وطريقة لتقييم خصائص تعزيز من الايثانول في الفئران بدون ماء الحرمان، السكرين يتلاشى أو الوصول إلى تدريب موسع

Summary

يصف هذا البروتوكول رواية وكفاءة طريقة لبدء استثابي بسرعة الاستجابة للإيثانول في الفئران التي، خلافا للطرق القياسية، لا يحتاج إلى الحرمان من الماء أو السكرين / السكروز يتلاشى لبدء الاستجابة.

Abstract

وتستخدم أساليب الإدارة الذاتية عن طريق الفم هواء فعال عادة لدراسة خصائص يعزز من الايثانول في الحيوانات. ومع ذلك، فإن الأساليب القياسية تتطلب السكرين / يتلاشى السكروز، والحرمان من المياه و / أو التدريب الموسع لبدء استثابي الاستجابة في الفئران. وتصف هذه الورقة رواية وكفاءة طريقة لبدء استثابي بسرعة الاستجابة لالإيثانول الذي ترونه مناسبا المجربون ولا تتطلب الحرمان من الماء أو السكرين / يتلاشى السكروز، وبالتالي القضاء على إرباك المحتمل لاستخدام المحليات في الإيثانول دراسات الإدارة الذاتية استثابي. مع هذا الأسلوب، الفئران ويستار عادة اكتساب والحفاظ على الإدارة الذاتية من حل الإيثانول 20٪ في أقل من أسبوعين من التدريب. وعلاوة على ذلك، تركيزات الإيثانول الدم والمكافآت هي مرتبطة بشكل إيجابي لدورة الإدارة الذاتية 30 دقيقة. وعلاوة على ذلك، النالتريكسون، دواء وافقت عليها الهيئة للاعتماد على الكحول التي قد تظهر لقمع الإيثانول الإدارة الذاتيةفي القوارض، الجرعة بشكل تابع يقلل من تناول الكحول والدافع للاستهلاك الكحول للفئران، إدارة الذات الايثانول 20٪، وبالتالي التحقق من صحة استخدام هذه الطريقة الجديدة للدراسة خصائص يعزز من الكحول في الفئران.

Introduction

وقد أثبتت تطوير نماذج حيوانية لدراسة آثار يعزز من المخدرات أداة هامة لدراسة ادمان المخدرات البشري. وبشكل أكثر تحديدا، استثابي الإدارة الذاتية هي النموذج السلوكي المستخدمة على نطاق واسع التي هي واحدة من أكثر الوسائل فعالية لتقييم الآثار يعزز إيجابية من حل الإيثانول تستهلك شفويا. أما القضية الأولى في تطوير هذا النموذج الذوق مكره الرئيسي لتركيزات عالية من الإيثانول لمعظم القوارض، وهي الظاهرة التي يشترك أيضا في البشر مع خبرة قليلة أو معدومة مع الكحول ^1. بروتوكول قياسي للتغلب على هذا الحاجز يتطلب الحرمان من الماء و / أو السكرين أو السكروز يتلاشى لاقتناء وصيانة الإدارة الذاتية. ومع ذلك، هذين النهجين ليست مفيدة. أنها تتطلب فترات طويلة من التدريب لمجرد الشروع في الاستجابة للإيثانول والحصول على معدل النجاح النسبي لاكتساب. يقدم استخدام المحليات أيضا التحيز المحتمل فيتفسير البيانات الإدارة الذاتية. لا تنطبق هذه القيود إلى بروتوكول التالي.

