مقالة منهجية

الصلبة الدهون النانوية (SLNs) لاستهداف التطبيقات بين الخلايا

DOI:

10.3791/53102

⸱

نوفمبر 17, 2015

 ,  ,  , 
1Research and Exploratory Development Department, The Johns Hopkins Applied Physics Laboratory, 2Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Johns Hopkins School of Medicine, 3Asymmetric Operations Sector, The Johns Hopkins Applied Physics Laboratory

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة ، تم وصف طريقة لتصنيع مجموعات صغيرة جدا من الجسيمات النانوية المتوافقة حيويا ، بالإضافة إلى العديد من الطرق المختبرية التي يمكن من خلالها تقييم تفاعلاتها الخلوية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
أظهرت مركبات التوصيل القائمة على الجسيمات النانوية

واعدة كبيرة لتطبيقات الاستهداف داخل الخلايا ، مما يوفر آلية لتغيير الإشارات الخلوية والتعبير الجيني على وجه التحديد. في تحقيق سابق ، تم توضيح تخليق الجسيمات النانوية الدهنية الصلبة الصغيرة جدا (SLNs) لتوصيل الأدوية الموضعية وتطبيقات الكشف عن المؤشرات الحيوية. SLNs هي مثال مدروس جيدا لنظام توصيل الجسيمات النانوية الذي ظهر كوسيلة واعدة لتوصيل الأدوية. في هذه الدراسة ، تم تحميل SLNs بصبغة فلورية واستخدمت كنموذج للتحقيق في تفاعلات الجسيمات والخلية. تم استخدام طريقة درجة حرارة انعكاس الطور (PIT) لتخليق مجموعات صغيرة جدا من الجسيمات النانوية المتوافقة حيويا. تم استخدام اختبار 3- (4،5-dimethylthiazol-2-yl) -2،5-diphenylphenyletrazolium bromide (MTT) من أجل تحديد مستويات الجرعات المناسبة قبل دراسات تفاعل الجسيمات النانوية والخلية. علاوة على ذلك ، تعرضت الخلايا الليفية الجلدية البشرية الأولية والخلايا المتغصنة للفأر ل SLN المحملة بالصبغة بمرور الوقت وتم تمييز التفاعلات فيما يتعلق بالسمية وامتصاص الجسيمات باستخدام الفحص المجهري الفلوري وقياس التدفق الخلوي. أظهرت هذه الدراسة أن SLNs صغيرة جدا ، كنظام توصيل للجسيمات النانوية ، مناسبة للاستهداف داخل الخلايا لأنواع مختلفة من الخلايا.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أظهرت وسائل إيصالها القائم على جسيمات متناهية الصغر وعودا كبيرة للتطبيقات التي تستهدف الخلايا، وتوفير آلية لتغيير وجه التحديد الإشارات الخلوية والتعبير الجيني. هذه المركبات يمكن تحميلها مع المخدرات، والبروتينات، والأحماض النووية مصممة للتأثير الاستجابات الخلوية وتحقيق التأثير المطلوب في الأنسجة المستهدفة. تم استكشاف العديد من أنواع nanocarriers لفائدة علاجية وتشخيصية بما في ذلك الدهون، والبوليمرات، والسيليكون، والمواد المغناطيسية. هذه النظم هي جذابة نظرا لقدرتها على العقاقير الموضعية، وزيادة التركيز العلاجي في الأنسجة المستهدفة، والحد من سمية جهازية.

النانوية الدهون الصلبة (SLNs) هي مثال مدروسة لنظام تسليم جسيمات متناهية الصغر التي برزت باعتبارها واعدة المركبات تسليم المخدرات في السنوات الأخيرة. SLNs يمكن أن تصاغ بسهولة لتطبيقات متعددة بما في ذلك 1 الاستشعار البيولوجية، ومستحضرات التجميل 2، ورتسليم herapeutic 3-7. تنبع فائدتها من حقيقة أنها تتألف بالكامل من resorbable، والدهون غير سامة، مما أدى إلى تعزيز توافق مع الحياة. خلال التوليف، ويمكن إدراج الأدوية محبة للدهون في المركبات SLN، وبالتالي زيادة القابلية للذوبان في المخدرات وصلاحيتها للبالحقن. سيارات SLN يساعد أيضا على تحقيق الاستقرار العلاجات مغلفة، والحد من تدهورها وإزالة الألغام، وتعظيم العمل العلاجي. هذه المركبات بشكل خاص مناسبة تماما لطويل المفعول، والأعمال التحضيرية تسيطر عليها الافراج عن نظرا لاستقرارها في درجة حرارة الجسم 3،4،8،9. الأهم من ذلك، تغليف الأدوية النانوية في الدهون يغير ملامح الدوائية الجوهرية للجزيئات الدواء. وهذا يوفر ميزة محتملة من خلال السماح بإطلاق سراح تسيطر المخدرات مع مؤشر العلاجي الضيق. معدل الإفراج عن العلاجات-أدرجت SLN يمكن ضبطها على أساس معدل التحلل الدهني أو معدل انتشار المخدرات فيمصفوفة الدهون.

