفيز إنتاج البروتين الدهني، وكيف يمكن استخدامها في نظام التعبير الفيروسة البطيئة لتحقيق overexpression فعال، وكيف ينبغي تحليل البروتينات الدهنية معزولة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. الحفاظ على خلايا كاتشو-2

  1. باستخدام أطباق زراعة الأنسجة العادية
    1. ذوبان الجليد في كاتشو-2 الخلايا من قارورة المجمدة عن طريق وضع القارورة في 37 ° C حمام الماء، وعلى الفور إضافتها إلى صحن 10 سم زراعة الأنسجة التي تحتوي على 10 مل من قبل تحسنت وسائل الاعلام نمو (15٪ مصل بقري جنيني (FBS ) في Dulbecco لتعديل النسر المتوسطة (DMEM)).
      1. عندما وصلت إلى خلايا كاتشو-2 50-70٪ التقاء، تقسيمها 1: 6 التي يحتضنها الخلايا مع 3 مل من 0.05٪ التربسين / 0.53 ملي حمض ethylenediaminetetraacetic (EDTA) عند 37 درجة مئوية حتى يتم فصل انهم (15 دقيقة) . لتجنب تكتل الخلايا، مزيج خلايا عدة مرات من قبل pipetting لطيف. إضافة 0.5 مل من الخلايا trypsinized إلى صحن 10 سم زراعة الأنسجة التي تحتوي على 10 مل من وسائط النمو قبل تحسنت.
    2. يهز بلطف الأطباق عدة مرات في اتجاه الأمام والخلف تليها الاتجاه اليساري ونحو اليمين. تجنب يحوم الأطباقكما أنه قد يؤدي إلى تشتت خلية غير المتكافئ.
    3. وضع الأطباق على سطح مستو في حاضنة C 37 ° المتوفرة مع 5٪ CO 2. قد يؤدي أسطح مائلة أيضا في تشتت خلية غير المتكافئ.
    4. تغيير وسائط النمو بعد يوم من بدء الحضانة.
    5. رصد الخلايا وسجل يوم وصولها إلى نقطة التقاء. وسوف يستغرق حوالي 1 أسبوع للحصول على الخلايا للوصول إلى نقطة التقاء من اليوم منقسمون فيها.
    6. تغيير وسائط النمو مرتين في الأسبوع قبل الوصول إلى نقطة التقاء الخلايا. مرة واحدة قد وصلت إلى خلايا التقاء، تغيير وسائط النمو كل يوم. بعد الخلايا هي 7 أيام بعد متموجة، تغيير وسائط النمو يوميا.
      ملاحظة: الخلايا جاهزة للتجارب عندما تكون 13 يوما بعد انتهاء متموجة (الشكل 1). منذ الخلايا سوف تصبح في نهاية المطاف أقل فعالية في انتاج البروتينات الدهنية، استخدام الخلايا التي هي بين 13 إلى 17 يوما بعد متموجة 8. انتقل إلى الخطوة 3 على كيفية إجراء التجربة.
  2. باستخدام نظام نفاذية الغشاء
    1. البذور الخلايا كاتشو-2 في إدراج نفاذية الغشاء كما هو موضح في الخطوة 1.1.1.1. أعلاه. تجنب استخدام الخلايا من قارورة المجمدة بسبب نمو الخلايا الخاصة بهم عادة أبطأ (فترة نقاهة). لفترة وجيزة، إضافة 0.5 مل من الخلايا trypsinized إلى غرفة قمي (المقصورة العليا) التي تحتوي على 10 مل من وسائط النمو قبل تحسنت. أيضا، إضافة 10 مل من وسائط النمو قبل تحسنت إلى غرفة basolateral (أقل المقصورة).
      ملاحظة: للحصول على أفضل الممارسات، إضافة سائط النمو إلى غرفة قمي أولا ثم إلى غرفة basolateral. عند إزالة وسائل الإعلام القديمة، وإزالة وسائل الإعلام basolateral أمام وسائل الإعلام قمي. تجنب بدس الغشاء البولي لأنها قد تمزق الغشاء.
    2. بسبب ضعف الرؤية الخلية من خلال الغشاء البولي، البذور الخلايا كاتشو-2 في صحن زراعة الأنسجة منتظم مع كثافة مماثلة، واستخدام هذا الطبق للحكم على التقاء الخلايا.
    3. اتبع الصورةteps 1.1.2-1.1.6 أعلاه.