لفترة وجيزة، وقد أظهرت شمشون وزملاؤه ² ما هو مطلوب حل الإيثانول في حل الحلو من 20٪ سكروز وثم يتلاشى من حلاوة أكثر من 4 أسابيع من التدريب لبدء الاستجابة لمدة 10٪ من الإيثانول في الماء. علاوة على ذلك، حققت كمية الإيثانول يمكن الاعتماد عليها عادة في 6-8 أسابيع ^1-3. هذا النهج هو مشكلة كبيرة. أولا، فإنه يتطلب فترات طويلة من التدريب قبل المحققين يمكن أن تبدأ لقياس الإيثانول الإدارة الذاتية. في المقابل، عن طريق الوريد الإدارة الذاتية من الكوكايين أو الهيروين تتطلب 0-1 أيام من التدريب قبل الدواء على رافعة توصيل المواد الغذائية في طعام الحيوانات المحظورة، ومستقرة الاستجابة لمكافحة المخدرات وغالبا ما يتحقق في 10-12 أيام ^4،5. الحد آخر من هذا الأسلوب هو حقيقة أن السكرين والسكروز ومجزية للغاية للفئران وتثير أنماط نشاط المخ الصورةimilar إلى تعاطي المخدرات، وبالتالي تقديم قدرات ليفند في الإيثانول الإدارة الذاتية يدرس ^6-9. وأخيرا، الفئران اكتساب الإدارة الذاتية من حل الإيثانول باستخدام هذه الطريقة تظهر التباين في اقتناء واستجابة معدل ^1،10، مع نسبة كبيرة من الفئران استبعاد باستمرار من التجارب بسبب استحواذ ناجحة و / أو عدم كفاية معدل الاستجابة.

على النقيض من ذلك، مع هذا البروتوكول، ونحن نقدم وسيلة كفؤ بسيط لاقتناء وصيانة طريق الفم الإدارة الذاتية من الايثانول 20٪ في محلول المياه التي لا تتطلب الحرمان من الماء، والسكروز / السكرين يتلاشى أو التدريب الوصول الموسعة. وكشف التحقيق مؤخرا أن الإدارة الذاتية لإنتاج الإيثانول عن طريق الفم يعرض على شكل حرف U منحنى الاستجابة للجرعة مقلوب مع أكبر قدر من السعرات الإيثانول خلال الإدارة الذاتية في تركيز الايثانول 20٪، وبالتالي توفير الأساس المنطقي لاختيار 20٪ من محلول الإيثانول في experim لديناتصميم ental ^11.

Protocol

تتم جميع الإجراءات وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة للرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.

1. رعاية الحيوان والإسكان

1. ولدى وصوله في المستعمرة، الفئران منزل الذكور ويستار وزنها 200-225 غرام عند وصوله في أزواج في درجة الحرارة (21 درجة مئوية) والبيئة التي تسيطر عليها الرطوبة مع دورة ضوء الظلام 12 ساعة عكسه.
   ملاحظة: اعتمادا على منطق التجارب، قد تكون الفئران واحد يضم.
2. السماح للفئران حتى يتأقلم إلى الحظيرة ودورة الخفيفة لمدة أسبوع على الأقل قبل البدء في التجربة والتعامل معها يوميا. وزن الحيوانات مرة واحدة أسبوعيا.
3. إعطاء الفئران حرية الوصول إلى تشاو ومياه الصنبور لمدة التجربة (الحرمان من الماء وليس من الضروري لبدء الاستجابة ^12). إجراء جميع التجارب السلوكية خلال المرحلة المظلمة من دورة ضوء الظلام في غرفة اختبار المظلمة.
   ملاحظة: على الرغم من أننا نستخدم بشكل روتيني الشباب البالغين فئران ويستار الذكور (أيام بعد الولادة 62-65)، وهذا عrotocol يمكن أن يكون نظريا مناسبة للتحقيق في سلالات أخرى من الفئران، وكذلك الجنس و / أو سن الخلافات.

