كان استخدام عينات التشريح والحية الصور MR لهذا البروتوكول وفقا للوائح المحلية والموافقة عليها من قبل مجلس المراجعة المؤسسية المحلية من المركز الطبي لجامعة اوتريخت (UMCU).
1. MR الموجهة المرضية التحقق من القشرية Microinfarcts
- فيفو السابقين MRI
- عند التعامل مع أنسجة المخ، وارتداء القفازات دائما وملابس واقية مناسبة.
- بناء على سؤال البحث، حدد المناسبة، ويفضل 10 مم، الثابتة الفورمالين ألواح الدماغ. وقد استمدت ألواح الدماغ لهذه الورقة من قسم أمراض الأعصاب من UMCU، والمركز الطبي لجامعة VU (VUMC)، يستند المعروفة الزهايمر علم الأمراض.
- الفورمالين-إصلاح العقول كلها لمدة 3-4 أسابيع على الأقل عن طريق الغمر في 10٪ من الفورمالين، قبل القطع. قطع العقول إلى ألواح الاكليلية، تحتوي على كل من نصفي الكرة الأرضية.
- لمسح بعد الوفاة، حدد على سبيل المثال جيش تحرير السودان ثلاث الدماغبكالوريوس في الدماغ، التي اتخذت من أمامي، الصدغي الجداري، والمناطق القفوية من الدماغ. هو الأمثل البروتوكول الحالي لاستخدام ثلاثة ألواح الدماغ الاكليلية، تحتوي على كل من نصفي الكرة الأرضية، في جلسة مسح واحد.
- التقاط صور لألواح الدماغ في كلا الجانبين (الظهرية والذيلية)، وتدوين الملاحظات بعناية (أو جعل الرسومات) من التوجه للألواح في حاوية والماسح الضوئي، لاحق شارك في توطين الأنسجة مع التصوير بالرنين المغناطيسي.
- ملء وعاء بنيت لهذا الغرض (الشكل 1) - في هذه الحالة واحد يلائم داخل MR رئيس لفائف - مع الفورمالين الطازج 10٪ في RT. إذا كان غير مرغوب إشارة MRI من السوائل، واستخدام الفلورة (PFPE) زيوت التشحيم مع كثافة مناسبة بدلا من الفورمالين (مثل Fomblin أو Galden PFPE). ضمان استخدام مجلس الوزراء التدفق عند التعامل مع الفورمالين.
- عند وضع ألواح الدماغ في الحاوية، تأكد لتجنب فقاعات الهواء. إزالة غالبية فقاعات الهواء التي كتبها بلطف SHAKIنانوغرام الأنسجة، إما باليد أو باستخدام شاكر أو الموجات فوق الصوتية حمام.
- تأكد من ألواح لا يمكن أن تتحرك داخل الحاوية والحد من كمية السوائل اللازمة، وذلك باستخدام وعاء أصغر للحفاظ على ألواح في مكان (الشكل 1).
- تغطية حاويات من البلاستيك أو parafilm، لمنع التبخر وحماية MR (رئيس) لفائف من التلوث المحتمل (الشكل 2).
- استخدام كامل الجسم 7T MRI الماسح الضوئي مع لفائف المناسب. في هذا البروتوكول على الإرسال المزدوج و32 قناة تلقي يستخدم لفائف الرأس.
- وضع الحاوية في لفائف الرأس، ملفوفة في منشفة أو الجراحي underpad، لمنع إراقة المحتملين من السوائل. تأكد من أن الحاوية لا يمكن أن تتحرك، وأن ألواح تبقى في وضع أفقي (الشكل 2).
- تشغيل تفحص المسح التي يمكن استخدامها لتخطيط عمليات المسح عالية الدقة، الصحيح B0 التجانس باستخدام أداة الملئ المناسبة، ومعايرة قوة RFللحصول على زوايا الوجه الصحيح (عدد قليل من ألواح تتطلب طاقة أقل مقارنة في الجسم الحي مسح كامل الرأس) وفقا لبروتوكول الشركة الصانعة.
