Method Article

التحقق من صحة نموذج الفأر لعرقلة ينك مجمعات بطريقة خلية محددة

DOI:

10.3791/53318

⸱

December 10th, 2015

 ,  , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, Washington University in St. Louis School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلعب بروتينات الغلاف النووي دورا مركزيا في العديد من العمليات البيولوجية الأساسية وقد تورطت في مجموعة متنوعة من الأمراض البشرية. يصف هذا البروتوكول نموذج ماوس جديد قائم على Cre / Lox يسمح بالتحكم الزماني المكاني في تعطيل مجمعات LINC.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتمد الهجرة النووية والتثبيت داخل الأنسجة النامية والبالغة بشكل كبير على تجميعات البروتين الجزيئية الكبيرة التي تسمى LInkers للهيكل النووي والهيكل الخلوي (مجمعات LINC). تمتد سقالات البروتين هذه على الغلاف النووي وتربط الجزء الداخلي من النواة بمكونات الهيكل الخلوي السيتوبلازمي المحيط. تتكون مجمعات LINC من عائلتين من البروتين المحفوظة تطوريا ، وهما بروتينات الشمس و Nesprins التي تحتوي على أشكال توقيع جزيئية طرفية C تسمى مجالي SUN و KASH ، على التوالي. بروتينات الشمس هي بروتينات عبر الغشاء للغشاء النووي الداخلي الذي يتفاعل مجاله النووي الطرفي N مع الصفيحة النووية بينما تبرز مجالات SUN الطرفية C الخاصة بها في الفضاء المحيط بالنواة وتتفاعل مع مجال KASH في Nesprins. تحتوي الأشكال الإسوية Nesprin الكنسية على طرف N متغير الحجم يدخل في السيتوبلازم ويتفاعل مع مكونات الهيكل الخلوي. يصف هذا البروتوكول التحقق من صحة استراتيجية الفأر المعدلة وراثيا السلبية المهيمنة التي تعطل تفاعلات الشمس / KASH الداخلية بطريقة محددة من نوع الخلية. يعتمد نهجنا على نظام Cre / Lox الذي يتجاوز العديد من العيوب مثل الفتك في الفترة المحيطة بالولادة والأنماط الظاهرية غير المستقلة للخلايا المرتبطة بنماذج السلالة الجرثومية لتعطيل مركب LINC. لهذا السبب ، يوفر هذا النموذج أداة مفيدة لفهم دور مجمعات LINC أثناء التطور والتوازن في مجموعة واسعة من الأنسجة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المغلف النووي (NE) يفصل جبلة النواة عن السيتوبلازم. وهي تتألف من الغشاء النووي الداخلي والخارجي (الحركة الوطنية العراقية وONM، على التوالي) التي تربط في المسام النووية. ويسمى التجويف الذي رسمه كل من الأغشية مساحة محيط بالنواة (المحيطي). وONM هو امتداد الشبكة الإندوبلازمية الخشنة (ER)، والحركة الوطنية العراقية تتمسك الصفيحة النووية، كانت شبكة من النووي نوع-V خيوط المتوسطة ممثلة A- و B-نوع lamins 1،2. LInkers من Nucleoskeleton والهيكل الخلوي (لينك) المجمعات هي المجالس الجزيئات التي تمتد المغلف النووي بأكمله للاتصال جسديا داخل نواة لخيوط هيكل الخلية والمحركات الجزيئية (الشكل 1A). وهي تتألف من التفاعلات بين الزخارف الحفاظ تطويريا التي تميز عائلتين من البروتينات الغشاء لا يتجزأ من NE: الشمس (Sad1 / Unc84) البروتينات وNesprins (النووية مغلف SPectRINS). في الثدييات، Sun1 وSun2 عالبريد البروتينات عبر الغشاء من الحركة الوطنية العراقية الذي المنطقة النواة إلى الهيولى N-محطة يتفاعل مباشرة مع A- و B-نوع lamins 3-5. على الجانب الآخر من الحركة الوطنية العراقية، في الجهاز العصبي المحيطي، والبروتينات الشمس تؤوي إمتداد التطوري-حفظها من ~ الأحماض الأمينية 150 C-محطة تدعى المجال أشعة الشمس. المجالات SUN تتفاعل مباشرة مع كاش التطوري-المحفوظة (Klarsicht / حزب المؤتمر الوطني الافريقي-1، المتزامنة التماثل) المجال، توقيع الجزيئي للNesprins. تتكون المجالات كاش من امتداد ~ 30 الأحماض الأمينية-C المحطة أن يبرز في الجهاز العصبي المحيطي تليها مجال الغشاء 6. لا يقل عن أربعة جينات Nesprin مميزة (Nesprin1-4) ترميز كاش المحتوية على البروتينات التي توطين في NE 7. المناطق حشوية من Nesprins، التي تختلف أحجام من ~ 50kDa (Nesprin4) إلى مذهل 1000 كيلو دالتون (Nesprin1 العملاقة)، ​​تحتوي على إسبكترن متعددة يكرر وكذلك الزخارف محددة تمكن تفاعلها مع مكونات هيكل الخلية مثل الأكتين، plectin والمحركات الجزيئية 8- 13.