2. الجينات Overexpression

  1. باستخدام نهج ترنسفكأيشن العادية
    1. البذور الخلايا كاتشو-2 على طبق زراعة الأنسجة كما هو موضح في 1.1.1.1.-1.1.4 أعلاه.
      ملاحظة: عندما الخلايا هي حوالي 40-50٪ متموجة، هم على استعداد ليكون transfected.
    2. إضافة 67 ميكرولتر من كاشف ترنسفكأيشن إلى 472 ميكرولتر من وسائل الإعلام المصل انخفاض في أنبوب microcentrifuge. تجنب الاتصال من كاشف ترنسفكأيشن غير مخفف مع جدار الأنبوب.
    3. إضافة 23 ميكروغرام من pLL3.7 تعزيز البروتين الفلوري الأخضر (EGFP) 9 في ترنسفكأيشن الكاشف / انخفاض خليط سائل الاعلام المصل.
    4. احتضان الخليط لمدة 20 دقيقة في RT.
    5. استبدال وسائط النمو الخلايا كاتشو-2 "مع 8 مل من 10٪ FBS في DMEM.
    6. يضاف خليط الحمض النووي / كاشف ترنسفكأيشن / خفضت وسائل الاعلام المصل الإفلات من الحكمة أن الطبق.
    7. يهز بلطف الأطباق عدة مرات في الأمام وتفلالاتجاه ckward تليها الاتجاه اليساري ونحو اليمين.
    8. وضع الطبق في الحاضنة 37 درجة مئوية.
    9. استبدال وسائل الإعلام في الطبق مع 10 مل من وسائط النمو بعد يوم من بدء الحضانة.
    10. مراقبة التعبير الجيني.
      1. مراقبة التعبير الجيني دون 4، 6-diamidino-2-phenylindole (دابي) تلطيخ. باستخدام المجهر الفلورسنت، وتحديد النسبة المئوية للخلايا التي هي الخضراء. وتمثل نسبة كفاءة ترنسفكأيشن.
      2. مراقبة التعبير الجيني مع تلوين دابي.
        1. غسل الخلايا مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ثلاث مرات.
        2. إصلاح الخلايا بإضافة 10 مل من 4٪ الفورمالديهايد في برنامج تلفزيوني (10 دقيقة حضانة في RT).
        3. غسل الخلايا مع PBS ثلاث مرات.
        4. احتضان الخلايا في الظلام لمدة 15 دقيقة في RT مع 8 مل من برنامج تلفزيوني يحتوي على 1: 500 دابي، 1٪ BSA، 0.01٪ ديجيتونين.
        5. غسل الخلايا مع PBS ثلاث مرات.
        6. Uالغناء المجهر الفلورسنت، وتحديد عدد الخلايا التي هي خضراء / زرقاء بالنسبة إلى تلك التي هي الزرقاء (الشكل 2 لوحة أعلى). وتمثل النسبة المئوية محسوبة كفاءة ترنسفكأيشن.
  2. باستخدام نظام overexpression الفيروسة البطيئة 10
    1. بذور الكلى الجنينية (كلوة) الخلايا البشرية 293T في 15 سم صحن زراعة الأنسجة (10٪ FBS في DMEM وسائل الإعلام نموها).
      ملاحظة: عندما الخلايا هي حوالي 60-70٪ متموجة، هم على استعداد ليكون transfected.