وغالبا ما المهندسة SLNs تتراكم في الأنسجة المستهدفة المحددة. على سبيل المثال، حجمها (عادة أكبر من 10 نانومتر) يقوي الاحتفاظ في الدورة الدموية، حيث الأوعية الدموية المتسرب من نسيج الورم يسهل ترسب. وبالإضافة إلى ذلك، فقد تبين أن طريقة التعاطي الجسيمات لتغيير biodistribution مع القدرة على استهداف البنى فسيولوجية معينة مثل الغدد الليمفاوية 10،11. على ترسب في الأنسجة المستهدفة، وتحقيق التفاعلات الخلوية المناسبة واستيعاب نهاية المطاف النانوية يشكل تحديا نظرا لقدرة أغشية الخلايا للسيطرة بشكل انتقائي تدفق الأيونات والجزيئات داخل وخارج الخلية 12. لتسهيل امتصاص الخلوية، فمن الممكن تعديل nanocarriers مع بروابط معينة بما في ذلك الببتيدات، جزيئات صغيرة، والاجسام المضادة 13،14. العديد من الآليات بما في ذلك اختراق السلبي والنقل النشط النانويةعبر غشاء الخلية قد تم وصفها سابقا 3،12،15. بشكل عام، وقد ثبت أن تفاعلات الخلايا جسيمات متناهية الصغر تتأثر الخصائص الفيزيائية للجسيمات النانو بما في ذلك الحجم والشكل، وتهمة السطحية والكيمياء السطحية، بالإضافة إلى المعلمات خلية محددة مثل نوع من الخلايا أو الخلية مرحلة دورة 12.

أظهر تحقيق سابق توليف الفرعية 10 SLNs نانومتر للالموضعية 16 و العلامات البيولوجية التطبيقات كشف 1 باستخدام طريقة درجة الحرارة مرحلة انقلاب (PIT) 17. هذه هي طريقة تركيب لطيف حيث 2 يبقى التكوين المستمر بينما يتم تغيير درجة الحرارة تدريجيا. التقليب المستمر من الحل ساخنة، لأنه يبرد إلى نتائج RT في nanoemulsion. ينتج عن هذه العملية في تركيب SLNs مع حجم أصغر الجسيمات 1 من ذلك ذكرت سابقا باستخدام أساليب مختلفة لتركيب الدهون نانoparticles 17-22. مقياس حجم الناتج أقل من 20 نانومتر، ويوفر ميزة لتطبيقات استهداف الخلايا نتيجة لزيادة مساحة السطح والإمكانات لتعزيز التفاعلات الخلوية.

A التخطيطي SLNs، وتهدف إلى تقديم صبغة الفلورسنت أو العلاجية، ويظهر في الشكل 1. تتكون SLNs من الدهون الداخلية (على سبيل المثال، ألكان الخطية) السماح بإدماج المركبات محبة للدهون (على سبيل المثال، والأصباغ أو المداواة) والخارجي السطحي (السطحي غير أيوني على سبيل المثال، وخطي) تحيط بها المياه. في هذه الدراسة، تم تحميلها SLNs مع صبغة الفلورسنت وتستخدم كنموذج للتحقيق في التفاعلات خلية الجسيمات. تعرضت الخلايا الليفية الجلدية الإنسان الأساسية والخلايا الجذعية الماوس لتحميل صبغ SLN على مر الزمن من أجل توصيف التفاعلات فيما يتعلق سمية وامتصاص الجسيمات. وكان 3- (4،5-dimethylthiazol-2-يل) -2،5-diphenylphenyltetrazolium بروميد (MTT) فحص utiliزد من أجل تحديد مستويات الجرعات المناسبة. كانت المجهري مضان والتدفق الخلوي اثنين من الأساليب المستخدمة لفحص امتصاص الجسيمات في المختبر.