<ص الطبقة = "jove_content"> دراسات في الفقاريات واللافقاريات أظهرت أن لامين / الأحد / Nesprin / المحركات الجزيئية تشكل "محور" الحفظ تطويريا السيطرة على الهجرة النووية ومرسى. وقد وصفت عدة طرق المغادرة (KO) نماذج الماوس من مكونات ينك معقدة وكان أساسيا في توفير إطار لفهم أدوار الشمس وNesprin البروتينات في NE خلال تطوير الثدييات 9،14،15. ولكن هذه النماذج الحالية عدة عيوب كبيرة، أبرزها: 1) صعوبة في تفسير الظواهر المقرر أن الخلية الآثار غير المتمتعة بالحكم الذاتي، 2) صعوبة في التمييز المساهمات phenotypical من كاش المحتوية مقابل كاش أقل Nesprin إيسفورمس 16، 3) التكرار وظيفية من الشمس وNesprin البروتينات في NE في العديد من أنواع الخلايا يتطلب مخططات تربية معقدة لتعطيل جميع التفاعلات SUN-كاش في الفئران 17 و 4) من الفتك فترة ما حول الولادة من الفئران التي تعاني من نقص للكاش المجال على حد سواءNesprins1 و2 يحول دون تحليل الظواهر الكبار 18.

يصف هذا البروتوكول نموذج الفأر رواية تهدف إلى تعطيل جميع التفاعلات SUN-كاش في الجسم الحي، في زنزانة بطريقة ذاتية الحكم وينظم تنمويا، وبالتالي تجاوز كثير من السلبيات المذكورة أعلاه. يعتمد هذا لجنة المساواة العرقية / القائم السلمون المدخن نموذج الفأر على مفهومين هامين: 1) المجال كاش من أي بروتين Nesprin معروفة كافية لاستهداف EGFP إلى NE في أنظمة زراعة الخلايا و2) مجالات SUN تتفاعل باباحه مع مجالات كاش، وبالتالي overexpression من وأي مجال كاش تشبع جميع المجالات SUN الداخلية ووقف نشاط المجمعات ينك بطريقة المهيمنة سلبية 17 (الشكل 1B). يصف هذا البروتوكول حصاد الأنسجة وخطوات المعالجة المستخدمة للتأكد من تعطيل جميع التفاعلات SUN-كاش في الخلايا العصبية للدماغ.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاق: إجراءات التي تجرى على الحيوانات وتمت الموافقة من قبل لجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في جامعة واشنطن في سانت لويس.

