مقالة منهجية
تتيح تقنية Landis المعدلة القياس المزدوج للتوصيل الهيدروليكي للأوعية الدقيقة الفردية في المساريق للفئران العادية والمعدل وراثيا تحت ظروف التحكم والاختبار باستخدام تقنيات التروية الدقيقة. يوفر طريقة ملائمة لتقييم الآليات التي تنظم نفاذية الأوعية الدقيقة والتبادل عبر الأوعية الدموية في ظل الظروف الفسيولوجية.
تجارب لقياس خصائص نفاذية microvessels perfused بشكل فردي توفر جسرا بين التحقيق في الآليات الجزيئية والخلوية تنظيم نفاذية الأوعية الدموية في تربيتها الطبقات الوحيدة الخلية البطانية وخصائص الصرف الوظيفية للأسرة بأكملها الاوعية الدموية الدقيقة. ووصف طريقة ليقني؛ يدخل القنية ويروي microvessels venular من مساريق الفئران وقياس التوصيل الهيدروليكي للجدار microvessel. المعدات الرئيسية اللازمة تشمل مجهر حيوي داخلي مع مرحلة كبيرة المعدلة التي تدعم micromanipulators وضع ثلاث microtools مختلفة: (1) micropipette مشطوف زجاج ليقني؛ يدخل القنية ويروي microvessel. (2) كوب الصغرى مطبق لمنع عابر نضح وتمكين قياس transvascular حركة تدفق الماء عند الضغط الهيدروستاتيكي قياس، و (3) قضيب زجاج حادة لتحقيق الاستقرار في أنسجة المساريقي في موقع إقناء؛ إدخال القنية. وتعديل لانديس الصغرى انسداد TECHNIQرق يستخدم خلايا الدم الحمراء المعلقة في الإرواء الصناعي كعلامات لحركة السوائل transvascular، وأيضا تمكن يتم التحكم بدقة القياسات المتكررة لهذه التدفقات يتم تغيير الظروف التجريبية كما والهيدروستاتيكي والغروي فرق الضغط الأسموزي عبر microvessels. قياسات التوصيل الهيدروليكي لأول مرة باستخدام الإرواء التحكم، ثم بعد إعادة إقناء؛ إدخال القنية من نفس microvessel مع perfusates اختبار تمكين إقران مقارنات بين استجابة microvessel في ظل هذه الظروف تسيطر عليها بشكل جيد. وكانت محاولات لتمديد طريقة لmicrovessels في مساريق الفئران مع التعديلات الجينية المتوقع أن تعديل نفاذية الأوعية الدموية محدودة للغاية بسبب غياب microvessels طويلة مستقيمة وغير متفرع في مساريق الماوس، ولكن مؤخرا بالاطلاع على الفئران مع التعديلات الجينية مماثلة تستخدم ومن المتوقع أن فتح مجالات جديدة للتحقيق حيث الطرق الموضحة في هذه الوثيقة يمكن تطبيقها على كريسبر التكنولوجيا / Cas9.
تروية دقيقة في الأوعية الدموية يستلزم إنشاء تسيطر تدفق وسائل الإرواء الاصطناعي للتكوين المعروفة عبر micropipette في أحد الأوعية الدموية عادة ما تكون أقل من 40 ميكرون في القطر. ولا تزال السفينة perfused ضمن بيئة الأنسجة الطبيعية، ويتم مع perfused الدم حتى الحيوان لوقت إقناء؛ إدخال القنية. عندما تستخدم بالاقتران مع مجموعة من تصوير الفيديو أو تقنيات فلوروميتريك، تروية دقيقة في الموقع يتيح قياس الماء والمذاب التدفقات عبر جدران microvessels في ظل الظروف التي لا يعرف القوى الدافعة لهذه التدفقات وخصائص نفاذية جدار الأوعية الدموية يمكن أن يكون تقييم مباشرة. وعلاوة على ذلك، من خلال التحكم في تكوين السائل المحيط microvessel في ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بيان الأخلاق: تم استعراض جميع الإجراءات واعتمادها من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي.