figure-introduction-1
الشكل 1. رسم تخطيطي للSLN تبين المكونات الرئيسية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تجهيز SLNs

  1. توليف SLNs
    ملاحظة: استخدام أسلوب PIT 1،17،20 لإعداد الفرعية 20 نانومتر SLNs 1.
    1. استخدام تقنية العقيم، bioreagents أو زراعة الخلايا الكواشف الصف، والمواد المعقمة (أي الماصات، ملاعق، قارورة، وما إلى ذلك).
    2. استخدام الوزراء للسلامة الأحيائية لتركيب SLNs (الشكل 2).
    3. الجمع بين 0.6 ملغ من صبغة الفلورسنت (النيل الأحمر (نير)، وتركيز نير ما يقرب من 0.3 ملغ / مل) و 0.10 غرام من Heneicosane (الدهن، 5 وزن / وزن٪ تركيز الدهون) في قارورة (15 مل)، وشارك في تذوب في 90 ° C، ويقلب.
    4. إضافة 0،11 ز البولي أوكسي إتيلين (10) الأثير أوليل (السطحي، 5.5 وزن / وزن٪ تركيز بالسطح). شارك في إذابة الخليط الناتج على 90 ° C ويقلب.
    5. إضافة 1.79 غرام من الماء المعقم إلى الخليط، والحرارة إلى 90 درجة مئوية، ويحرك حتى يتم تشكيل nanoemulsion شفافة.
      ملاحظة: في ظل استمرار التحريك والتبريد للرقابة، SLيتم إنشاء نانوثانية. هذه الشروط تتسبب في انقلاب من مستحلب الماء في الزيت إلى مستحلب النفط في المياه. جزيئات محبة للدهون مثل نير قسم إلى قطرات الدهون.
    6. إعداد nanoemulsion بالتوازي دون إضافة صبغة الفلورسنت، وذلك لتكون بمثابة عينة السيطرة. الجمع بين 0.10 غرام من Heneicosane و 0.11 غرام البولي أوكسي إتيلين (10) الأثير أوليل إلى قارورة (15 مل) المشارك تذوب في 90 ° C، ويقلب.
      1. إضافة 1.79 غرام من الماء المعقم إلى الخليط، والحرارة إلى 90 درجة مئوية، ويحرك حتى يتم تشكيل nanoemulsion شفافة.
    7. وعلاوة على ذلك تعقيم كل nanoemulsion باستخدام معقم 0.2 ميكرون التصفية.
    figure-protocol-1
    الشكل 2. تخطيطي لتركيب SLNs. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
  2. حجم الجسيمات وبولydispersity
    1. استخدام تشتت الضوء الحيوي (DLS) لقياس حجم الجسيمات والتشتت المتعدد من SLNs 1 باستخدام كوفيت الزجاج وأداة مصممة لقياس حجم الجسيمات.
    2. قبل قياسات للعينات، وقياس أحجام الجسيمات اثنين من المعايير المعروفة التالية بروتوكول الشركة المصنعة لإعداد وقياس معايير.
    3. ملء كفيت الزجاج مع 1.5 مل من محلول قياسي وقياس الحل قياسي باستخدام شروط القياس نفس العينات.
      ملاحظة: وقد تكرر الخطوة السابقة لكل معيار.
    4. قياس العينات وإعدادها. لكل، استخدم المعلمات التجريبية التالية: وقت التشغيل 100 ثانية، ومعامل انكسار الماء (1.33)، واللزوجة من الماء عند 20 درجة مئوية (1.002 ميجا باسكال · ثانية).
      ملاحظة: يستخدم هذا الأسلوب تردد تحول من الضوء لقياس حجم الجسيمات النانوية.
    5. الإبلاغ عن متوسط ​​قطرها الجسيمات والتشتت المتعدد للحزبشركة كلي حجم التوزيع.
  3. ذوبان نقطة والكامنة للحرارة الانصهار
    1. استخدام مسعر المسح التفاضلي (DSC) مجهزة لصناعة السيارات في أخذ العينات ومصدر تبريد النيتروجين السائل للتحقيق في السلوك الحراري للSLNs 1.
    2. ماصة كما أعدت-SLNs إلى الألومنيوم عموم 40 ميكرولتر مع كتلة من ما يقرب من 25 ملغ و بإحكام اغلاق المقلاة باستخدام الصحافة المكشكش العالمي للحد من فقدان الرطوبة أثناء الفحص DSC.
    3. قياس كل nanoemulsion 5-80 ° C.
    4. الإبلاغ عن نقطة انصهار والحرارة الكامنة لانصهار من مؤامرة DSC، حيث يمثل وادي درجة انصهار وتكامل المنطقة تحت المنحنى في المؤامرة DSC مقسوما على كمية المواد تمثل الحرارة الكامنة لانصهار.

2. SLNs التفاعل مع الخلايا الليفية والخلايا الجذعية

  1. ثقافة الابتدائية الخلايا الليفية الإنسان
    1. ثقافة فاي البشري الأساسيbroblasts وفقا لتعليمات الشركة الصانعة في الوسط السائل لثقافة الخلايا الليفية الجلدية الإنسان (المتوسطة 106)، على أن تستكمل مع انخفاض ملحق النمو المصل (LSGS) عدة. الحفاظ على الخلايا في جو مرطب عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 و ثقافة فرعية عند بلوغ 80٪ التقاء.
    2. لكل من MTT والتحليل والتصوير، وخلايا البذور في لوحة 96-جيدا، في مناطق ذات كثافة من 2 × 10 4 خلايا لكل بئر، والسماح للتوازن عند 37 درجة CO / N قبل التعرض SLN.
    3. في وقت الصفر، وتمييع SLNs في المتوسط ​​كاملة كما هو مبين (الشكل 4)، فيما يتعلق تركيز الدهون، وإضافة 10 ميكرولتر لكل بئر لكل تتكاثر بشكل جيد في لوحة 96-جيدا.
    4. الحفاظ على الخلايا عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2، خلال فترة الحضانة.
  2. MTT سمية الفحص
    1. بعد 24 ساعة من الحضانة مع SLNs، وتحديد الجدوى الخلوية باستخدام فحص MTT، وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
    2. غسل خلايا مرة واحدة وإضافة متوسطة جديدة إلى كل بئر (100 ميكرولتر / جيد). قتل آبار المراقبة التي يحتضنها في حل الميثانول 70٪ لمدة 10 دقيقة قبل استبدال مع المتوسط ​​الطازجة.
    3. إضافة كاشف MTT (10 ميكرولتر لكل بئر) إلى كل بئر من صفيحة ميكروسكوبية واحتضان O / N عند 37 درجة مئوية.
    4. بعد O / N الحضانة، وإذابة البلورات formazin الخلايا مع محلول منظف المقدمة (100 ميكرولتر لكل بئر) وفقا لبروتوكول الشركة الصانعة.
    5. بعد 3 ساعات من الحضانة في RT، الحصول على قيم الامتصاصية في الطول الموجي قياس 570 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة ميكروسكوبية.
      كاشف MTT المستخدمة يجب أن تكون أقل من 1٪ (وزن / حجم) 3- (4،5-dimethylthiazolyl-2) -2، بروميد 5-ثنائي-نتروبلو: مذكرة.
  3. مضان المجهر
    1. في نقطة زمنية محددة بعد الجرعات من الخلايا الليفية مع SLN، وغسل الخلايا الليفية مرتين مع الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (PBS) وإصلاح لمدة 10 دقيقة مع بارد 70٪ الميثانول.
    2. بعد 10 دقيقةاستبدال الميثانول مع برنامج تلفزيوني والتقاط الصور باستخدام مجهر مقلوب، وذلك باستخدام تمريرة الفرقة (BP) 690/50 نانومتر تصفية مجموعة.
  4. ثقافة خلايا الفأر نخاع العظم الجذعية
    1. حمل الماوس العظام المستمدة من نخاع الخلايا الجذعية (BMDC) كما هو موضح سابقا 23،24. لفترة وجيزة، تعليق خلية لوحة واحدة من C57BL / 10 نخاع العظام في 100 ملم أطباق بتري في 2 × 10 6 / لوحة مع المؤتلف الفئران عامل تحفيز مستعمرة الكريات البيضاء بلعم (GM-CSF، 300 U / مل)، والفئران المؤتلف IL-4 (خلية B عامل تحفيز، 200 U / مل). تغيير وسائل الاعلام كل 3 أيام.
    2. في يوم 7، إضافة SLNs نير تحميلها على الأطباق في تركيز النهائي من 0.5 و 5.0 ميكروغرام / مل الدهون والحفاظ على خلايا في 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 حاضنة للطول المطلوب من التعرض.