1. ماوس تربية والتنميط الجيني

  1. تولد تيراغرام (CAG-LacZ / EGFP-KASH2) الفئران مع تيراغرام (PCP2-لجنة المساواة العرقية) الفئران لانتاج تيراغرام (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) 19،20. ملاحظة: في حين أن ما تبقى من هذا البروتوكول تركز على استخدام خط تيراغرام (PCP2-لجنة المساواة العرقية) الماوس لتقييد EGFP-KASH2 التعبير إلى الخلايا العصبية في المخيخ، يمكن اتباع إجراء مماثل مع أي تيراغرام (لجنة المساواة العرقية) الماوس الأخرى ( الشكل 2A).
  2. أداء التنميط الجيني لتحديد الجراء إيواء كل من EGFP والجينات المحورة لجنة المساواة العرقية كما هو موضح سابقا (19).

2. إعداد مواد للتشريح والأنسجة مجموعة

  1. إعداد 100 مل من السكروز 30٪ في برنامج تلفزيوني (30 ز السكروز / 100 مل من 1X PBS) وتخزينها في -20 ° C. يوم الأنسجة حarvesting، ذوبان الجليد وتحميل ~ 30-35 مل من محلول السكروز إلى حقنة 35 مل لperfusions transcardial.
  2. إعداد 40 مل من 4٪ PFA في برنامج تلفزيوني (10 مل 16٪ امتصاص العرق و 30 مل PBS). تحميل ~ 30-35 مل من 4٪ PFA إلى حقنة 35 مل لperfusions transcardial.
  3. ملء 10 سم نسيج لوحة الثقافة مع 10 مل من برنامج تلفزيوني لتشريح الأنسجة.
  4. إعداد كوكتيل الكيتامين / زيلازين تتكون من 16 ملغ / مل الكيتامين و 3 ملغ / مل زيلازين.
  5. إعداد محلول من الايثانول 70٪ للتشريح.

3. تشريح والأنسجة مجموعة

  1. باستخدام حقنة 1 مل، وضخ 500 ميكرولتر من كوكتيل الكيتامين / زيلازين لكل 25 غرام من وزن الجسم وانتظر ~ 15 دقيقة. بدلا من ذلك، استخدام أسلوب التخدير أخرى وافق مؤسسيا الذي يتناسب مع النظام البيولوجي للاهتمام.
  2. على التخدير، قرصة بلطف مخلب الخلفي لتأكيد عدم استجابة الألم، ويعلقون كل الكفوف على صينية الستايروفوم مع الجانب الظهري للالماوس لأسفل.
  3. رش البطن مع الايثانول 70٪ وإجراء شق من أسفل البطن إلى أعلى القفص الصدري للوصول إلى القلب.
  4. إجراء شق صغير في الأذين الأيمن من القلب وإدراج حقنة تحتوي على محلول السكروز 30٪ إلى البطين الأيسر من القلب.
  5. يروي حل بمعدل ~ 2-5 مل لكل دقيقة. عندما تكون فارغة، وإزالة حقنة وتكرار مع 4٪ PFA حل.
  6. بفصل الماوس من علبة الستايروفوم وقطع رأس للوصول إلى الدماغ.
  7. إزالة الجلد حول الرأس من الحيوان باستخدام ملقط ومقص. كزة حفرة في الجزء الخلفي من الجمجمة مع إبرة وإزالة بعناية الجمجمة مع مقص وملقط تشريح.
  8. مرة واحدة في الدماغ يمكن الوصول إليها بشكل واضح، واستخدام ملقط لإزالة المخيخ ووضعه في برنامج تلفزيوني. شطر المخيخ في المستوى السهمي مع مشرط ونقل إلى حل السكروز 30٪ بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. ملاحظة: لالإعداديةهي أقسام البارافين، إصلاح المخيخ بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية في 4٪ PFA قبل تضمين الأنسجة وباجتزاء.