2. التدريب هواء فعال

1. إجراء جميع عمليات التدريب السلوكي والتجارب في غرف استثابي متطابقة قياس 30.5 × 29.2 × 24.1 سم وتحتوي على طوابق شبكة والمقالي النفايات واصطف مع أغطية فراش (تغيرت بين الحيوانات للحد من الاشارات رائحة)، ويضم في مقصورات-المخففة صوت مجهزة مراوح العادم للتهوية .
   ملاحظة: يتم تدريب الفئران عن طريق تكييف هواء فعال، من يوم 1 من التدريب (ردا على رافعة ضرورية للحصول على معزز) بين + 1 ساعة و+ 8 ساعات من دورة الظلام. ليس هناك ما قبل التعرض للكحول، ولا الطعام أو السوائل قبل تشكيل التدريب الكحول.
2. تجهيز كل غرفة استثابي مع أضواء التحفيز، مضخات الحقنة واثنين من العتلات قابل للسحب وضعه أفقيا إلى وعاء كوب السائل. غرف واجهة والتحكم بواسطة الكمبيوتر باستخدام البرنامج المناسب.
   ملاحظة:ومعظم البائعين توفير حزم الإدارة الذاتية تحتوي على جميع العناصر الضرورية وكذلك البرمجيات واجهات اللازمة للسيطرة على المجلسين.
3. كتابة برنامج تكييف هواء فعال، الذي يبدأ الجدول الزمني للنسبة الثابتة (FR) من 20٪ من الإيثانول التعزيز (جدول الإجرائي الذي يتم تعزيز استجابة إلا بعد عدد معين من الردود) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. على سبيل المثال، في لنسبة ثابتة 1، الفئران يجب أن تنتج رد واحد للحصول على معزز (راجع قسم ملفات التعليمات البرمجية الإضافية للحصول على مثال برنامج FR1). تنفيذ الأوامر التالية.
   1. تمديد اثنين من العتلات بمناسبة بداية الدورة وللإشارة إلى توافر الكحول.
      ملاحظة: يتم مكافأة واحدة الصحافة رافعة على رافعة المرتبطة الإيثانول (نشط) من خلال تقديم وبلغ حجم التداول 100 ميكرولتر من 20٪ من الإيثانول في المياه في المتاخمة الشرب بشكل جيد ويبدأ 5-ق فترة ما يصاحب ذلك من المهلة بشرت به إضاءة للجديلة الضوء فوق رافعة. يتم إدخال الضوء جديلة في يوم 1 من التدريب.
   2. خلال فترة المهلة، سجل يستجيب على الرغم من أنه لا يوجد لديه عواقب حسب الجدول الزمني. ردود سجل على رافعة أخرى (غير نشطة) على الرغم من أنها لا تكون له عواقب السلوكية. ملاحظة: يخدم رافعة الخاملة كعنصر تحكم لتقييم السلوك غير محددة.
   3. تسجيل عدد من الردود على رافعة النشطة (معدلات الاستجابة) وعدد من المكافآت الايثانول 20٪ حصل.
   4. بعد انقضاء مدة 30 دقيقة، وسحب العتلات اثنين للإشارة إلى نهاية الدورة وللإشارة إلى نهاية توافر الكحول.
   5. حفظ وأرشفة كافة البيانات.
4. قبل البدء في دورة تدريبية، والتحقق من حسن سير العمل في جميع الأجهزة في كل غرفة استثابي (روافع قابل للسحب، السائل موزع).
5. إعداد 20٪ ت / ت حل الإيثانول من 190 إثبات (95٪) من الإيثانول المخفف في مياه الحنفية.
   ملاحظة: يمكن أن تظل الحل الايثانول في درجة حرارة الغرفة. اعتماداعلى الشركة المصنعة، قد تكون الحلول الأسهم الإيثانول تصل إلى 99.98٪. لاحظ أيضا أنه في حين أن في معظم المخطوطات المنشورة، يتم عرض عادة تركيزات الإيثانول حجم / حجم، البعض قد تقديمها لوزن / حجم.
6. ملء المحاقن مع الحل الايثانول 20٪ وتأكد من عدم وجود تسرب أو فقاعات الهواء في خطوط ضخ. دفع يدويا كمية صغيرة من الايثانول من خلال خطوط ضخ للتأكد من أن الإيثانول سيتم تسليمها بشكل صحيح في وعاء من الاستجابة عززت الأولى. تجفيف وعاء مع منشفة ورقية، وتأكد من أنها فارغة قبل بدء الدورة.
7. تحميل البرنامج الذي يتحكم في جدول FR من 20٪ من الإيثانول التعزيز
8. قطار operant- والفئران ساذجة المخدرات تحت جدول زمني FR1 في تقرير المصير، تدير 20٪ من الإيثانول دون الحرمان من الماء خلال 30 جلسات دقيقة.
   1. نقل الفئران من الحظيرة إلى غرفة الاختبار باستخدام قفص النقل.
   2. تعيين كل فأر لغرفة واحدة.اتخاذ كل فأر الفردية من القفص النقل ووضعها في غرفة الإدارة الذاتية المعينة.
   3. محاولة للحفاظ على شروط التجربة تتفق كل يوم. لذلك، دائما اختبار الفئران في غرفة الإدارة الذاتية نفسها تقريبا في نفس الوقت كل يوم.
   4. بدء تشغيل البرنامج الذي يبدأ الجدول الزمني FR1 من 20٪ من الإيثانول التعزيز.
   5. في نهاية الدورة، وإزالة الفئران من غرف الإدارة الذاتية وإعادتها إلى الحظيرة.
   6. من أجل تأكيد يدويا أن الحل الكحول المستهلكة من قبل الحيوانات، واستخدام منشفة ورقية ومعرفة ما اذا كان يتم تجفيفها وعاء. بدلا من ذلك، استخدم 1 أو 2 مل حقنة وجمع السائل المتبقي في وعاء لتقدير حجم التي لا تستهلك.
      ملاحظة: للحصول على قياس أكثر دقة (ولكن أيضا أكثر تكلفة)، فمن الممكن لتجهيز كل غرفة مع نظام lickometer متصلة وعاء كوب السائل التي تتيح للإحصاء دقيق للعقق التي تنتجها الفئران خلال الدورة الإدارة الذاتية.
   7. تنظيف الجدران وشبكة أرضية كل غرفة مع مطهر السطح.
   8. بعد الاستعمال، والحفاظ على خطوط ضخ من قبل تنظيفها بمحلول الإيثانول 70٪. عندما لا تكون قيد الاستعمال، إدراج الغطاء لتجنب العفن والغبار.
9. بعد كل دورة، وجمع وتحليل البيانات التي تم إنشاؤها. بوجه أخص، وحساب متوسط ​​عدد المطابع رافعة نشطة، ومتوسط ​​عدد المكافآت الكحول التي تم الحصول عليها، فضلا عن متوسط ​​عدد المطابع رافعة الخاملة.
   ملاحظة: في معظم الصحف، ويرد استهلاك الكحول أيضا كمية الإيثانول في جم / كجم (الجسم). ويمكن حساب كمية الإيثانول باستخدام الصيغة التالية:
   