    3. جمع الخلايا من الأطباق بواسطة الشفط جميع وسائل الإعلام في لوحة، وجمع ذلك في أنبوب 50 مل، تليها الغسل الكامل من لوحة (لطرد إعلان فضفاضةخلايا herent) مع 5 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) التي تحتوي على 4 ملم ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الخل (EDTA). جمع تعليق خلية تم الحصول عليها في نفس أنبوب 50 مل.
  5. تقييم SLNs التأسيس عن طريق التدفق الخلوي
    1. تحديد تركيز تعليق الخلية التي تم الحصول عليها في النقطة 2.4.3 وتوزيع 3x10 5 خلايا إلى 12 مم × 75 مم أسفل جولة FACS أنبوب.
    2. غسل الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني ومن ثم الطرد المركزي الأنابيب لمدة 5 دقائق في 400 x ج، عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
    3. تجاهل طاف و resuspend بيليه مع 100 ميكرولتر من PBS / 2 ملي EDTA / 0.1٪ ألبومين المصل البقري (BSA) (العازلة تلطيخ) التي تحتوي على مكافحة CD11c و-FITC الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (0.25 ميكروغرام / مل النهائي). احتضان لمدة 30 دقيقة على الجليد في الظلام.
    4. غسل الخلايا مع 1 مل من برنامج تلفزيوني ثم الطرد المركزي الأنابيب لمدة 5 دقائق في 400 x ج، عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
    5. تجاهل وطاف resuspend كلبيليه مع 400 ميكرولتر من العازلة تلطيخ. الخلايا هي الآن جاهزة للشراء من العينات مع الكريات تدفق (ربما مجهزة ليزر زرقاء وحمراء).
    6. باستخدام التدفق الخلوي برامج التحليل، وتقييم مستوى إدماج SLNs بواسطة DC بواسطة المعزولة على سكان CD11c و+ الخلايا (FITC إيجابي) والمقارنة بين شدة المرتبطة SLNs مضان (المقاسة في القنوات PerCP-Cy5.5 أو APC).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم استخدام أسلوب PIT لتجميع SLNs وتم تحديد درجة الحرارة مرحلة انعكاس باستخدام حمام مائي. كانت النماذج تسخن ببطء وتحريكها بلطف حتى ظهر حل واضح. درجة الحرارة المرحلة انعكاس لSLNs التي تستخدم فيها الدهون heneicosane 45 ° C. ويلخص الجدول 1 حجم الجسيمات، والتشتت المتعدد، نقطة انصهار والحرارة الكامنة لانصهار لSLNs. أدى SLNs تصنيعه باستخدام ظروف التصنيع المذكورة أعلاه في SLNs السيطرة وSLNs نير محملة متوسط ​​قطرها الجسيمات من 18.59 و16.87 نانومتر ومع التش...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة، تم استكشاف توليف SLNs وتطبيقها للتطبيقات التي تستهدف الخلايا. وقد أظهرت هذه الجسيمات النانوية حيويا وعد بوصفها وسائل إيصال لتطبيقات متعددة بما في ذلك تسليم المخدرات، إسكات الجينات والتقنيات لقاح 25-30. تم توليفها SLNs الصغيرة جدا باستخدام عملية السطحية، واستكشفت تفاعلاتها مع خلايا الجلد الابتدائية والخلايا المناعية الأولية. وقد صممت SLNs لتشمل التغليف من صبغة الفلورسنت (نير)، الذي كان بمثابة البضائع العلاجية نموذجية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
تم دعم