4. معالجة الأنسجة وباجتزاء

  1. إعداد الطين من الثلج الجاف وغاز البوتان 2-الميثيل. السماح لدرجة حرارة الحمام لكي تتوازن لمدة 5 دقائق.
  2. ملء cryomold مع أكتوبر المجمع ووضع نصف من المخيخ شطر في القالب.
  3. باستخدام مجهر تشريح وزوج من ملقط موقف المخيخ بحيث سطح شطر (بالقرب من خط الوسط من المخيخ) هو مواجهة.
  4. نقل cryomold إلى الطين الجليد الجاف لمدة 5 دقائق حتى شكلت مجمع أكتوبر مصفوفة صلبة بيضاء حول عينة الأنسجة. ملاحظة: يمكن الآن أن يتم تخزين العينات المجمدة في -20 ° C إذا لزم الأمر.
  5. التسمية مسبقا المعاملة الشرائح بولي يسين لجمع أقسام الأنسجة وإعداد ناظم البرد وفقا لتعليمات الشركة الصانعة من أجل جمع 15 ميكرون أقسام قيراللجوء إلى الحرب. لجمع المقاطع، اتصل بعناية القسم أكتوبر مع الجانب بولي يسين المغلفة للشريحة. للحفاظ على التوجه للقسم، لا تدوير الشريحة خلال هذه الخطوة.
  6. أقسام تخزين الأنسجة في -20 درجة مئوية حتى الشروع في تلطيخ والتصوير.

5. تلطيخ والتصوير من أقسام المخيخ

  1. إعداد الحلول التالية قبل تلطيخ الأنسجة:
    ~ 50 مل من برنامج تلفزيوني
    ~ 5-10 مل من 4٪ PFA في برنامج تلفزيوني
    ~ 10-20 مل من 0.5٪ تريتون X-100، و 10٪ المصل حمار في برنامج تلفزيوني
  2. أقسام المخيخ ذوبان الجليد. الأهم من ذلك، تقليل تعرضهم إلى أي مصدر ضوء مستمر ومكثف لمنع يتلاشى من EGFP.
  3. بمانع القلم مسعور، رسم مستطيل حول أقسام الأنسجة.
  4. بعد إصلاح الأجزاء مع 4٪ PFA لمدة 5 دقائق. استخدام ما يكفي من السوائل لتغطية المنطقة بأكملها حددتها حاجز مسعور (عادة ~ 500 ميكرولتر). باستخدام فراغ أو ماصة، وإعادةنقل تثبيتي يجري الحذر بشكل خاص على عدم تعكير صفو أقسام الأنسجة.
  5. مع ماصة، وتطبيق بلطف PBS على الشريحة دون إزعاج أقسام الأنسجة. بعد 5 دقائق استخدام الفراغ أو ماصة لإزالة بعناية السائل. كرر PBS شطف ما مجموعه ثلاث مرات.
  6. باستخدام ماصة، وتطبيق بعناية التخفيف المناسبة من الأجسام المضادة الأولية (3 ميكرولتر Calbindin و / أو Nesprin2 الأجسام المضادة في 900 ميكرولتر من الحل) 0.5٪ تريتون X-100، و 10٪ مصل حمار في برنامج تلفزيوني. احتضان لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
    ملاحظة: سوف EGFP-KASH2 تكون مرئية بواسطة المجهر مضان مباشر على الأبواب المجمدة، وأنه ليس من الضروري استخدام أجسام مضادة لمكافحة EGFP. ومع ذلك، إذا تم إعداد أقسام البارافين، تصوير EGFP-KASH2 يتطلب مناعي مع الأجسام المضادة لمكافحة EGFP.
  7. إزالة حل الأجسام المضادة وشطف مع PBS ثلاث مرات.
  8. إعداد 1: 1000 التخفيفات الأجسام المضادة الثانوية اليكسا فلور 0.5٪ تريتون X-100،10٪ مصل حمار في برنامج تلفزيوني وتخزينها في الظلام.
  9. إزالة بلطف PBS شطف النهائي وتطبيق التخفيف الضد الثانوية لمدة ساعة واحدة في الظلام.
  10. إزالة حل الأجسام المضادة الثانوية، وشطف وغسل القسم ثلاث مرات. إذا لزم الأمر، وتطبيق وصمة عار النووية، مثل دابي (~ 300nM)، أثناء تطبيق برنامج تلفزيوني الأول.
  11. تماما إزالة حل PBS من جميع أنحاء الأنسجة ومكان ~ 5-7 ميكرولتر من تصاعد وسائل الإعلام على قسم الأنسجة. وضع ساترة الزجاج على رأس قسم الأنسجة وتوضع جانبا ل~ 15-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
  12. استخدام المجهر مضان مجهزة مرشحات مناسبة لتصور EGFP وأي موجات أخرى مناسبة لالأجسام المضادة الثانوية المستخدمة في الخطوات 5.8 / 5.9. في شرائح للدماغ، واستخدام الهدف 20X لعرض الحافات النووية EGFP-KASH2.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوضح هذا البروتوكول فائدة (/ EGFP-KASH2 CAG-LacZ) نموذج الفأر تيراغرام لتقييد EGFP-KASH2 التعبير إلى الخلايا العصبية للدماغ باستخدام تيراغرام (PCP2-لجنة المساواة العرقية) الفئران. في تيراغرام (PCP2Cre CAG-EGFP / KASH2) ذرية، يتم استئصاله وLacZ / V5 إطار القراءة المفتوحة في P6 قبل recombinase لجنة المساواة العرقية مما يؤدي إلى التعبير عن EGFP-KASH2 تستهدف على وجه التحديد إلى خلايا العصبية (الشكل 2A). كما هو متوقع، والتي تستهدف EGFP-KASH2 إلى الغلاف النوو...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخطوة الأكثر أهمية للدراسة بنجاح دور المجمعات ينك في الجسم الحي باستخدام (/ EGFP-KASH2 CAG-LacZ) نموذج تيراغرام هو تحديد خط الماوس لجنة المساواة العرقية مناسب (ق). في الواقع، إن لجنة المساواة العرقية تنشط في غيرها من أنواع الخلايا المشاركة في مسارات مشابهة، يمكن أن تعقد تفسير النتائج. وبالتالي، فمن المهم دراسة الخلايا المجاورة، كما هو موضح هنا في طبقات الخلية الجزيئية والحبيبية في المخيخ (الشكل 2B). وبالمثل، لتعظيم أي الظواهر ذات الصلة من الناحية الفسيول...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