   مع حجم المستهلكة (مل) - عدد من المكافآت المكتسبة ± موحدة حجم / الثواب وكثافة الايثانول في درجة حرارة الغرفة - 0.789 غرام / مليلتر.
   على سبيل المثال، إذا كان الفئران وزنها 400 غرام حصل 20 ريواطلقة من 20٪ حل ت / ت الإيثانول:
   
10. عقد دورات 5/6 أيام في الأسبوع حتى استقرار الأداء (كما هو موضح ما لا يقل عن 15 جلسة وأي تغيير أكبر من 15٪ في العدد الإجمالي من المكافآت المكتسبة خلال 3 جلسات الأخيرة).
    ملاحظة: بمجرد الفئران قد وصلت إلى خط الأساس مستقرة على FR1، يمكن تعديل برنامج تكييف هواء فعال وفقا لتعليمات الشركة الصانعة لزيادة عدد الردود اللازمة للحصول على مكافأة الكحول. يمكن على سبيل المثال أن تكون زيادة لنسبة ثابتة لFR2 أو FR3 من أجل تقليل تعزيز عرضي.
11. قياس تركيزات الإيثانول في الدم:
    1. للتأكد من أن المكافآت التي تم الحصول عليها في جلسة الإدارة الذاتية يتم استهلاكها من قبل الفئران، وقياس تركيزات الإيثانول الدم بعد الإدارة الذاتية. مرة واحدة الفئران قد وصلت إلى خط الأساس مستقرة، وجمع الدم من الوريد الذيل الأفقي التالية فوراالدورة. إدراج 23 G الإبرة في الأوعية الدموية، وجمع 50 عينة ميكرولتر الدم باستخدام الأنابيب الشعرية.
    2. نقل عينات الدم 50 ميكرولتر إلى 10 قارورة فراغ الرأس مل وإضافة 50 ميكرولتر من 1: الكحول 1000 الإيزوبروبيل وفقا لمعايير الداخلي. إعداد المنحنى القياسي 10-300 ملغ / ديسيلتر من المعايير الإيثانول. عينات العملية مع العينات فراغ الرأس مع العمود اللوني ¹³ وفقا لإعدادات المصنع.
12. نسبة التقدمية
    1. استخدام التقدمية جداول نسبة (PR) لتقييم الدافع من الحيوانات تستهلك مكافأة ^14. العلاقات العامة هو الجدول الزمني الإجرائي الذي يتم زيادة عدد الردود للحصول على معزز تدريجيا (وبعبارة أخرى، يتعين على الفئران أن نعمل بجد لكل مكافأة متتالية).
       ملاحظة: على عكس الاب الدورات، لا يتم توقيت جلسة العلاقات العامة وسيتم إنهاء مرة واحدة فقط 30 دقيقة قد انقضت دون نسبة إنجازها.
       1. وضع الفئران في صناديق استثابي المسندة إليهم والسماحلهم بالاستجابة لل20٪ من الإيثانول في إطار الجدول الزمني العلاقات العامة في تعزيز: حافظ على جميع ظروف تجريبية مماثلة لتلك المستخدمة في جدول FR (راجع الخطوة 2.3)، باستثناء زيادة شرط استجابة أو تكلفة ضمن الدورة (أي عدد من المطابع رافعة مطلوب على رافعة النشطة للحصول على مكافأة الإيثانول واحدة) وفقا للمعادلة التالية: 1، 2، 3، 4، 6، 8، 10، 12، 16، 20، 24، 28، 32 ... ملاحظة: مثال على يتم توفير برنامج العلاقات العامة في قسم الملفات رمز البرامج الملحقة.
       2. إنهاء دورة العلاقات العامة مرة واحدة قد انقضت مدة 30 دقيقة دون أجر.
          ملاحظة: يتم تعريف توقف هو الشرط استجابة الانتهاء الماضي خلال دورة العلاقات العامة.