- التخطيط لعمليات الاستحواذ عالية الدقة على فحص المسح، لضمان يتم تضمين ألواح الدماغ بشكل كامل في مجال رؤية. مسح ألواح الدماغ O / N مع الاستحواذ عالية الدقة هو مبين في الجدول رقم 1، التي هي الأمثل لخارج الجسم الحي التصوير. بروتوكول اكتساب المقدمة هنا يشمل صورة 3D FLAIR، T2، T1 والمرجحة مع قرار موحد الخواص من 0.4 ملم، وT2 * صورة المرجحة مع قرار موحد الخواص من 0.18 ملم.
- تحديد العمليات تلقائية للبرامج التي قد يقطع المسح، مثل الآلي يصل التواريخ التي تعمل O / N، أو تحذيرات لتحفيز الأعصاب الطرفية، وتأكد لن توقف الإجراءات الماسح الضوئي عن طريق هذه.
- مراقبة الماسح الضوئي O / N لالممكنة تأكيد النوافذ المنبثقة التي قد يقطع المسح الضوئي، باستخدام مثلا اتصال VPN.
- العودة في صباح اليوم التالي (بعد الوقت الإجمالي تفحص ما يقرب من 12 ساعة في البروتوكول الحالي). تخزين ألواح الدماغ في الفورمالين، وتنظيف.
- حفظ الصور إلى قرص صلب خارجي.

الشكل 1. إعداد ألواح الدماغ الثابتة الفورمالين لمسح بعد الوفاة في 7T MRI. شغل A البرسبيكس الحاوية بنيت لهذا الغرض مع أي 10٪ من الفورمالين أو مواد التشحيم الفلورة (PFPE) إذا إشارة MRI من السائل هو غير مرغوب فيها. وضعت ثلاثة 10 مم ألواح الدماغ الاكليلية الثابتة الفورمالين في الحاوية. يتم استخدام الحاويات الصغيرة للحفاظ على ألواح في المكان. الشريط الحاوية الثانية إلى الأولى، لمنع الحركة.

الشكل 2. التنسيبمن الحاوية بنيت لهذا الغرض في 7T رئيس لفائف. غطي الوعاء مع البلاستيك أو parafilm لمنع التبخر من الفورمالين. وضع الحاويات، المغلقة في منشفة أو underpad الجراحية، في لفائف رئيس ماسح ضوئي 7T MR. تأكد من أن الحاوية لا يمكن أن تتحرك، وأن ألواح تبقى في وضع أفقي.
- التشريح المرضي
- تحديد نظام معلومات إدارة الشركات القشرية ممكن - أو الآفات الأخرى ذات الاهتمام - على الصور المكتسبة. هذه الآفات هي أهداف للتحليل النسيجي. احترس من القطع الأثرية، مثل تلف الأنسجة بعد الوفاة (التي تظهر أحيانا على سطح ألواح الدماغ بسبب انقطاع) أو طويلة الأجل التحف تخزين الفورمالين (على سبيل المثال، hypointensities MRI الخشنة تمثل التغييرات neuropil 8).
ملاحظة: أنواع فرعية النسيجية المرضية مختلفة من نظام معلومات إدارة الشركات القشرية لها خصائص مختلفة MR. لمزيد من التفاصيل على أنواع فرعية CMI، يشار إلى القارئ إلى آخر خارج الحي دراسة 7. - AFثالثا تحديد نظام معلومات إدارة الشركات القشرية ممكن على صور الرنين المغناطيسي، أخذ عينات من المنطقة ذات الاهتمام من أجل التحقق من الأنسجة. تأكد لقطع المنطقة، التي تحتوي على المعالم التشريحية، لمطابقة لاحق من التصوير بالرنين المغناطيسي مع التشريح. أداء التشريح القياسية، كما يتبع (ولكن قد تنطبق أيضا نهج أخرى).