شكرا المؤلفين موظفي الصرف والتصوير الأساسية، من صميم علم الوراثة الجزيئي (قسم طب وجراحة العيون والعلوم البصرية) والفأر علم الوراثة الأساسية في جامعة واشنطن في سانت لويس مدرسة الطب. معتمدة على الكتاب من قبل برنامج المنح الصغيرة من مركز ماكدونيل لالخلوية والجزيئية بيولوجيا الأعصاب، مركز الأمل للاضطرابات العصبية، والمعهد الوطني للعيون (# R01EY022632 إلى DH)، مركز المعهد الوطني للعيون الأساسية غرانت (# P30EY002687) و منحة غير المقيد من البحوث للوقاية من العمى إلى قسم العيون والعلوم البصرية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
السكروزسيجما ألدريتشS0389
10x PBSGibco14200-075
16٪ محلول بارافورمالديهايدعلوم المجهر الإلكتروني15710
OCT CompoundTissue-Tek4583
شرائح التصاقStatLabM1000W
مصل الحمارسيجما ألدريتشD9663
Triton X-100Sigma AldrichT9284
ImmuEdge PenVector LaboratoriesH-4000
الأجسام المضادة للكالبندينSigma AldrichC9848
الأجسام المضادةل EGFP Abcamab13970
الجسم المضادالموصوف سابقا في المرجع 21
تركيب الفلورسنت وسائل الإعلامداكوS3023
2-ميثيل البوتانسيجما ألدريتشO3551
المضادة للنسبرين 2