البحث الذي تم الإبلاغ عنه في هذا المنشور من قبل قسم البحث والتطوير الاستكشافي في مختبر جونز هوبكنز للفيزياء التطبيقية ، ومكتب نقل التكنولوجيا ، وبرنامج زمالة ستيوارت إس جاني ، بالإضافة إلى المعهد الوطني للقلب والرئة والدم التابع للمعاهد الوطنية للصحة بموجب الجائزة رقم R21HL127355.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

الكاشف U1985IS جميع مكونات مجموعة فحص تكاثر الخلايا الكاملة مجموعة

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الحيوي للنيل الأحمر (NiR)Sigma19123، مناسب للتألق ، & ge ؛ 98.0٪
HeneicosaneAldrich28605298٪
Brij O10SigmaP6136Brij 97 ، C18-1E10 ، Polyoxyethylene (10) أوليل الأثير
WaterSigmaW3500معقم مفلتر ، كاشف حيوي ، مناسب لفلتر حقنة ثقافة الخلايا
0.2 وميكرو ؛ م غشاء سوبور منخفض البروتين ملزمةعلوم الحياةPN4612نانوتراك الترا غير الحمايي
& nbsp ؛الرقم التسلسليMicrotrac
كالوريمتر المسح التفاضليللأداة Mettlet-ToledoInstument
الخلايا الليفية البشرية الأولية   ؛Life TechnologiesC-004-5CNeonatal (HDFn)
Medium 106Life TechnologiesM-106-500وسيط سائل معقم لزراعة الخلايا الليفية الجلدية البشرية.
مجموعة مكمل نمو المصل المنخفض (مجموعة LSGS)Life TechnologiesS-003-KLSGS
MTTTrevigen4890-025-Kحساسة لقياس تكاثر الخلايا بناء على تقليل ملح التيترازوليوم ، 3- [4،5-ثنائي ميثيل ثيازول-2- يل] -2،5-ثنائي فينيل-تيترازوليوم بروميد (MTT)
قارئ الصفيحة الدقيقة Safire2Tecan----أداة
الفوسفات المخزنة الملحية سيجماP5493للبيولوجيا الجزيئية
الفئران المؤتلف GM-CSF & nbsp ؛Peprotech315-03>97٪ ، بواسطة SDS-PAGE في ظل ظروف مخفضة وتصورها بقعة الفضة.
الفئران المؤتلفة IL-4   ؛Peprotech214-14>97٪ ، بواسطة SDS-PAGE في ظل ظروف التقليل وتصورها بقعة الفضة.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Calderon-Colon, X., et al. Synthesis of sub-10 nm solid lipid nanoparticles for topical and biomarker detection applications. J Nanopart Res. 16 (2252), 1-10 (2014).
  2. Patwekar, S., et al. Review on nanoparticles used in cosmetics and dermal products. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 3 (8), 1407-1421 (2014).
  3. Martins, S., et al. Solid lipid nanoparticles as intracellular drug transporters: An investigation of the uptake mechanism and pathway. International Journal of Pharmaceutics. 430, 216-227 (2012).
  4. Yadav, N., Khatak, S., Sara, U. V. S. Solid Lipid Nanoparticles - A Review. International Journal of Applied Pharmaceuticals. 5 (2), 8-18 (2013).
  5. Weber, S., Zimmer, A., Solid Pardeike, J. Lipid Nanoparticles (SLN) and Nanostructured Lipid Carriers (NLC) for pulmonary application: a review of the state of the art. Eur J Pharm Biopharm. 86 (1), 7-22 (2014).
  6. Mahajan, A., Kaur, S., Grewal, N. K., Kaur, S. Solid Lipd Nanoparticles (SLNs) - As Novel Lipd based Nanocarriers for Drugs. International Journal of Advanced Research. 2 (1), 433-441 (2014).
  7. Buse, J., El-Aneed, A. Properties, engineering and applications of lipid-based nanoparticle drug-delivery systems: current research and advances. Nanomedicine (Lond). 5, 1237-1260 (2010).
  8. Malam, Y., Loizidou, M., Seifalian, A. M. Liposomes and nanoparticles: nanosized vehicles for drug delivery in cancer. Trends Pharmacol Sci. 30 (11), 592-599 (2009).
  9. Lim, S. B., Banerjee, A., Onyuksel, H. Improvement of drug safety by the use of lipid-based nanocarriers. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 163, 34-45 (2012).
  10. Ali Khan, A., Mudassir, J., Mohtar, N., Darwis, Y. Advanced drug delivery to the lymphatic system: lipid-based nanoformulations. International journal of nanomedicine. 8, 2733-2744 (2013).
  11. Oussoren, C., Storm, G. Liposomes to target the lymphatics by subcutaneous administration. Advanced drug delivery reviews. 50, 143-156 (2001).
  12. Shang, L., Nienhaus, K., Nienhaus, G. U. Engineered nanoparticles interacting with cells: size matters. J Nanobiotechnology. 12, 5(2014).
  13. Joshi, M. D., Muller, R. H. Lipid nanoparticles for parenteral delivery of actives. European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics : official journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik e.V. 71, 161-172 (2009).