3. اختبار لصحة التنبؤية لنموذج هواء فعال من الكحول الذاتي الإدارة

ملاحظة: بمجرد الفئران التي حصلت على خط الأساس مستقرة الإدارة الذاتية (راجع الخطوة 2)، فمن الممكن لتقييم صحة التنبؤية لهذا النموذج من قبلاختبار فعالية النالتريكسون، وهو دواء وافقت عليها الهيئة حاليا لإدمان الكحول في خفض 20٪ من الإيثانول الإدارة الذاتية. ونحن نوصي بذلك الاختبار على أعلى FR التي تحققت خلال التدريب (FR2)، عندما الردود مرتفعة بشكل موثوق. وبمجرد إنشاء صحة التنبؤية، ونموذج يمكن استخدامها لتقييم المرشحين دواء جديد.

1. قبل يوم الاختبار، وإعطاء الفئران حقن المياه المالحة تحت الجلد 30 دقيقة قبل دورات الإدارة الذاتية لروض لهم الحقن خلال مدة لا تقل عن دورتين الإدارة الذاتية متتالية أو حتى الاستجابة لالإيثانول لا يتأثر حقن محلول ملحي (كما هو موضح أي تغيير أكثر من 15٪ في العدد الإجمالي للمكافآت حصل خلال الجلسات الأخيرة (2)).
2. حل النالتريكسون في المياه المالحة وضبط درجة الحموضة للوصول إلى حياد لتسهيل الحقن للحيوانات. حقن المخدرات في حجم 1.0 مل / كغ 30 دقيقة قبل جلسة، وذلك باستخدام الطريق تحت الجلد الإدارة. ملاحظة: لتريوفر ature أدلة جيدة لاختيار الجرعة التي تتراوح بين 0.1 - 1mg / كغ، وهكذا يتم استخدام 0.1، 0.3 و 1 ملغ / كغ في هذا البروتوكول.
   ملاحظة: تشير البحوث إلى استخدام كل الطرق تحت الجلد والغشاء البريتوني الإدارة لالنالتريكسون، على الرغم من قوتها قد تختلف مع الحقن تحت الجلد الراهن 30 أضعاف أكثر قوة أن الحقن داخل الصفاق ^15. لهذا السبب، فإننا ننصح باستخدام الطريق تحت الجلد كما تم التحقق من صحة استخدام هذا الطريق لحقن النالتريكسون وتكرارها من قبل مختبرات مختلفة في مجموعة واسعة من التركيز بين 0.1 و 1 ملغ / كغ ^12،15،16.
3. خلال يوم الاختبار، حقن الفئران في ذلك على نحو متوازن / عشوائي في التصميم بين-المواد عبر واحدة من دورات النالتريكسون الجرعات أربعة (0، 0.1، 0.3 و 1 ملغ / كلغ) 30 دقيقة قبل الدورة الإدارة الذاتية.
4. بين كل دورة الجرعات، والسماح الفئران لتبييض الدواء مع ما لا يقل عن دورتين الإدارة الذاتية متتالية أو حتى الاستجابة لالإيثانول هو العودة الى الاساس. ملاحظة: ونتيجة لذلك، في نهاية الاختبار، تم حقن جميع الفئران مع كل من الجرعات أربعة.
5. بعد هذه المرحلة، تحديد الجرعة الأكثر فعالية (1 ملغ / كلغ) واختبار تأثير النالتريكسون على الدافع من الحيوانات للاستهلاك الكحول باستخدام جدول زمني نسبة التقدمية (راجع الخطوة 2.12).