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hutchison, C. J. Lamins: building blocks or regulators of gene expression? Nature reviews. Molecular cell biology. 3, 848-858 (2002).
  2. Stuurman, N., Heins, S., Aebi, U. Nuclear lamins: their structure, assembly, and interactions. Journal of structural biology. 122, 42-66 (1998).
  3. Crisp, M., et al. Coupling of the nucleus and cytoplasm: role of the LINC complex. The Journal of cell biology. 172, 41-53 (2006).
  4. Haque, F., et al. SUN1 interacts with nuclear lamin A and cytoplasmic nesprins to provide a physical connection between the nuclear lamina and the cytoskeleton. Molecular and cellular biology. 26, 3738-3751 (2006).
  5. Hodzic, D. M., Yeater, D. B., Bengtsson, L., Otto, H., Stahl, P. D. Sun2 is a novel mammalian inner nuclear membrane protein. The Journal of biological chemistry. 279, 25805-25812 (2004).
  6. Starr, D. A. KASH and SUN proteins. Current biology : CB. 21, R414-R415 (2011).
  7. Mellad, J. A., Warren, D. T., Shanahan, C. M. Nesprins LINC the nucleus and cytoskeleton. Current opinion in cell biology. 23, 47-54 (2011).
  8. Fridolfsson, H. N., Starr, D. A. Kinesin-1 and dynein at the nuclear envelope mediate the bidirectional migrations of nuclei. The Journal of cell biology. 191, 115-128 (2010).
  9. Meyerzon, M., Fridolfsson, H. N., Ly, N., McNally, F. J., Starr, D. A. UNC-83 is a nuclear-specific cargo adaptor for kinesin-1-mediated nuclear migration. Development. 136, 2725-2733 (2009).
  10. Padmakumar, V. C., et al. Enaptin, a giant actin-binding protein, is an element of the nuclear membrane and the actin cytoskeleton. Experimental cell research. 295, 330-339 (2004).
  11. Roux, K. J., et al. Nesprin 4 is an outer nuclear membrane protein that can induce kinesin-mediated cell polarization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 2194-2199 (2009).
  12. Wilhelmsen, K., et al. a novel outer nuclear membrane protein, associates with the cytoskeletal linker protein plectin. The Journal of cell biology. 171, 799-810 (2005).
  13. Wilson, M. H., Holzbaur, E. L. Nesprins anchor kinesin-1 motors to the nucleus to drive nuclear distribution in muscle cells. Development. 142, 218-228 (2015).
  14. Yu, J., et al. KASH protein Syne-2/Nesprin-2 and SUN proteins SUN1/2 mediate nuclear migration during mammalian retinal development. Human molecular genetics. 20, 1061-1073 (2011).
  15. Zhang, X., et al. Syne-1 and Syne-2 play crucial roles in myonuclear anchorage and motor neuron innervation. Development. 134, 901-908 (2007).
  16. Zhang, J., et al. Nesprin 1 is critical for nuclear positioning and anchorage. Human molecular genetics. 19, 329-341 (2010).
  17. Stewart-Hutchinson, P. J., Hale, C. M., Wirtz, D., Hodzic, D. Structural requirements for the assembly of LINC complexes and their function in cellular mechanical stiffness. Experimental cell research. 314, 1892-1905 (2008).
  18. Zhang, X., et al. SUN1/2 and Syne/Nesprin-1/2 complexes connect centrosome to the nucleus during neurogenesis and neuronal migration in mice. Neuron. 64, 173-187 (2009).
  19. Razafsky, D., Hodzic, D. Temporal and tissue-specific disruption of LINC complexes in vivo. Genesis. 52, 359-365 (2014).
  20. Razafsky, D., Hodzic, D. A variant of Nesprin1 giant devoid of KASH domain underlies the molecular etiology of autosomal recessive cerebellar ataxia type I. Neurobiology of disease. 78, 57-67 (2015).
  21. Razafsky, D., Blecher, N., Markov, A., Stewart-Hutchinson, P. J., Hodzic, D. LINC complexes mediate the positioning of cone photoreceptor nuclei in mouse retina. PloS one. 7, e47180(2012).
  22. Razafsky, D. S., Ward, C. L., Kolb, T., Hodzic, D. Developmental regulation of linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton during mouse postnatal retinogenesis. Nucleus. 4, 399-409 (2013).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

LINC ComplexesTransgenic Mouse ModelCre Lox SystemNuclear EnvelopeCerebellar Purkinje CellsFluorescent MicroscopyImmunofluorescence StainingTissue SectioningEGFP TaggingNesprin Displacement

Related Articles