- قطع منطقة ما يقرب من 30 × 20 × 5 مم 3 التي تتضمن الممكنة القشرية CMI.
- للحصول على عينات دقيقة، وتقدير موقع الآفة من قبل شريحة سمك من الصور MR، والهندسة المعمارية الأنسجة. قطع يدويا النسيج أعلى قليلا من مكان الآفة تشير التقديرات إلى الحد من كمية باجتزاء مسلسل (بعد البارافين التضمين) أن هناك حاجة لاستهداف الآفة.
- تأكد من الأنسجة عينات يناسب شريط الأنسجة. ضع السطح لتكون قطع وجها لأسفل في الكاسيت.
- منع جميع أشرطة الأنسجة في 10٪ من الفورمالين، حتى تجهيز الأنسجة.
- معالجة الأنسجة لتضمين البارافين. هذا وعادة ما ينطوي إجراء الآلي من التجفيف النسيج، من خلال سلسلة من الكحول متدرج (على سبيل المثال، 70٪ إلى 95٪ إلى 100٪) الحمامات، وتنظيف الأنسجة في زيلين.
- تضمين الأنسجة في كتل شمع البارافين. ضمان السطح المراد خفض يواجه عقوبة تصل بعد التضمين.
- قطع 4-6 ميكرون أقسام التسلسلية مع مشراح، حتى يتم استرداد الآفة المستهدفة.
- تعويم المقاطع على سطح 37 درجة C حمام الماء. تحميل المقاطع على الشرائح الزجاجية. ضع الشرائح على كتلة الاحترار لسندات الأنسجة على الزجاج. متجر الشرائح O / N في RT.
- إجراء تلطيخ المناسب (على سبيل المثال، H & E تلطيخ) على جزئين الأول، والحفاظ على أقسام فارغة مجاورة لاستخدامها مرة أخرى (على سبيل المثال، المناعية).
- ساترة الأقسام H & E الملون، وذلك باستخدام قطرة من تصاعد المتوسطة في الاختيار. خفض بلطف زلة، وتجنب فقاعات الهواء.
- دراسة المقاطع باستخدام المجهر الضوئي، في وماج المناسبnification. مقارنة المقاطع لصور الرنين المغناطيسي التي تم الحصول عليها سابقا.
2. تقييم Microinfarcts القشرية على فيفو 7T MRI
- أداء 7T MRI في عدد السكان المريض من اهتمامك، وذلك باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي في الجسم الحي بروتوكول (التي تضم ما لا يقل عن FLAIR 3D) كما هو موضح في 6.
- تقييم نظام معلومات إدارة الشركات القشرية على المجراة الصور 7T MR كما هو مفصل في الخطوات التالية، وذلك باستخدام معايير التصنيف 7T التالية لنظام معلومات إدارة الشركات: نظام معلومات إدارة الشركات القشرية هي hyperintense على FLAIR (مع أو بدون مركز hypointense)، hyperintense على T2، hypointense على T1، للكشف على اثنين على الاقل من آراء الدماغ (على سبيل المثال، السهمي ومستعرضة)، يقتصر على القشرة، تختلف عن المساحات المحيطة بالأوعية، مع أكبر البعد ≤4 مم 6،7.
- استخدام واجهة مع ثلاثة مشاهد صورة، لعرض في وقت واحد FLAIR، T1، T2، والصور، على سبيل المثال، MeVisLab (الشكل 3). هذا ألو منصةوفاء سلطان لدمج المشاهدين متعددة ووضع علامات على مواقع آفة محتملة.
- أولا تقييم نصف الكرة احدة على FLAIR نظرا السهمي. فحص القشرة بأكملها للآفات hyperintense. أي hyperintens الآفة ≤4 ملم غير محتملة CMI. وضع علامات بالضغط على كل الممكنة CMI.
- تكرار لنصف الكرة الأرضية الأخرى.
- التحقق من جميع المواقع المحددة على T1 و T2. تجاهل موقع إذا لم يكن hypointense على T1 أو hyperintense على T2.
- تقييم عرض مستعرضة، على FLAIR، T1، T2 و. تجاهل موقع إذا كان غير مرئي. تحقق من وجهة نظر الاكليلية في حالة الشك.
- احترس من القطع الأثرية MRI والاختلافات التشريحية (خصوصا حواف sulcal).
- حفظ علامات.

الرقم 3. مثال منصة عرض صورة لتقييم microinfarcts القشرية. يستخدم واجهة، الباحثegrated في MeVisLab. هذا البرنامج يتيح لدمج المشاهدين متعددة في وقت واحد، التبديل بسهولة بين سهمي / مستعرضة / التوجيه الإكليلي، ووضع وحفظ علامات على مواقع آفة محتملة. (علامات مختلفة يمكن اختيار لأنواع مختلفة من الآفات).
3. تقييم Microinfarcts القشرية على فيفو 3T MRI
- الحصول على صور 3T MR السكان المريض من اهتمامك. ويمكن أيضا أن تستخدم البيانات الموجودة طالما يتضمن البروتوكول التصوير بالرنين المغناطيسي على الأقل T1 3D، والذوق وT2.
- تقييم نظام معلومات إدارة الشركات القشرية على المجراة الصور 3T MR كما هو مفصل في الخطوات التالية، وذلك باستخدام معايير التصنيف 3T التالية لنظام معلومات إدارة الشركات: نظام معلومات إدارة الشركات القشرية هي hypointense على T1 (isointense مع CSF)، للكشف عن اثنين على الاقل من آراء الدماغ (مثل السهمي ومستعرضة)، يقتصر على القشرة، تختلف عن المساحات المحيطة بالأوعية، مع أكبر البعد ≤4 مم.
- استكشاف الموقع من hypointense الآفة القشرية وجدت في T1 على الذوق وT2 الصور مرجح. معدل الآفة بشكل القشرية CMI المحتملة إذا كان الموقع هو hyperintense أو isointense (مع المادة الرمادية) على الذوق وT2. تجاهل الآفة إذا كان في نفس الموقع تم العثور على إشارة hypointense على T2، مما يدل على آفة T1 hypointense إما بسبب آفة النزفية، سفينة، أو قطعة أثرية. في حالة الشك، تحقق من موقع على T2 * صورة المرجح 9.
- استخدام نفس واجهة كما هو موضح أعلاه.
- أولا تقييم نصف الكرة احدة على T1 نظرا السهمي. فحص القشرة بأكملها للآفات hypointense التنسيق. أي hypointense الآفة ≤4 ملم غير محتملة CMI. وضع علامات بالضغط على كل الممكنة CMI.
- تكرار لنصف الكرة الأرضية الأخرى.
- تقييم مستعرضة T1، وفي الوقت نفسه تحقق جميع المواقع المحددة على FLAIR مستعرضة وT2. يتعلق الموقع باعتباره CMI المحتملة إذا كان hyperintense أو isointense على الذوق وT2. تجاهل لط الموقعو يبدو أن قطعة أثرية أو الاختلاف التشريحي. تجاهل موقع إذا كان hypointense على T2.
- احترس من الأعمال الفنية التي تبدو وكأنها نظام معلومات إدارة الشركات على T1 الصور مرجح، خصوصا رنين القطع الأثرية في 'حواف' من الدماغ والتي سوف تظهر في العديد من التلافيف المجاور، احترس من حواف تلم، احترس من السفن الكبيرة في الفص الصدغي (في القطبين). وأخيرا، فمن المستحسن أن تجاهل نظام معلومات إدارة الشركات القشرية ممكن في الأنسجة في مقربة من احتشاء القشرية أكبر.
- حفظ علامات.