1. تصنيع أولي بال micropipettes، Restrainers، والحاجزون
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ويبين الشكل 4 نتائج قياس مدار الساعة من التغييرات في L ص في الفئران venular microvessel مقنى تباعا مع أربعة perfusates 33 تم استخدام حجم L ص محسوبة على الضغط المستمر كمقياس للتغييرات في microvessel جدار النفاذية، لأول مرة في سيطرة الدولة مع الإرواء تحتوي على 1٪ ألبومين المصل البقري ثم عندما تعرضت السفينة إلى براديكينين كيل التهابات (لبنك) باستخدام micropipette الثاني تحتوي على 10 نانومتر لبنك. تسبب براديكينين زيادة عابرة في L .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تفاصيل L الحسابات ص. على الرغم من أن تحدث حركة السوائل transvascular بينما perfused السفينة بحرية، وهذا التبادل هو أبعد ما يكون صغير جدا بحيث لا يمكن قياسها خلال نضح الحرة لأنها عادة ما تكون أقل من 0.01٪ من معدل نضح السفينة. ومع ذلك، عندما نضح توقف عابر التي تسد microvessel، وتدفق transvascular (أي الترشيح) يقاس من حركة خلايا الدم الحمراء علامة في التجويف كعمود من السوائل بين الخلايا الحمراء علامة وموقع الانسداد يقصر كما هو موضح في الشكل (3).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح HL44485 وHL28607.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المجهر والجدول والمرحلة مجهر | |||
| مقلوب (نوع معدني) برأس ثلاثي العينيات للفيديو: مثال | أوليمبوس | CK-40 | حاول وضع العدسات أعلى بالنسبة للمرحلة - عليك أن تنظر من خلال العدسات أثناء الوصول إلى أعلى المسرح فوق المجهر المقلوب المتداخل |
| (النوع المعدني) برأس ثلاثي العين للفيديو: مثال | لايكا | تحاول DMIL | وضع العدسات أعلى بالنسبة إلى المرحلة - عليك أن تنظر من خلال العدسات أثناء الوصول إلى أعلى المسرح فوق المتداخلين المتداخلين |
| بالقطر الضيق ، هدف مسافة العمل الطويلة: مثال | نيكون | نيكون E Plan 10 مرات ؛ / 0.25 منصة LWD | |
| - 1/2 بوصة أو 1 سم ورشة | يجب أن تكون ثقيلة لتقليل الاهتزاز | ||
| Unislide x-y الجدول: حمامة الذيل الشرائح | Velmex | AXY4006W1 | |
| VIDEO | |||
| CCD كاميرا الفيديو: مثال | Pulnix | TM-7CN (لم يعد متوفرا) | لا |
| إلى لون نظام التقاط الفيديو مع الصوت - | |||
| (إطار ثابت تماما ، حركة إطار واحد) | |||
| صغير معالجات ميكروفون | |||
| دقيقة, أصحاب | |||
| micromanipulator, XYZ (3) | السابق / Stoelting (لم يعد متوفرا) | ابحث عن Z الدقيقة, ونطاق أكبر من السفر في محركات الأقراص الخشنة لسهولة تحديد المواقع | |
| محرك المسبار الهيدروليكي, طريقة واحدة | FHC | 50-12-1C | تحتاج إلى شراء إما محرك يدوي أو محرك إلكتروني |
| يدوي أسطوانة محرك | FHC | 50-12-9-02 | |
| أو محرك هيدروليكي ، 3 اتجاهات | Siskiyou Corporation | MX610 (1-way) أو MX630 (3-way) | رائعة للأذرع القصيرة ، مملوءة بالمياه ويجب إرسالها مرة أخرى لإعادة التعبئة ~ كل عامين |
| موصلات / قضبان / حوامل | Siskiyou Corporation | MXC-2.5 ، MXB إلخ. | |
| دبوس ملزمة | Starrett | 162C | لعقد |
| حامل ماصة | World Prescision Instruments | MPH3 | |
| مقياس ضغط الماء ~ 120 سم | |||
| علبة مجهر | |||
| شفافة زجاجية لعلبة المجهر للحيوان | |||
| 3/4 بوصة قرص كوارتز مصقول ~ 1/4 بوصة | طويل القامةشركة الكوارتز العلمية | مخصص | ( أو زجاج شبكي مصقول ، زجاج) ؛ تأكد من أن الارتفاع أقل من مسافة العمل |
| لغراء زجاج شبكي موضوعي (لحام 4: تحذير مادة مسرطنة) | |||
| لاصق طبي لبئر الأنسجة | NuSil | MED-1037 | |
| حصيرة حرارية مطاطية من السيليكون لجميع الأغراض ، سخان 5 "طول × 2" W | Cole Parmer | EW-03125-20 | لعلبة المجهر - يحتاج إلى سلك ووحدة تحكم - يتوفر إصدار |
| 240 فولتمحول سلك الطاقة لسخانات وأطقم Kapton ، 6 أقدام ، 120 فولت تيار متردد | كول بارمر | EW-03122-75 | |
| STACO 3PN1010B وحدة تحكم متغيرة الجهد ، 10 أمبير ؛ 120 فولت في ، 0-140 فولت خارج | كول بارمر | EW-01575-00 | |
| PIPET MANUFACTURE | |||
| مجتذب الماصة العمودي | Sutter Instrument Company | P-30 مع خيوط | |
| 1.5 مم OD أنابيب شعرية رقيقة الجدار | Sutter Instrument Company | B150-110-10 | |
| مطحنة الماصة حجر الهواء ومجهر التشريح - انظر المرجع في النص | أو قم بشراء حزمة من Sutter Instruments أو World Precision Instruments | ||
| RX Honing Machine Machine ، System II | RX Honing Machine Corporation | MAC-10700 Rx System II آلة | بديلة لحجر الهواء ، استخدم مع مجهر تشريح مركب بزاوية |
| مع قرص شحذ السيراميك | ، تستخدم شركة RX Honing Machine | Corporation "كما هي" أو نعلق | |
| صفائح فيلم اللف ، 0.3 أو 0.5 um | 3M | الجزء رقم 051144 80827 | 268X صفائح فيلم اللف الإمبراطوري مع ظهر لاصق - يمكن شراؤها من أمازون |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن