إإكسبلنتس الشبكية كاملة من الدجاج الأجنة لعلاج Electroporation للوالكيميائية الكاشف

Shahrzad Shirazi Fard; Maria Blixt; Finn Hallböök

doi:10.3791/53202

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إإكسبلنتس الشبكية كاملة من الدجاج الأجنة لعلاج Electroporation للوالكيميائية الكاشف

9.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/53202

⸱

سبتمبر 30, 2015

Shahrzad Shirazi Fard¹ , Maria Blixt¹ , Finn Hallböök¹

¹Department of Neuroscience, Biomedical Center, Uppsala University

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول وسيلة لتشريح، والتعامل معها بشكل تجريبي وإإكسبلنتس الشبكية ثقافة بأكملها من أجنة الدجاج. ثقافات يزدرع هي مفيدة عند نسبة نجاح عالية والفعالية واستنساخ هناك حاجة لاختبار آثار البلازميدات ل electroporation و / أو المواد كاشف، أي مثبطات الأنزيمية.

الملخص

شبكية العين هي نموذج جيد للجهاز العصبي المركزي النامية. حجم كبير للعين والأهم من ذلك الوصول للتلاعب التجريبية في البيضة / في الجسم الحي يجعل من الدجاج شبكية العين الجنينية نموذج تجريبي تنوعا وفعالة جدا. على الرغم من أن شبكية العين الدجاج سهلة لاستهداف في البيضة عن طريق الحقن داخل العين أو Electroporation لل، والتركيز الفعال والدقيق للالكواشف داخل شبكية العين قد يكون من الصعب السيطرة عليها بشكل كامل. قد يكون هذا بسبب الاختلافات في موقع الحقن الدقيق، والتسرب من العين أو نشرها متفاوتة من المواد. وعلاوة على ذلك، وتواتر التشوهات والوفيات بعد التلاعب الغازية مثل Electroporation للمرتفع إلى حد ما.

يصف هذا البروتوكول والبيضة السابقين تقنية لزراعة إإكسبلنتس شبكية العين كلها من أجنة الدجاج ويوفر طريقة للتعرض للرقابة في شبكية العين إلى الكواشف. بروتويصف العقيد كيفية تشريح، تجريبيا التلاعب، وإإكسبلنتس الشبكية ثقافة بأكملها من أجنة الدجاج. لل explants يمكن تربيتها لحوالي 24 ساعة وأن تخضع للتلاعب مختلفة مثل Electroporation لل. المزايا الرئيسية هي أن التجربة ليست متوقفة على بقاء الجنين وأن تركيز الكاشف قدم يمكن أن تختلف والسيطرة من أجل تحديد وتحسين التركيز الفعال. وعلاوة على ذلك، والتقنية هي سريعة ورخيصة وجنبا إلى جنب مع ارتفاع نسبة النجاح التجريبية، فإنه يضمن استنساخه النتائج. وينبغي التأكيد على أنه بمثابة مكمل ممتاز لتجارب أجريت في البيضة.

المقدمة

شبكية العين هي جزء من الجهاز العصبي المركزي وأنه هو، مع بساطتها النسبية والهندسة المعمارية الخلوية تتميز جيدا، وهذا نموذج شعبية لدراسة تطوير النظام العصبي المركزي. عين الجنين الدجاج كبيرة نسبيا بالمقارنة مع بقية الجنين. وبالتالي فإنه يمكن الوصول إليه بسهولة في البيضة للتلاعب التجريبية، مثل الحقن أو Electroporation لل، وبمثابة أداة ممتازة لاكتساب المعرفة حول خلايا شبكية والبيولوجيا التطورية في الجسم الحي. على الرغم من هذه المزايا الرئيسية، ويمكن البقاء على قيد الحياة من الأجنة تكون منخفضة عند التجارب هي الغازية مثل مع electroporations، تكرار الحقن، أو التلاعب التجريبية مجتمعة.