  14. Torchilin, V. P. Micellar nanocarriers: pharmaceutical perspectives. Pharmaceutical research. 24, 1-16 (2007).
  15. Ashley, C. E., et al. The targeted delivery of multicomponent cargos to cancer cells by nanoporous particle-supported lipid bilayers. Nature materials. 10, 389-397 (2011).
  16. Patchan, M., et al. Nanotech; Nanotechnology 2013: Bio Sensors Instruments, Medical, Environment and Energy; Chapter 3: Materials for Dru., and Gene Delivery. Nanobandage for controlled release of topical therapeutics. 3, 255-258 (2013).
  17. Forgiarini, A., Esquena, J., Gonzalez, C., C, S. Formation and stability of nano-emulsions in mixed nonionic surfactant systems. Trends in colloid and interface science XV. Progress in Colloid and Polymer Science. Koutsoukos, P. 118, Springer Berlin. Heidelberg. 184-189 (2001).
  18. Nantarat, T., Chansakaow, S., Leelapornpisid, P. Optimization, characterization and stability of essential oils blend loaded nanoemulsions by PIC technique for anti-tyrosinase activity. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 7, 308-312 (2015).
  19. Sevcikova, P., Vltavska, P., Kasparkova, V., Formation Krejci, J. Characterization and Stability of Nanoemulsions Prepared by Phase Inversion. Proceeding MACMESE'11 Proceedings of the 13th WSEAS international conference on Mathematical and computational methods in science and engineering, , 132-137 (2011).
  20. Forgiarini, A., Esquena, J., Gonzalez, C., Solans, C. Studies of the relation between phase behavior and emulsification methods with nanoemulsion formation. Trends in colloid and interface science XIV. Progress in Colloid and Polymer Science. Buckin, V. 115, Springer. Berlin Heidelberg. 36-39 (2000).
  21. Forgiarini, A., Esquena, J., Gonzalez, C., Solans, C. Formation of nano-emulsions by low-energy emulsification methods at constant temperature. Langmuir. 17 (7), 2076-2083 (2001).
  22. Cabone, C., Tomasello, B., Ruozi, B., Renis, M., Puglisi, G. Preparation and optimization of PIT solid lipid nanoparticles via statistical factorial design. Eur J Med Chem. 49, 110-117 (2012).
  23. Raimondi, G., et al. Mammalian Target of Rapamycin Inhibition and Alloantigen-Specific Regulatory T Cells Synergize To Promote Long-Term Graft Survival in Immunocompetent Recipients. J Immunol. 184, 624-636 (2010).
  24. Jhunjhunwala, S., Raimondi, G., Thomson, A. W., Little, S. R. Delivery of rapamycin to dendritic cells using degradable microparticles. J Control Release. 133 (13), 191-197 (2009).
  25. Kapse-Mistry, S., Govender, T., Srivastava, R., Yergeri, M. Nanodrug delivery in reversing multidrug resistance in cancer cells. Front Pharmacol. 5 (159), 1-22 (2014).
  26. Musacchio, T., Torchilin, V. P. Recent developments in lipid-based pharmaceutical nanocarriers. Front Biosci (Landmark Ed). 1 (16), 1388-1412 (2011).
  27. Cerpnjak, K., Zvonar, A., Gašperlin, M., Vrečer, F. Lipid-based systems as a promising approach for enhancing the bioavailability of poorly water-soluble drugs). Acta Pharm. 63 (4), 27-445 (2013).
  28. Rodrìguez-Gascòn, A., Pozo-Rodrìguez, A., Solinìs, M. A. Development of nucleic acid vaccines: use of self-amplifying RNA in lipid nanoparticles. Int J Nanomedicine. 9, 1833-1843 (2014).
  29. Almeida, A. J., Souto, E. Solid lipid nanoparticles as a drug delivery system for peptides and proteins. Adv Drug Deliv Rev. 59, 478-490 (2007).
  30. Pardeshi, C., et al. Solid lipid based nanocarriers: an overview. Acta Pharm. 62, 433-472 (2012).
  31. Attama, A. A., Momoh, M. A., Builders, P. F. Lipid Nanoparticulate Drug Delivery Systems: A Revolution in Dosage Form Design and Development. Recent Advances in Novel Drug Carrier Systems. Sezer, A. D. , 107-140 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Phase Inversion TemperatureDynamic Light ScatteringDifferential Scanning CalorimetryFluorescence MicroscopyFlow CytometryMTT AssayParticle Cell InteractionsNanoparticle Synthesis

مقالات ذات صلة