Results

ويبين الشكل 1 سلوك الإدارة الذاتية التمثيلي للفئران ويستار operant- والمخدرات ساذجة (ثمانية أفواج مختلفة تصل إلى ما مجموعه 239 الفئران) تدريب على جدول زمني FR1 في تقرير المصير، إدارة 20٪ من الإيثانول دون الحرمان من الماء أو السكرين / السكروز يتلاشى خلال جلسات مدة الواحدة 30 دقيقة. مع هذا البروتوكول، الفئران الشروع رافعة الضغط للحصول على مكافأة الإيثانول بسرعة كبيرة، وبالفعل الحصول على أكثر من 10 جوائز خلال الدورتين الأولى (...

Discussion

مع هذا البروتوكول، ونحن تقديم طريقة جديدة للحصول على والحفاظ على الاستقرار عن طريق الفم الإدارة الذاتية من 20٪ من الإيثانول في الفئران التي، على عكس النماذج الكلاسيكية من الإيثانول الإدارة الذاتية، لا تتطلب استخدام الحرمان من الماء والتدريب الوصول الموسعة، أو السكرين / السكروز يتلاشى ^12. وعلاوة على ذلك، النالتريكسون، وهو دواء وافقت عليها الهيئة حاليا لإدمان الكحول، ويقلل بنجاح الكحول الإدارة الذاتية والدافع للاستهلاك الكحول من فئران ويستار تدرب مع هذا البروتوكول. توفر ه...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
مقصورة مخففة للصوت MDF الطويلة للغاية ، الداخلية: 22 بوصة عرض × 22 بوصة ارتفاع × 16 بوصة D	Med Associates Inc.	ENV-018MD
غرفة اختبار معيارية فائقة القامة مع أعلى معدل ، وعاء النفايات وشعاع الصور	Med Associates Inc.	ENV-007CT-PH
أرضية شبكية من الفولاذ المقاوم للصدأ للفئران أو الرئيسيات الصغيرة	Med Associates Inc.	ENV-005
قابلة للسحب	Med Associates Inc.	ENV-112CM	2 من SA chambers
Stimulus Light ، عدسة بيضاء مقاس 1 بوصة ، مثبتة على لوحة معيارية	Med Associates Inc.	ENV-221M	2 من SA chambers
وعاء سائل مزدوج الكوب مع 18 ga أنابيب الفولاذ المقاوم	Med Associates Inc.	السرعة ENV-200R3AM
، 3.33 دورة في الدقيقة	Med Associates Inc.	PHM-100
طقم توصيل السوائل	Associates Inc.	PHM-122-18
SmartCtrl 8 إدخال / 16 حزمة إخراج	Med Associates Inc.	برنامج DIG-716P2
MED-PC	Associates Inc.	SOF-735
http://www.mednr.com/	Associates Inc.		موقع ويب مفتوح المصدر وتم إنشاؤه لتزويد الباحثين بمكان لتبادل رمز MEDState Notation
Kendall Monoject 20 cc محاقن ، Regular Luer Tip	VWR International	MJ8881-520657
الإيثانول ، النقي ، 190 برهان (95٪) ، USP ، مختبرات KOPTEC	Decon Labs	2801
0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم ، USP	Hospira	0409-4888-50
Naltrexone هيدروكلوريد	سيجما ألدريتش	N3136-1G
23 G BD PrecisionGlide إبر	BD	305145
Minivette POCT 50 & micro ؛ L ، K3< / sub>EDTA	Sarstedt	17.2113.150	لجمع الدم الشعري