    2. إضافة 162 ميكرولتر من كاشف ترنسفكأيشن إلى 1133 ميكرولتر من وسائل الإعلام المصل انخفاض في أنبوب microcentrifuge 11. تجنب الاتصال من كاشف ترنسفكأيشن غير مخفف مع جدار الأنبوب.
    3. إضافة 24 ميكروغرام من pLL3.7 EGFP (أو بناء أخرى)، 15.6 ميكروغرام من عنصر استجابة القس (RRE)، و 6.0 ميكروغرام من REV، و 8.4 ميكروغرام من الحويصلي بروتين سكري فيروس التهاب الفم (VSVG) في ترنسفكأيشن الكاشف / صeduced خليط سائل الاعلام المصل.
    4. احتضان الخليط لمدة 20 دقيقة في RT.
    5. استبدال وسائط النمو مع 16 مل من 10٪ FBS في DMEM.
    6. يضاف خليط الحمض النووي / كاشف ترنسفكأيشن / خفضت وسائل الاعلام المصل الإفلات من الحكمة أن الطبق.
    7. يهز بلطف الأطباق عدة مرات في اتجاه الأمام والخلف تليها الاتجاه اليساري ونحو اليمين. فمن الطبيعي أن نرى بعض الخلايا HEK293T فصل في هذه المرحلة.
    8. وضع الطبق في الحاضنة.
    9. بعد 24 ساعة من الحضانة، واستبدال وسائل الإعلام في الطبق مع 25 مل من وسائط النمو.
    10. في اليوم التالي، وجمع وسائط النمو التي تحتوي على الفيروسة البطيئة (المجموعة الأولى).
    11. كرر الخطوة 2.2.10 لجمع المزيد من الفيروسة البطيئة (المجموعة الثانية).
    12. تجمع جمع الأول والثاني، وإزالة الحطام الخلية بواسطة الطرد المركزي (2500 x ج لمدة 5 دقائق).
    13. تصفية جمع مع مرشح المتاح زجاجة أعلى (0.45 ميكرون المسام)، وتركيز الفيروس عن طريق الطرد المركزي جمع في 31400 x ج لمدة 2 ساعة على RT (JA-20 الدوار). بمناسبة السفلي من أنبوب الطرد المركزي حيث يقع بيليه. صب طاف، وترك الأنبوب المقلوب في RT لمدة 15 دقيقة.
    14. resuspend الكرية التي تحتوي على الفيروس مع 100 ميكرولتر من 1X PBS. تجنب الفقاعات.
    15. تخزين الفيروس تتركز في -80 ° C. تجنب تجميد أذاب دورات.
    16. تحديد المبلغ الأمثل للفيروس اللازمة لتنبيغ الخلايا كاتشو-2 بواسطة المعايرة. لتوفير التكاليف، واستخدام لوحة 24-جيدا (0.3 مل من وسائط النمو / جيد) بدلا من صحن 10 سم زراعة الأنسجة لالمعايرة.
      1. إضافة كميات متزايدة من الفيروس المركزة (0، 1، 2، 5، 10، 25، و 50 ميكرولتر / جيد) تستكمل مع polybrene (نهائي تركيز = 5 ميكروغرام / مل) إلى متموجة 40-70٪ كاتشو-2 الخلايا. يهز لوحة 24-جيدا بلطف كما هو موضح في 1.1.2.
      2. مراقبة التعبير الجيني على (الخطوة 2.1.10.) (الشكل 2 أسفل4 لوحات).
    17. منذ تعبير عن التحوير هو مستمر بشكل عام، والحفاظ على خلايا transduced للتجارب في المستقبل، ورصد مستمر التعبير الجيني على (الخطوة 2.1.10).

3. تحفيز إفراز البروتين الدهني

  1. باستخدام صحن زراعة الأنسجة العادية
    1. تحضير خليط الدهن 100X عن طريق خلط 50 ملغ من حمض الأوليك، 40 ملغ من الليسيثين، و 48 ملغ من الصوديوم توروكولات. تحقيق وحدة التخزين إلى 900 ميكرولتر مع PBS (ما يكفي لمدة 8 أطباق). دوامة خليط الدهن بقوة.
    2. إضافة 900 ميكرولتر من خليط الدهن 100X إلى 89.1 مل من وسائط النمو. خلط، وتصفية وسائل الإعلام التي تحتوي على الدهون. تركيزات النهائية (1X) من حمض الأوليك، ليستين، وتوروكولات الصوديوم هي 2.0 ملم، 1.36 ملم، و 1.0 ملم على التوالي.
    3. إضافة 10 مل من وسائل الإعلام التي تحتوي على الدهون إلى الخلايا.
    4. احتضان الخلايا مع وسائل الإعلام التي تحتوي على الدهون لمدة 4 ساعة في 37° C الحاضنة.
    5. غسل الخلايا مع PBS ثلاث مرات.
    6. إضافة 10 مل من وسائط النمو للخلايا لجمع إفراز البروتين الدهني.
    7. احتضان لمدة 2 ساعة في الحاضنة 37 درجة مئوية.
    8. جمع وسائل الإعلام التي تحتوي على البروتين الدهني.
  2. باستخدام نظام نفاذية الغشاء
    1. اتبع الخطوات 3.1.1-3.1.2 لإعداد خليط الدهن.
    2. إضافة 10 مل من وسائل الإعلام التي تحتوي على الدهون إلى غرفة قمي و 10 مل من وسائط النمو إلى غرفة basolateral.
    3. احتضان لمدة 4 ساعات في الحاضنة 37 درجة مئوية. جمع وسائل الإعلام التي تحتوي على البروتين الدهني في غرفة basolateral.

4. البروتين الدهني عزل (الشكل 3)

  1. إزالة الحطام خلية من وسائل الإعلام التي تحتوي على البروتين الدهني بواسطة الطرد المركزي (2000 x ج لمدة 5 دقائق).
  2. صب سائل الإعلام في أنبوب 50 مل.
  3. إضافة 5.95 غرام من كلوريد الصوديوم إلى وسائل الإعلام.
  4. إذا كان ساوسيتم تحليل mple من قبل TEM، إضافة 1 البروتيني قرص المانع كوكتيل للحفاظ على سلامة البروتينات الدهنية.
  5. تبرزي حجم 23 مل مع الماء (1.2 غرام / مل كلوريد الصوديوم حل الكثافة).
  6. حل المذابة تماما.
  7. صب كل من الحل في أنبوب البولي نابذة فائقة السرعة.
  8. تراكب بلطف الحل كثافة 1.2 جرام / مل مع 0.5 مل من الماء (1.0 غرام / مل الكثافة).
  9. تحقيق التوازن في أنبوب من حيث الوزن وليس من حيث الحجم.
  10. تحميل بلطف الأنابيب في الدوار T865.
  11. تدور العينات في نابذة فائقة السرعة في 429460 x ج لمدة 24 ساعة في 4 درجات مئوية.
  12. عزل فورا الأعلى 0.5 مل من محلول من قبل pipetting لطيف. الحفاظ على أنبوب كما لا تزال ممكن.

5. تحليل TEM

  1. إعداد 5 مل من حمض الفسفوتنغستيك 2٪ (ث / ت) وضبط درجة الحموضة إلى 6.0.
  2. تصفية حمض الفسفوتنغستيك 2٪ مع فلتر حقنة (حجم المسام: 0.2 ميكرون).
  3. إسقاط 20 ميكرولتر من العينة البروتين الدهني على طبق العقيمة.
  4. إسقاط 20 ميكرولتر من تصفيتها حمض الفسفوتنغستيك 2٪ إلى جانب عينة على نفس الطبق.
  5. إسقاط بلطف على شبكة EM مع الجانب مملة يستريح على العينة.
  6. في احتضان RT لمدة 1 دقيقة.
  7. اضغط برفق على جانب الشبكة EM على ورق الترشيح لإزالة عينة من الشبكة.
  8. إسقاط بلطف الشبكة EM مع الجانب مملة يستريح على حمض الفسفوتنغستيك 2٪.
  9. في احتضان RT لمدة 1 دقيقة.
  10. اضغط برفق على جانب الشبكة EM على ورق الترشيح لإزالة حمض الفسفوتنغستيك من الشبكة.
  11. باستخدام TEM، والتقاط الصور من البروتينات الدهنية (الشكل 4).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

الشكل 1 يعرض العادية 13 يوما بعد متموجة-كاتشو-2 الخلايا. ظهور هياكل على شكل قبة وقطرات الدهون داخل الخلايا هي سمة من يفرق كاتشو-2 الخلايا. عندما لا تفرق الخلايا كاتشو-2 على حد سواء خلال البذر، فإنها تتجمع وكسا الأرض في مناطق معينة من الطبق. وسيكون هناك عدد قليل من المناطق في الطبق دون أي الخلايا. دوامات ووضع الطبق على سطح مائل ينبغي تجنبها. ومن المهم أيضا أن نلاحظ أن بعد متموجة-كاتشو-2 الخلايا هي أكثر عرضة للانفصال عند إضافة وسائط النمو الجديد على الخلايا تقريبا أ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الورقة، والنظامين التي يمكن استخدامها للحفاظ على موصوفة كاتشو-2 الخلايا، وهي طبق زراعة الأنسجة العادية ونفاذية الغشاء. وتشمل مزايا استخدام نظام نفاذية الغشاء فصل قمي والمقصورات basolateral، والقدرة على احتضان خليط الدهن وجمع إفراز البروتين الدهني في وقت واحد. ومع ذلك، فإن إدراج غشاء نفاذية غالية الثمن، والغشاء البولي بهم لا تسمح لرؤية الخلية جيد. واحدة من مزايا هذا النموذج في المختبر هو أن الدراسات الوراثية التلاعب سيكون أكثر اقتصادا وأقل استهلاكا للوقت. لفعالية أف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلف ليس لديه ما يفصح عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال جائزة Seed Grant من كلية الصيدلة بجامعة كاليفورنيا نورث ستيت (إلى AMN). يود المؤلفون أن يشكروا كلية الصيدلة بجامعة كاليفورنيا نورث ستيت لتغطية تكلفة نشر هذه المقالة ، وجورج تالبوت على مساعدته في تحرير هذه المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
DMEMVWR16750-112قم بتسخين وسائط النمو مسبقا في طبق زراعة الأنسجة الفردية قبل إضافة الخلايا
FBSFisher3600511نحن لا نقوم بتعطيل مصل
التربسينVWR45000-660يمكن غسل الخلايا باستخدام PBS قبل علاج التربسين   ؛
نظام غشاء قابل للاختراق7200173 فيشرطبق 10 سم ، حجم المسام 3 مم ، غشاء بولي كربونات
10 سمطبق فيشر08-772-Eطبق زراعة الأنسجة
15 سمطبق فيشر08-772-24طبق زراعة الأنسجة
24 لوح بئرفيشر12565163لوحة زراعة الأنسجة
كاشف التعداء القائم على الدهونفيشرPRE2691يمكن استبداله بكاشف تعدي آخر
وسائط مصل مخفضةInvitrogen11058021للتعداء
pLL3.7 eGFPAddgene11795https://www.addgene.org/11795/< / a>
مرشح أعلى الزجاجةفيشر97611200.45 مم مسام
PolybreneFisherNC984045410 مجم / مل
حمض الأوليكسيجما01383-5Gمنع دورة التجميد والذوبان
الليسيثين   ؛فيشرIC10214625ليسيثين البيض 
منتج توروكولات الصوديومفيشرNC9620276 ؛ رقم الكتالوج البديل: 50-121-7956
قرص كوكتيل مثبط للبروتياز (خالي من EDTA)5892791001فيشر تستخدم بشكل أساسي للعينات التي تحتاج إلى تحليل TEM
أنبوب الطرد المركزي الفائق من البولي كربوناتفيشرNC9696153إعادة استخدامه عدة مرات سيؤدي إلى انهيار غطاء الأنبوب
لأنبوب الطرد المركزي الفائقفيشر NC9796914مطلوب أداة لإزالة الأنبوب / الغطاء من حقنة الدوار
فيشر50-949-261
مرشح حقنةمنها فيشر09-719Cحجم المسام = 0.2 مم ؛ نايلون
حمض الفوسفوتونغستيكفيشرAC208310250لتحضير حمض الفوسفوتونغستيك 2٪ ، درجة الحموضة 6.0
الملقطفيشر50-238-62غرامة إضافية و نصائح قوية
فورمفار / شبكة الكربونفيشر50-260-34فورمفار / الكربون فيلم شبكة مربعة 400 نحاس
توقف يمكن التخلص

المراجع

  1. Drover, V. A., et al. CD36 deficiency impairs intestinal lipid secretion and clearance of chylomicrons from the blood. J Clin Invest. 115 (5), 1290-1297 (2005).
  2. Nauli, A. M., et al. CD36 is important for chylomicron formation and secretion and may mediate cholesterol uptake in the proximal intestine. Gastroenterology. 131 (4), 1197-1207 (2006).
  3. Nauli, A. M., Zheng, S., Yang, Q., Li, R., Jandacek, R., Tso, P. Intestinal alkaline phosphatase release is not associated with chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284 (4), G583-G587 (2003).
  4. Lo, C. -M., et al. Why does the gut choose apolipoprotein B48 but not B100 for chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294 (1), G344-G352 (2008).
  5. Jandacek, R. J., Heubi, J. E., Tso, P. A novel, noninvasive method for the measurement of intestinal fat absorption. Gastroenterology. 127 (1), 139-144 (2004).
  6. Nauli, A. M., Nauli, S. M. Intestinal transport as a potential determinant of drug bioavailability. Curr Clin Pharmacol. 8 (3), 247-255 (2013).
  7. Tso, P., Nauli, A., Lo, C. M. Enterocyte fatty acid uptake and intestinal fatty acid-binding protein. Biochem Soc Trans. 32 (Pt 1), 75-78 (2004).
  8. Nauli, A. M., Sun, Y., Whittimore, J. D., Atyia, S., Krishnaswamy, G., Nauli, S. M. Chylomicrons produced by Caco-2 cells contained ApoB-48 with diameter of 80-200 nm. Physiol Rep. 2 (6), (2014).
  9. Rubinson, D. A., et al. A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells, stem cells and transgenic mice by RNA interference. Nat Genet. 33 (3), 401-406 (2003).
  10. Li, M., Husic, N., Lin, Y., Snider, B. J. Production of lentiviral vectors for transducing cells from the central nervous system. J Vis Exp. (63), e4031(2012).
  11. Pottekat, A., et al. Insulin biosynthetic interaction network component, TMEM24, facilitates insulin reserve pool release. Cell Rep. 4 (5), 921-930 (2013).
  12. Van Greevenbroek, M. M., van Meer, G., Erkelens, D. W. Effects of saturated, mono-, and polyunsaturated fatty acids on the secretion of apo B containing lipoproteins by Caco-2 cells. Atherosclerosis. 21 (1), 139-150 (1996).
  13. Levy, E., Yotov, W., Seidman, E. G., Garofalo, C., Delvin, E., Ménard, D. Caco-2 cells and human fetal colon: a comparative analysis of their lipid transport. Biochim Biophys Acta. 1439 (3), 353-362 (1999).
  14. Luchoomun, J., Hussain, M. M. Assembly and secretion of chylomicrons by differentiated Caco-2 cells. Nascent triglycerides and preformed phospholipids are preferentially used for lipoprotein assembly. J Biol Chem. 274 (28), 19565-19572 (1999).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

باستخدام كاتشو-2 خلايا لدراسة نقل الدهون من الأمعاء
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.